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Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / ntroducción: Se ha documentado ampliamente en la bibliografía internacional sobre las manifestaciones orales y máxilofaciales asociadas a la infección por VIH/SIDA y cuál es su frecuencia de aparición en este tipo de pacientes. Sin embargo, en nuestro país, los datos epidemiológicos de este tipo de manifestaciones son escasos y desactualizados. Contar con esta información es esencial para optimizar los recursos involucrados en el tratamiento integral de estos pacientes. Objetivo: Determinar frecuencia de manifestaciones orales, asociadas y no asociadas a infección por VIH, en pacientes adultos VIH/SIDA del Hospital San Juan de Dios y describirlas según género y edad. Materiales y métodos: Estudio observacional descriptivo de corte transversal en adultos diagnosticados con VIH/SIDA en atención en el Hospital San Juan de Dios, en un periodo de 18 meses. Se realizó examen intraoral y el diagnóstico de las lesiones fue basado en el criterio clínico de la European Comunity Clearing Clearinghouse (ECC), y en estudios histopatológicos e imagenológicos complementarios al diagnóstico. Todos los pacientes incluidos en el estudio aceptaron participar voluntariamente y firmaron el consentimiento informado. Resultados: 68 pacientes, 52 hombres (76,5%) y 17 mujeres (23,5) cumplieron los criterios de inclusión. 23 pacientes presentaron al menos una lesión oral relacionada a la infección por VIH (33,8%), en donde las lesiones más prevalentes fueron las Úlceras mayores y el Papiloma oral (8,8%), seguida de la Candidiasis oral (5,9%), la Queilitis Angular (5,9), Sarcoma de Kaposi (4,4%), Linfoma no Hodgkin (2,94%), Gingivitis Ulceronecrotizante y Leucoplasia Pilosa (1,47%). Mientras que las lesiones no asociadas a VIH como Caries y Enfermedad Periodontal se presentaron en 31 pacientes (45,5%). 4 Conclusión: Un 33,8% de los pacientes estudiados presentaron al menos una lesión asociada a VIH/SIDA, en donde la lesión oral asociada a la infección por VIH más frecuente corresponde a Papiloma oral y Úlceras orales mayores. Las lesiones orales no asociadas a VIH/SIDA más frecuentes fueron la Caries y la Enfermedad Periodontal.

Trabajo de investigación requisito para optar al título de Cirujano-Dentista / Introducción: Lesiones bucomaxilofaciales conocidas se asocian con estados de inmunosupresión en pacientes VIH/SIDA. La presencia de estas lesiones puede ser el primer signo clínico de la infección y ser una importante herramienta para monitorizar la progresión y pronóstico de ésta. Objetivo: Determinar la asociación entre las lesiones bucomaxilofaciales y diferentes niveles de inmunosupresión determinados por el recuento de linfocitos TCD4+ en: Ausente (≥ 500 células/ml), Moderada (entre 201 células/ml y 499 células/ml) y Severa (≤200 células/ml) en pacientes adultos VIH/SIDA en atención en el Hospital San Juan de Dios. Materiales y Método: Estudio observacional analítico de corte transversal en adultos diagnosticados con VIH/SIDA en atención en el Hospital San Juan de Dios, durante un periodo de 17 meses. Se realizó examen intraoral y el diagnóstico de las lesiones bucomáxilofaciales fue de acuerdo al criterio clínico de EEC clearing house y a estudios imagenológicos e histopatológicos. El grado de inmunosupresión se basó en el recuento de linfocitos TCD4+ más cercano al momento del examen odontológico. Pacientes con diabetes, alcoholismo u otra condición que provoque inmunosupresión fueron excluidos, al igual que las pacientes embarazadas que pueden presentar manifestaciones orales propias de su condición. Todos los pacientes incluidos en el estudio aceptaron participar voluntariamente y firmaron el consentimiento informado. Los datos fueron analizados mediante el test paramétrico T-Student para variables continuas y en el caso de variables dicotómicas o categóricas se utilizó el test de chi cuadrado de Pearson y Odds Ratio. Se utilizó un nivel de confianza de 95% cuando correspondió. Resultados: 60 pacientes cumplieron con los criterios de inclusión. Dentro del grupo, 11 pacientes correspondieron a individuos del sexo femenino (18,3%) y 49 del sexo masculino (81,6%). La edad promedio fue de 40 ±1,44 años. 2 El 35% de los pacientes presentaba lesiones orales asociadas a infección por VIH con un recuento promedio de linfocitos TCD4+ de 299 células/ml y el 65% restante presentaba un recuento promedio de 348 células/ml, sin existir diferencia estadísticamente significativa (p=0,38). Por otro lado, se observó que es 3,275 veces más probable presentar una lesión asociada a VIH/SIDA cuando el paciente se encuentra en inmunosupresión determinado por recuentos de linfocitos TCD4+ menores a 500 células/ml. (OR=3,275). Las lesiones orales asociadas a VIH/SIDA más comúnmente observadas fueron las úlceras orales (10%) y el papiloma (0,8%). El Sarcoma de Kaposi se relacionó con recuentos de linfocitos TCD4+ bajos (p=0,061). Conclusión: Los pacientes con lesiones orales asociadas a infección por VIH presentaron un recuento de linfocitos TCD4+ promedio menor (299 cél/ml) que los que no presentaban lesiones asociadas (348 cél/ml) y existe mayor probabilidad de presentar lesiones asociadas a VIH/SIDA cuando existe inmunosupresión determinado por recuentos de linfocitos TCD4+ <500 cél/ml. (OR=3,275). Los pacientes que presentaron sarcoma de Kaposi se relacionaron con recuentos de linfocitos TCD4+ muy bajos (<50 cél/ml), lo que podría relacionarse con inmunosupresión severa.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-02-25T18:43:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Catarina Tenorio de Lima.pdf: 1482710 bytes, checksum: 33aa99ed5deb74e6d960dbda8fec8282 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T18:43:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Catarina Tenorio de Lima.pdf: 1482710 bytes, checksum: 33aa99ed5deb74e6d960dbda8fec8282 (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / O sarcoma de Kaposi (SK) é uma neoplasia maligna multifocal resultante da proliferação anormal do endotélio vascular, que ocorre principalmente em indivíduos com deficiência do sistema imunológico, sendo o câncer mais comumente associado à aids. Nos países emergentes, o SK permanece ainda como um grave problema de saúde pública e elevada taxa de mortalidade mesmo em pacientes que apresentam a forma cutânea da doença. Outros fatores agravantes nestes países são: o acesso tardio à terapia antirretroviral (TARV), o diagnóstico do SK em fase avançada da neoplasia e a não disponibilidade aos agentes antineoplásicos. Em Pernambuco, apesar da elevada taxa de detecção (22/100.000 habitantes) de casos de aids registrados no Siscel/Siclon, não existem dados do SK publicados. Este estudo objetiva descrever as principais características clínico-laboratoriais, o estadiamento inicial e o desfecho do SK em pacientes com aids atendidos em Centro de Referência de Recife-PE no período de 2004 a 2014, além de descrever quais as infecções oportunistas mais frequentes. Trata-se de um estudo descritivo com caráter analítico, retrospectivo, do tipo série de casos, onde foram analisados os prontuários de pacientes maiores 18 anos com aids e que apresentaram o diagnóstico histopatológico de SK. Foram incluídos 22 indivíduos, sendo 20 homens e 2 mulheres. Setenta e dois por cento dos indivíduos eram jovens e adultos jovens com idade que variava entre 18-39 anos. Muitos destes pacientes (54,4%) tiveram diagnóstico recente de HIV, com contagem de células T-CD4+ <200 cél/mm3 (77,3%) e 15 dos 22 pacientes não faziam uso de TARV. Quanto à classificação das lesões: 36,4% apresentavam lesões exclusivamente cutâneas, algumas disseminadas; 54,5% além do envolvimento da pele, a doença se estendia para mucosas, linfonodos e órgãos; e apenas 9% dos indivíduos durante a investigação tinham acometimento exclusivamente visceral, sem lesões de pele ou mucosas. O órgão mais acometido foi o estômago (53,3%), e na maioria das vezes, os pacientes eram assintomáticos. O estadiamento inicial foi baseado no AIDS Clinical Trial Group Oncology Committee, onde a descrição de Alto Risco foi mais frequente (86,4%). Não observamos associação significativa na relação entre o estadiamento inicial e o uso de TARV. Dos 22 pacientes, apenas cinco (22,7%) tratou o SK exclusivamente com TARV, enquanto 17 (77,3%) realizaram tratamento com quimioterapia. Quanto ao desfecho dos casos de SK, 40,9% dos pacientes obtiveram remissão completa. Entre os casos estudados, oito tiveram desfecho letal (36,5%). A despeito do diagnóstico tardio do SK associado à aids na população estudada, inclusive com risco desfavorável no momento do estadiamento, encontrou-se mortalidade menor do que a reportada em outros estudos e que pode estar relacionado ao acesso a serviço de saúde especializado. / The Kaposi sarcoma (KS) is a malignant multifocal neoplasm that results from the abnormal proliferation of the vascular endothelium occurs mainly in immunocompromised individuals. This type of cancer is most commonly associated with acquired immune deficiency syndrome (AIDS). In developing countries, KS remains a serious public health problem, with a high mortality rate even in patients presenting with the cutaneous variant of the disease. Other aggravating factors in these countries are late access to antiretroviral therapy (ART), diagnosis of KS in advanced stages of the cancer, and unavailability of antineoplastic agents. Despite the high rate of detection (22/100.000 inhabitants) of AIDS cases recorded in Siscel/Siclon in Pernambuco, there is not published data of the SK .The aims of this study were to describe the main clinical and laboratory characteristics, initial staging, and outcome of KS in AIDS patients examined at the Reference Center of Recife-PE between 2004 and 2014, and to describe the most frequent opportunistic infections. This case series is a descriptive, character analitico, retrospective study in which the medical records of older than 18 years AIDS patients who presented with a histopathological diagnosis of KS were reviewed. Twenty-two individuals (20 men and 2 women) were included in this study. Seventy-two percent of the individuals were youngs and young adults aged between 18 and 39 years. Many of these patients (54.4%) had been recently diagnosed with human immunodeficiency virus (HIV) infection, with CD4+ T-cell counts <200 cells/mm3 (77.3%) and 15 of the 22 patients did not undergo ART. Regarding the classification of lesions, 36.4% of the patients presented with exclusively cutaneous lesions, some of which were dispersed. In 54.5% of the patients, the disease had spread beyond the skin to include mucous membranes, lymph nodes, and organs; only 9% of the subjects presented with an exclusively visceral involvement, without skin or mucosal lesions, during the course of this research. The most frequently affected organ was the stomach (53.3%), in which case most of the patients were asymptomatic. The initial staging was in accordance with the AIDS Clinical Trial Group Oncology Committee staging system, whereby 5 of 7 patients who were undergoing ART and 14 of 15 patients who were not undergoing ART were classified to be at high risk of KS. No significant association between initial staging and the use of ART was observed. Of the 22 patients, only 5 (22.7%) were treated exclusively with ART for KS, whereas 17 (77.3%) underwent chemotherapy. Regarding the outcome of KS, 40.9% of the patients achieved complete remission. Among the patients studied, oito (36,5%)had fatal outcomes. Despite the late diagnosis of KS associated with AIDS in the population under study, including the unfavorable risk at the time of staging, the mortality was lower than that reported in other studies, which can be related to the current patients having access to a specialized health service.

El sarcoma de Kaposi es una patología tumoral angio-proliferativa cuyo agente etiológico asociado es el herpesvirus 8. El receptor viral acoplado a proteína G (vGPCR) es uno de los genes virales que induce la transformación oncogénica y la formación de lesiones angiogénicas asociadas al sarcoma de Kaposi a través de modificaciones paracrinas, por lo que su expresión es necesaria para el mantenimiento del tumor. El calcitriol o 1α,25(OH)2-vitamina D3 (1α,25(OH)2D3) es la forma hormonal activa de la vitamina D, no sólo es vital para la homeostasis mineral, sino que presenta efectos antineoplásicos en varios tipos de tumores. Nuestro grupo de investigación ha aportado evidencia sobre los efectos anti-proliferativos del 1α,25(OH)2D3 en un modelo celular murino de sarcoma de Kaposi. En esta Tesis Doctoral se investigó si la actividad anti-angiogénica y antiinflamatoria del 1α,25(OH)2D3 y su rol en el estrés oxidativo contribuyen a su mecanismo de acción antitumoral en un modelo celular murino de sarcoma de Kaposi. Se obtuvo evidencia de que 1α,25(OH)2D3 regula los factores pro-angiogénicos, se observó una disminución de la expresión de HIF-1α en forma dependiente del VDR, no así de VEGF, que aumentó independientemente de la disminución de HIF-1α y EGR-1, posiblemente por regulación directa del promotor de VEGF por parte del VDR. A su vez, la expresión del mensajero del factor anti-oncogénico JunB aumentó, mientras que el mensajero del factor pro-oncogénico c-Fos sólo disminuyó durante cortos periodos de tiempo. Además, se demostró que el 1α,25(OH)2D3 regula negativamente la vía Wnt/β-catenina por tres mecanismos diferentes relacionados y consecuentes en el tiempo. En primer lugar, se observó un aumento del inhibidor extracelular Dkk-1 el cual disminuyó inicialmente los niveles de β-catenina; en segundo lugar, una asociación de las proteínas β-catenina/VDR con la consecuente disminución de la actividad transcripcional de β-catenina en genes clave durante la proliferación celular como c-myc, Mmp-9 y ciclina D1 y finalmente, un aumento de VE-cadherina implicando la relocalización de β-catenina para participar de las uniones intercelulares. En cuanto a los efectos antiinflamatorios del 1α,25(OH)2D3, se demostró una modulación dual compuesta por la inhibición de la producción de PGE2 a través de la interacción entre las proteínas COX-2/VDR, la que disminuyó la actividad enzimática, y la supresión diferencial de los receptores EPs de PGE2. Finalmente, en cuanto al rol del 1α,25(OH)2D3 frente al estrés oxidativo, se determinó que los niveles de ROS se encontraron aumentados estimulando así el desencadenamiento del proceso apoptótico por medio del aumento de la expresión de factores pro-apoptóticos como BIM y Caspasa 3-clivada. Los resultados en este trabajo de Tesis Doctoral contribuyen al conocimiento sobre el mecanismo de acción anti-angiogénico y antinflamatorio, efecto frente al estrés oxidativo del 1α,25(OH)2D3 con la participación del VDR en un modelo celular murino de sarcoma de Kaposi. A su vez, sustenta las bases para dar continuación a otros estudios usando modelos in vivo y para evaluar el uso de análogos de 1α,25(OH)2D3 con menor efecto calcémico para el tratamiento de esta patología. / Kaposi's sarcoma is an angioproliferative tumor and herpesvirus 8 is the associated etiologic agent. The G protein-coupled viral receptor (vGPCR) is one of the viral genes that induces oncogenic transformation and the formation of angiogenic lesions associated with Kaposi's sarcoma through paracrine modifications, therefore its expression is necessary for tumor maintenance. Calcitriol or 1α,25(OH)2-vitamin D3 (1α,25(OH)2D3) is the active hormonal form of vitamin D, it is not only vital for mineral homeostasis, but it also has antineoplastic effects in various types of tumors. Our research group has provided evidence on the anti-proliferative effects of 1α,25(OH)2D3 in a murine cell model of Kaposi's sarcoma. This Doctoral Thesis investigated whether the anti-angiogenic and anti-inflammatory activity of 1α,25(OH)2D3 and its role in oxidative stress contribute to the antitumor action mechanism in a murine cell model of Kaposi's sarcoma. Evidence was obtained that 1α,25(OH)2D3 regulates pro-angiogenic factors. A decrease in the expression of HIF-1α was observed on a VDR dependent manner, but not on VEGF, which increased independently of the decrease in HIF-1α and EGR-1, possibly through direct regulation of the VEGF promoter by VDR. At the same time, the expression of the messenger of the anti-oncogenic factor JunB increased, while the messenger of the pro-oncogenic factor c-Fos only decreased for short periods of time. Furthermore, it was shown that 1α,25(OH)2D3 negatively regulates the Wnt/β-catenin pathway by three different related and consequent mechanisms over time. First, an increase in the extracellular inhibitor Dkk-1 was observed, which initially decreased the levels of β-catenin; second, an association of β-catenin/VDR proteins with the consequent decrease in the transcriptional activity of β-catenin upon key genes during cell proliferation such as c-myc, Mmp-9 and cyclin D1; and finally, an increase in VE-cadherin involving the relocation of β-catenin to participate in the intercellular junctions. Regarding to the anti-inflammatory effects of 1α,25(OH)2D3, a dual modulation was demonstrated, composed of PGE2 production inhibition through the interaction between the COX-2/VDR proteins, which decreased the enzymatic activity; and the differential suppression of EP receptors by PGE2. Finally, regarding the role of 1α,25(OH)2D3 against oxidative stress, it was determined that ROS levels were found increased, thus stimulating the apoptotic process by increasing the expression of pro-apoptotic factors such as BIM and Caspase-3 cleavage. The results of this Doctoral Thesis work contribute to the knowledge of the anti-angiogenic and anti-inflammatory mechanisms, the effect against oxidative stress of 1α,25(OH)2D3 with VDR participation in a murine cell model of Kaposi's sarcoma. It supports the basis for continuing other studies using in vivo models and evaluating the use of 1α,25(OH)2D3 analogues with less calcemic effect for the treatment of this pathology.

Made available in DSpace on 2014-08-11T12:37:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) patricia_pereira_ipec_mest_2011.pdf: 7410297 bytes, checksum: 4e58503c3df5b42c2c9ba06556e24b56 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O sarcoma de Kaposi (SK) é a neoplasia mais diagnosticada em pacientes com SIDA e a detecção do antígeno nuclear latente do herpesvirus humano 8 (HHV8-LNA-1) tem se mostrado útil no seu diagnóstico histológico. O objetivo deste estudo é investigar a expressão do antígeno do HHV8 no sarcoma de Kaposi e seus simuladores histológicos em biópsias de pele de pacientes HIV positivos acompanhados no Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC) entre 2003 e 2010. A pesquisa do antígeno foi realizada em protocolo de imuno-histoquímica em 49 casos de SK cutâneo e em 60 casos de eventuais simuladores histológicos desta lesão (12 dermatofibromas, 17 hemangiomas, 8 granulomas piogênicos e 23 dermatites de estase). Dados clínico-epidemiológicos foram coletados a partir da revisão dos prontuários. O diagnóstico de SK foi confirmado por dois patologistas. A expressão nuclear do antígeno HHV-8 foi detectada em todos os casos de SK independentemente do estágio clínico da doença, e nenhuma positividade foi encontrada nos demais casos. Nossos resultados confirmam o valor diagnóstico do antígeno nuclear latente do HHV8 (HHV8-LNA-1) para diferenciar o SK de seus simuladores e consolidam sua utilização na rotina do laboratório de Anatomia Patológica do IPEC / Kaposi sarcoma is the most diagnosed neoplasia in AIDS patients and detection of human herpes virus 8 latent nuclear antigen (HHV8 - LNA - 1) has been shown to be an useful histological diagnostic test. The goal of this study is to investigate the expression of HHV8 antigen in Kaposi sarcoma and its histological simulators on skin biopsies from HIV positive patients followed in the Instituto de Pesquisa Clínica E vandro Chagas (IPEC) between 2003 and 2010. Immunohistochemistry protocol for the antigen was applied in 49 cases of cutaneous KS and in 60 cases of occasional histological simulators of this lesion (12 dermatofibromas, 17 hemangiomas, 8 pyogenic granuloma s and 23 stasis dermatitis). Clinical and epidemiological data were obtained from clinical files. The diagnosis of KS was confirmed by two pathologists. Expression to HHV8 - LNA - 1 was detected in all cases of KS despite its clinical stage and no positivity w as observed in the remainder cases. Our results confirm the diagnostic value of HHV8 latent nuclear antigen to distinguish KS from its simulators and consolidate its use in IPEC’s pathology laboratory daily practice

El herpesvirus asociado al sarcoma de Kaposi, KSHV, es el agente etiológico del sarcoma de Kaposi. Dentro del genoma viral, el receptor viral acoplado a proteína G (vGPCR) conduce a la oncogénesis y angiogénesis; su expresión persistente y actividad es necesaria para el mantenimiento del tumor. La forma hormonal activa de la vitamina D, 1α,25(OH)2D3, presenta efectos antineoplásicos en varios tipos de tumores. El potencial anti-proliferativo y antiinflamatorio del 1α,25(OH)2D3 en células endoteliales que expresan el vGPCR ha sido explorado por nuestro grupo. En los últimos años se ha incrementado el uso de análogos sintéticos del 1α,25(OH)2D3 con menor actividad calcemica para minimizar la hipercalcemia producida por dosis altas del metabolito. En este trabajo de Tesis Doctoral se profundizó en el mecanismo de acción antineoplásico del 1α,25(OH)2D3 y su análogo menos calcemiante TX 527. Se obtuvo evidencia que ambos compuestos promueven la apoptosis a través de un desbalance entre los miembros de la familia de proteínas Bcl-2 en células vGPCR. Se observó un aumento en los niveles de expresión de la proteína pro-apoptótica BIM y disminución de A20 por un mecanismo dependiente del VDR y un pico de inactivación en la fosforilación de BAD acompañado por la formación de complejos con Bcl-2, alterando posiblemente la integridad de la mitocondria. También, se demostró que el 1α,25(OH)2D3 y TX 527 inducen autofagia a través de la inactivación del eje PI3K/Akt/mTOR y regulación de BECN1 como parte del mecanismo antineoplásico de acción. Asimismo, ambos agonistas regulan la proliferación de las células vGPCR mediante la inactivación de ERK1/2 y p38 y aumento de la expresión de las fosfatasas MKP-3 y MKP-5. Eventos regulados por la expresión del VDR, con excepción de ERK1/2, debido probablemente a una regulación no genómica de esta quinasa. El Bortezomib, inhibidor del proteasoma y de la activación de NF-ĸB, disminuyó la proliferación celular e indujo apoptosis por un mecanismo similar a los agonistas del VDR en células vGPCR. Proceso acompañado además por la activación del factor de transcripción FOXO1, disminución en la expresión génica de VEGF y aumento del inhibidor del ciclo celular, p21. Debido a las limitaciones que presentan los cultivos celulares bidimensionales, se desarrolló un método para obtener esferoides multicelulares a partir de células endoteliales y transformadas por la expresión del vGPCR. Las células vGPCR cultivadas en una superficie de baja adherencia desarrollaron esferoides de mayor tamaño y el tratamiento con 1α,25(OH)2D3 produjo cambios morfológicos con la consecuente inducción de apoptosis. A nivel molecular, se observó un aumento en la expresión génica del VDR, BIM y p21 al aumentar la dosis. Además, el 1α,25(OH)2D3 provocó un aumento en los niveles proteicos de BIM y disminuyó la activación de ERK1/2 y Akt, permitiendo concluir que las células en cultivos tridimensionales responden al agonista de manera similar a lo observado en cultivos en monocapa. Los resultados obtenidos en este trabajo de tesis contribuyen al conocimiento del mecanismo de acción antiproliferativo del 1α,25(OH)2D3 y su análogo menos calcemiante TX 527 en un modelo celular de sarcoma de Kaposi. A su vez, sustenta las bases para dar continuación a otros estudios en modelos in vivo y evaluar su potencial aplicación, sólo o en combinación con Bortezomib, en el tratamiento de esta patología. / The Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus, KSHV, is the etiological agent of Kaposi's sarcoma. Within the viral genome, the viral G protein-coupled receptor (vGPCR) leads to oncogenesis and angiogenesis; its persistent expression and activity are necessary for tumor maintenance. The active hormonal form of vitamin D, 1α,25(OH)2D3, has antineoplastic effects in several types of tumors. The anti-proliferative and antiinflammatory potential of 1α,25(OH)2D3 in endothelial cells expressing vGPCR has been explored by our group. In recent years, the use of synthetic analogues of 1α,25(OH)2D3 with lower calcemic activity has been increased to minimize the hypercalcemia produced by high doses of the metabolite. In this Doctoral Thesis work, the antineoplastic mechanism of action of 1α,25(OH)2D3 and its less calcemic analogue TX 527 was studied. Evidence was obtained that both compounds promote apoptosis through an imbalance of Bcl-2 protein family members in vGPCR cells. An increase of pro-apoptotic BIM and a decrease of A20 protein expression levels by a VDRdependent mechanism was observed, as well as, a peak of inactivation of phosphorylated BAD accompanied by its association with Bcl-2, possibly altering mitochondria integrity. It was also demonstrated that 1α,25(OH)2D3 and TX 527 induce autophagy through the inactivation of the PI3K/Akt/mTOR axis and regulation of BECN1 as part of the antineoplastic mechanism of action. Moreover, both agonists regulate vGPCR cells proliferation by inactivating ERK1/2 and p38 and increasing MKP- 3 and MKP-5 phosphatases expression. These events were regulated by VDR expression, with the exception of ERK1/2, probably due to a non-genomic regulation of this kinase. Bortezomib, an inhibitor of proteasome and NF-ĸB activation, decreased cell proliferation and induced apoptosis by a similar mechanism to VDR agonists in vGPCR cells. Process also accompanied by the activation of the transcription factor FOXO1, decrease in VEGF gene expression and increase of the cell cycle inhibitor, p21. Due to the limitations of two-dimensional cell cultures, a method was developed to obtain multicellular spheroids from endothelial cells and transformed by the expression of vGPCR. vGPCR cells cultured on a low adhesion surface developed larger spheroids and treatment with 1α,25(OH)2D3 triggered morphological changes with consequent apoptosis induction. At molecular level, an increase in VDR, BIM and p21 gene expression was observed when dose was increased. In addition, 1α,25(OH)2D3 caused an increase in BIM protein levels and decreased the activation of ERK1/2 and Akt, allowing to conclude that cells in three-dimensional cultures respond to the agonist in a similar way to that observed in monolayer cultures. The results obtained in this thesis work contribute to the knowledge of the anti-proliferative mechanism of action of 1α,25(OH)2D3 and its less calcemic analogue TX 527 in a cellular model of Kaposi's sarcoma. In turn, it supports the bases to continue other studies in vivo models and evaluate their potential application, either alone or in combination with Bortezomib, in the treatment of this pathology.

O HHV-8 (herpesvírus 8 humano) é o agente etiológico do sarcoma de Kaposi (SK). Diferentemente dos outros herpesvírus, o HHV-8 é distribuído de modo não ubíquo ao redor do mundo. São sete os principais genótipos de HHV-8, de acordo com o padrão de variabilidade da ORF K1: A, B, C, D, E, F e Z. Estudos da variabilidade genética do HHV-8 poderão trazer melhores interpretações sobre o potencial patogênico dos genótipos de HHV-8 e das variações genotípicas funcionais. Dados sobre a variabilidade genética do HHV-8 no Brasil, em que o SK é associado ao HIV, permanecem escassos. Pelo nosso conhecimento, esse é o primeiro estudo que compara a variabilidade genética de HHV-8 em indivíduos infectados por HIV com SK e sem SK no Brasil. Objetivo. O estudo visou analisar a variabilidade genética do HHV-8 entre indivíduos infectados por HIV com SK e sem histórico de SK. Métodos. Sequências de DNA de HHV-8 foram investigadas em amostras criopreservadas de células mononucleares do sangue periférico a partir de 37 indivíduos infectados por HIV com SK (grupo 1); e de amostras de saliva de indivíduos sem SK (grupo 2), as quais foram selecionadas por meio da detecção positiva de DNA/ORF73/HHV-8 a partir de um total de 751 indivíduos. Dados demográficos e clínicos do estadio e evolução do SK, assim como parâmetros laboratoriais foram caracterizados. As análises moleculares e reconstruções filogenéticas foram baseadas nas ORFs K1 e K12 do HHV-8. Resultados. Foram obtidas sequências de DNA dos loci K1 e/ou K12 de 75 indivíduos, 34 indivíduos do grupo 1 e 41 do grupo 2. O sistema de primers empregado foi capaz de detectar os genótipos A, B, C, F e amplo perfil de subgenótipos de K1/HHV-8. Os dados não mostraram associação de genótipos de HHV-8 com a presença de SK ou estadio de SK. Todavia, o subgenótipo B1 predominou naqueles em que não houve registro de piora de SK (p=0,04). Os subgenótipos B1 e C3 foram igualmente predominantes em ambos os grupos. As frequências do genótipos A foram de 24% e 12,2% e dos genótipos B e C foram de 34,1 e 35,3%, nos grupos 1 e 2, respectivamente. O genótipo F foi descrito pela primeira no Brasil, um caso de cada grupo. Um amplo perfil de subgenótipos de C no grupo 2 sem SK foi encontrado (C1, C2, C3, C5 e C7). Subgenótipos K1 C5 e C7, exclusivos do grupo 2 (7%), foram confirmados como recombinantes. Não houve variabilidade genotípica de HHV-8 em amostras biológicas diferentes do mesmo indivíduo em oito casos estudados. Sítios polimórficos (6/59) em regiões codificadoras de miRNA do locus K12 foram observados, sendo 70% presentes exclusivamente em sequências de HHV-8 do grupo com SK e protótipos de SK. Conclusão. Embora não houvesse associação entre genótipos de HHV-8 e presença ou estadio de SK, o subgenótipo B1 foi significativamente relacionado ao melhor prognóstico de SK. Alguns recombinantes foram observados no locus K1 de HHV-8 em indivíduos do grupo 2 sem SK. A presença de SNPs em regiões codificadoras de miR12-12 e miR12-10 predominou em sequências de HHV-8 de indivíduos com SK, grupo 1, e protótipos de SK epidêmico, endêmico e clássico. A escoha de primers foi importante para garantir a amplificação de todos os genótipos e amplo perfil de subgenotipos de HHV-8. / HHV-8 (Human Herpes Virus 8) is the etiological agent of Kaposi\'s sarcoma (KS). Unlike other herpesviruses, the distribution of HHV-8 is not so ubiquitous around the world. There are seven major HHV-8 genotypes, according to the variability pattern of the ORF K1: A, B, C, D, E, F and Z. Studies on the genetic variability of HHV-8 may help to better understand the pathogenic potential of HHV-8 genotypes and their functional genotypic variations. Data on the genetic variability of HHV-8 in Brazil, where KS is associated with HIV infected people, remain scarce. To our knowledge, this is the first study comparing the genetic variability of HHV-8 among HIV-infected individuals with KS and without KS in Brazil. Objective. The study aimed to analyze the genetic variability of HHV-8 among HIV-infected individuals with and without KS. Casuistry and Methods. HHV-8 DNA sequences were obtained from samples of cryopreserved peripheral blood mononuclear cells from 37 individuals infected with HIV-KS (group 1); and saliva from individuals without KS (group 2) who were selected by means of detection of positive DNA/ORF73/HHV-8 from a total of 751 individuals. Demographic and clinical data (stage and progression of KS), as well as laboratory parameters were characterized. Molecular analysis and phylogenetic reconstructions were based on sequences of the ORFs K1 and/or K12 of HHV-8. Results. K1 and/or K12 DNA sequences of HHV-8 were obtained from 75 subjects, 34 from group 1 and 41 from group 2. The primer system used was able to detect the genotypes A, B, C, F and a wide profile of HHV- 8 K1 subgenotypes. Data showed no association of genotypes with the occurrence of KS or with visceral KS either. However, subgenotype B1 predominated in individuals who did not report any progression of KS (p=0.04). Subgenotypes B1 and C3 were equally prevalent in both groups. Genotype A frequencies were 24 % and 12.2% and genotypes B and C were 34.1 and 35.3 % in groups 1 and 2, respectively. We also described here for the first time the genotype F of HHV-8 in Brazil. A wide profile of subgenotypes C (C1, C2, C3, C5 and C7) in the group without KS was found. HHV-8 K1 DNA sequences of group 2 (7%) belonging to subgenotypes C5 and C7 were confirmed as recombinants. Our findings did not show virus variability in the same patient in samples collected at different times or from different biological material in the eight cases studied here. There was no statistical difference regarding the presence/absence of a given SNP from locus K12 between groups with and without KS. However, there were a total of 6/59 polymorphic sites in coding regions of miRNA, 70% of which present only in the HHV-8 DNA sequence of group with KS and KS prototypes. Conclusion. Although there was no association between HHV-8 genotypes and the presence of KS and KS clinical stage, subgenotype B1 was significantly related to the absence of progression of KS. Some recombinants in K1/HHV-8 locus were observed in the group without KS. The presence of SNPs in coding regions of miR12-12 and miR12- 10 predominated in sequences of HHV- 8 of SK cases (group 1) and of epidemic, endemic and classic KS prototypes. The choice of primers was essential to ensure amplification of all HHV- 8 genotypes and wide profile de subgenotypes.