Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2015-05-21T15:13:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DIGITAL.CCS.GEORGEA GERTRUDES DE OLIVEIRA MENDES CAHU.pdf: 2536289 bytes, checksum: 3d682a611b1761ef1a0a6979bde86913 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-21T15:13:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DIGITAL.CCS.GEORGEA GERTRUDES DE OLIVEIRA MENDES CAHU.pdf: 2536289 bytes, checksum: 3d682a611b1761ef1a0a6979bde86913 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / A infecção pelo herpes vírus humano tipo 8 (HHV-8) é endêmica na Amazônia e de endemicidade intermediária em doadores de sangue no Brasil. Estudos demonstraram um aumento na prevalência deste vírus em pessoas vivendo com HIV/aids. Contudo, ainda são escassos dados sobre a distribuição geográfica e descrições epidemiológicas da infecção pelo HHV-8 nesse país de dimensão continental. O presente estudo se propôs a estimar a prevalência e os fatores de risco associados à infecção pelo HHV-8 em pessoas vivendo com HIV/aids de Recife, nordeste do Brasil, no período de novembro de 2013 a julho de 2014. Foram pesquisados anticorpos contra o HHV-8 utilizando o ensaio imunoenzimático de vírus total (ELISA) em amostras de plasma de 500 indivíduos vivendo com HIV/aids. A prevalência do anti-HHV-8 encontrada foi de 28,6% (143/500; 95% IC, 24,72–32,82). A infecção pelo HHV-8 foi mais frequente entre o sexo masculino (31,9% homens HHV-8+ vs. 22,6% mulheres HHV-8+, OR: 1,605, 95% IC: 1,054 – 2,443; p = 0,03). A soroprevalência da infecção não variou de acordo com a idade. A infecção pelo HHV-8 foi mais frequente entre os indivíduos que tiveram carga viral do HIV detectável (p = 0,048). Entre o grupo de mulheres, ter idade menor que 40 anos (OR: 2,190, p = 0,042) e ter <18 anos na primeira relação sexual (OR: 2,540, p = 0,051), são variáveis que mostraram uma associação significante com a infecção pelo HHV-8. A frequência deste vírus entre 140 homens que fazem sexo com homem (HSH) foi de 38,6%. Este foi o primeiro estudo que abordou os aspectos epidemiológicos da infecção pelo HHV-8 no Nordeste do Brasil, uma região não endêmica para esta infecção, e que descreveu um aumento da circulação deste vírus em pessoas vivendo com HIV/aids e de forma mais intensa entre HSH. O presente estudo sugere um possível papel da transmissão não sexual nesta população.

Made available in DSpace on 2014-08-11T12:37:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) patricia_pereira_ipec_mest_2011.pdf: 7410297 bytes, checksum: 4e58503c3df5b42c2c9ba06556e24b56 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O sarcoma de Kaposi (SK) é a neoplasia mais diagnosticada em pacientes com SIDA e a detecção do antígeno nuclear latente do herpesvirus humano 8 (HHV8-LNA-1) tem se mostrado útil no seu diagnóstico histológico. O objetivo deste estudo é investigar a expressão do antígeno do HHV8 no sarcoma de Kaposi e seus simuladores histológicos em biópsias de pele de pacientes HIV positivos acompanhados no Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC) entre 2003 e 2010. A pesquisa do antígeno foi realizada em protocolo de imuno-histoquímica em 49 casos de SK cutâneo e em 60 casos de eventuais simuladores histológicos desta lesão (12 dermatofibromas, 17 hemangiomas, 8 granulomas piogênicos e 23 dermatites de estase). Dados clínico-epidemiológicos foram coletados a partir da revisão dos prontuários. O diagnóstico de SK foi confirmado por dois patologistas. A expressão nuclear do antígeno HHV-8 foi detectada em todos os casos de SK independentemente do estágio clínico da doença, e nenhuma positividade foi encontrada nos demais casos. Nossos resultados confirmam o valor diagnóstico do antígeno nuclear latente do HHV8 (HHV8-LNA-1) para diferenciar o SK de seus simuladores e consolidam sua utilização na rotina do laboratório de Anatomia Patológica do IPEC / Kaposi sarcoma is the most diagnosed neoplasia in AIDS patients and detection of human herpes virus 8 latent nuclear antigen (HHV8 - LNA - 1) has been shown to be an useful histological diagnostic test. The goal of this study is to investigate the expression of HHV8 antigen in Kaposi sarcoma and its histological simulators on skin biopsies from HIV positive patients followed in the Instituto de Pesquisa Clínica E vandro Chagas (IPEC) between 2003 and 2010. Immunohistochemistry protocol for the antigen was applied in 49 cases of cutaneous KS and in 60 cases of occasional histological simulators of this lesion (12 dermatofibromas, 17 hemangiomas, 8 pyogenic granuloma s and 23 stasis dermatitis). Clinical and epidemiological data were obtained from clinical files. The diagnosis of KS was confirmed by two pathologists. Expression to HHV8 - LNA - 1 was detected in all cases of KS despite its clinical stage and no positivity w as observed in the remainder cases. Our results confirm the diagnostic value of HHV8 latent nuclear antigen to distinguish KS from its simulators and consolidate its use in IPEC’s pathology laboratory daily practice

Orientadores: Raquel Silveira Bello Stucchi, Sandra Cecília Botelho Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T21:51:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Milan_Arlete_D.pdf: 3275520 bytes, checksum: 25bbae8b034967286ca090efbc210090 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O transplante de fígado tornou-se a terapia mais eficaz para o tratamento dos pacientes com doença hepática terminal, sendo que o sucesso pode ser limitado por complicações infecciosas no primeiro ano pós-transplante. O citomegalovírus é o tipo de infecção viral mais comum e está relacionado com a morbidade e mortalidade. A infecção bacteriana é uma séria complicação em pacientes transplantados de fígado. O Herpesvírus humano 8 tem uma distribuição global heterogênea, poucos estudos existem em pacientes submetidos à transplante de fígado. Nosso objetivo foi correlacionar a infecção do citomegalovírus e do Herpesvírus Humano 8 com a ocorrência de infecções bacterianas nos pacientes submetidos à transplante de fígado. Foram incluídos pacientes monitorados por seis meses para a detecção da infecção do citomegalovírus e do Herpesvírus Humano 8. As amostras foram realizadas no momento da cirurgia e semanalmente até o segundo mês, quinzenalmente no terceiro mês e mensalmente do quarto ao sexto mês. A infecção por citomegalovírus foi definida por antigenemia positiva (> três células) ou dois testes positivos de Nested-Reação em Cadeia de Polimerase com intervalo de 30 dias associada a sintomas clínicos. A metodologia para o diagnóstico de infecção bacteriana foi por meio de cultura de urina e de sangue através de testes bioquímicos e automatizado BacT / ALERT® 3 D - VITEK® (bioMérieux, França). A investigação para o Hespesvírus Humano 8 foi através da Nested-Reação em Cadeia de Polimerase da região Open Reading Frame-26 e confirmado pela sorologia da imunoglobulina G - Enzyme Linked Immunosorbet Assay the Advanced Biotechnologies Incorporated (Maryland, EUA). Teste do qui-quadrado foi utilizado para as variáveis dicotômicas com diferenças significativas quando p < 0,05. Cinquenta pacientes foram acompanhados no período de fevereiro de 2008 a janeiro de 2010. Vinte e um (42%) pacientes tiveram infecção bacteriana. Dezesseis pacientes (32%) apresentaram infecção por citomegalovírus . Dos 16 pacientes, 13 (81%) mostraram infecção bacteriana concomitante. Trinta e quatro pacientes (68%) não tiveram infecção por citomegalovírus e deles, 8 (24%) tiveram infecções bacterianas. Não encontramos em nossa casuística positividade para o Herpesvírus Humano 8. As infecções bacterianas pós-transplante de fígado foram associadas a infecção ativa pelo citomegalovírus / Abstract: Liver transplantation has become the most effective therapy for the treatment of patients with end-stage liver disease but its success can be limited by infectious complications during the first year post-transplant. Cytomegalovirus is the most common viral infection and it is associated with morbidity and mortality. Bacterial infection is a serious complication in liver transplant patients. Human Herpesvirus 8 has a global distribution heterogeneous; there are few studies in patients undergoing liver transplantation. Our objective was to correlate infection of cytomegalovirus and with the occurrence of bacterial infections in patients undergoing liver transplantation. This study included patients monitored for six months for detection of cytomegalovirus and of Human Herpesvirus 8 infection. The sample collections were performed at the time of surgery, weekly until the second month, twice a month in the third month, and monthly from the fourth to the sixth month. Cytomegalovirus infection was defined by positive antigenemia (> three cells) or two positive Nested-Polymerase Chain Reaction tests associated with clinical symptoms. The methodology for the diagnosis of bacterial infection was through biochemical tests and the automated BacT / ALERT® 3 D - VITEK® (bioMérieux, França) for identification and antibiogram using samples of urine and blood cultures. Research for Human Herpesvirus 8 was by Nested-Polymerase Chain Reaction region Open Reading Frame-26 and confirmed by serology IgG - Enzyme Linked Immunosorbet Assay the Advanced Biotechnologies Incorporated (Maryland, EUA). Chi-square test was used for dicotomic variables with significant differences when p < 0,05. Fifty patients were followed up from february 2008 to january 2010. Twenty-one (42%) patients had bacterial infection. Sixteen patients (32%) had citomegalovírus infection. Of the 16 patients, 13 (81%) showed concomitant bacterial infection. Thirty-four patients (68%) had no citomegalovírus infection, and of them, 8 (24%) had bacterial infections. Not found in our sample positive for Human Herpesvirus 8. Bacterial infections after liver transplantation were associated with cytomegalovirus active infection / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

Submitted by Angelo Silva (asilva@icict.fiocruz.br) on 2016-07-13T18:45:42Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 71853.pdf: 2511930 bytes, checksum: c11c765cbeaf1ef6dbaa98b8cb800465 (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-07-25T18:06:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 71853.pdf: 2511930 bytes, checksum: c11c765cbeaf1ef6dbaa98b8cb800465 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T18:06:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 71853.pdf: 2511930 bytes, checksum: c11c765cbeaf1ef6dbaa98b8cb800465 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os herpesvírus humanos (HHV) (herpes simples 1 e 2, varicella-zoster, Epstein-Barr, citomegalovírus humano, herpesvírus humanos 6A, 6B, 7 e 8) estão associados à diversas doenças, porém são nos indivíduos portadores do vírus da imunodeficiência humana (HIV) que estes herpesvírus causam infecção grave e duradoura, podendo levá-los ao óbito. Contudo, no Brasil, pouco é conhecido sobre a verdadeira prevalência das infecções causadas por HHV nesses indivíduos devido a poucos estudos realizados no país. Portanto, este trabalho visou determinar a prevalência desta co-infecção HIV/Herpesvírus humanos através de um diagnóstico diferencial que detecta simultaneamente as nove espécieis de HHV (Pan-herpesvírus). Este método é baseado na amplificação, por reação em cadeia da polimerase (PCR) Nested, de uma região altamente conservada (DPOL) do genoma desses vírus e na identificação da espécie viral por sequenciamento do genoma viral. Além disso, este estudo visou avaliar possíveis fatores associados com a prevalência desta co-infecção, como sexo, idade e taxas de linfócitos T CD4+ (LT CD4+), e destinou-se comparar a prevalência das infecções causadas por HHV entre indivíduos HIV reagentes (grupo teste) e indivíduos não reagentes para este vírus (grupo controle). Para isso, 241 amostras de soro de indivíduos portadores do HIV coletadas durante os anos de 2012 (95 amostras), 2013 (89 amostras) e 2014 (57 amostras), e 94 amostras de soro de indivíduos HIV não reagentes coletadas durante o ano de 2013 foram testadas através de PCR Nested As amostras amplificadas foram sequenciadas para a identificação da espécie viral. Com isso, neste estudo foi encontrada prevalência da co-infecção HIV/HHV de 14,1% (34/241), sendo 13% (31/241), 0,8% (2/241) e 0,4% (1/241) relacionado às co-infecções HIV/HSV-1, HIV/HHV-6 e HIV/HHV-8, respectivamente. Também foi observada diminuição estatisticamente significativa (p-valor < 0,0001) da prevalência da co-infecção HIV/HHV durante os anos estudados. Já o grupo controle obteve menor prevalência da infecção causada por HHV (1,1%; 1/94) e foi referente à infecção causada por HHV-6. Ademais, foi verificada associação estatisticamente significativa da detecção da co-infecção HIV/HSV-1 com as taxas de LT CD4+, evidenciando que a taxa LT CD4+ <500 células/mm³ é um fator de risco para infecções causadas por HSV-1 em indivíduos HIV reagentes (p-valor < 0,0327/ p-valor <0,0186). A partir disto, foi verificado que o Pan-herpesvírus foi eficiente na detecção das co-infecções HIV/HSV-1, HIV/HHV-6 e HIV/HHV-8. Sendo assim, este trabalho contribuiu para a investigação da prevalência das infecções causadas por herpesvírus humanos em indivíduos HIV reagentes no Rio de Janeiro/Brasil / The human herpesviruses (HHV) (herpes simplex 1 and 2, varicella-zoster, Epstein-Barr virus, human cytomegalovirus, human herpesviruses 6A, 6B, 7 and 8) are associated with several diseases, but these herpesviruses cause serious and lasting infection in individuals infected by the human immunodeficiency virus (HIV) and can lead to death. However, in Brazil few is known about the true prevalence of human herpesviruses infection in these individuals because of few studies in the country. Therefore, this study aimed to determine the prevalence of co-infection HIV/human herpesviruses through a differential diagnosis that simultaneously detects nine HHV species (Pan-herpesviruses). This method is based on amplification a highly conserved region (DPOL) genome of these viruses by Nested polymerase chain reaction (PCR) and on viral species identification by sequencing of the viral genome. In addition, this study aimed to evaluate possible factors associated with the prevalence of co-infection, such as sex, age and T CD4+ lymphocytes rates (LT CD4+), and aimed to compare the prevalence of infections caused by HHV among individuals HIV reagents and no reagents for this virus (control group). For this, 241 serum samples from individuals with HIV collected during the years 2012 (95 samples), 2013 (89 samples) and 2014 (57 samples), and 94 serum samples from individuals without HIV collected during the year 2013 were tested by Nested PCR The amplified samples were sequenced for identification of the viral species. This study found prevalence of co-infection HIV/HHV 14,1% (34/241), in which 13% (31/241), 0,8% (2/241) and 0,4% (1/241) were related with the co-infections HIV/HSV-1, HIV/HHV-6 and HIV/HHV-8, respectively. A decrease statistically significant (p-value <0,0001) in the prevalence of co-infection HIV/HHV was observed during the years of study. The control group had lower prevalence of infection caused by HHV (1,1%; 1/94) and was related with the infection caused by HHV-6. In addition, there was a statistically significant association between detection of co-infection HIV/HSV-1 with LT CD4+ rates, showing that LT CD4+ rate <500 cells/mm³ is a risk factor for infections caused by HSV-1 in individuals HIV reagents (p-value <0,0327 / p-value <0,0186). From this, was verified that the Pan-herpesviruses was efficient in the detection of co-infections HIV/HSV-1, HIV/HHV-6 and HIV/HHV-8. Therefore, this study contributed to the investigation of the prevalence of infections caused by human herpesviruses in people living with HIV in Rio de Janeiro/Brazil

O Herpesvírus 8 humano (HHV-8) é endêmico em populações africanas e indígenas da região Amazônica. A infecção nestas populações acontece durante a infância e, na África, envolve o contato íntimo no ambiente intrafamiliar. Diversos estudos confirmam a distribuição geográfica dos diferentes subtipos de HHV-8, sendo que o subtipo E é típico das populações indígenas. Objetivos: 1. Caracterizar o(s) subtipo(s) de HHV-8 que circula(m) em população indígena da Amazônia brasileira baseado na análise da região ORF K1 do vírus; 2. Construir a árvore filogenética dos subtipos virais encontrados; 3. Comparar filogeneticamente os subtipos encontrados com os subtipos prevalentes em outras populações indígenas do Brasil e de outros países da América do Sul; 4. Calcular a taxa de substituição para a região VR1 do HHV-8 para as amostras estudadas; 5. Estimar a data de entrada do vírus na população do estudo; 6. Investigar a dinâmica de transmissão do vírus no ambiente intrafamiliar; 7. Averiguar se há correlação entre os alelos de HLA classe I (A e B) e II (DQB1 e DRB1) e suscetibilidade à infecção por HHV-8. Casuística e métodos: Estudo de soroprevalência da infecção por HHV-8 em amostra de população indígena da Amazônia brasileira utilizando IFI para detecção de antígenos da fase latente (LANA) e lítica (Lítico) do vírus. Análise filogenética da amostras encontradas utilizando-se o DNA/HHV-8 extraído de amostras de saliva, submetidas à reação de nested PCR para amplificar as regiões hipervariáveis VR1 e VR2. Cálculo da taxa de substituição do HHV-8, utilizando-se os métodos de distância e técnica bayesiana. Estimar a data do ancestral comum mais recente para as amostras em estudo, utilizando-se o programa BEAST. Tipagem de HLA de indivíduos positivos e negativos para a infecção por HHV-8, utilizando-se a técnica de PCR-SSO. Resultados: A soroprevalência geral da infecção por HHV-8 na população em estudo foi de 75,3% (399/530). Observou-se que a soropositividade dos filhos está correlecionada com a soropositividade materna. O único subtipo viral encontrado foi o subtipo E. A taxa de substituição de nucleotídeos do HHV-8 utilizando a região VR1 foi da ordem de 6x10-4 substituições por sítio por ano (s/s/a). Ao analisar todas as seqüências estudadas o ancestral comum mais recente está em torno de 138 anos. Não houve correlação entre a susceptibilidade à infecção por HHV-8 e alelos de HLA classe I ou II. Conclusões: A população estudada é endêmica para a infecção por HHV-8. A infecção ocorre principalmente na infância, por via horizontal não-sexual, e a transmissão se dá provavelmente pela saliva. Assim como em outras populações endêmicas da África, a soropositvidade dos filhos está correlacionada com a soropositividade das mães. Confirmando achados anteriores, o único subtipo do HHV-8 circulante na população estudada, foi o subtipo E. Nossos dados sugerem que a região do gene VR1 do HHV-8 evolui com uma taxa de 6x10-4 substituições por sítio por ano (s/s/a), e que o ancestral comum mais recente do vírus, a partir das amostras analisadas está em torno de 138 anos. Os dados sugerem, também, que não há correlação entre a susceptibilidade à infecção por HHV-8 e os alelos de HLA classe I ou II. / The human herpesvirus 8 (HHV-8) is endemic in Africa and Amerindian populations from Amazon region. The infection in those populations occurs during childhood and, in Africa, involves a close contact in intrafamilial environment. Several studies confirm the geographical distribution of different subtypes of HHV-8, and the subtype E is typical of the Amerindian population. Objectives: 1. To characterize the HHV-8 subtypes circulating in Amerindian population from Brazilian Amazon, based on the analysis of ORF K1 region of the virus. 2. To construct a phylogenetic tree of viral subtypes found among Amerindians 3. To compare by phylogenetic methods the subtypes found in Mapuera Amerindians with the subtypes prevalent in others Amerindians populations of Brazil and South America 4. To determine the substitution rate of VR1 region of HHV-8 for the sequences obtained in the present study 5. To estimate the date of entry of the viruses in the Mapuera population 6. To investigate the dynamic of transmission of the virus in the intrafamilial environment 7. To investigate if there is a correlation between susceptibility to HHV-8-infection and HLA class I (A and B) and II (DQB1 and DRB1) alleles. Patients and methods: The seroprevalence of HHV-8 infection in a sample of the indigenous population of the Brazilian Amazon was carried out using IFA to detect antibodies to latent (LANA) and lytic phase antigens of HHV-8. Phylogenetic analysis of the sequences was performed by using the DNA extracted from samples of saliva, using a nested PCR to amplify the hypervariable regions VR1/ VR2 of HHV-8. Estimation of the substitution rate of HHV-8 nucleotides was performed by using the method of distance and the Bayesian technique. Estimates of the time of the most recent common ancestor (TMRCA) for all samples studied were done by using the BEAST program. HLA typing of positive and negative subjects for HHV-8 infection was performed by using the PCR-SSO technique. Results: The overall HHV-8 seroprevalence was 75.3% (399/530). There was a positive correlation between soropositivity of children and maternal seropositivity. The only viral subtype found was subtype E. The substitution rate of HHV-8 using the VR1 region was estimated around 6x10-4 substitutions per site per year (s / s / y). By using this rate of substitution, the TMRCA of the Mapuera viruses sequences was estimated to be around 138 years. There was no correlation between susceptibility to HHV-8-infection and HLA class I or II alleles. Conclusions: The population studied is endemic for HHV-8 infection. The infection occurs mainly in childhood, by horizontal, nonsexual transmission, probably by saliva. As in endemic populations of Africa, the soropositvity of children is positively correlated with the seropositivity of the mothers. In agreement with previous reports, the subtype E was the only HHV-8 subtype found in Mapuera Amerindians. Our data suggest that the VR1 gene region of HHV-8 evolves with a rate of 6x10-4 substitutions per site per year (s / s / y), which results in a time of the most recent common ancestor for Mapuera HHV-8 sequences of 138 years. There was no correlation between susceptibility to HHV-8-infection and HLA class I or II alleles.

O Herpesvírus 8 humano (HHV-8) é endêmico em populações africanas e indígenas da região Amazônica. A infecção nestas populações acontece durante a infância e, na África, envolve o contato íntimo no ambiente intrafamiliar. Diversos estudos confirmam a distribuição geográfica dos diferentes subtipos de HHV-8, sendo que o subtipo E é típico das populações indígenas. Objetivos: 1. Caracterizar o(s) subtipo(s) de HHV-8 que circula(m) em população indígena da Amazônia brasileira baseado na análise da região ORF K1 do vírus; 2. Construir a árvore filogenética dos subtipos virais encontrados; 3. Comparar filogeneticamente os subtipos encontrados com os subtipos prevalentes em outras populações indígenas do Brasil e de outros países da América do Sul; 4. Calcular a taxa de substituição para a região VR1 do HHV-8 para as amostras estudadas; 5. Estimar a data de entrada do vírus na população do estudo; 6. Investigar a dinâmica de transmissão do vírus no ambiente intrafamiliar; 7. Averiguar se há correlação entre os alelos de HLA classe I (A e B) e II (DQB1 e DRB1) e suscetibilidade à infecção por HHV-8. Casuística e métodos: Estudo de soroprevalência da infecção por HHV-8 em amostra de população indígena da Amazônia brasileira utilizando IFI para detecção de antígenos da fase latente (LANA) e lítica (Lítico) do vírus. Análise filogenética da amostras encontradas utilizando-se o DNA/HHV-8 extraído de amostras de saliva, submetidas à reação de nested PCR para amplificar as regiões hipervariáveis VR1 e VR2. Cálculo da taxa de substituição do HHV-8, utilizando-se os métodos de distância e técnica bayesiana. Estimar a data do ancestral comum mais recente para as amostras em estudo, utilizando-se o programa BEAST. Tipagem de HLA de indivíduos positivos e negativos para a infecção por HHV-8, utilizando-se a técnica de PCR-SSO. Resultados: A soroprevalência geral da infecção por HHV-8 na população em estudo foi de 75,3% (399/530). Observou-se que a soropositividade dos filhos está correlecionada com a soropositividade materna. O único subtipo viral encontrado foi o subtipo E. A taxa de substituição de nucleotídeos do HHV-8 utilizando a região VR1 foi da ordem de 6x10-4 substituições por sítio por ano (s/s/a). Ao analisar todas as seqüências estudadas o ancestral comum mais recente está em torno de 138 anos. Não houve correlação entre a susceptibilidade à infecção por HHV-8 e alelos de HLA classe I ou II. Conclusões: A população estudada é endêmica para a infecção por HHV-8. A infecção ocorre principalmente na infância, por via horizontal não-sexual, e a transmissão se dá provavelmente pela saliva. Assim como em outras populações endêmicas da África, a soropositvidade dos filhos está correlacionada com a soropositividade das mães. Confirmando achados anteriores, o único subtipo do HHV-8 circulante na população estudada, foi o subtipo E. Nossos dados sugerem que a região do gene VR1 do HHV-8 evolui com uma taxa de 6x10-4 substituições por sítio por ano (s/s/a), e que o ancestral comum mais recente do vírus, a partir das amostras analisadas está em torno de 138 anos. Os dados sugerem, também, que não há correlação entre a susceptibilidade à infecção por HHV-8 e os alelos de HLA classe I ou II. / The human herpesvirus 8 (HHV-8) is endemic in Africa and Amerindian populations from Amazon region. The infection in those populations occurs during childhood and, in Africa, involves a close contact in intrafamilial environment. Several studies confirm the geographical distribution of different subtypes of HHV-8, and the subtype E is typical of the Amerindian population. Objectives: 1. To characterize the HHV-8 subtypes circulating in Amerindian population from Brazilian Amazon, based on the analysis of ORF K1 region of the virus. 2. To construct a phylogenetic tree of viral subtypes found among Amerindians 3. To compare by phylogenetic methods the subtypes found in Mapuera Amerindians with the subtypes prevalent in others Amerindians populations of Brazil and South America 4. To determine the substitution rate of VR1 region of HHV-8 for the sequences obtained in the present study 5. To estimate the date of entry of the viruses in the Mapuera population 6. To investigate the dynamic of transmission of the virus in the intrafamilial environment 7. To investigate if there is a correlation between susceptibility to HHV-8-infection and HLA class I (A and B) and II (DQB1 and DRB1) alleles. Patients and methods: The seroprevalence of HHV-8 infection in a sample of the indigenous population of the Brazilian Amazon was carried out using IFA to detect antibodies to latent (LANA) and lytic phase antigens of HHV-8. Phylogenetic analysis of the sequences was performed by using the DNA extracted from samples of saliva, using a nested PCR to amplify the hypervariable regions VR1/ VR2 of HHV-8. Estimation of the substitution rate of HHV-8 nucleotides was performed by using the method of distance and the Bayesian technique. Estimates of the time of the most recent common ancestor (TMRCA) for all samples studied were done by using the BEAST program. HLA typing of positive and negative subjects for HHV-8 infection was performed by using the PCR-SSO technique. Results: The overall HHV-8 seroprevalence was 75.3% (399/530). There was a positive correlation between soropositivity of children and maternal seropositivity. The only viral subtype found was subtype E. The substitution rate of HHV-8 using the VR1 region was estimated around 6x10-4 substitutions per site per year (s / s / y). By using this rate of substitution, the TMRCA of the Mapuera viruses sequences was estimated to be around 138 years. There was no correlation between susceptibility to HHV-8-infection and HLA class I or II alleles. Conclusions: The population studied is endemic for HHV-8 infection. The infection occurs mainly in childhood, by horizontal, nonsexual transmission, probably by saliva. As in endemic populations of Africa, the soropositvity of children is positively correlated with the seropositivity of the mothers. In agreement with previous reports, the subtype E was the only HHV-8 subtype found in Mapuera Amerindians. Our data suggest that the VR1 gene region of HHV-8 evolves with a rate of 6x10-4 substitutions per site per year (s / s / y), which results in a time of the most recent common ancestor for Mapuera HHV-8 sequences of 138 years. There was no correlation between susceptibility to HHV-8-infection and HLA class I or II alleles.

Sarcoma de Kaposi (SK) é um tumor de origem vascular associado ao herpesvírus 8 humano (HHV-8). A incidência do SK-AIDS tem diminuído após o advento da terapia anti-retroviral combinada (HAART), sem estudos relacionando a resposta inflamatória cutânea e a expressão de HHV-8 na era pré e pós HAART. Utilizamos a immuno-histoquímica para caracterizar e quantificar in situ as células inflamatórias, o padrão de citocinas e a expressão de HHV-8 em lesões cutâneas de sarcoma de Kaposi clássico (SKC), sarcoma de Kaposi associado à AIDS (com ou sem HAART). O número diminuído de linfócitos TCD4+ em lesões de SK-AIDS quando comparado com SKC, reflete a imunodeficiência severa causada pelo HIV. O número de linfócitos TCD8+ foi similar nos três grupos de SK, o qual parece não se correlacionar com a forma clínico-epidemiológica do SK. As células S100+ e DD FXIIIa+ estiveram aumentadas em todas as lesões de SK comparadas com a pele normal. Nós também encontramos uma população celular dérmica S100+CD1a- peculiar nas lesões de SK. Os macrófagos CD68+ estiveram aumentados nas lesões de SKC quando comparados com as lesões de SK-AIDS, mas similares com aqueles encontrados em lesões de SK-AIDS/HAART. Dados semelhantes foram encontrados nas células de Langerhans epidérmicas nesses grupos, sugerindo uma recuperação immune parcial através da HAART. O número aumentado de células expressando IFN- em lesões de SKC e SK-AIDS/HAART quando comparado com SK-AIDS sugere essa citocina como um indicador de resposta imune mais eficaz. A expressão aumentada de IL-1 nas lesões de SKC e SK-AIDS/HAART poderia estar relacionada ao seu efeito anti-tumoral. A expressão de TNF-, IL-4 e IL-6 foram similares entre as lesões de SK avaliadas. Através de dupla marcação, a identificação nuclear de HHV-8 em DD FXIIIa+ sugere esse tipo celular como alvo para infecção por HHV-8. As lesões de SKC apresentaram número aumentado de células com expressão de HHV-8 quando comparado com os grupos de SK-AIDS, independente da HAART. Nosso estudo mostra que existiu uma recuperação da resposta immune local nas lesões de SK-AIDS/HAART e que a severidade clínica do SK não pode estar diretamente associada com a densidade aumentada de células infectadas pelo HHV-8 no tecido / Kaposis sarcoma (KS) is a vascular-originated tumor associated to human herpesvirus 8 (HHV-8). The incidence of AIDS-KS has decreased after the advent of highly active antiretroviral therapy (HAART), without studies regarding cutaneous inflammatory response and HHV-8 expression in pre- and post-HAART era. We used immunohistochemistry to characterize and to quantify in situ inflammatory cells, its cytokines pattern and the expression of HHV-8 in cutaneous lesions of classic Kaposis sarcoma (CKS), AIDS associated Kaposis sarcoma (with or without HAART). The decreased number of T CD4+ lymphocytes in lesions of AIDS-KS as compared with CKS, reflect the severe immunodeficiency caused by HIV. T CD8+ lymphocytes numbers were similar in three KS groups, which appeared unrelated to the clinical or epidemiological type of KS. S100+ cells and FXIIIa+ DD were increased in all KS lesions as compared with normal skin. We also found a peculiar dermal cellular population in KS lesions. CD68+ macrophages were higher in CKS lesions as compared with AIDS-KS lesions, but similar to those found in lesions of HAART/AIDS-KS. Similar data were found in epidermal Langerhans cells in these groups, suggesting a partial immune recovery by HAART. The high number of cells expressing IFN- in CKS lesions and HAART/AIDS-KS as compared with AIDS-KS suggests that this cytokine may be a marker of effective immune response. The increased expression of IL-1 in CKS lesions and HAART/AIDS-KS could be related with its anti-tumor effect. Expression of TNF-, IL-4 e IL-6 were similar between KS lesions. Demonstrated by double-immunostaining, nuclear identification of HHV-8 in FXIIIa+ DD suggests this cell type as target for HHV-8 infection. CKS lesions showed increased number of cells with HHV-8 expression as compared with another groups of AIDS-KS, independent of HAART. Our data shown that there was a partial recovery of local immune response in HAART/AIDS-KS lesions and that the KS clinical severity cannot be directly associated with the increased density of HHV-8 infected cells in tissue

A prevalência de anticorpos e DNA viral de HHV-8 em 400 doadores de sangue e 50 indivíduos politransfundidos da Fundação Pró-Sangue Hemocentro de São Paulo, através das técnicas de Nested PCR e IFI para antígenos lítico e latente. Foi detectada uma soroprevalência mais alta entre doadores de sangue(4%) quando comparados a indivíduos politransfundidos (14%) (p= 0,002). A prevalência também foi mais alta entre mulheres em relação a homens, 7% versus 1.8% (p= 0,012; 95% IC 1,14 - 16,6). Foram detectados DNA de HHV-8 no plasma e PBMC de um doador 0.25%. Esta amostra foi seqüenciada confirmando a presença de HHV-8. O encontro de DNA viral no plasma de um doador de sangue indica a transfusão sanguínea como um possível meio de transmissão deste agente / The prevalence of antibodies and DNA viral of HHV-8 in 400 donors of blood and 50 receiving of the Fundação Pró-Sangue Hemocentro of São Paulo, through Nested PCR'S techniques and IFI for lithic and latent antigens. A seroprevalence of 4% was detected in the donors of blood and 14% in receiving, significantly high in comparison with the prevalence in donors of blood (p = 0,002). There was a significant difference in the prevalence among men 1,8% and 7% in the women (p= 0,012; 95% CI 1,14 - 16,6). They were detected DNA of HHV-8 in the plasma and a donor's 6,3% PBMC, and it was sequenced and submitted to the Gene Bank where presented 100% of identity. This allows to define the transmission tax and the need of introducing methods for this agent's selection

Sarcoma de Kaposi (SK) é um tumor de origem vascular associado ao herpesvírus 8 humano (HHV-8). A incidência do SK-AIDS tem diminuído após o advento da terapia anti-retroviral combinada (HAART), sem estudos relacionando a resposta inflamatória cutânea e a expressão de HHV-8 na era pré e pós HAART. Utilizamos a immuno-histoquímica para caracterizar e quantificar in situ as células inflamatórias, o padrão de citocinas e a expressão de HHV-8 em lesões cutâneas de sarcoma de Kaposi clássico (SKC), sarcoma de Kaposi associado à AIDS (com ou sem HAART). O número diminuído de linfócitos TCD4+ em lesões de SK-AIDS quando comparado com SKC, reflete a imunodeficiência severa causada pelo HIV. O número de linfócitos TCD8+ foi similar nos três grupos de SK, o qual parece não se correlacionar com a forma clínico-epidemiológica do SK. As células S100+ e DD FXIIIa+ estiveram aumentadas em todas as lesões de SK comparadas com a pele normal. Nós também encontramos uma população celular dérmica S100+CD1a- peculiar nas lesões de SK. Os macrófagos CD68+ estiveram aumentados nas lesões de SKC quando comparados com as lesões de SK-AIDS, mas similares com aqueles encontrados em lesões de SK-AIDS/HAART. Dados semelhantes foram encontrados nas células de Langerhans epidérmicas nesses grupos, sugerindo uma recuperação immune parcial através da HAART. O número aumentado de células expressando IFN- em lesões de SKC e SK-AIDS/HAART quando comparado com SK-AIDS sugere essa citocina como um indicador de resposta imune mais eficaz. A expressão aumentada de IL-1 nas lesões de SKC e SK-AIDS/HAART poderia estar relacionada ao seu efeito anti-tumoral. A expressão de TNF-, IL-4 e IL-6 foram similares entre as lesões de SK avaliadas. Através de dupla marcação, a identificação nuclear de HHV-8 em DD FXIIIa+ sugere esse tipo celular como alvo para infecção por HHV-8. As lesões de SKC apresentaram número aumentado de células com expressão de HHV-8 quando comparado com os grupos de SK-AIDS, independente da HAART. Nosso estudo mostra que existiu uma recuperação da resposta immune local nas lesões de SK-AIDS/HAART e que a severidade clínica do SK não pode estar diretamente associada com a densidade aumentada de células infectadas pelo HHV-8 no tecido / Kaposis sarcoma (KS) is a vascular-originated tumor associated to human herpesvirus 8 (HHV-8). The incidence of AIDS-KS has decreased after the advent of highly active antiretroviral therapy (HAART), without studies regarding cutaneous inflammatory response and HHV-8 expression in pre- and post-HAART era. We used immunohistochemistry to characterize and to quantify in situ inflammatory cells, its cytokines pattern and the expression of HHV-8 in cutaneous lesions of classic Kaposis sarcoma (CKS), AIDS associated Kaposis sarcoma (with or without HAART). The decreased number of T CD4+ lymphocytes in lesions of AIDS-KS as compared with CKS, reflect the severe immunodeficiency caused by HIV. T CD8+ lymphocytes numbers were similar in three KS groups, which appeared unrelated to the clinical or epidemiological type of KS. S100+ cells and FXIIIa+ DD were increased in all KS lesions as compared with normal skin. We also found a peculiar dermal cellular population in KS lesions. CD68+ macrophages were higher in CKS lesions as compared with AIDS-KS lesions, but similar to those found in lesions of HAART/AIDS-KS. Similar data were found in epidermal Langerhans cells in these groups, suggesting a partial immune recovery by HAART. The high number of cells expressing IFN- in CKS lesions and HAART/AIDS-KS as compared with AIDS-KS suggests that this cytokine may be a marker of effective immune response. The increased expression of IL-1 in CKS lesions and HAART/AIDS-KS could be related with its anti-tumor effect. Expression of TNF-, IL-4 e IL-6 were similar between KS lesions. Demonstrated by double-immunostaining, nuclear identification of HHV-8 in FXIIIa+ DD suggests this cell type as target for HHV-8 infection. CKS lesions showed increased number of cells with HHV-8 expression as compared with another groups of AIDS-KS, independent of HAART. Our data shown that there was a partial recovery of local immune response in HAART/AIDS-KS lesions and that the KS clinical severity cannot be directly associated with the increased density of HHV-8 infected cells in tissue

A prevalência de anticorpos e DNA viral de HHV-8 em 400 doadores de sangue e 50 indivíduos politransfundidos da Fundação Pró-Sangue Hemocentro de São Paulo, através das técnicas de Nested PCR e IFI para antígenos lítico e latente. Foi detectada uma soroprevalência mais alta entre doadores de sangue(4%) quando comparados a indivíduos politransfundidos (14%) (p= 0,002). A prevalência também foi mais alta entre mulheres em relação a homens, 7% versus 1.8% (p= 0,012; 95% IC 1,14 - 16,6). Foram detectados DNA de HHV-8 no plasma e PBMC de um doador 0.25%. Esta amostra foi seqüenciada confirmando a presença de HHV-8. O encontro de DNA viral no plasma de um doador de sangue indica a transfusão sanguínea como um possível meio de transmissão deste agente / The prevalence of antibodies and DNA viral of HHV-8 in 400 donors of blood and 50 receiving of the Fundação Pró-Sangue Hemocentro of São Paulo, through Nested PCR'S techniques and IFI for lithic and latent antigens. A seroprevalence of 4% was detected in the donors of blood and 14% in receiving, significantly high in comparison with the prevalence in donors of blood (p = 0,002). There was a significant difference in the prevalence among men 1,8% and 7% in the women (p= 0,012; 95% CI 1,14 - 16,6). They were detected DNA of HHV-8 in the plasma and a donor's 6,3% PBMC, and it was sequenced and submitted to the Gene Bank where presented 100% of identity. This allows to define the transmission tax and the need of introducing methods for this agent's selection