Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-16T21:44:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Pablo de Ataide Ferreira.pdf: 1795536 bytes, checksum: cd2f0468dfad20515e2a0e2b5588594c (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-27T22:45:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Pablo de Ataide Ferreira.pdf: 1795536 bytes, checksum: cd2f0468dfad20515e2a0e2b5588594c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-27T22:45:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Pablo de Ataide Ferreira.pdf: 1795536 bytes, checksum: cd2f0468dfad20515e2a0e2b5588594c (MD5) Previous issue date: 2016-09-15 / FACEPE / O sulfato de Hidroxicloroquina (SHC) integra a relação de fármacos recomendados no consenso brasileiro de doenças reumáticas. Associação em Dose Fixa (ADF) é uma combinação de dois ou mais insumos farmacêuticos ativos em uma razão fixa de doses em uma mesma forma farmacêutica. Por associar atividade anti-inflamatória, imunomoduladora e antiartrítica, B trimera (Less.) DC, popularmente conhecida como carqueja, é um material vegetal promissor para compor uma ADF com a SHC, como alternativa inovadora para o tratamento da artrite reumatoide. Comodidade para o paciente e consequentemente, incremento na adesão ao tratamento são razões aventadas para estimular desenvolvimento de uma ADF. Este trabalho teve como objetivo otimizar a obtenção desta em ADF em escala piloto, assim como avaliar a toxicidade aguda e crônica da ADF em modelos experimentais. Foram desenvolvidos também, estudos acerca dos modelos de indução de artrite em roedores. Os resultados para o lote-piloto obtido, demostraram estar de acordo com os resultados descritos na literatura. Mediante o estudo de toxicidade aguda, foi possível determinação da DL₅₀ da SHC na ADF, obtendo-se um valor de 762,34 mg/Kg. O estudo de toxicidade crônica da dose de 150-4,2 mg/Kg (SHC-B. trimera) respectivamente, não demonstrou sinais de toxicidade. Em relação ao modelo experimental de indução artrite em camundongos, não foi observada diferença estatística significativa em relação ao índice de artrite apresentado pelo grupo CIA (artrite induzida por cartilagem) e seu grupo controle. Em relação ao modelo de indução de artrite em ratos Wistar, os resultados obtidos demostraram não haver homogeneidade na indução, pois observou-se um elevado desvio-padrão intra-grupo, assim como houve diferença significativa entre vários grupos de animais induzidos. Portanto, conclui-se que os protocolos experimentais de indução de artrite são de caráter complexo, visto que vários fatores são determinantes na responsividade dos animais frente aos modelos descritos na literatura. O lote-piloto obtido demonstrou estar de acordo com as normas vigentes, conferindo à ADF confiabilidade necessária para o desenvolvimento de ensaios em animais. / Hydroxychloroquine sulfate (HCS) integrates the recommended drug ratio in the Brazilian consensus of rheumatic diseases. Fixed Dose Association (FDA) is a combination of two or more active pharmaceutical ingredients in a fixed dose ratio in the same pharmaceutical form. By combining antiinflammatory, immunomodulatory and antiarthritic activity, B trimera (Less.) DC, popularly known as carqueja, is a promising plant material to compose an FDA with HCS as an innovative alternative for the treatment of rheumatoid arthritis. Comfort for the patient and consequently, increased adherence to treatment are reasons to encourage the development of an FDA. The objective of this study was to optimize its use in pilot-scale FDA, as well as to evaluate the acute and chronic toxicity of FDA in experimental models. Studies on the models of rodent arthritis induction have also been developed. The results for the pilot-scale obtained were in agreement with the results described in the literature. Through the acute toxicity study, it was possible to determine the LD50 of SHC in the ADF, obtaining a value of 762.34 mg / kg. The chronic toxicity study at the dose of 150-4.2 mg / kg (SHC-B. trimera) respectively showed no signs of toxicity. Regarding the experimental model of arthritis induction in mice, no significant statistical difference was observed in relation to the arthritis index presented by the CIA group (collagen-induced arthritis) and its control group. Regarding the model of induction of arthritis in Wistar rats, the results obtained showed no homogeneity in the induction, since a high intra-group standard deviation was observed, as well as there was a significant difference between several groups of induced animals. Therefore, it is concluded that the experimental protocols of induction of arthritis are complex, since several factors are determinant in the responsiveness of the animals to the models described in the literature. The pilot-lot obtained proved to be in compliance with the current standards, giving the FDA reliability necessary for the development of animal tests.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-10-13T12:17:17Z No. of bitstreams: 1 hervaldelacerdabonfante.pdf: 995668 bytes, checksum: 748fb8eea98b5b0a025cf634a825ef38 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-10-22T12:55:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 hervaldelacerdabonfante.pdf: 995668 bytes, checksum: 748fb8eea98b5b0a025cf634a825ef38 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-22T12:55:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 hervaldelacerdabonfante.pdf: 995668 bytes, checksum: 748fb8eea98b5b0a025cf634a825ef38 (MD5) Previous issue date: 2008-05-15 / Este estudo teve o objetivo de avaliar o uso de hidroxicloroquina (HCQ) em pacientes com osteoartrite (OA) primária e sintomática de joelhos analisando a resposta clínica através de índices funcionais como o Western Ontario and McMaster Universities Index (WOMAC), o índice algo funcional de Lequesne e a escala visual analógica (EVA). Por outro lado, avaliou a dosagem sérica das quimiocinas monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), interleukin-8 (IL-8), interferon gamma-inducible protein-10 (IP-10) e monokyne induced by interferon-gamma (MIG) e a influência do uso da HCQ nestas dosagens. Concluíram o estudo 29 pacientes com diagnóstico de OA sintomática de joelhos que foram divididos em 2 grupos, 16 pacientes utilizaram HCQ na dosagem de 400mg/dia e 13 receberam placebo. O estudo teve a duração de 16 semanas. Dois grupos controle foram incluídos nesse estudo, o primeiro constituído de 10 indivíduos que não possuíam OA de joelhos, com idade superior a 60 anos (controle idoso), não apresentavam queixas álgicas, nem evidência clínica ou radiológica de OA de joelhos e o segundo formado por 10 indivíduos adultos jovens sadios com idade inferior a 40 anos (controle jovem). As quimiocinas MCP-1, IL-8, IP-10 e MIG foram dosadas no soro, utilizando o método de citometria de fluxo (cytometric bead array). A dosagem destas quimiocinas foi repetida após quatro meses nos 29 pacientes com OA. Quanto aos resultados, não houve diferença significativa entre os grupos com OA nos índices de WOMAC, Lequesne e na EVA. Com relação a dosagem de quimiocinas, não houve diferença entre os pacientes com OA antes e após o tratamento com HCQ. O grupo formado por adultos jovens apresentou dosagem menor das quimiocinas IP-10 (p = 0,02), MCP-1 (p = 0,04), MIG (p < 0.0001) e IL-8 (p < 0.0001) em relação aos dois grupos de pacientes e ao grupo controle idoso. Concluiu-se que a HCQ utilizada por 4 meses, não alterou os níveis séricos das quimiocinas MCP-1, IL-8, IP-10 e MIG em pacientes com OA sintomática de joelhos, entretanto os pacientes com OA e os indivíduos com idade superior a 60 anos apresentaram níveis séricos de todas as quimiocinas estudadas maiores que o grupo jovem, sendo mais evidente nas dosagens de MCP-1 e IL-8 no grupo com OA quando comparado com o grupo jovem, demonstrando que ocorre um aumento dos níveis séricos de quimiocinas com o envelhecimento.Ficou caracterizada a importância da obesidade na OA, não só pela grande prevalência neste estudo, como pela diferença estatisticamente significativa do índice de massa corporal (IMC) entre o grupo idoso sem evidências clínicas de OA de joelhos e o grupo com OA (p < 0.001).Este trabalho foi o primeiro a Easy PDF Creator is professional software to create PDF. If you wish to remove this line, buy it now. fazer a correlação entre OA de joelhos e quimiocinas séricas antes e após uso de HCQ. Novos estudos são necessários, inclusive com análise do líquido sinovial, devido a possibilidade de que as alterações das estruturas articulares ocorridas na OA possam estar associadas com elevação dos níveis de quimiocinas apenas na articulação e não no soro. / This study assessed the clinical and biological responses of patients with primary and symptomatic knee osteoarthritis (OA) to hydroxychloroquine. (HCQ) Clinical impact was assessed through Western Ontario and McMaster Universities Index (WOMAC), Lequesne-algofunctional index, and visual analog scale (VAS). Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), interleukin-8 (IL 8), interferon-gamma-inducible protein-10 (IP-10), and monokine induced by interferon-gamma (MIG) serum levels were obtained for assessment of the biological impact. 29 patients diagnosed with symptomatic knee OA were divided in two groups: 16 received HCQ 400mg/day and 13 received placebo. The study lasted 16 weeks. Two control groups were formed: the first one composed of 10 asymptomatic subjects over 60 years of age, without any clinico-radiological evidence of knee OA (elderly controls), and the second one composed of 10 healthy adults under 40 years of age (young controls). Serum levels of MCP-1, IL-8, IP-10, and MIG chemokines were measured through cytometry (cytometric bead array) at baseline in all groups, and after four months in the 29 OA patients. WOMAC, Lequesne, and VAS results did not significantly differ among the groups. Chemokine levels before and after treatment with chloroquine did not differ in OA patients. The young controls had lower levels of IP-10 (p = 0.02), MCP-1 (p = 0.04), MIG (p < 0.0001), and IL-8 (p < 0.0001), compared to the other two groups. Hydroxychloroquine for four months did not alter serum levels of MCP-1, IL-8, IP-10 and MIG chemokines in symptomatic patients with knee OA. However, OA patients and elderly controls had higher levels of all chemokines studied as compared to young controls (chiefly MCP-1 and IL-8 in the OA group compared with young controls), pointing to an increase in the serum levels of chemokines with aging. Obesity was shown to influence OA, not only because of the high prevalence found, but also because of the statistically significant difference in body mass index (BMI) found between elderly controls and the OA group (p < 0.001). This is the first study to correlate knee OA with serum chemokines before and after chloroquine use. Because joint damage might lead to joint limited chemokine increase without any serum change, further studies involving synovial fluid analysis are warranted.

Objetivo: Analizar las minimizaciones energéticas de interacción de los receptores homólogos para Hidroxicloroquina (HCQ). Materiales y Métodos: Se realizó un estudio in silico, mediante acoplamiento molecular por ordenador local con los softwares AutodockTools4 y AutodockVina, donde se evaluó la estabilidad de HCQ frente a receptores inespecíficos; las proteínas para este análisis fueron obtenidas a partir de la base de datos ChEMBL. Con el uso de Softwares de acoplamiento molecular, se obtuvo datos teóricos de las interacciones ligando – receptor, para luego ser analizadas en función de sus energías libres. Resultados: Las proteínas analizadas para este estudio fueron cuatro; estas presentan muy baja similitud en la cadena de aminoácidos con la proteína modelo para HCQ, la Enzima convertidora de angiotensina-2. Los análisis de acoplamiento indicaron que, la interacción teórica para cada uno de ellos por energía libre fue de, -6.7kcal/mol el receptor Adrenérgico ⍺-2, -6.2kcal/mol Muscarínico M1, -6.5kcal/mol receptor Muscarínico M2, -7.4kcal/mol Transportador de glucosa 1. Conclusión: Los receptores para HCQ en este estudio, presentan heterogeneidad marcada, esto puede deberse al origen de las secuencias nucleotídicas y la diferencia de funciones entre sí. De los resultados obtenidos por acoplamiento molecular pueden interpretar una interacción inespecífica con las proteínas no dianas. Entendiendo que existe la posibilidad de una reacción cruzada del medicamento.

A análise estereosseletiva tem um lugar de destaque em várias áreas e, dentre elas, a farmacêutica, pois diversos fármacos quirais são comercializados como misturas racêmicas. A análise estereosseletiva empregando a cromatografia líquida de alta eficiência e a eletroforese capilar é prática e bastante eficaz para aplicações que envolvem a determinação de enantiômeros ao nível de traços em matrizes complexas, como por exemplo, em estudos de disposição cinética. Entretanto, devido à complexidade das matrizes biológicas, há necessidade da preparação da amostra antes de sua análise. Entre as diversas técnicas existentes, as mais utilizadas são a extração líquido-líquido e a extração em fase sólida. Contudo, essas técnicas apresentam algumas desvantagens,sendo a principal delas o uso de grandes quantidades de solventes. Portanto, técnicas que requerem pouco ou nenhum consumo de solventes orgânicos são bastante desejáveis. Entre essas técnicas destacam-se a microextração em fase sólida (SPME) e a microextração em fase líquida (LPME). Essas técnicas relativamente recentes têm como vantagens a utilização de quantidades mínimas de solventes orgânicos, o alto poder de concentração, a remoção dos interferentes da matriz biológica e a simplicidade de automação. Nesse trabalho propusemos a utilização da SPME e LPME como técnicas de preparação de amostras de urina, visando o desenvolvimento de métodos estereosseletivos com detectabilidade e seletividade adequadas para aplicação em estudos posteriores de disposição cinética. A SPME foi empregada para análise estereosseletiva do ibuprofeno e de seus principais metabólitos, carboxiibuprofeno e 2-hidroxiibuprofeno e da hidroxicloroquina e seus principais metabólitos, enquanto que a LPME foi usada para a análise estereosseletiva da hidroxicloroquina e seus metabólitos. Inicialmente, foi realizada a otimização da separação dos fármacos e metabólitos em diversas colunas quirais,a otimização da separação da hidroxicloroquina e seus metabólitos por eletroforese capilar e,em seguida, a otimização dos procedimentos de extração e a validação dos métodos desenvolvidos. Utilizando a coluna Chiralpak AD-RH® e fase móvel composta por solução de ácido fosfórico 1 mol L-1 pH 3 : metanol (75 : 25, v/v), foi validado um método para análise enantiosseletiva do ibuprofeno em urina. A SPME foi empregada para extração do ibuprofeno das amostras de urina utilizando a fibra PDMS-DVB 60 6;m. O método mostrou ser linear na faixa de concentração de 0,25 a 25 &#956;g mL–1 para cada enantiômero. Para a análise do 2-hidroxiibuprofeno e carboxiibuprofeno, foi utilizada a coluna Chiralpak AS® e fase móvel composta por hexano: isopropanol (94 : 6, v/v) + 0,05% de ácido trifluoracético. A extração desses metabólitos foi feita empregando a fibra de CW-TPR 50 µm. O método mostrou ser linear na faixa de concentração de 5 a 50 µg mL -1. Já para a análise da hidroxicloroquina e seus principais metabólitos, DHCQ e DCQ, foi utilizada a coluna Chiralcel OD-H® e fase móvel composta por hexano : etanol : metanol (96 : 2 : 2, v/v/v) + 0,2% de dietilamina. A extração desses metabólitos foi feita empregando a fibra de PDMSDVB 60 &#956;m. O método mostrou ser linear na faixa de concentração de 50 a 1000 ng mL -1para HCQ e 42 - 416 ng mL-1 para os metabólitos. A microextração em fase líquida foi avaliada na análise da hidroxicloroquina e seus metabólitos, BDCQ, DHCQ e DCQ e separação por eletroforese capilar. Para tanto foi utilizado um capilar de sílica fundida nãorecoberto com um comprimento efetivo de 42 cm, e 30 mmol L-1 de HP-b-CD + 1% de CD-b- sulfatada dissolvida em tampão tris(hidroxiaminometano) 100 mmol L-1 pH 9 como tampão de análise. O método mostrou ser linear na faixa de concentração de 10 - 1000 ng mL-1 para HCQ e 21-333 ng mL-1 para os metabólitos. Obteve-se precisão com coeficientes de variação inferiores a 15% e exatidão com erros relativos menores que 15% para todos os métodos desenvolvidos. Após validação, os métodos foram empregados na determinação da quantidade excretada acumulada do do ibuprofeno, da hidroxicloroquina e de seus metabólitos após administração de de rac-ibuprofeno e rac-hidroxicloroquina a voluntários sadios. Em suma, as duas técnicas foram eficientes na extração dos fármacos e metabólitos estudados. A SPME mostrou ser uma técnica de mais fácil manuseio, porém com baixos valores de recuperação. Por outro lado, a LPME apresentou valores de recuperação maiores, porém o manuseio do sistema de extração foi mais difícil, necessitando de um tempo maior para o domínio da técnica. / The stereoselective analysis has been standing out in several areas, and it is mainly present in the pharmaceutical industry, since many drugs are marketed as racemic mixtures. The stereoselective analysis employing high-performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) is very useful for the determination of enantiomers at very low concentrations, as the ones found in biological matrices, for instance, in pharmacokinetic studies. The first step in the analysis of drugs in biological fluids is the extraction procedure. The most common extraction procedures employed are liquid-liquid extraction and solidphase extraction. These techniques show several drawbacks, such as the high amount of organic solvent consumed. So, based on this fact, techniques that consume small amounts of organic solvents are desirable. Among these techniques, solid-phase microextraction (SPME) and liquid-phase microextraction (LPME) have been stood out. The main advantages of these techniques are the small amount of organic solvent consumed and its high capacity in drug concentration. In this work, our purpose was to employ the SPME and the LPME as sample preparation techniques to develop stereoselective methods to be further applied in pharmacokinetic studies. SPME was employed for the stereoselective analysis of ibuprofen, hydroxychloroquine and their major metabolites.On the other hand,LPME was employed only for the enantioselective analysis of hydroxychloroquine and its metabolites. The first step was the separation optimization of the drugs and their metabolites by HPLC using several chiral columns, and the separation optimization of hydroxychloroquine and its metabolites by CE. Next, the extraction optimizations and method validations were performed. The enantioselective analysis of ibuprofen in human urine was carried out in the Chiralpak AD-RH® column, using methanol-pH 3.0 phosphoric acid solution (75 : 25 v/v) as mobile phase. The method was linear over the 0.5 - 25 µg mL-1 concentration range for both enantiomers. The fiber used in this method was PDMS-DVB 60 µm.The analysis of 2-hydroxyibuprofen and carboxyibuprofen was performed on a Chiralpak AS® column using hexane:isopropanol (95 : 5 v/v) plus 0.05% trifluoroacetic acid as the mobile phase. The method was linear over the 5 - 50 µg mL-1 concentration range. To perform the extractions, a CW-TPR 50 µm coated fiber was employed. The analysis of hydroxychloroquine and its major metabolites (DCQ and DHCQ) was done on a Chiralcel OD-H® column using hexane-methanol-ethanol (96 : 2 : 2, v/v/v) plus 0.2% diethylamine as mobile phase. The extraction was performed using a PDMS-DVB 60 µm coated fiber. The method was linear over the range of 50 - 1000 ng mL-1 for HCQ enantiomers and over the range of 42 - 416 ng mL-1 for DCQ and DHCQ enantiomers. LPME and CE were applied for the chiral determination of hydroxychloroquine and its metabolites (DCQ, DHCQ, BDCQ) in human urine. The electrophoretic separations were carried out in 100 mmol L-1tris(hydroxymethyl)aminomethane buffer (pH adjusted to 9.0 with phosphoric acid) containing 1% (w/v) S-b-CD and 30 mg mL-1 HP-?-CD, with a constant voltage of +18 kV. The method was linear over the concentration range of 10-1000 ng mL -1 for each HCQ stereoisomer and 21-333 ng mL -1 for each metabolite stereoisomer. Within-day and between-day assay precision and accuracy for all described methods were lower than 15%. The developed methods were applied for the determination of the cumulative urinary excretion of ibuprofen metabolites and hydroxychloroquine and its metabolites after oral administration of racibuprofen and rac-hydroxychloroquine to health volunteers. Comparing the techniques, both SPME and LPME were efficient to extract the drugs and their metabolites from human urine. iv SPME showed to be an easier technique to handle, however, the drug amount recovered by this technique was too small. On the contrary, LPME was a more difficulty technique to be handled, but better recovery values were obtained with this technique.

A análise estereosseletiva tem um lugar de destaque em várias áreas e, dentre elas, a farmacêutica, pois diversos fármacos quirais são comercializados como misturas racêmicas. A análise estereosseletiva empregando a cromatografia líquida de alta eficiência e a eletroforese capilar é prática e bastante eficaz para aplicações que envolvem a determinação de enantiômeros ao nível de traços em matrizes complexas, como por exemplo, em estudos de disposição cinética. Entretanto, devido à complexidade das matrizes biológicas, há necessidade da preparação da amostra antes de sua análise. Entre as diversas técnicas existentes, as mais utilizadas são a extração líquido-líquido e a extração em fase sólida. Contudo, essas técnicas apresentam algumas desvantagens,sendo a principal delas o uso de grandes quantidades de solventes. Portanto, técnicas que requerem pouco ou nenhum consumo de solventes orgânicos são bastante desejáveis. Entre essas técnicas destacam-se a microextração em fase sólida (SPME) e a microextração em fase líquida (LPME). Essas técnicas relativamente recentes têm como vantagens a utilização de quantidades mínimas de solventes orgânicos, o alto poder de concentração, a remoção dos interferentes da matriz biológica e a simplicidade de automação. Nesse trabalho propusemos a utilização da SPME e LPME como técnicas de preparação de amostras de urina, visando o desenvolvimento de métodos estereosseletivos com detectabilidade e seletividade adequadas para aplicação em estudos posteriores de disposição cinética. A SPME foi empregada para análise estereosseletiva do ibuprofeno e de seus principais metabólitos, carboxiibuprofeno e 2-hidroxiibuprofeno e da hidroxicloroquina e seus principais metabólitos, enquanto que a LPME foi usada para a análise estereosseletiva da hidroxicloroquina e seus metabólitos. Inicialmente, foi realizada a otimização da separação dos fármacos e metabólitos em diversas colunas quirais,a otimização da separação da hidroxicloroquina e seus metabólitos por eletroforese capilar e,em seguida, a otimização dos procedimentos de extração e a validação dos métodos desenvolvidos. Utilizando a coluna Chiralpak AD-RH® e fase móvel composta por solução de ácido fosfórico 1 mol L-1 pH 3 : metanol (75 : 25, v/v), foi validado um método para análise enantiosseletiva do ibuprofeno em urina. A SPME foi empregada para extração do ibuprofeno das amostras de urina utilizando a fibra PDMS-DVB 60 6;m. O método mostrou ser linear na faixa de concentração de 0,25 a 25 &#956;g mL–1 para cada enantiômero. Para a análise do 2-hidroxiibuprofeno e carboxiibuprofeno, foi utilizada a coluna Chiralpak AS® e fase móvel composta por hexano: isopropanol (94 : 6, v/v) + 0,05% de ácido trifluoracético. A extração desses metabólitos foi feita empregando a fibra de CW-TPR 50 µm. O método mostrou ser linear na faixa de concentração de 5 a 50 µg mL -1. Já para a análise da hidroxicloroquina e seus principais metabólitos, DHCQ e DCQ, foi utilizada a coluna Chiralcel OD-H® e fase móvel composta por hexano : etanol : metanol (96 : 2 : 2, v/v/v) + 0,2% de dietilamina. A extração desses metabólitos foi feita empregando a fibra de PDMSDVB 60 &#956;m. O método mostrou ser linear na faixa de concentração de 50 a 1000 ng mL -1para HCQ e 42 - 416 ng mL-1 para os metabólitos. A microextração em fase líquida foi avaliada na análise da hidroxicloroquina e seus metabólitos, BDCQ, DHCQ e DCQ e separação por eletroforese capilar. Para tanto foi utilizado um capilar de sílica fundida nãorecoberto com um comprimento efetivo de 42 cm, e 30 mmol L-1 de HP-b-CD + 1% de CD-b- sulfatada dissolvida em tampão tris(hidroxiaminometano) 100 mmol L-1 pH 9 como tampão de análise. O método mostrou ser linear na faixa de concentração de 10 - 1000 ng mL-1 para HCQ e 21-333 ng mL-1 para os metabólitos. Obteve-se precisão com coeficientes de variação inferiores a 15% e exatidão com erros relativos menores que 15% para todos os métodos desenvolvidos. Após validação, os métodos foram empregados na determinação da quantidade excretada acumulada do do ibuprofeno, da hidroxicloroquina e de seus metabólitos após administração de de rac-ibuprofeno e rac-hidroxicloroquina a voluntários sadios. Em suma, as duas técnicas foram eficientes na extração dos fármacos e metabólitos estudados. A SPME mostrou ser uma técnica de mais fácil manuseio, porém com baixos valores de recuperação. Por outro lado, a LPME apresentou valores de recuperação maiores, porém o manuseio do sistema de extração foi mais difícil, necessitando de um tempo maior para o domínio da técnica. / The stereoselective analysis has been standing out in several areas, and it is mainly present in the pharmaceutical industry, since many drugs are marketed as racemic mixtures. The stereoselective analysis employing high-performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) is very useful for the determination of enantiomers at very low concentrations, as the ones found in biological matrices, for instance, in pharmacokinetic studies. The first step in the analysis of drugs in biological fluids is the extraction procedure. The most common extraction procedures employed are liquid-liquid extraction and solidphase extraction. These techniques show several drawbacks, such as the high amount of organic solvent consumed. So, based on this fact, techniques that consume small amounts of organic solvents are desirable. Among these techniques, solid-phase microextraction (SPME) and liquid-phase microextraction (LPME) have been stood out. The main advantages of these techniques are the small amount of organic solvent consumed and its high capacity in drug concentration. In this work, our purpose was to employ the SPME and the LPME as sample preparation techniques to develop stereoselective methods to be further applied in pharmacokinetic studies. SPME was employed for the stereoselective analysis of ibuprofen, hydroxychloroquine and their major metabolites.On the other hand,LPME was employed only for the enantioselective analysis of hydroxychloroquine and its metabolites. The first step was the separation optimization of the drugs and their metabolites by HPLC using several chiral columns, and the separation optimization of hydroxychloroquine and its metabolites by CE. Next, the extraction optimizations and method validations were performed. The enantioselective analysis of ibuprofen in human urine was carried out in the Chiralpak AD-RH® column, using methanol-pH 3.0 phosphoric acid solution (75 : 25 v/v) as mobile phase. The method was linear over the 0.5 - 25 µg mL-1 concentration range for both enantiomers. The fiber used in this method was PDMS-DVB 60 µm.The analysis of 2-hydroxyibuprofen and carboxyibuprofen was performed on a Chiralpak AS® column using hexane:isopropanol (95 : 5 v/v) plus 0.05% trifluoroacetic acid as the mobile phase. The method was linear over the 5 - 50 µg mL-1 concentration range. To perform the extractions, a CW-TPR 50 µm coated fiber was employed. The analysis of hydroxychloroquine and its major metabolites (DCQ and DHCQ) was done on a Chiralcel OD-H® column using hexane-methanol-ethanol (96 : 2 : 2, v/v/v) plus 0.2% diethylamine as mobile phase. The extraction was performed using a PDMS-DVB 60 µm coated fiber. The method was linear over the range of 50 - 1000 ng mL-1 for HCQ enantiomers and over the range of 42 - 416 ng mL-1 for DCQ and DHCQ enantiomers. LPME and CE were applied for the chiral determination of hydroxychloroquine and its metabolites (DCQ, DHCQ, BDCQ) in human urine. The electrophoretic separations were carried out in 100 mmol L-1tris(hydroxymethyl)aminomethane buffer (pH adjusted to 9.0 with phosphoric acid) containing 1% (w/v) S-b-CD and 30 mg mL-1 HP-?-CD, with a constant voltage of +18 kV. The method was linear over the concentration range of 10-1000 ng mL -1 for each HCQ stereoisomer and 21-333 ng mL -1 for each metabolite stereoisomer. Within-day and between-day assay precision and accuracy for all described methods were lower than 15%. The developed methods were applied for the determination of the cumulative urinary excretion of ibuprofen metabolites and hydroxychloroquine and its metabolites after oral administration of racibuprofen and rac-hydroxychloroquine to health volunteers. Comparing the techniques, both SPME and LPME were efficient to extract the drugs and their metabolites from human urine. iv SPME showed to be an easier technique to handle, however, the drug amount recovered by this technique was too small. On the contrary, LPME was a more difficulty technique to be handled, but better recovery values were obtained with this technique.