Submitted by Angelo Silva (asilva@icict.fiocruz.br) on 2016-07-13T18:26:36Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 71822.pdf: 1728254 bytes, checksum: d921c02c1f05a7463f391f259e73255d (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-08-09T17:36:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 71822.pdf: 1728254 bytes, checksum: d921c02c1f05a7463f391f259e73255d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T17:36:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 71822.pdf: 1728254 bytes, checksum: d921c02c1f05a7463f391f259e73255d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os medicamentos utilizados no controle da infecção causada por espécies de Leishmania estão associados a alta toxicidade, dificuldade de administração, altos custos e crescente resistência. A procura por novas alternativas de tratamento é, portanto, uma prioridade. Na busca de outros fármacos que possam ser efetivos e menos tóxicos destacam-se os inibidores de protease. As proteases de Leishmania estão envolvidas nos mais diversos mecanismos, tais como virulência e patogênese. Dentro deste contexto, trabalhos mostram a atividade de inibidores de aspártico protease do HIV (IPs-HIV) em patógenos oportunistas, dentre eles Leishmania spp. No presente estudo trabalhamos com moléculas precursoras de síntese dos IPs-HIV, as hidroxietilaminas (HEAs). O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade leishmanicida de HEAs e suas implicações na biologia de Leishmania spp. De 23 móleculas submetidas à triagem inicial em promastigotas, 15 prosseguiram nos testes e confirmaram sua atividade sobre amastigotas intracelulares de L. amazonensis, todas com IC50 < 5,0 \F06DM. A avaliação da toxidez in vitro sobre macrófagos peritoneais murinos e células MRC5 demonstrou que as substâncias-teste PMTB1, PMTB4, PMTB11, PLIP2, PLIP19 possuem índice de seletividade superior a 20. As substâncias mais ativas sobre amastigotas foram selecionadas para testes onde diferentes variáveis foram usadas, como: espécies do parasito, razão de infecção, tempo e metodologia de contagem. Os resultados destacaram os compostos PMTB1, PMTB8, PMTB10, PLIP1, PLIP27 e PLIP33, que foram mais ativos para L. amazonensis e L. major considerando as diversas variáveis Além disso, ficou evidente que existe uma diferença significativa no resultado de IC50/IC90 de acordo com a metodologia de contagem. Os testes de inibição da atividade proteolítica de aspártico protease mostraram que as HEAs tem perfis diferentes de inibição, e as com maior capacidade inibitória foram PLIP19, PLIP27, PMTB3, PMTB4, PMTB5, PMTB7, PMTB9 e PMTB10, não guardando correlação direta com a atividade leishmanicida. Ao analisarmos a relação estrutura/atividade das moléculas, percebemos que o grupamento NH2 mantém a atividade leishmanicida. A análise do perfil dos lipídeos neutros mostrou que não houve acúmulo de esteróis metilados na posição 14, que são caracteristíscos da inibição farmacológica da CYP51. No entanto, houve uma alteração na composição dos esteróis, principalmente pela PLIP27, cujo mecanismo necessita ser explorado. A análise in silico demostrou a aderência das moléculas à regra dos cinco (Ro5) de Lipinski, sugerindo que de acordo com parâmetros físico-químicos, elas são boas canditadas à administração oral. Juntos, estes resultados sugerem que as HEAs, principalmente PLIP27 e PMTB10, são moléculas promissoras com amplo espectro de atividade e podem auxiliar no estudo e desenvolvimento de protótipos semelhantes aos IPs-HIV para o tratamento das leishmanioses / Drugs used to control infection caused by Leishmania species are associated with poor therapeutic responses, adverse effects, high toxicity, high costs and resistance. The search for new treatment approaches is a priority. Seeking other effective and less toxic drugs there are the protease inhibitors. Leishmania proteases are involved in many mechanisms, such as virulence and pathogenesis. In this context, studies show the activity of HIV aspartic protease inhibitors (HIV-PIs) in opportunistic pathogens, including Leishmania spp. In this study we worked with hydroxyethylamines (HEAs) used as precursor molecules in the synthesis of HIV-PIs. The objective of the study was to evaluate the leishmanicidal activity of HEAs and their implications in Leishmania biology. From 23 molecules in the initial screening with promastigotes, 15 continued in the tests and confirmed their activity on intracellular amastigotes of L. amazonensis, all of them with IC50 < 5,0 \F06DM. The toxicity assay on murine peritoneal macrophages and MRC5 cells showed that the molecules PMTB1, PMTB4, PMTB11, PLIP2, PLIP19 have selectivity index greater than 20. The most active substances on amastigotes were selected for testing in different methodologies, ranging parasitic species, infection rate, time and counting procedure. The results highlighted PMTB1, PMTB8, PMTB10, PLIP1, PLIP27 and PLIP33 as the most active compounds for L. amazonensis and L. major, considering several variables Furthermore, it was evident that there are significant differences in results of IC50/IC90 according to the counting methodology. Inhibition tests of the proteolytic activity of aspartic protease showed that HEAs have different profiles of inhibition. PLIP19, PLIP27, PMTB03, PMTB04, PMTB05, PMTB07, PMTB09 e PMTB10 were the most potent inhibiting the protease activity, without having a direct correlation with the leishmanicidal activity. Analyzing the relationship structure / activity of molecules, we realize that the group NH2 is important for leishmanicidal activity. Analysis of neutral lipids from promastigotes of L. amazonensis treated with PLIP27 and PMTB10 showed that there was no accumulation of C14-methylated sterols, which are typical of pharmacological inhibition of CYP51. However, other changes in sterol composition induced mainly by PLIP27 were noted, but the mechanism remains to be explored. The in silico analysis demonstrated the adherence of molecules to the rule of five (Ro5) of Lipinski, suggesting that according to physicochemical parameters they are good candidates of oral treatment. Altogether, these results suggest that HEAs, mainly PLIP27 and PMTB10, are promising molecules with broad-spectrum activity, and can be useful in the study and development of prototypes similar to HIV-PI for the treatment of leishmaniasis

Orientador: Artur Udelsmann / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T15:05:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bonfim_MatheusRodrigues_M.pdf: 2022340 bytes, checksum: a5de652e3794240a34fc70fa9e5da209 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Justificativa e objetivos: Várias soluções podem ser empregadas no tratamento da hipovolemia, sendo as mais comuns as cristalóides e as colóides. Na década de 1980, estudou-se o uso de soluções salinas hipertônicas, na reposição volêmica com pequenos volumes. Posteriormente foi indicada a associação das soluções hipertônicas com soluções colóides com resultados satisfatórios. O hidroxi-etil amido hipertônico é uma nova solução de reposição volêmica, composta por um colóide associado ao NaCl 7,2%. O objetivo deste trabalho foi estudar, em cães submetidos à hipovolemia, as respostas hemodinâmicas da reposição volêmica com solução fisiológica e hidroxi-etil amido hipertônico. Método: 40 cães sob anestesia geral e monitorização hemodinâmica com pressão arterial invasiva e cateter de Swan-Ganz, após medidas hemodinâmicas em repouso, foram sangrados 20 ml.kg-1 em 10 minutos e tiveram os parâmetros novamente medidos após 10 minutos; em seguida foi realizada reposição volêmica com solução fisiológica na razão de duas vezes o volume retirado em 5 minutos ou 4 ml.kg-1 de hidroxi-etil amido hipertônico também em 5 minutos e os dados hemodinâmicos foram medidos após 5, 15, 30, 45 e 60 minutos. Os resultados foram comparados estatisticamente. Resultados: nesse estudo, a reposição volêmica com as duas soluções fez os valores retornarem a níveis hemodinâmicos satisfatórios. Valores iniciais maiores foram observados com a solução fisiológica, mas tenderam a diminuir progressivamente, com o hidroxi-etil amido hipertônico os parâmetros estudados retornaram a valores semelhantes ao repouso e variaram menos. O índice cardíaco mostrou valores maiores para o grupo SF em todos os momentos após a reposição volêmica (p<0,001) . As pressões arteriais e pulmonares não mostraram diferenças entre os grupos. As pressões capilar pulmonar e venosa central mostraram valores maiores para o grupo SF imediatamente após a reposição volêmica (M3). Conclusões: ambas as soluções se mostraram eficientes na reposição volêmica no curto prazo estudado, mas o hidroxi-etil amido hipertônico proporcionou resultados mais estáveis. Unitermos: hipovolemia, hidroxi-etil amido, solução salina hipertônica / Abstract: Background and Objectives: Several solutions may be employed for the treatment of hypovolemia. Among the various solutions used, the most common are crystalloids and colloids. In the 80s, the use of hypertonic saline solutions was studied for small-volume fluid replacement. Subsequently, these hypertonic solutions were associated with colloid solutions producing satisfactory results. Hypertonic hydroxyethyl starch is a new solution used for volume replacement that is composed of a colloid associated with 7.2% NaCl. The purpose of this study was to examine hemodynamic response to volume replacement using saline solution and hypertonic hydroxyethyl starch in dogs subjected to hypovolemia. Method: Forty (40) dogs underwent general anesthesia and were hemodynamically monitored with intra-arterial blood pressure monitoring and a Swan-Ganz catheter. Baseline hemodynamic values were measured and the dogs were bled 20 ml.Kg.1 Parameters were measured after 10 minutes. Volume replacement with saline solution was then performed at a ratio of twice the volume removed or 4 ml.Kg-1 of hypertonic hydroxyethyl starch. Hemodynamic data was measured after 5, 15, 30, 45 and 60 minutes. The results were statistically compared. Results: In this study, values returned to satisfactory hemodynamic levels when volume was replaced with both solutions. Higher initial values were observed when saline solution was used. However, these values tended to decrease progressively. When hypertonic hydroxyethyl starch was used, the parameters studied returned more rapidly to values similar to those at baseline and less variation was observed. The cardiac index showed higher values for the saline group at all time periods studied after volume replacement (p<0.001). Arterial blood pressure and pulmonary blood pressure showed no differences between groups. Pulmonary capillary pressure and central venous pressure showed higher values for the saline group immediately after volume replacement (M3). Conclusions: Both solutions proved to be efficient at replacing volume in the short period studied. However, hypertonic hidroxyethyl starch provided more stable results. Uniterms: Hypovolemia, Hetastarch, Saline Solution, Hypertonic / Mestrado / Cirurgia / Mestre em Cirurgia