<p>A new European labeling directive (2003/89/EC) states that certain foods and products derived thereof must always be declared. Among the tree nuts specified is Macadamia nut (Macadamia spp.). During the last few years, cases of IgE-allergic reactions, even severe anaphylaxes, have been reported. Reliable methods for the detection of this nut are needed.</p><p>Protein from Macadamia nuts was isolated. Polyacrylamide gel electrophoresis in SDS revealed two main protein bands of about 20 and 50kDa. These protein bands were cut and extracted from the gel and rabbits were immunized with each protein.</p><p>Immunoblotting showed dominant reactivity with the respective antigens. The antisera were further tested for specificity in immunodiffusion and in rocket immunoelectrophoresis.</p><p>In addition, a specific DNA-method was developed, based on Real-Time PCR using Macadamia vicilin as target sequence. Two different primer pairs were tested. Specificity was tested against potentially related nuts. Optimisation of primer and probe concentrations was performed. The limit of detection was 2-4 pg DNA, corresponding to a macadamia nut concentration of 50 to 100 μg per g. In a background of soybean DNA, down to 0,01 % macadamia DNA could be detected.</p>

Nuts of all kinds are common ingredients in food. For nut allergy sufferers the frequent use of nuts cause problems and "hidden" nuts in food products may elicit allergic reaction when such foods are consumed. Methods for detecting and quantifying walnut (and other nuts) with high sensitivity and specificity are therefore very important. The objective of this project was to verify the specificity of a rabbit antiserum against walnut with immunodiffusion and to determine the size of the dominant walnut antigens with Western blotting. In addition, a commercial sandwich ELISA for walnut quantification was validated and compared with a qualitative real-time PCR. The rabbit antiserum proved to be less specific but after absorption with cross-reacting nuts and seeds it showed high specificity. The ELISA kit reacted, except for walnut, with pecan and slightly with other nuts and seeds tested. The PCR showed an absolute specificity to walnut. As low levels as 2.5mg walnut/kg can be quantified with the ELISA. This is 8 to 100 fold less than with the PCR method. It is therefore concluded that the ELISA kit is more sensitive than the PCR method but the PCR method is more specific than the ELISA kit.

Food allergy is an IgE-mediated immunological disease, which affects almost 4% of the adult population and up to 6% of children. Proteins from milk, egg, peanuts, soybean, wheat, fish and nuts are the main cause of food allergies. A less common allergen is pea protein. The National Food Administration analyses undeclared pea protein and contaminations of pea protein in foods using rocket immunoelectrophoresis and immunodiffusion. For both methods an antiserum against pea protein is needed. The aim of this study has been to characterize a newly developed rabbit-antiserum against pea protein. It is important to know if the antiserum is specific against peas, the detection as well as the quantification limits before it can be taken into use. The results of the study show that the antiserum was not absolutely specific, since it cross-reacted with chickpeas, fenugreek and lenses. However there is an "in-house" established PCR-method that can distinguish between chickpeas, fenugreek and peas and that method can be used as a complement to the rocket immunoelectrophoresis. The PCR-method cannot be used alone because it is not quantitative. Rocket immunoelectro¬phoresis detects 0,003% pea protein with purified IgG-antibodies from the antiserum.

A new European labeling directive (2003/89/EC) states that certain foods and products derived thereof must always be declared. Among the tree nuts specified is Macadamia nut (Macadamia spp.). During the last few years, cases of IgE-allergic reactions, even severe anaphylaxes, have been reported. Reliable methods for the detection of this nut are needed. Protein from Macadamia nuts was isolated. Polyacrylamide gel electrophoresis in SDS revealed two main protein bands of about 20 and 50kDa. These protein bands were cut and extracted from the gel and rabbits were immunized with each protein. Immunoblotting showed dominant reactivity with the respective antigens. The antisera were further tested for specificity in immunodiffusion and in rocket immunoelectrophoresis. In addition, a specific DNA-method was developed, based on Real-Time PCR using Macadamia vicilin as target sequence. Two different primer pairs were tested. Specificity was tested against potentially related nuts. Optimisation of primer and probe concentrations was performed. The limit of detection was 2-4 pg DNA, corresponding to a macadamia nut concentration of 50 to 100 μg per g. In a background of soybean DNA, down to 0,01 % macadamia DNA could be detected.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv. / Härtill 4 uppsatser.

Introdução: A tuberculose e a histoplasmose são clínica-radiológica e histopatologicamente semelhantes, o que pode levar ao tratamento equivocado. Neste sentido, a importância do atual projeto é a confirmação de casos de histoplasmose em pacientes com suposta tuberculose, no Vale d Sinos – Rio Grande do Sul. Objetivo: Demonstrar a prevalência de histoplasmose a partir da detecção de anticorpos anti- Histoplasma capsulatum (H. capsulatum) em pacientes que possuíam diagnóstico inconclusivo e que receberam tratamento para tuberculose. Métodos e resultados: A primeira fase do estudo foi retrospectiva, com análise de prontuários para a seleção de pacientes cadastrados no Sistema Único de Saúde que receberam tratamento tuberculostático sem diagnóstico etiológico conclusivo para tuberculose. A segunda fase do estudo foi prospectiva, onde o soro dos pacientes que se enquadraram nos critérios de inclusão/exclusão foi analisado por imunodifusão radial dupla para a detecção da presença de anticorpos anti-H. capsulatum. Dos 42 soros testados, três (7,14%) tiveram resultado positivo para a presença de anticorpos anti-H. capsulatum. Conclusão: A ausência de achados etiológicos conclusivos para a tuberculose aliados à positivação da imunodifusão para H. capsulatum, demonstra que três pacientes apresentavam histoplasmose e não tuberculose, sugerindo a necessidade de pesquisa da micose nos casos com suspeita de tuberculose, mas sem confirmação diagnóstica. / Introduction: Tuberculosis and histoplasmosis are clinic-radiologic and hitopatologically similar, and so the treatment may be mistaken. In this sense, the importance of this project is to confirm histoplasmosis cases on patients who are being treated for supposed tuberculosis, in Vale do Sinos – Rio Grande do Sul. Aim: To demonstrate the prevalence of histoplasmosis by the presence of anti-Histoplasma capsulatum (H. capsulatum) antibodies in patients whose diagnosis is inconclusive and who have been treated for tuberculosis. Methods and Results: The first stage of the study was retrospective, by the analysis of medical records to select patients who are filed on Sistema Único de Saúde and who have received tuberculostatic treatment without conclusive etiologic diagnosis for tuberculosis. The second stage of the study was prospective, and the serum of patients who are integrated to inclusion/exclusion criteria was examined by double radial im munodiffusion to detect the presence of anti-H. capsulatum antibodies. From the 42 serum which were tested, three of them (7,14%) have had positive results for the presence of anti-H. capsulatum antibodies. Conclusion: The lack of conclusive etiologic find for tuberculosis associated to the positivation of immunodiffusion for H. capsulatum, proves that three patients have showed histoplasmosis and not tuberculosis, proposing then the necessity of a research of mycosis on the cases which there is the suspect of tuberculosis, but without diagnostic confirmation.

A Histoplasmose é uma infecção micótica causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum var. capsulatum. Apresenta especial afinidade patogênica com o Sistema Retículo Endotelial (S.R.E) e é de gravidade variável. É uma das micoses oportunistas mais importantes em indivíduos com comprometimento imunológico. É endêmica em humanos nos Estados Unidos, principalmente nas regiões dos Grandes Lagos e nos vales dos Rios Mississipi e Ohio, América Latina, parte da Ásia e África. No Brasil, 26 microepidemias foram relatadas em oito Estados. O fungo habita solos úmidos, ricos em substâncias orgânicas de pH ácido, contendo alto teor de nitrogênio, especialmente os que contêm fezes de morcegos e aves. O contágio se dá pela inalação das células reprodutivas do fungo, desenvolvendo inicialmente a infecção no pulmão. É notável que o aumento na intensificação dos métodos de produção na suinocultura levou ao aparecimento de doenças relacionadas com as novas tecnologias introduzidas, que promoveram condições para que, agentes que antes se encontravam em equilíbrio com o hospedeiro, viessem exercer efeito patogênico. Após o aparecimento das doenças virais imunossupressoras nos plantéis suínos de todo o mundo, como a Síndrome Respiratória Reprodutiva Suína (SRRS), Síndrome da Dermatite e Nefropatia (SDN) e a Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS), as doenças fúngicas se tornaram mais freqüentes, participando com maior expressão nas perdas econômicas do setor. Nesse novo cenário, fungos passaram a expressar suas potencialidades patogênicas, pois com a imunidade comprometida, os animais não são capazes de se proteger mesmo em baixos níveis de infecção. A escassez de pesquisa sobre histoplasmose em suínos gerou a hipótese de que a falta de diagnóstico desta doença não está sendo colocada como possibilidade de casuística diferencial para outras doenças. Há necessidade de serem conduzidos estudos que possam auxiliar em um diagnóstico adequado e que possa, posteriormente, esclarecer possíveis implicações do agente sobre o desempenho animal. O trabalho desenvolvido propôs utilizar a técnica sorológica de Imunodifusão em gel de agar (IDGA) para detectar a infecção por H. capsulatum através da pesquisa de anticorpos em amostras de sangue de suínos provenientes de diferentes unidades produtoras de leitões, no estado do Rio Grande do Sul. A amostragem foi composta por 246 amostras de soro de suínos e dividida em três grupos caracterizados de acordo com a taxa de mortalidade apresentada na creche e um quarto grupo composto por animais de baixo desenvolvimento. A presença de reações de precipitação no teste de IDGA não foi verificada em nenhuma das 246 amostras testadas. Entretanto, não se exclui a possibilidade de resultados falso negativos na prova de imunodifusão, pois outra técnica comparativa não foi utilizada neste estudo. É plausível a suposição da ocorrência da infecção pelo H. capsulatum em suínos em regiões constantemente expostas ao risco. É uma linha de pesquisa que ainda carece de muitos estudos principalmente epidemiológicos que auxiliem em um diagnóstico adequado e confiável. / Histoplasmosis is a fungal infection caused by the dimorphic fungus Histoplasma capsulatum var. capsulatum. It shows strong pathogenic affinity with the Reticulo Endothelial System (S.R.E) and has variable severity. It is one of the most important opportunistic mycoses in individuals with compromised immune system. It is an endemic mycosis in humans in the United States, mainly in the Great Lakes and in the valleys of the Mississippi and Ohio rivers regions, Latin America and regions of Asia and Africa. In Brazil, 26 microepidemics were reported in eight states.The fungus inhabits moist soil, rich in organic substances with acid pH, containing high content of nitrogen, especially those containing feces of birds and bats. The infection occurs by inhalation of the reproductive cells of the fungus, initially developing the infection in the lungs. It is remarkable that growing application of intensive production methods in the swine industry has facilitated to the arisal of diseases. Some technologies may promote conditions for agents, which before were in harmony with the host, to become pathogenic. After the arisal of immunosuppressive viral diseases in swine herds around the world, such as Porcine Reproductive Respiratory Syndrome (PRRS), Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome (PDNS) and Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome (PMWS), the fungal diseases have been occuring more frequently, accounting for significative economic losses for the swine industry. In this new scenario, fungi began to express its pathogenic potential and animals with compromised immune system are not able to protect themselves, even under low levels of infection. The shortage of research on swine histoplasmosis has led to the hypothesis that the lack of diagnosis of this disease is due to the fact that it is not being considered as an alternative diagnostic for other diseases. There is a need for studies on more adequate diagnosis methods and also on alternatives that assess the implications of the agent on the subsequent animal performance. This study proposed the application of the serological technique - immunodiffusion agar-gel - to detect infection by H. capsulatum through the search for antibodies in blood samples from pigs from different swine herds in the Rio Grande do Sul state, Brazil. A total of 246 serum samples from pigs were harvested. Three groups were characterized according to the weaning mortality rate and the fourth group of animals was characterized by pigs with low performance. The presence of immunoprecipitation in the test was not found in any of the 246 samples tested. The possibility of false negative results may not be excluded, because no other comparative technique was used in this study. It is plausible to suppose the occurrence of infection by H. capsulatum in pigs in areas constantly exposed to risk. It is a new line of research that still requires more epidemiological studies to assist in an appropriate and reliable diagnosis.

A Histoplasmose é uma infecção micótica causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum var. capsulatum. Apresenta especial afinidade patogênica com o Sistema Retículo Endotelial (S.R.E) e é de gravidade variável. É uma das micoses oportunistas mais importantes em indivíduos com comprometimento imunológico. É endêmica em humanos nos Estados Unidos, principalmente nas regiões dos Grandes Lagos e nos vales dos Rios Mississipi e Ohio, América Latina, parte da Ásia e África. No Brasil, 26 microepidemias foram relatadas em oito Estados. O fungo habita solos úmidos, ricos em substâncias orgânicas de pH ácido, contendo alto teor de nitrogênio, especialmente os que contêm fezes de morcegos e aves. O contágio se dá pela inalação das células reprodutivas do fungo, desenvolvendo inicialmente a infecção no pulmão. É notável que o aumento na intensificação dos métodos de produção na suinocultura levou ao aparecimento de doenças relacionadas com as novas tecnologias introduzidas, que promoveram condições para que, agentes que antes se encontravam em equilíbrio com o hospedeiro, viessem exercer efeito patogênico. Após o aparecimento das doenças virais imunossupressoras nos plantéis suínos de todo o mundo, como a Síndrome Respiratória Reprodutiva Suína (SRRS), Síndrome da Dermatite e Nefropatia (SDN) e a Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS), as doenças fúngicas se tornaram mais freqüentes, participando com maior expressão nas perdas econômicas do setor. Nesse novo cenário, fungos passaram a expressar suas potencialidades patogênicas, pois com a imunidade comprometida, os animais não são capazes de se proteger mesmo em baixos níveis de infecção. A escassez de pesquisa sobre histoplasmose em suínos gerou a hipótese de que a falta de diagnóstico desta doença não está sendo colocada como possibilidade de casuística diferencial para outras doenças. Há necessidade de serem conduzidos estudos que possam auxiliar em um diagnóstico adequado e que possa, posteriormente, esclarecer possíveis implicações do agente sobre o desempenho animal. O trabalho desenvolvido propôs utilizar a técnica sorológica de Imunodifusão em gel de agar (IDGA) para detectar a infecção por H. capsulatum através da pesquisa de anticorpos em amostras de sangue de suínos provenientes de diferentes unidades produtoras de leitões, no estado do Rio Grande do Sul. A amostragem foi composta por 246 amostras de soro de suínos e dividida em três grupos caracterizados de acordo com a taxa de mortalidade apresentada na creche e um quarto grupo composto por animais de baixo desenvolvimento. A presença de reações de precipitação no teste de IDGA não foi verificada em nenhuma das 246 amostras testadas. Entretanto, não se exclui a possibilidade de resultados falso negativos na prova de imunodifusão, pois outra técnica comparativa não foi utilizada neste estudo. É plausível a suposição da ocorrência da infecção pelo H. capsulatum em suínos em regiões constantemente expostas ao risco. É uma linha de pesquisa que ainda carece de muitos estudos principalmente epidemiológicos que auxiliem em um diagnóstico adequado e confiável. / Histoplasmosis is a fungal infection caused by the dimorphic fungus Histoplasma capsulatum var. capsulatum. It shows strong pathogenic affinity with the Reticulo Endothelial System (S.R.E) and has variable severity. It is one of the most important opportunistic mycoses in individuals with compromised immune system. It is an endemic mycosis in humans in the United States, mainly in the Great Lakes and in the valleys of the Mississippi and Ohio rivers regions, Latin America and regions of Asia and Africa. In Brazil, 26 microepidemics were reported in eight states.The fungus inhabits moist soil, rich in organic substances with acid pH, containing high content of nitrogen, especially those containing feces of birds and bats. The infection occurs by inhalation of the reproductive cells of the fungus, initially developing the infection in the lungs. It is remarkable that growing application of intensive production methods in the swine industry has facilitated to the arisal of diseases. Some technologies may promote conditions for agents, which before were in harmony with the host, to become pathogenic. After the arisal of immunosuppressive viral diseases in swine herds around the world, such as Porcine Reproductive Respiratory Syndrome (PRRS), Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome (PDNS) and Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome (PMWS), the fungal diseases have been occuring more frequently, accounting for significative economic losses for the swine industry. In this new scenario, fungi began to express its pathogenic potential and animals with compromised immune system are not able to protect themselves, even under low levels of infection. The shortage of research on swine histoplasmosis has led to the hypothesis that the lack of diagnosis of this disease is due to the fact that it is not being considered as an alternative diagnostic for other diseases. There is a need for studies on more adequate diagnosis methods and also on alternatives that assess the implications of the agent on the subsequent animal performance. This study proposed the application of the serological technique - immunodiffusion agar-gel - to detect infection by H. capsulatum through the search for antibodies in blood samples from pigs from different swine herds in the Rio Grande do Sul state, Brazil. A total of 246 serum samples from pigs were harvested. Three groups were characterized according to the weaning mortality rate and the fourth group of animals was characterized by pigs with low performance. The presence of immunoprecipitation in the test was not found in any of the 246 samples tested. The possibility of false negative results may not be excluded, because no other comparative technique was used in this study. It is plausible to suppose the occurrence of infection by H. capsulatum in pigs in areas constantly exposed to risk. It is a new line of research that still requires more epidemiological studies to assist in an appropriate and reliable diagnosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-20Bitstream added on 2014-06-13T19:35:12Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_ahc_me_araca.pdf: 2490069 bytes, checksum: 714344d8f3e4f1f5ba08fcf82344d992 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A língua azul é uma doença viral, cujo agente etiológico pertence à família Reoviridae, gênero Orbivírus, transmitida por um vetor (artrópode) hematófago, do gênero Culicoides. Por se tratar de doença confundível com Febre Aftosa está incluída na lista de diagnóstico diferencial juntamente com Estomatite Vesicular, Varíola Ovina, Ectima Contagioso. O estudo teve como objetivo detectar a presença de anticorpos para língua azul em ovinos da região de Araçatuba, por ser esta uma região com rebanho expressivo e condições climáticas favoráveis à multiplicação de insetos. As amostras foram colhidas ao longo do ano de 2006, de ovinos adultos, em fase reprodutiva, (acima de 12 meses e com pelo menos uma parição, ou em caso de machos sexualmente maduros) e sem sintomas característicos da doença, de ambos os sexos, cadastrados no Núcleo de Produtores de Ovinos da Região de Araçatuba, distribuídas nos municípios da Região administrativa de Araçatuba. O tamanho da amostras foi calculado, considerando-se distribuição normal, prevalência de 50%, nível de confiança de 95% e precisão absoluta de 3%. Foram analisadas 1002 amostras de soros ovinos adultos, provenientes de 31 cabanhas, pelas provas de imunodifusão dupla em gel de agar (IDGA) e ELISA (Enzyme Linked immunosorbent Assay) de competição da fase sólida (ELISA CFS), provenientes do Centro Panamericano de Febre aftosa. Dessas amostras, 744 (74,3%) foram reagentes ao vírus da língua azul , pelo teste de ELISA–CFS e 651 (65,1%), pela técnica de IDGA. Não houve associação significante entre prevalência da doença e o sexo dos animais. Esses resultados revelam que o Vírus da Língua Azul encontra-se disseminado nessas regiões, sugerindo a ocorrência de infecções inaparente. / Bluetongue (BT) is an infectious, non-contagious, insect-born viral disease of Ruminants. The causative agent of BT is bluetongue virus (BTV) that belongs to the family Reoviridae genus Orbivirus. Insect vectors in the genus Culicoides transmit this virus. BT affects domestic and wild ruminants, however small ruminants are considered the most affected specie. BT is included in the OIE list based on the differential diagnosis with Foot and Mouth Disease (FMDV), Vesicular Stomatitis Virus (VSV) and Sheep Pox Virus (SPV). The aim of the study was to detect antibodies against BTV in commercial sheep farms, of the Northeastern region of Sao Paulo State, Brazil. The size of the samples was calculated, considering normal distribution, prevalence of 50%, confidence level of 95% and absolute precision of 3%.A total of 1002 sera samples collected from adult sheep (above 1 year-old), comprising a total of 31 farms, were screened for the presence of BTV antibodies, by agar gel immunodiffusion test (AGID) and ELISA-CFS (Enzyme Linked Immunosorbent Assay – competitive solid phase), both produced by Pan American Center of FMDV. From a total of 744 samples 74,3% were positive by ELISA – CFS and 651 (65,1%) were positive by AGID. There was no significant association between prevalence of the disease and sex of animals.These results suggest that the BTV is widespread among farms, probably causing subclinical infections, with high level of antibodies.

Introdução: A tuberculose e a histoplasmose são clínica-radiológica e histopatologicamente semelhantes, o que pode levar ao tratamento equivocado. Neste sentido, a importância do atual projeto é a confirmação de casos de histoplasmose em pacientes com suposta tuberculose, no Vale d Sinos – Rio Grande do Sul. Objetivo: Demonstrar a prevalência de histoplasmose a partir da detecção de anticorpos anti- Histoplasma capsulatum (H. capsulatum) em pacientes que possuíam diagnóstico inconclusivo e que receberam tratamento para tuberculose. Métodos e resultados: A primeira fase do estudo foi retrospectiva, com análise de prontuários para a seleção de pacientes cadastrados no Sistema Único de Saúde que receberam tratamento tuberculostático sem diagnóstico etiológico conclusivo para tuberculose. A segunda fase do estudo foi prospectiva, onde o soro dos pacientes que se enquadraram nos critérios de inclusão/exclusão foi analisado por imunodifusão radial dupla para a detecção da presença de anticorpos anti-H. capsulatum. Dos 42 soros testados, três (7,14%) tiveram resultado positivo para a presença de anticorpos anti-H. capsulatum. Conclusão: A ausência de achados etiológicos conclusivos para a tuberculose aliados à positivação da imunodifusão para H. capsulatum, demonstra que três pacientes apresentavam histoplasmose e não tuberculose, sugerindo a necessidade de pesquisa da micose nos casos com suspeita de tuberculose, mas sem confirmação diagnóstica. / Introduction: Tuberculosis and histoplasmosis are clinic-radiologic and hitopatologically similar, and so the treatment may be mistaken. In this sense, the importance of this project is to confirm histoplasmosis cases on patients who are being treated for supposed tuberculosis, in Vale do Sinos – Rio Grande do Sul. Aim: To demonstrate the prevalence of histoplasmosis by the presence of anti-Histoplasma capsulatum (H. capsulatum) antibodies in patients whose diagnosis is inconclusive and who have been treated for tuberculosis. Methods and Results: The first stage of the study was retrospective, by the analysis of medical records to select patients who are filed on Sistema Único de Saúde and who have received tuberculostatic treatment without conclusive etiologic diagnosis for tuberculosis. The second stage of the study was prospective, and the serum of patients who are integrated to inclusion/exclusion criteria was examined by double radial im munodiffusion to detect the presence of anti-H. capsulatum antibodies. From the 42 serum which were tested, three of them (7,14%) have had positive results for the presence of anti-H. capsulatum antibodies. Conclusion: The lack of conclusive etiologic find for tuberculosis associated to the positivation of immunodiffusion for H. capsulatum, proves that three patients have showed histoplasmosis and not tuberculosis, proposing then the necessity of a research of mycosis on the cases which there is the suspect of tuberculosis, but without diagnostic confirmation.