Orientador: Hermione Elly Melara de Campos Bicudo / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo-Oliveira / Banca: Francisco Chiaravalloti Neto / Resumo: O mosquito Aedes aegypti é vetor dos vírus causadores de doenças humanas entre as quais incluem-se a dengue, a dengue hemorrágica e a febre amarela. A transmissão dessas doenças é feita pelas fêmeas adultas, as quais necessitam de repasto sanguíneo para amadurecimento de seus óvulos. Ao picar indivíduos doentes e depois indivíduos não infectados, as fêmeas transmitem os vírus absorvidos dos primeiros, juntamente com o sangue. Vários estudos mostraram que o tratamento com cafeína (CAF) bloqueia o desenvolvimento e mata A. aegypti na fase larval, impedindo a produção de adultos e, consequentemente, a transmissão das doenças mencionadas. Paralelamente, trabalhos preliminares indicaram que o tratamento do mosquito com CAF altera o padrão de síntese das enzimas esterases. São enzimas que desempenham papel importante em vários processos fisiológicos dos organismos, estando inclusive envolvidas no controle da metamorfose dos insetos. No presente trabalho, as esterases foram analisadas em géis de poliacrilamida corados com α-naftil e β-naftil acetatos e Fast Blue RR. As amostras foram preparadas com larvas L2/L3, L4, pupas e adultos, porém, tendo em vista que a fase L4 foi a que permitiu melhor observação das bandas, o estudo praticamente restringiu-se à mesma. A comparação das amostras dos mosquitos tratados e controle envolveu a observação da presença e da frequência das bandas esterásicas nos géis. Foi também analisado o grau de expressão das bandas com base na intensidade de coloração avaliada pelo programa computacional Global Lab Image. A presente análise mostrou que a CAF altera cinco bandas β-esterásicas (EST-17A a EST-21) e um grupo de bandas α-esterásicas (EST-12 a EST-14). As bandas EST-17A a EST-20 apresentaram redução em ambas as características, enquanto EST-21 e as α-esterases apresentaram aumento. Tendo em vista as variações do grau de expressão das esterases, paralelamente ao ... / Abstract: The mosquito Aedes aegypti is a vector of human disease-causing virus, including dengue, dengue hemorrhagic fever and yellow fever. The transmission of these diseases is made by the adult females, which require blood repast for completing their eggs maturation. When females bite sick individuals and later bite healthy individuals, they transmit the virus absorbed with the blood from the first. Several studies have shown that treatment with caffeine (CAF) blocks development and kills A. aegypti in the larval phase, preventing the production of adults and, consequently, the transmission of the mentioned diseases. In addition, preliminary work indicated that CAF treatment of A. aegypti changes the pattern of synthesis of esterase enzymes. The esterase enzymes play important roles in various physiological processes of the organisms, including among them the control of the metamorphosis of insects. In the present study, the esterases were analyzed in polyacrylamide gels stained with α and ß naphthyl acetates and Fast Blue RR. The samples were prepared with L2, L3 and L4 larval stages, pupae and adults. However, considering that the L4 stage was the one that allowed better observation of the bands, the study was almost restricted to it. The comparison of the treated and control mosquitoes involved observations of the presence and frequency of the esterase bands in the gels. The degree of expression of the bands was also analyzed on the basis of the staining intensity evaluated by the Global Lab Image computer program. The analysis showed that CAF changed five β-esterase bands (EST-17A to EST-21) and a group of α-esterase bands (EST-12 to EST-14). The bands EST-17A to EST-20 showed reduction in both characteristics, while EST-21 and the α-esterases showed increase of them. In view of the changes occurred in the degree of expression of the esterases, parallel to the larval development block we thought in the hypothesis that these esterases ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-30Bitstream added on 2014-11-10T11:57:54Z : No. of bitstreams: 1 000790878_20160101.pdf: 380398 bytes, checksum: e08dff4e487573cfc636c3c84240a44f (MD5) Bitstreams deleted on 2016-01-04T10:26:14Z: 000790878_20160101.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-04T10:28:11Z : No. of bitstreams: 1 000790878.pdf: 2021307 bytes, checksum: 73f8799e623a542c65f4f583e02335e5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O mosquito Aedes aegypti é vetor dos vírus causadores de doenças humanas entre as quais incluem-se a dengue, a dengue hemorrágica e a febre amarela. A transmissão dessas doenças é feita pelas fêmeas adultas, as quais necessitam de repasto sanguíneo para amadurecimento de seus óvulos. Ao picar indivíduos doentes e depois indivíduos não infectados, as fêmeas transmitem os vírus absorvidos dos primeiros, juntamente com o sangue. Vários estudos mostraram que o tratamento com cafeína (CAF) bloqueia o desenvolvimento e mata A. aegypti na fase larval, impedindo a produção de adultos e, consequentemente, a transmissão das doenças mencionadas. Paralelamente, trabalhos preliminares indicaram que o tratamento do mosquito com CAF altera o padrão de síntese das enzimas esterases. São enzimas que desempenham papel importante em vários processos fisiológicos dos organismos, estando inclusive envolvidas no controle da metamorfose dos insetos. No presente trabalho, as esterases foram analisadas em géis de poliacrilamida corados com α-naftil e β-naftil acetatos e Fast Blue RR. As amostras foram preparadas com larvas L2/L3, L4, pupas e adultos, porém, tendo em vista que a fase L4 foi a que permitiu melhor observação das bandas, o estudo praticamente restringiu-se à mesma. A comparação das amostras dos mosquitos tratados e controle envolveu a observação da presença e da frequência das bandas esterásicas nos géis. Foi também analisado o grau de expressão das bandas com base na intensidade de coloração avaliada pelo programa computacional Global Lab Image. A presente análise mostrou que a CAF altera cinco bandas β-esterásicas (EST-17A a EST-21) e um grupo de bandas α-esterásicas (EST-12 a EST-14). As bandas EST-17A a EST-20 apresentaram redução em ambas as características, enquanto EST-21 e as α-esterases apresentaram aumento. Tendo em vista as variações do grau de expressão das esterases, paralelamente ao ... / The mosquito Aedes aegypti is a vector of human disease-causing virus, including dengue, dengue hemorrhagic fever and yellow fever. The transmission of these diseases is made by the adult females, which require blood repast for completing their eggs maturation. When females bite sick individuals and later bite healthy individuals, they transmit the virus absorbed with the blood from the first. Several studies have shown that treatment with caffeine (CAF) blocks development and kills A. aegypti in the larval phase, preventing the production of adults and, consequently, the transmission of the mentioned diseases. In addition, preliminary work indicated that CAF treatment of A. aegypti changes the pattern of synthesis of esterase enzymes. The esterase enzymes play important roles in various physiological processes of the organisms, including among them the control of the metamorphosis of insects. In the present study, the esterases were analyzed in polyacrylamide gels stained with α and ß naphthyl acetates and Fast Blue RR. The samples were prepared with L2, L3 and L4 larval stages, pupae and adults. However, considering that the L4 stage was the one that allowed better observation of the bands, the study was almost restricted to it. The comparison of the treated and control mosquitoes involved observations of the presence and frequency of the esterase bands in the gels. The degree of expression of the bands was also analyzed on the basis of the staining intensity evaluated by the Global Lab Image computer program. The analysis showed that CAF changed five β-esterase bands (EST-17A to EST-21) and a group of α-esterase bands (EST-12 to EST-14). The bands EST-17A to EST-20 showed reduction in both characteristics, while EST-21 and the α-esterases showed increase of them. In view of the changes occurred in the degree of expression of the esterases, parallel to the larval development block we thought in the hypothesis that these esterases ...

Rhynchosciara americana é estudada desde a década de 50 quando foi evidenciada a amplificação gênica em regiões de seus cromossomos politênicos. Os fenômenos de amplificação e a formação destes cromossomos gigantes se dão por meio da ocorrência de endociclos, regulados pela oscilação na atividade do complexo ciclinaE/CDK2. Nas glândulas salivares de nosso modelo, durante o desenvolvimento, há ocorrência de cromossomos politênicos. Foi seqüenciada uma mensagem de uma quinase dependente de ciclina (CDK10) que não apresenta qualquer ligação com os endociclos, descrita na literatura. Este transcrito teve sua sequencia revelada por experimentos de 5\'RACE. A sequência genômica foi parcialmente determinada. O perfil de expressão deste gene foi determinado nos ovários, glândulas salivares e corpo gorduroso. A presença da proteína CDK10 foi determinada por experimentos de western blot em glândulas salivares. A localização celular foi determinada nos ovários. Resultados sugerem a existência de duas isoformas deste gene nos tecidos analisados. / Rhynchosciara americana is studied since the 50s decade when gene amplifications was discovered in some regions of its polytene chromosomes. The phenomena of amplification and the formation of these giant chromosomes happens through the endocycles, regulated by an activity oscillation of the complex CyclinE/CDK2. It is known that, in the salivary glands of our model, during it is development, there is the occurrence of these polytene chromosomes, formed since the beginning of the larval life. It was sequenced a message of CDK10, a cyclin depended kinase that shows no participation with the endocycles, as described at the literature. This transcript was fully sequenced by 5\'RACE experiments. Its genomic sequence was partially determined. The relative expression pattern was determined for ovaries, salivary glands and fat body. The CDK10 protein was observed by western blot experiments in the salivary glands. Its cellular location was determined at the ovaries. Results suggest the existence of two isoforms of the RaCDK10 gene at the tissues analyzed.

Rhynchosciara americana é estudada desde a década de 50 quando foi evidenciada a amplificação gênica em regiões de seus cromossomos politênicos. Os fenômenos de amplificação e a formação destes cromossomos gigantes se dão por meio da ocorrência de endociclos, regulados pela oscilação na atividade do complexo ciclinaE/CDK2. Nas glândulas salivares de nosso modelo, durante o desenvolvimento, há ocorrência de cromossomos politênicos. Foi seqüenciada uma mensagem de uma quinase dependente de ciclina (CDK10) que não apresenta qualquer ligação com os endociclos, descrita na literatura. Este transcrito teve sua sequencia revelada por experimentos de 5\'RACE. A sequência genômica foi parcialmente determinada. O perfil de expressão deste gene foi determinado nos ovários, glândulas salivares e corpo gorduroso. A presença da proteína CDK10 foi determinada por experimentos de western blot em glândulas salivares. A localização celular foi determinada nos ovários. Resultados sugerem a existência de duas isoformas deste gene nos tecidos analisados. / Rhynchosciara americana is studied since the 50s decade when gene amplifications was discovered in some regions of its polytene chromosomes. The phenomena of amplification and the formation of these giant chromosomes happens through the endocycles, regulated by an activity oscillation of the complex CyclinE/CDK2. It is known that, in the salivary glands of our model, during it is development, there is the occurrence of these polytene chromosomes, formed since the beginning of the larval life. It was sequenced a message of CDK10, a cyclin depended kinase that shows no participation with the endocycles, as described at the literature. This transcript was fully sequenced by 5\'RACE experiments. Its genomic sequence was partially determined. The relative expression pattern was determined for ovaries, salivary glands and fat body. The CDK10 protein was observed by western blot experiments in the salivary glands. Its cellular location was determined at the ovaries. Results suggest the existence of two isoforms of the RaCDK10 gene at the tissues analyzed.