Os extratos de média polaridade de sete indivíduos de Piper solmsianum coletados em diferentes localidades foram analisados por cromatografia líquida de alta eficiência para se verificar diferenças quantitativas na concentração relativa de apiol, dilapiol, miristicina, grandisina, elemicina, isoelemicina e lignana tetraidrofurânica rel- (7R, 8R, 7\'R, 8\'R)-3,4,3\',4\'-dimetilenodioxi-5,5\'-dimetoxi-7,7\'-epoxilignana. Todos os perfis cromatográficos consistiam de apenas dois, três ou quatro picos majoritários. O(s) composto(s) majoritário(s) era(m) distinto(s) de planta para planta, e em um dos espécimes o pico predominante não era nenhum dos sete metabólitos secundários avaliados. Estudaram-se as variações diárias e anuais em três espécimes de uma população selvagem de P. solmsianum localizada na Reserva da CUASO, em São Paulo. A grandisina apresentou teores máximos no início da noite e teores mínimos no início da manhã. Apiol/dilapiol apresentou variação circadianas evidentes apenas em dois indivíduos, sendo que em um deles o teor máximo ocorreu por volta das oito horas da noite, e no outro, o teor máximo ocorreu por volta das cinco horas da manhã. A variação sazonal mostrou pequena amplitude de oscilação. Em dois espécimes o máximo teor de apiol/dilapiol e grandisina ocorreu no verão. No terceiro espécime não se observou variação periódica anual. / The crude extracts of seven individuals of Piper solmsianum collected in different places were analyzed by high efficiency liquid chromatography (HPLC) in order to determine changes in the relative content of apiol, dillapiol, myristicin, grandisin, elemicin, isoelemicin, and tetrahydrofuran lignan rel-(7R,8R,7R,8R)-3,4,3,4- dimethylenedioxy-5,5-dimethoxy-7,7-epoxylignan. All chromatographic profiles consisted of two, three or four major peaks with significant qualitative and quantitative differences. Major components were different from plant to plant and in one specimen an component different from the seven metabolites observed in most cases. The leaf extracts from three wild specimens of P. solmsianum collected at CUASO Reserve, showed annual and diurnal variations in apiol/dillapiol and grandisin relative concentrations. Three plants presented circadian variation with maximum content of grandisin late afternoon, and minimum content in the dawn. Apiol/dillapiol displayed clear circadian variation in two individuals, but without synchrony between phases. The maximum content was observed and in a second specimen around 8 p.m., and in the another specimen, the maximum content occur was observed at 5 a.m. The seasonal variation showed small amplitude of oscillation and in two individuals the maxima contents of apiol/dillapiol and grandisin were observed in summer

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This study aims to contribute to the improvement and conservation of orchids with distribution in the Brazilian Cerrado. Selfcompatibility was evaluated for seven species: Cohniella cepula, Cyrtopodium eugenii, C. saintlegerianum, Epidendrum densiflorum, Epidendrum nocturnum, Epidendrum secundum e Lockhartia goyazensis. Only three were autocompatible: Epidendrum nocturnum, Epidendrum secundum and Lockhartia goyazensis. Interspecific compatibility was assessed for Cyrtopodium and Epidendrum genera, using reciprocal crosses. Just E. nocturnum and C. eugenii produced viable seeds. For early in vitro floral induction 20 different treatments were used through nutritional changes and use of cytokinin (BAP) in modified MS medium. Only C. cepula showed positive responses to treatment with formation of 46% floral stems. The effect of BAP was evident in the results. Cryopreservation was tested by vitrification of seeds of seven species of orchids, obtained from outcrossing. The responses to cryopreservation were partially different for each species. Most seeds tested showed any significant differences between freezing in liquid nitrogen without cryoprotectants and control without freezing. The freezing without cryoprotectant was successful to maintaining seed viability for all species, C. cepula 63%, C. eugenii 59%, C. sainttlegerianum 70%, E. densiflorum 42%, E. nocturnum 31%, E. secundum 69% and L. goyazensis 52%. Only E .nocturnum and C. cepula showed a significant reduction in viability when submitted to freezing in liquid nitrogen. The results presented here are useful for the development of breeding programs for orchids and conservation of these species. / A grande maioria das espécies de orquídeas é polinizada por insetos, principalmente abelhas, borboletas e mariposas. A família Orchidaceae é, em geral, considerada alógama, mas informações sobre o tipo de reprodução não são conhecidas para a maioria das espécies. Pouca informação existe sobre orquídeas do Cerrado, o que prejudica o melhoramento destas espécies e adia sua utilização no desenvolvimento de novas cultivares para o mercado de ornamentais. Métodos recentes de biotecnologia vegetal podem auxiliar tanto o melhoramento quanto a conservação destas espécies, como a indução a floração precoce in vitro, técnica importante principalmente para espécies de ciclo longo, e a criopreservação, como ferramenta para o desenvolvimento de bancos de germoplasma, essenciais tanto para o melhoramento quanto para a conservação da variabilidade genética. Este trabalho teve como objetivos contribuir para o melhoramento e conservação de orquídeas com distribuição no Cerrado Brasileiro. Foi avaliada a autocompatibilidade para sete espécies: Cohniella cepula, Cyrtopodium eugenii, Cyrtopodium saintlegerianum, Epidendrum densiflorum, Epidendrum nocturnum, Epidendrum secundum e Lockhartia goyazensis. Apenas três foram autocompatíveis: E. nocturnum, E. secundum e L. goyazensis. Foi avaliada a compatibilidade interespecífica dentro dos gêneros Cyrtopodium e Epidedrum utilizando cruzamentos recíprocos. Apenas C. eugenii e E. nocturnum produziram sementes viáveis. Para a indução floral precoce in vitro foram testadas diferentes composições nutricionais e concentrações de benzilaminopurina (BAP) no meio MS modificado. Apenas C. cepula apresentou respostas positivas aos tratamentos, com formação de até 46% de hastes florais. O efeito do BAP ficou evidente nos resultados dos tratamentos. Foi testada a criopreservação por vitrificação de sementes das sete espécies de orquídeas, obtidas de cápsulas originadas de fecundação cruzada. As respostas aos crioprotetores foram parcialmente distintas para os tratamentos de criopreservação avaliados, dependendo da espécie. A maioria das sementes testadas não apresentou diferenças significativas entre o congelamento em nitrogênio líquido e o controle sem o crioprotetor e sem o congelamento. O congelamento sem crioprotetor foi bem sucedido para todas as espécies mantendo a viabilidade das sementes, para C. cepula em 63%, C. eugenii em 59%, C. sainttlegerianum 70%, E. densiflorum 42%, E. nocturnum 31%, E. secundum 69% e L. goyazensis em 52%. Apenas E. nocturnum e C. cepula apresentaram redução significativa da viabilidade quando submetidas ao congelamento direto em nitrogênio líquido, sem crioprotetor. Os resultados apresentados neste trabalho são úteis ao desenvolvimento de programas de melhoramento para orquídeas e para conservação destas espécies.

Orientador: Márcio Silva Araújo / Resumo: A variação individual no uso de recursos alimentares pode depender de fatores ecológicos como a competição intra e interespecífica, predação, além da diversidade e abundância de recursos. O objetivo deste trabalho foi identificar as causas da variação individual no uso de recursos alimentares em populações do peixe Characidium schubarti, conh’ecido como “charutinho” e descrito como insetívoro bentônico. O estudo foi realizado em riachos de Mata Atlântica no Parque Estadual Carlos Botelho, núcleo São Miguel Arcanjo, região sudeste do Estado de São Paulo. Os charutinhos foram coletados ao longo de transectos em 11 riachos diferentes. Foram coletadas amostras da comunidade de invertebrados bentônicos em cada riacho para a obtenção de estimativas da diversidade e abundância de recursos alimentares. Identificamos e quantificamos todas as possíveis espécies de peixes competidoras (insetívoros bentônicos). Nossos resultados sugerem significativa variação na dieta dos indivíduos de todas as populações, porém com baixo grau de especialização individual. Nós não encontramos efeito significativo da oportunidade ecológica (diversidade de recursos), produtividade secundária (biomassa de recursos) e competição (densidade de charutinhos e competidores) sobre o grau de variação na dieta nas populações estudadas. / Abstract: Individual variation in food resource use can depend on ecological factors such as intra and interspecific competition, predation, and the diversity and abundance of resources. Our main goal in this study was to identify the ecological causes of individual variation in the use of food resources in natural populations of the fish Characidium schubarti, part of a group popularly known as “South American darters”, described as benthic insectivores. The study was conducted in Atlantic Forest streams at the Carlos Botelho State Park, at São Miguel Arcanjo, in the southeast of the state of São Paulo. Specimens were collected along transects in 11 streams. We collected samples from the benthic invertebrate community in each stream to estimate the diversity and abundance of food resources. We identified and quantified all possible competing species of fishes (benthic insectivores). Our results suggest significant variation in the diet of individuals from all populations, however, with a low degree of individual specialization. We found no significant effect of ecological opportunity (resource diversity), secondary productivity (resource biomass) and competition (density of charutinhos and competitors) on the degree of dietary variation in the studied populations. / Mestre

Gracilaria. caudata J. Agardh é uma das espécies mais comuns no Oceano Atlântico tropical e subtropical. No nordeste do Brasil a espécie é explotada como uma importante agarófita, onde recentemente foram encontradas variantes de coloração marrom-esverdeada crescendo lado a lado a indivíduos de coloração vermelha (mais comuns) em uma população natural. Este estudo teve por objetivo averiguar a estabilidade e o padrão de herança de cor marrom-esverdeada de indivíduos de G. caudata procedentes de uma população natural, bem como avaliar o desempenho somático e reprodutivo das diferentes fases do histórico de vida, levando-se em consideração indivíduos de coloração marrom-esverdeada e vermelha. A partir de cruzamentos teste foi possível verificar que a coloração marrom-esverdeada é estável e herdável, sendo o padrão de herança dessa coloração do tipo nuclear codominante, em que tetrasporófitos homozigotos são vermelhos (vmvm) ou marrom-esverdeados (meme) e os heterozigotos apresentam o fenótipo marrom (vmme e mevm). Variantes pigmentares, independentemente da fase do histórico, atingiram precocemente a maturidade reprodutiva quando comparadas a espécimes do tipo selvagem. Essa característica pode favorecer a manutenção da variante marrom-esverdeada na natureza. No entanto, apesar da diferenciação tardia de cistocarpos, gametófitos femininos, provenientes de tetrasporófitos vmvm, apresentaram um melhor desempenho reprodutivo em relação a gametófitos femininos provenientes de tetrasporófitos com variação pigmentar (meme, vmme e mevm); essa característica poderia contribuir para a predominância de espécimes selvagens na natureza. Entretanto, tetrasporófitos com variação pigmentar não só atingiram precocemente a maturidade reprodutiva como se tornaram mais férteis em relação ao tipo selvagem. Apenas na descendência de tetrasporófitos selvagens (vmvm) foi observada a proporção sexual esperada, entre gametófitos femininos e masculinos. Na progênie de tetrasporófitos com variação pigmentar foram observadas alterações na proporção sexual, devido à presença de gametófitos bissexuais. Essa condição de bissexualidade, provavelmente, é decorrente da presença de um alelo recessivo denominado bi, o qual possibilitaria a expressão de funções femininas em gametófitos masculinos. No presente estudo, pudemos evidenciar que a bissexualidade em G. caudata é herdável, e que gametófitos femininos que portam a mutação bi foram capazes de transmitir a mutação aos descendentes, porém o alelo não é fenotipicamente detectável. Como não foram observados gametófitos bissexuais na descendência de tetrasporófitos vmvm (provenientes do cruzamento feminino vm x masculino vm) sugere-se que a mutação bi estaria presente apenas em tetrasporófitos marrom-esverdeados oriundos da natureza. No entanto, permanece a possibilidade de ocorrência de espécimes bissexuais de coloração vermelha em populações naturais, já que tais indivíduos foram observados na progênie de tetrasporófitos vmme e mevm, indicando assim, que não há ligação entre a bissexualidade e a coloração do talo. Gametófitos femininos vermelhos apresentam melhor desempenho somático quando comparados a gametófitos femininos marrom-esverdeados. Esse aspecto foi evidenciado por meio de taxas de crescimento, número de ápices diferenciados e percentual de fixação ao frasco de cultura. Essas características devem contribuir para a predominância de espécimes do tipo selvagem na natureza. Gametófitos marrom-esverdeados, em contrapartida, apresentaram melhor desempenho fotossintetizante, o que poderia representar uma vantagem, considerando-se o ambiente heterogêneo de ocorrência da espécie, e desse modo, contribuir para a manutenção dessa variante em população natural. Entretanto, não foram observadas diferenças com relação às taxas crescimento entre tetrasporófitos dos quatro genótipos (vmvm, meme, vmme e mevm), apesar das diferenças quanto à fertilidade, concentração pigmentar, número de ápices diferenciados e desempenho fotossintetizante. Tais tetrasporófitos apresentaram taxas de crescimento semelhantes às observadas para gametófitos femininos marrom-esverdeados, apesar do melhor desempenho fotossintetizante desses últimos. Os dados obtidos nesse trabalho sugerem que a variante marrom-esverdeada apresente vantagens adaptativas para G. caudata / Gracilaria caudata J. Agardh is one of the most common species in the tropical and subtropical Atlantic Ocean. In the northeast of Brazil the species is exploited as an important agar producer, where greenish-brown color variants have recently been found growing side by side with individuals of red color (more common) in a natural population. The aim of this study was to investigate the stability and pattern of green-brown inheritance of G. caudata individuals from a natural population, as well as to evaluate the somatic and reproductive performance of the different stages of life history, considering individuals of greenish-brown and red colors. From test crosses it was possible to verify that the greenish-brown color is stable and inheritable. Codominant nuclear inheritance was found in the greenish-brown strains. Homozygous tetrasporophytes are red (rdrd) or greenish-brown (gbgb) while heterozygous tetrasporophytes present the brown phenotype (rdgb and gbrd). Color variants, regardless of the history phase, reached early reproductive maturity when compared to wild type specimens. This feature may favor the maintenance of the greenish-brown variant in nature. However, in spite of the late differentiation of cystocarps, female gametophytes derived from rdrd tetrasporophytes had a better reproductive performance in relation to female gametophytes from tetrasporophytes with color variation (gbgb, rdgb and gbrd); this feature could contribute to the predominance of wild specimens in nature. However, tetrasporophytes with color variation not only reached reproductive maturity early but also became more fertile in relation to the wild type. The expected sexual ratio between female and male gametophytes was only observed in the offspring of wild tetrasporophytes (rdrd). There were changes in the sexual proportion in the progeny of tetrasporophytes with color variation due to the presence of bisexual gametophytes. This condition of bisexuality is probably due to the presence of a recessive allele called bi, which would allow the expression of female functions in male gametophytes. In the present study, we could show that bisexuality in G. caudata is inheritable, and that female gametophytes, which carry the bi mutation, were able to transmit the mutation to the offspring, but the allele is not phenotypically detectable. As no bisexual gametophytes were found in the offspring of rdrd tetrasporophytes (from the cross female rd x male rd), it is suggested that the bi mutation would only be present in brown-green tetrasporophytes from the natural population. However, it remains the possibility of occurrence of bisexual specimens of red color in natural populations, since such individuals were observed in the progeny of tetrasporophytes rdgb and gbrd, thus indicating that there is no link between bisexuality and the thallus color. Red female gametophytes show better somatic performance when compared to the greenish-brown female gametophytes. This aspect was evidenced by means of growth rates, number of differentiated apices, and percentage of attachment to the culture flask. These characteristics should contribute to the predominance of wild type specimens in natural populations. Otherwise, the greenish-brown gametophytes showed better photosynthetic performance, which could represent an advantage considering the heterogeneous environment of the species occurrence, thus contributing to the maintenance of this variant in the natural population. However, no differences were observed among tetrasporophytes of the four genotypes (rdrd, gbgb, rdgb and gbrd), regarding the growth rates, despite of the differences in fertility, pigment concentration, number of differentiated apices, and photosynthetic performance. These tetrasporophytes presented similar growth rates to those observed for greenish-brown female gametophytes, despite of the better photosynthetic performance of the latter. The data obtained in this work suggest that the greenish-brown variant presents adaptive advantages for G. caudata

We have investigated genetic variation in microRNA-mediated regulation as a susceptibility factor for anxiety disorders following two different approaches. We first studied two isoforms of the candidate gene NTRK3 by re-sequencing its different 3'UTRs in patients with Panic (PD) and Obsessive Compulsive disorders (OCD) as well as controls. Two rare variants that altered microRNA-mediated regulation were identified in PD. Conversely, association of a common SNP with OCD hoarding subtype was found. Moreover, we have also studied a possible involvement of microRNAs in anxiety disorders. Consequently, we have analysed the genomic organisation and genetic variation of miRNA-containing regions to construct a panel of SNPs for association analysis. Case-control studies revealed several associations. However, it is worth remarking the associations of miR-22 and miR-488 with PD; two microRNAs for which functional assays and transcriptome analysis after microRNA overexpression showed significant repression of a subset of genes involved in physiological pathways linked to PD development. / Hem investigat la variació genètica a la regulació mediada per microRNAs com a factors de susceptibilitat pels trastorns d'ansietat seguint dues aproximacions diferents. Primer vam estudiar dues isoformes del gen candidat NTRK3 mitjançant la reseqüenciació dels seus diferents 3'UTRs a pacients de pànic (TP), a pacients amb trastorn obsessiu compulsiu (TOC) i a controls. Dues variants rares que alteren la regulació mediada per microRNAs foren identificades per TP. D'altra banda, es trobà associació d'un SNP comú amb el subtipus acumulador de TOC. A més, també hem estudiat la possible implicació dels microRNAs als trastorns d'ansietat. Conseqüentment, hem analitzat l'organització genòmica i la variació genètica a regions que contenen microRNAs per construir un panell d'SNPs per fer anàlisis d'associació. Els estudis cas-control van revelar algunes associacions. Tanmateix, val la pena destacar les associacions del miR-22 i el miR-488 amb TP; dos microRNAs pels quals assajos funcionals i anàlisis de transcriptoma després de la seva sobreexpressió han mostrat una repressió significativa d'un grup de gens implicats en vies fisiològiques lligades al desenvolupament del TP.