L'objectif scientifique de la thèse est de contribuer à améliorer la compréhension des mécanismes lésionnels découlant de l’impact non pénétrant d’un projectile en région thoracique latérale. Concrètement, l’application concerne l’amélioration de l’évaluation du potentiel lésionnel et l’optimisation de projectiles dits « à létalité réduite ». Cette étude a été menée dans le cadre du projet PARCHOC, associant la Délégation Générale pour l’Armement-Techniques Terrestres, le laboratoire PRISME de l’université d’Orléans, les sociétés Nexter munitions, ITC élastomère et ATCOM télémétrie. Il s’agit notamment de mettre en évidence les paramètres des projectiles qui doivent être maîtrisés pour limiter le risque lésionnel. Nous avons d’abord réalisé une étude pour caractériser des projectiles d'essais constitués d'un culot rigide et d'une ogive en mousse d'élastomère. Les propriétés dynamiques des élastomères ont été caractérisées par le système des barres de Hopkinson. Ce travail a permis la mise au point d'un modèle numérique de comportement des élastomères. Des essais ainsi que des simulations d’impacts sur cibles rigides ont ensuite été réalisés afin d'étudier l'influence du couple masse-vitesse et des caractéristiques mécaniques des élastomères sur le chargement généré. Dans la seconde partie de l'étude, des essais sur cibles biologiques instrumentées ont été menés à l’aide des projectiles d'études précédemment caractérisés. Les résultats expérimentaux et numériques montrent que la dangerosité des projectiles est liée à l’action qu’ils exercent sur la structure osseuse thoracique après sa fragilisation et que le mécanisme lésionnel est fortement dépendant de l’impulsion transmise par le projectile lors de l’impact. / The scientific objective of the thesis was to make a contribution in the understanding of the injury mechanisms following the blunt impact of a projectile on the lateral thoracic region. Practically, the application concerns safety certification and optimization of less-lethal projectile. This research was supported by the project PARCHOC partners: the Délégation Générale pour l’Armement-techniques terrestres, the PRISME laboratory (Orléans university),the companies Nexter munitions, ITC élastomère and ATCOM télémétrie. In particular, we have sought the principal projectile parameters which must be controlled to limit injury risk. Firstly, we have performed a study based on specialized test projectiles, made with a rear rigid part and soft foam (elastomeric) nose. The foams’ chemical formulations were made so that the dynamical properties (measured with the Hopkinson bar apparatus) were those expected. Experiments and simulations of the impacts on rigid wall target have been made to investigate how the mass-velocity couple and the foam material properties influence the impact force. Secondly, an experimental campaign was made using pig anatomical parts and the projectiles previously studied. Experimental and numerical results obtained during the thesis demonstrate that the dangerous nature of the projectiles used is essentially linked to the action on the thoracic bone structure after it has been weakened by the impact. Furthermore, injuries are strongly dependent upon the impulse transmitted during the impact.

L’identification d’interactions synthétiques létales (SL) apparait aujourd’hui comme une approche prometteuse, qui permet de cibler directement les cellules cancéreuses. Dans cette étude, nous avons utilisé la levure Saccharomyces cerevisiae en tant qu’organisme modèle simple pour cribler des mutations SL avec une drogue, l’AICAR (5-Amino-4-Imidazole CArboxamide Ribonucleoside). L’AICAR est une molécule connue pour inhiber spécifiquement la prolifération de multiples lignées cancéreuses. Ici, nous montrons que la perte d’ubiquitination de l’histone H2B ou de méthylation de l’histone H3K4 est SL avec l’AICAR. Nos résultats pointent sur l’AICAR causant une accumulation de cellules en G1 due à ses effets sur la localisation subcellulaire de la cycline Cln3, tandis que la perte d’ubiquitination d’H2B ou de méthylation de H3K4 affectent l’expression des deux autres cyclines deG1, CLN1 et CLN2. Ainsi, l’AICAR et la perte d’ubiquitination de l’histone H2B ou de méthylation del’histone H3K4 affectent les trois cyclines simultanément, conduisant à une condition connue pourêtre SL. De plus, cette interaction chemo-genetique s’est révélée être conservée chez les cellules humaines HCT116. En effet, le knock down de RNF40, ASH2L ou MLL2 conduit à une sensibilité àl’AICAR exacerbée. Or, on sait que MLL2 est muté dans de nombreux cancers, ce qui rend cette interaction SL très intéressante dans le cadre d’une approche thérapeutique. / Identifying synthetic lethal interactions has emerged as a promising new therapeutic approach that aims to directly target the cancer cells. Here, we used the yeast Saccharomyces cerevisiae as a simple eukaryotic model to screen for mutations resulting in a synthetic lethality with 5-Amino-4-ImidazoleCArboxamide Ribonucleoside (AICAR) treatment. Indeed, AICAR has been reported to specifically inhibit the proliferation of multiple cancer cell lines. Here, we found that loss of two several histone modifying enzymes, including Bre1 (histone H2B ubiquitination) and Set1 (histone H3 lysine 4methylation), greatly enhanced AICAR inhibitory effects on growth. Our results point to AICAR causing a significant accumulation of G1 cells due to its impact on Cln3 subcellular localization, whilebre1 or set1 deletion impacts on the two other G1 cyclins, by affecting CLN1 and CLN2 expression .As a consequence, AICAR and bre1/set1 deletions jointly affect all three G1 cyclins, leading to a condition that is known to result in synthetic lethality. Most importantly, these chemo-genetic synthetic interactions were conserved in human HCT116 cells. Knock-down of RNF40, ASH2L orKMT2D induced a highly significant increased sensitivity to AICAR. As KMT2D is mutated at high frequency in a variety of cancers, this synthetic lethal interaction has an interesting therapeutic potential.

Introduction : Selon la publication conjointe par l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS) et la Banque Mondiale du rapport mondial sur la prévention des traumatismes chaque année les accidents de la route sont responsables de plus de 1,2 million de morts dans le monde. 90% de ces décès surviennent dans les pays à revenu faible ou intermédiaire. Les accidents de la route concernent toutes les tranches d’âge, mais touchent plus particulièrement les jeunes actifs. La lutte contre ce fléau se heurte à la qualité des données sur les accidents de la route recueillies et rapportées, par le défaut de performance ou d’efficacité des outils de collecte des données existants et la non-représentativité des populations d’étude. Face à l’augmentation grandissante des accidents de la circulation dans les pays en développement et particulièrement dans notre pays, le Mali, et l’absence notoire d’un système de collecte de données fiable et extrapolable à la population générale, nous avons mis en en place un projet de recherche. Objectif : Etait de caractériser les accidents corporels de la route enregistrés dans les structures de santé et dans tous les commissariats de police du District de Bamako afin de proposer un système d’information efficace et durable permettant de doter le Mali d’un système de surveillance opérationnel et pertinent, à même d’aider à la prise de décision et aux actions opérationnelles de prévention et de prise en charge des accidents de la route favorisant ainsi la création d’un observatoire national de la sécurité routière basé sur la remontée et le codage des procès-verbaux. Méthode : A partir d’un appariement des données accidentelles corporelles de la route des structures de santé et de la police. Nous avons procédé à une estimation du nombre d’accidents par la méthode de capture-recapture sur une période de quatre mois (de Janvier à Avril) et assuré une surveillance épidémiologique sur 12 mois (de janvier à Décembre 2012) ne portant que sur les données collectées à la police. Résultats : L’estimation globale des accidentés a été nettement supérieur au dénombrement des 2 sources soit 8518 (8047-8990) victimes, contre 1432 pour la police et 3586 pour la santé. Nous pouvons conclure que la capture-recapture est une méthode sensible d’estimation de l’exhaustivité du nombre d’accidents de la route applicable dans les pays à revenu faible. Par contre avec la mortalité, cette sous-estimation diminue soit 99 versus 57 pour la police et 54 pour la santé. L’étude de la surveillance des AVP de Janvier à décembre 2012 a enregistré 2512 accidents avec 3905 victimes dont 407 blessés graves et 142 tués, impliquant 4434 véhicules. L’analyse des facteurs prédictifs de la gravité a révélé une vulnérabilité des moins de 15 ans OR=1,10(1,05-1,15) et des 60 ans et plus OR=1,15(1,06-1,25). Parmi les causes des accidents, l’imprudence du piéton a été le facteur le plus associé à la gravité des AVP OR=1,22 (1,06-1,40). Le défaut de lumière a été significativement associé à la gravité des accidents de la route à Bamako OR=1,05 (1,02-1,09). L’analyse des facteurs prédictifs de la létalité a élucidé un risque de mourir plus élevé chez les 60 ans et plus OR=1,06 (1,01-1,12). Les ménagères auraient un risque plus faible de décès que les autres couches socio professionnelles OR=0,97 (0,96-0,99). Parmi les causes des accidents de la route, l’imprudence du piéton a été le facteur le plus associé au risque de décès 1,11 (1,02-1,23) Les conditions climatiques surtout la saison des pluies et la saison froide ont été les périodes assez mortelles des accidentés de la route OR=1,08 (1,03-1,13). Conclusion : nous pouvons dire que cette étude a permis d'élucider les facteurs humains significativement associés à la gravité et la létalité des accidents de la route, mais aussi mis en évidence la nette sous-estimation du nombre des victimes de la route par la méthode de capture-recapture ayant comparé deux sources de données (police et hôpital). / Introduction: According to the joint publication by the World Health Organization (WHO) and the World Bankof the world report on the prevention of the traumas every year the road accidents are responsible for more than1.2 million deaths. 90 % of these deaths arise in low-income countries or intermediary. The fight against thisplague is impeded by the quality of the data which were collected and reported concerning road accidents, by thelack of performance and efficiency of the existing tools of data collection and the non-representativeness of thepopulations of study. In the face of the growing increase of the traffic accidents in developing countries andparticularly in our country, Mali, and the serious lack of a reliable and extrapolable data collection system in thegeneral population, we put in position a research project.Objective: It is to characterize the personal accidents of the road recorded in the structures of health and in allthe police stations of the District of Bamako in order to propose an effective and sustainable information systemallowing to endow Mali of an operational and relevant monitoring system which is able to help in the decisionmakingand in the operational actions of prevention and coverage of the road accidents thus, favoring thecreation of a national monitoring observatory of the road safety based on the rise and the coding of reports.Methods: we proceeded to an estimation of the number of accidents by the method of capture - recapture over aperiod of four months (from January to April, 2012) from a matching of the physical accidental data of the roadof the structures of health and the police. We also led an epidemiological surveillance over 12 months (fromJanuary to April 2012) concerning only the data collected in the police services.Results: The global estimation of the accident victims was absolutely upper to the enumeration of 2 sources thatis 8518 (8047-8990) victims, against 1432 for the police and 3586 for the health services. We can conclude thatthe capture - recapture is a sensitive method of estimation of the exhaustiveness of the applicable number of roadaccidents in low-income countries. On the other hand with the mortality, this underestimate decreases 99 versus57 for the police and 54 for the health services. The study of the surveillance of the RTA from January toDecember, 2012 recorded 2512 accidents with 3905 victims, among whom 407 badly wounded persons and 142persons killed, involving 4434 vehicles.The analysis of the predictive factors of the gravity revealed a vulnerability of individuals who were under 15OR=1.10 (1.05-1.15) and those who were 60 years old or above OR=1.15 (1.06-1.25).Among the causes of the accidents, the carelessness of the pedestrian was the factor the most associated with thegravity of the RTA OR=1.22 (1.06-1.40). The defect of light was associated significantly with the gravity of theroad accidents in Bamako OR=1.05 (1.02-1.09).The analysis of the predictive factors of the lethality showed arisk of dying higher with those were 60 years old and above OR=1.06 (1.01-1.12). The housewives had a lowerrisk of death more important than the other socio-professional classes OR=0.97 (0.96-0.99). Among the causesof the road accidents, the carelessness of the pedestrian was the factor the most associated with the risk of death1.11 (1.02-1.23). Weather conditions especially the rainy season and the cold season were the most lethal periodsof the road accident victims OR=1.08 (1.03-1.13).Conclusion: we can say that this study allowed to clarify human factors significantly associated to the gravityand the lethality of the road accidents, but it has also highlighted the important under estimation of the number ofthe victims of the road by the capture-recapture method which has compared two springs of data (police andhospital)

Le cancer occupe le premier rang parmi les causes de décès au Québec. Les taux de mortalité diffèrent cependant à travers les régions du Québec. En considérant les territoires des Centres de santé et de services sociaux (CSSS), ce mémoire propose dans un premier temps d’étudier la distribution des taux de mortalité pour les principaux sièges de cancer, d’identifier les régions où une différence significative du taux avec le reste du Québec est perceptible et d’approfondir des éléments impliqués dans la mortalité, soit l’incidence et la létalité. D’autre part, dans le but d’expliquer les variations des taux de mortalité, des variables socio-économiques liées aux territoires retenus serviront de variables explicatives au modèle de régression utilisé. Les résultats ont permis de constater que c’est pour le cancer du poumon que les écarts significatifs sont les plus nombreux. Quant au cancer colorectal, un seul territoire présentait un écart significatif. Pour ce qui est du cancer de la prostate et du sein, aucun écart n’est perceptible dans les taux de mortalité. Concernant la partie explicative de la mortalité, dans le cas du cancer du poumon, les taux d’incidence sont fortement corrélés aux taux de mortalité. On ne peut cependant faire le même constat pour les cancers colorectal, du sein et de la prostate. De plus, les variables socio-économiques considérées pour les territoires de CSSS ne permettaient pas d’arriver à un modèle explicatif convaincant. Ces résultats montrent la nécessité d’avoir des données longitudinales permettant de suivre les individus dès le moment où le diagnostic de cancer est établi afin d’être en mesure de mieux mesurer les liens entre l’incidence, la survie, le niveau socio-économique et la mortalité. / Cancer is the leading cause of death in Québec. However, mortality rates vary significantly throughout Quebec’s regions. Using the CSSS (Centre de santé et de services sociaux) territories as a base of comparison, the present thesis will study the regional distribution of mortality rates amongst the territories with the highest cancer rates, identify those territories that have a significant variation from the overall cancer rate of the province, and investigate the relation between incidence rates and lethality. Moreover, to help explain variations in mortality rates, a regression analysis was undertaken using socioeconomic variables of each territory. The analysis demonstrated that territorial disparity was the greatest for lung cancer. As for colorectal cancer, only one territory showed a rate different with that of Quebec as a whole. For prostate and breast cancer no variations were identified. Lung cancer mortality rates were found to be strongly correlated with incidence rates, but that wasn’t the case for the other cancers (colorectal, breast and prostate). Further, the analysis of the socio-economic variables in the regression model did no present any convincing results. The need for longitudinal data to study mortality rates by cancer and its associated factors is deemed to be a major issue.

Aujourd’hui, les traitements du cancer colorectal métastatique ont évolué grâce à la combinaison de chimiothérapies conventionnelles à base de 5-FU, oxaliplatine et/ou Irinotécan et de thérapies ciblées dirigées contre le récepteur de l’EGF ou le VEGF. Malgré un taux de survie amélioré par la combinaison de ces drogues, la résistance innée et acquise aux traitements est une cause fréquente d'échec thérapeutique.Dans le but de découvrir de nouvelles cibles thérapeutiques nous avons effectué plusieurs criblages phénotypiques en utilisant des modèles cellulaires de résistance acquises aux chimiothérapies (oxaliplatine et irinotécan) générés au laboratoire ainsi que la lignée HCT116 qui présente une résistance innée aux thérapies anti-EGFR (cétuximab, panitumumab, Erlotinib). Le but final de ce projet étant de révéler des gènes, dont l’inhibition permet de rétablir la sensibilité à l’un de ces traitements, affichant ainsi une interaction létale avec le médicament.Une fois les kinases potentiellement impliquées dans la résistance aux thérapies du CCR identifiées, une inhibition spécifique par shRNA et/ou un inhibiteur spécifique a été effectuée afin de confirmer les potentielles cibles thérapeutiques et/ou biomarqueurs de réponse aux traitements. La cible la plus prometteuse, identifiée comme un déterminant de la résistance à l’oxaliplatine est la protéine ATR (Ataxia-telangiectasia mutated and rad3 related). Une protéine jouant un rôle clé dans la réparation de l'ADN et qui est activée en réponse à la présence d'ADN simple brin persistant (ssDNA) ou de stress réplicatif, pouvant être généré par certaines thérapies anticancéreuses.L’inhibition ATR via son inhibiteur pharmacologique VE-822 (VX-970) combinée à l’oxaliplatine a alors été étudiée par l’utilisation de tests cytotoxiques complétés par une étude d’additivité. Ainsi, nous avons démontré que l’inhibition d’ATR combinée avec l’oxaliplatine entraine une forte synergie dans la lignée HCT116-R1 à la fois en 2D et en 3D. Cet effet est également retrouvé dans d’autres lignées clonales résistantes à l’oxaliplatine (HCT116-R2, SW48-R1) ainsi que dans les lignées cellulaires à l’origine de ces dernières (HCT116, SW48). Nous avons également montré que l'effet synergique de l’oxaliplatine et du VE-822 dans la lignée HCT116-R1 s'accompagne d'une augmentation de la présence d’ADN simple brins suivie de nombreuses cassures double brins de l’ADN, d'un arrêt de la prolifération et d'une induction de l'apoptose. L'apparition de ces dommages à l'ADN est également corrélée avec l'activation de la voie ATM, de p53 et l'inhibition de l'activité CDK2. De plus, in vitro le double traitement provoque une induction des signaux moléculaires à l’origine de la mort immunogène équivalente ou bien supérieure aux traitements par l’oxaliplatine seul. Enfin, l'association d'oxaliplatine + VE-822 est également efficace in vivo, sur des souris immunodéprimées xénogreffées avec les cellules HCT116-R1 ainsi que sur des souris immunologiquement compétentes, avec un effet synergique plus élevé indiquant que la mort immunitaire (ICD) fait partie du mécanisme de cette combinaison de médicaments. En conclusion, toutes ces données confirment l’intérêt du criblage phénotypique dans la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques en démontrant pour la première fois le rôle fonctionnel de l'ATR dans la sensibilité à l’oxaliplatine. / Today, treatments for metastatic colorectal cancer have evolved through the combination of conventional chemotherapy 5-FU, oxaliplatin and / or Irinotecan and targeted therapies directed against the EGF receptor or VEGF. Despite an improved survival rate through the combination of these drugs, innate and acquired resistance to treatment is a common cause of therapeutic failure.In order to discover new therapeutic targets we carried out several phenotypic screenings using cellular resistance models acquired to chemotherapies (oxaliplatin and irinotecan) generated in the laboratory as well as the HCT116 line which exhibits an innate resistance to anti-EGFR therapies (cetuximab , panitumumab, Erlotinib). The ultimate goal of this project is to reveal genes, whose inhibition restores sensitivity to one of these treatments, thus displaying a lethal interaction with the drug.Once the kinases potentially involved in resistance to CCR therapies identified, specific inhibition by shRNA and / or a specific inhibitor was performed to confirm the potential therapeutic targets and / or biomarkers for response to treatments. The most promising target, identified as a determinant of resistance to oxaliplatin is the ATR protein (Ataxia-telangiectasia mutated and rad3 related). A protein that plays a key role in DNA repair and is activated in response to the presence of persistent single stranded DNA (ssDNA) or replicative stress, which can be generated by certain anti-cancer therapies.The inhibition of ATR via its pharmacological inhibitor VE-822 (VX-970) combined with oxaliplatin was then studied by the use of cytotoxic tests supplemented by an additivity study. Thus, we demonstrated that the inhibition of ATR combined with oxaliplatin leads to a strong synergy in the HCT116-R1 cell line in both 2D and 3D. This effect is also found in other oxaliplatin resistant clonal lines (HCT116-R2, SW48-R) as well as in the cell lines originating from them (HCT116, SW48).We have also shown that the synergistic effect of oxaliplatin and VE-822 in the HCT116-R1 line is accompanied by an increase in the presence of single-stranded DNA followed by numerous double-stranded DNA breaks, stopping proliferation and inducing apoptosis. The occurrence of this damage to DNA is also correlated with activation of the ATM pathway, p53 and inhibition of CDK2 activity. Moreover, in vitro the double treatment causes an induction of the molecular signals triggering the immunogenic cell death equivalent or superior to the treatments by oxaliplatin alone.Finally, the combination of oxaliplatin + VE-822 is also effective in vivo in immunodeficient mice xenografted with HCT116-R1 cells as well as in immunologically competent mice with a higher synergistic effect indicating that immune death (ICD ) is part of the mechanism of this combination of drugs.In conclusion, all these data confirm the interest of phenotypic screening in the discovery of new therapeutic targets by demonstrating for the first time the functional role of ATR in sensitivity to oxaliplatin.

Le cancer occupe le premier rang parmi les causes de décès au Québec. Les taux de mortalité diffèrent cependant à travers les régions du Québec. En considérant les territoires des Centres de santé et de services sociaux (CSSS), ce mémoire propose dans un premier temps d’étudier la distribution des taux de mortalité pour les principaux sièges de cancer, d’identifier les régions où une différence significative du taux avec le reste du Québec est perceptible et d’approfondir des éléments impliqués dans la mortalité, soit l’incidence et la létalité. D’autre part, dans le but d’expliquer les variations des taux de mortalité, des variables socio-économiques liées aux territoires retenus serviront de variables explicatives au modèle de régression utilisé. Les résultats ont permis de constater que c’est pour le cancer du poumon que les écarts significatifs sont les plus nombreux. Quant au cancer colorectal, un seul territoire présentait un écart significatif. Pour ce qui est du cancer de la prostate et du sein, aucun écart n’est perceptible dans les taux de mortalité. Concernant la partie explicative de la mortalité, dans le cas du cancer du poumon, les taux d’incidence sont fortement corrélés aux taux de mortalité. On ne peut cependant faire le même constat pour les cancers colorectal, du sein et de la prostate. De plus, les variables socio-économiques considérées pour les territoires de CSSS ne permettaient pas d’arriver à un modèle explicatif convaincant. Ces résultats montrent la nécessité d’avoir des données longitudinales permettant de suivre les individus dès le moment où le diagnostic de cancer est établi afin d’être en mesure de mieux mesurer les liens entre l’incidence, la survie, le niveau socio-économique et la mortalité. / Cancer is the leading cause of death in Québec. However, mortality rates vary significantly throughout Quebec’s regions. Using the CSSS (Centre de santé et de services sociaux) territories as a base of comparison, the present thesis will study the regional distribution of mortality rates amongst the territories with the highest cancer rates, identify those territories that have a significant variation from the overall cancer rate of the province, and investigate the relation between incidence rates and lethality. Moreover, to help explain variations in mortality rates, a regression analysis was undertaken using socioeconomic variables of each territory. The analysis demonstrated that territorial disparity was the greatest for lung cancer. As for colorectal cancer, only one territory showed a rate different with that of Quebec as a whole. For prostate and breast cancer no variations were identified. Lung cancer mortality rates were found to be strongly correlated with incidence rates, but that wasn’t the case for the other cancers (colorectal, breast and prostate). Further, the analysis of the socio-economic variables in the regression model did no present any convincing results. The need for longitudinal data to study mortality rates by cancer and its associated factors is deemed to be a major issue.

Les DIPG représentent les tumeurs cérébrales pédiatriques les plus sévères. Aucun progrès dans leur prise en charge n’a été accompli au cours des 50 dernières années et la radiothérapie ne demeure que transitoirement efficace. Récemment, une mutation somatique de l’histone H3 (K27M) spécifique des DIPG a été trouvée chez environ 95% des patients. Elle est aujourd’hui considérée comme l'événement oncogénique initiateur de ces tumeurs. Deux sous-groupes majeurs de patients présentant des programmes oncogéniques et une réponse à la radiothérapie distincts peuvent être définis en fonction du gène dans lequel l’altération survient, codant les variantes protéiques H3.1 ou H3.3. Nous avons réalisé deux cribles de létalité synthétique par ARN interférence ciblant le kinome humain afin d'identifier d’une part les gènes nécessaires à la survie des DIPG et d’autre part les gènes dont l’inhibition sensibilise ces tumeurs à la radiothérapie. Le double objectif de ce projet était de mieux comprendre la biologie sous-jacente à l’oncogenèse des DIPG et de découvrir de nouvelles cibles thérapeutiques.Nous avons mis en évidence 41 gènes requis pour la survie des DIPG sans effet délétère majeur sur des cellules contrôles normales. Parmi eux, nous avons identifié VRK3 codant une serine thréonine kinase dont les fonctions restent peu décrites à ce jour et qui n'avait jamais été associée préalablement à l'oncogenèse de DIPG. Nous avons pu confirmer par la suite que son inhibition conduit à un arrêt total de la prolifération des cellules de DIPG associé à d’importants changements morphologiques, plus particulièrement dans les tumeurs mutées pour H3.3-K27M. VRK3 constitue par conséquent une nouvelle cible thérapeutique prometteuse dans cette pathologie à l’issue fatale pour la totalité des patients.En parallèle, un crible de survie similaire a été réalisé en conjonction avec l’irradiation des cellules. Très peu d’ARN interférents ont permis de sensibiliser les cellules H3.3-K27M à la radiothérapie contrairement aux cellules H3.1-K27M. Ce travail nous a permis de mettre en évidence une différence significative de radiosensibilité des modèles vitro de DMG en fonction du sous-groupe de tumeurs considéré, H3.1- ou H3.3-K27M muté, conformément à la survie des patients observée suite à la radiothérapie. Ces résultats inédits laissent entrevoir des perspectives d’amélioration du traitement de référence des patients atteints de DIPG actuellement identique quelle que soit leur génotype. / DIPG is one of the most severe paediatric brain tumours. No progress has been made in their management over the past 50 years and radiotherapy remains only transiently effective. Recently, a specific somatic mutation in the histone H3 (K27M) has been found in approximately 95% of DIPG patients and can be considered as the oncogenic driver of these tumours. Two major subgroup of patients with distinct oncogenic program and response to radiotherapy can be defined according to the gene in which the alteration occurs, encoding the H3.1 or H3.3 protein variants. We performed two synthetic lethality screens by RNA interference targeting the human kinome in order to identify the genes responsible for DIPG cell survival, as well as those sensitizing tumour cells to radiotherapy after inhibition. The dual purpose of this project was to better understand the biology underlying oncogenesis of DIPGs and to discover new therapeutic targets.We identified 41 genes required for DIPG cell survival with no major deleterious effect on normal control cells. Among them, we identified VRK3, a serine threonine kinase never involved in DIPG oncogenesis with functions remaining poorly described to date. We have shown that its inhibition leads to a complete arrest of DIPG cell proliferation and is additionally associated with important morphological changes, more particularly in H3.3-K27M mutated tumours. VRK3 is therefore a promising new therapeutic target for all patients in this fatal pathology.In parallel, a similar survival screen was performed in conjunction to cell radiation and very few interfering RNAs enhance H3.3-K27M cell radiosensitivity, in contrast to H3.1-K27M cells. These data highlighted a significant difference in radiosensitivity of the DMG in vitro models in H3.1- versus H3.3-K27M mutated tumours, in a concordant way with patient survival following radiotherapy. These unprecedented results suggest new opportunities for improving the current treatment of DIPG patients regardless of their genotype.

Excision Repair Cross-Complementation group 1 (ERCC1) est une enzyme de réparation de l’ADN fréquemment déficiente dans le cancer bronchique non-à-petites cellules. Bien qu’une expression faible d’ERCC1 soit prédictive de réponse aux sels de platine, l’efficacité des chimiothérapies à base de platine est limitée par leur toxicité et l’apparition de résistance, justifiant la nécessité de stratégies thérapeutiques alternatives. Par ailleurs, l’absence de test compagnon diagnostic permettant d’évaluer la fonctionnalité d’ERCC1 dans la pratique clinique empêche actuellement toute thérapie personnalisée basée sur le statut ERCC1.Afin d’identifier de nouvelles stratégies thérapeutiques pour les tumeurs ERCC1-déficientes en exploitant le concept de létalité synthétique, des screens à haut-débit , utilisant des composés pharmaceutiques ou par ARN interférence, ont été réalisés dans un modèle isogénique de CBNPC déficient en ERCC1. Cette approche a permis d’identifier plusieurs inhibiteurs de poly(ADP-ribose) polymerase 1 et 2 (PARP1/2), tels l’opalarib (AZD2281), le niraparib (MK-24827) et BMN 673 comme sélectifs pour les cellules ERCC1-déficientes. Les mécanismes sous-tendant cette sensibilité sélective ont été étudiés, et les résultats suivants ont été mis en évidence : (i) les cellules ERCC1-déficientes présentent un blocage prolongé en phase G2/M après exposition à l’olaparib ; (ii) l’isoforme 202 d’ERCC1, dont le rôle a été récemment mis en évidence dans la résistance aux sels de platine, module également la sensibilité aux inhibiteurs de PARP ; (iii) la déficience en ERCC1 est épistatique avec les défauts de recombinaison homologue (RH), malgré une capacité normale des cellules ERCC1-déficientes à former des foyers RAD51 ; ceci suggère qu’ERCC1 pourrait intervenir dans la réparation d’une lésion de l’ADN induite par l’inhibiteur de PARP1/2 en amont de l’invasion du brin d’ADN lors de la RH ; (iv) l’inhibition de l’expression de PARP1 par ARN interférence permet de restaurer la résistance aux inhibiteurs de PARP1/2, dans les cellules ERCC1-déficientes uniquement. Ces résultats suggèrent que les inhibiteurs de PARP1/2 pourraient représenter une nouvelle stratégie thérapeutique chez les patients dont la tumeur est déficiente en ERCC1 et un essai clinique va être mis en place pour évaluer cette hypothèse.Afin d’explorer la présence de biomarqueurs de la fonctionnalité d’ERCC1, quatre approches ont été entreprises en parallèle dans le modèle isogénique de CBNPC déficient en ERCC1: (i) irradiation aux UV, afin d’évaluer la voie NER (Nucleotide Excision Repair); (ii) séquençage d’exome, dans le but de rechercher une signature génomique (ADN) ; (iii) analyse du transcriptome cellulaire, pour identifier des modifications d’expression d’ARN ; et (iv) SILAC (Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture) afin de comparer le protéome des cellules ERCC1-déficientes et ERCC1-proficientes. Ces approches ont permis d’identifier une potentielle signature génomique, ainsi que de biomarqueurs d’activité – guanine deaminase (GDA) et nicotinamide phosphoribosyltransferase (NAMPT). De plus amples validations et investigations mécanistiques de ces observations préliminaires sont actuellement requises. / Excision Repair Cross-Complementation group 1 (ERCC1) is a DNA repair enzyme that is frequently deficient in non-small cell lung cancer (NSCLC). Although low ERCC1 expression correlates with platinum sensitivity, the clinical effectiveness of platinum therapy is limited - mainly by toxicities and occurrence of resistance - highlighting the need for alternative treatment strategies. In addition, the lack of a reliable assay evaluating ERCC1 functionality in the clinical setting currently precludes personalising therapy based on ERCC1 status. To discover new synthetic lethality-based therapeutic strategies for ERCC1-defective tumours, high-throughput drug and siRNA screens in an isogenic NSCLC model of ERCC1 deficiency were performed. This approach identified multiple clinical poly(ADP-ribose) polymerase 1 and 2 (PARP1/2) inhibitors such as olaparib (AZD-2281), niraparib (MK-4827) and BMN 673 as being selective for ERCC1 deficiency. The mechanism underlying ERCC1-selective effects was dissected by studying molecular biomarkers of tumour cell response, and revealed that: (i) ERCC1-deficient cells displayed a significant delay in double-strand break repair associated with a profound and prolonged G2/M arrest following PARP1/2 inhibitor treatment; (ii) ERCC1 isoform 202, which has recently been shown to mediate platinum sensitivity, also modulated PARP1/2 sensitivity; (iii) ERCC1-deficiency was epistatic with homologous recombination deficiency, although ERCC1-deficient cells did not display a defect in RAD51 foci formation. This suggests that ERCC1 might be required to process PARP1/2 inhibitor induced DNA lesions prior to DNA strand invasion; and (iv) PARP1 silencing restored PARP1/2 inhibitor resistance in ERCC1-deficient cells but had no effect in ERCC1-proficient cells, supporting the hypothesis that PARP1 might be required for the ERCC1 selectivity of PARP1/2 inhibitors. This study indicated that PARP1/2 inhibitors as a monotherapy could represent a novel therapeutic strategy for NSCLC patients with ERCC1-deficient tumours, and a clinical protocol is being written to evaluate this hypothesis.To investigate whether a surrogate biomarker of ERCC1 functionality could be developed, four parallel approaches were undertaken in the ERCC1-isogenic NSCLC model: (i) UV irradiation, to evaluate the Nucleotide Excision Repair (NER) pathway; (ii) whole exome sequencing, to look for an ERCC1-associated genomic scar at the DNA level; (iii) transcriptomic analysis, to investigate changes at the RNA expression level; and (iv) SILAC (Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture) analysis, to compare proteomic profiles between ERCC1-proficient and ERCC1-deficient cells. These approaches allowed the identification of putative genomic signature and potential metabolic surrogate biomarkers - guanine deaminase (GDA) and nicotinamide phosphoribosyltransferase (NAMPT). Further validation and mechanistic investigations of these latter preliminary observations are warranted.

Les microtubules, composants clés du cytosquelette des cellules eucaryotes, sont des polymères de tubuline très dynamiques et impliqués dans une grande variété de processus cellulaires. Leur rôle essentiel dans le cycle cellulaire a fait d’eux une cible validée en thérapie anticancéreuse. Malgré l’efficacité clinique des agents ciblant les microtubules (ACM), les effets secondaires compliquent l’utilisation. Nous avons cherché à identifier des vulnérabilités génétiques qui peuvent être exploitées pour diminuer la dose requise tout en maintenant l'efficacité, et donc réduire les effets secondaires. En collaboration avec le laboratoire Tyers à l’IRIC, nous avons réalisé un criblage génétique basé sur la létalité synthétique avec des agents antiprolifératifs, dont les ACMs. Nous avons sélectionné les gènes dont l’extinction sensibilisait les cellules aux ACMs. J’ai confirmé que l’invalidation de chacun des gènes GNA13, SEPHS1, DLGAP5 et des gènes QRICH1, DLGAP5 sensibilisaient les cellules NALM6 au docétaxel et la vincristine respectivement. En revanche, aucune invalidation de ces gènes n'a augmenté la sensibilité au docétaxel dans les cellules U2OS. En plus de son effet avec le docétaxel, le gène GNA13 s’est distingué être une cible particulièrement intéressante. En effet, la perte complète de GNA13 augmente considérablement la fréquence et la gravité d’erreurs de ségrégation des chromosomes dans les cellules U2OS. Cette augmentation n’a pas été rectifiée à la suite d’un traitement avec la molécule UMK57, connue pour réduire le taux d’erreurs de ségrégation des chromosomes. De manière intéressante, la perte complète de GNA13 augmente également la fréquence des erreurs de ségrégation des chromosomes dans les cellules RPE1, cellules non-cancéreuses et stables au niveau chromosomique. Cela suggère que la perte complète de GNA13 ne nécessite pas de transformation ni d'instabilité chromosomique, comme conditions préalables pour exacerber l'instabilité chromosomique. L’ensemble de ces résultats ouvre une nouvelle voie de stratégies thérapeutiques anticancéreuses, à savoir, le traitement des cancers présentant une mutation des gènes QRICH1, DLGAP5, GNA13, et SEPHS1 avec de faibles doses d’ACMs. En particulier, GNA13 est fréquemment muté dans certains lymphomes. De plus, les résultats obtenus démontrent que la perte complète de GNA13 aggrave l’instabilité chromosomique et par conséquent, pourrait être impliquée dans la cancérogenèse. / Microtubules, key components of the eukaryotic cytoskeleton, are highly dynamic polymers of tubulin implicated in a wide variety of cellular processes. Their essential roles in the cell cycle have made them a valid target in cancer therapy. Despite the clinical efficacy of microtubule targeting agents (MTA), their use is hampered by side effects. We sought to identify genetic vulnerabilities that can be exploited to decrease the required dose while maintaining efficacy, and therefore reduce side effects. In collaboration with the Tyers laboratory at IRIC, we carried out a genetic screen based on synthetic lethality with antiproliferative agents, including MTAs. We have selected genes whose knockout sensitized cells to MTAs. I have confirmed that the knockout of GNA13, SEPHS1, DLGAP5, and QRICH1, DLGAP5, sensitize NALM6 cells to docetaxel and vincristine respectively. However, no knockout of these genes increased the sensitivity to docetaxel in U2OS cells. In addition to its effect with docetaxel, GNA13 stood out as being a particularly exciting target. GNA13 knockout increased the frequency and severity of chromosome segregation errors in U2OS cells. This increase was not corrected following treatment with UMK57, a molecule known to reduce the rate of chromosome segregation errors. Interestingly, the GNA13 knockout also increased the frequency of chromosome segregation errors in non-cancerous and chromosomally stable RPE1 cells. This suggests that GNA13 does not require transformation nor chromosomal instability as prerequisites for exacerbating chromosomal instability. Overall, these results open up a new avenue of anticancer therapeutic strategies, namely, the treatment of cancers presenting mutations in QRICH1, DLGAP5, GNA13, and SEPHS1 with lower doses of MTAs. In particular, GNA13 is frequently mutated in certain lymphomas. In addition, the results obtained demonstrate that GNA13 knockout exacerbates chromosomal instability and, therefore, could be involved in carcinogenesis.

Les impacts non transfixiants sur les gilets pare-balles sont responsables de lésions non pénétrantes potentiellement létales, regroupées sous le terme d’effets arrière (Behind Armor Blunt Trauma : BABT). De telles lésions fermées se retrouvent également lors d’impacts thoraciques de projectiles d’Armes à Létalité Réduite cinétiques (ALRc). Afin d’améliorer le pouvoir protecteur des protections balistiques et de mieux maitriser le pouvoir vulnérant des ALRc, il est nécessaire de définir un critère lésionnel permettant de prédire l’importance des lésions en cas de traumatisme thoracique fermé de type balistique. Ce critère se doit d’être bien corrélé à la gravité du traumatisme, et de pouvoir être facilement transposable à l’ensemble des systèmes d’évaluation des protections balistiques et des ALRc. La gravité du traumatisme a été définie ici par le volume de la contusion pulmonaire. L’utilisation de cette valeur nécessitait le recours au modèle animal. Or, nous avons démontré que le thorax du modèle porcin n’offrait pas le même comportement biomécanique lors de l’impact que le thorax de l’adulte jeune. Nous avons donc développé un critère, l’impulsion de pression intrathoracique maximale (PImax), basé sur la mesure de la pression intrathoracique lors de l’impact, et donc indépendant du comportement biomécanique de la paroi thoracique vis-à-vis de ses effets sur le poumon. Ce critère très bien corrélé avec le volume de la contusion pulmonaire, quelque soit le type d’impact thoracique balistique (ALRc ou BABT), a l’avantage de pouvoir être transposable aux autres moyens d’évaluations balistiques tels que les modèles numériques ou mécaniques de thorax, afin de s’affranchir de l’expérimentation animale / When non-penetrating, impacts on bulletproof jackets can lead to potentially lethal blunt injuries known as behind armor blunt trauma (BABT). Impacts of less lethal kinetic weapons (LLKW) can also lead to such injuries. To both improve the protection capabilities of the BPJ and better comprehend the ounding potential of the LLKW, we need to design a wounding criterion to predict the injury severity of ballistic blunt thoracic trauma. In one hand, this criterion has to be well correlated with the severity of the injuries, and in the other hand, it has to be easily used with all the LLKW and BPJ assessment systems in use. First, we defined the pulmonary contusion volume as the severity of the injuries. Studying the pulmonary contusion involves the use of animal experiments. But we demonstrated that the biomechanics of the chest wall are different in animals and young adults. Then, we developed the maximum pressure impulse criterion (PImax). As it is based on the intrathoracic pressure measure during the blunt impact, it is independent from the chest wall behavior. This criterion can be used with the other assessment tools as the numerical simulation mechanical chest surrogates. This can help to reduce the use of animal experiments, which is more and more expensive, heavy and questionable on the ethical aspect