La fecundación es el proceso de unión entre el espermatozoide y el ovocito durante la reproducción sexual para dar lugar a un nuevo individuo. En vertebrados la fecundación puede ser interna o externa. La fecundación interna implica que el encuentro de los gametos tiene lugar dentro de la hembra y es característica de mamíferos, reptiles y aves. En la fecundación externa la unión de ambos gametos ocurre fuera del cuerpo de la hembra y se da principalmente en peces y anfibios. Los espermatozoides de mamíferos adquieren la capacidad fecundante en el tracto reproductor femenino en un proceso dinámico llamado capacitación, el cual puede requerir entre algunos minutos hasta varias horas en función de la especie. Sabemos que la capacitación espermática implica cambios moleculares como la eliminación de colesterol de membrana, la entrada de calcio o la fosforilación de proteínas implicadas en la hiperactivación. Entre las diversas modificaciones, se le ha otorgado un papel destacado al glucocáliz debido a su implicación en el proceso de fecundación en mamíferos. Los glucoconjugados que constituyen el glucocáliz espermático se reorganizan considerablemente durante la capacitación, preparándose así para interaccionar con la zona pelúcida y el oolema del ovocito. Esta reorganización de azúcares de membrana plasmática ha sido ampliamente estudiada en especies como el ratón, jabalí, cabra, toro y primates no-humanos. Sin embargo, los cambios estructurales y funcionales de los espermatozoides durante la capacitación en humanos actualmente permanecen poco definidos. Además, la elevada heterogeneidad de las muestras de semen humanas y la limitación de las técnicas convencionales para predecir la funcionalidad espermática, hace necesario profundizar en la fisiología espermática durante la capacitación. En la Fase I de este trabajo se utilizaron múltiples biomarcadores espermáticos con el fin de evaluar el impacto de diferentes tiempos de capacitación (una y cuatro horas) sobre la calidad del espermatozoide humano. Los resultados demostraron que los espermatozoides recuperados tras cuatro horas de capacitación presentaron mayor funcionalidad que aquellos que únicamente capacitaron una hora. En concreto, se observó un número significativamente mayor de células con morfología normal y tasas de fragmentación de ADN más bajas. Además, tras capacitar durante cuatro horas se observó un incremento significativo de espermatozoides con fosforilación en los residuos de tirosina de la pieza principal, así como una mayor redistribución de los azúcares presenten en la membrana plasmática. El análisis multivariante, considerando diferentes biomarcadores morfológicos y moleculares, mostró que la subpoblación de espermatozoides recuperada tras cuatro horas de capacitación fue más homogénea que la subpoblación recuperada tras una hora de capacitación. Estos hallazgos subrayan la importancia del tiempo de capacitación como variable a considerar en los métodos de selección espermática, tanto en investigación básica como en las técnicas de reproducción asistida. La finalidad de las técnicas de reproducción asistida es favorecer el embarazo en casos de infertilidad masculina, femenina o de ambos. En la mujer, una de las causas más comunes de infertilidad es la presencia de endometriosis. La endometriosis es una enfermedad crónica que consiste en el crecimiento de tejido endometrial fuera de la cavidad uterina y se asocia con disfunciones ovulatorias secundarias, alteraciones en la foliculogénesis, en el líquido peritoneal y/o en el sistema inmune. El líquido peritoneal de las mujeres con esta patología contiene una elevada concentración de sustancias inflamatorias y debido a la permeabilidad de las trompas es capaz de difundir al interior y afectar a la calidad de los gametos. Dado que es una enfermedad femenina, pocos estudios han relacionado el efecto del líquido peritoneal procedente de mujeres con endometriosis sobre la calidad espermática. Entre ellos, se ha visto que el líquido peritoneal de estas pacientes deteriora parámetros espermáticos como: la motilidad, la reacción acrosómica, la fragmentación del ADN y la capacidad de unión a la zona pelúcida del ovocito. Sin embargo, la implicación del líquido peritoneal procedente de pacientes con endometriosis en la redistribución de los glucoconjugados en la membrana del espermatozoide humano no ha sido estudiada hasta el momento. En la Fase II de este trabajo se evaluó el efecto del líquido peritoneal procedente de mujeres con y sin endometriosis sobre el espermatozoide humano mediante diversos biomarcadores. Para ello, se realizaron cultivos espermáticos durante 24 y 48 horas con líquido peritoneal al 20%. Los resultaron mostraron que la viabilidad espermática y la reacción acrosómica espontánea no se vieron afectadas en ninguna de las condiciones experimentales. No obstante, tras 48 horas, los espermatozoides cultivados con líquido peritoneal procedente de mujeres con endometriosis presentaron significativamente menor motilidad, menor fosforilación en los residuos de tirosinas y diferente reorganización de azúres de superficie en comparación con las células control. Estos datos aportan información sobre la fisiología de los espermatozoides humanos al interaccionar con el líquido peritoneal de mujeres con endometriosis, destacando el deterioro de la calidad espermática conforme aumenta el tiempo de exposición. Los modelos biomédicos son una fuente de gran valor en todos los campos de investigación. El pez cebra (Danio rerio) se ha convertido en un modelo animal con un elevado potencial en la biología del desarrollo, la genética, la inmunología, el comportamiento, la fisiología y la nutrición, debido a las numerosas ventajas que ofrece frente a otras especies. Además, presenta una elevada homología genética con la especie humana y sus costes de mantenimiento son relativamente bajos. En la fisiología reproductiva y del desarrollo, el modelo biológico del pez cebra destaca por presentar una tasa de fecundación elevada, un ciclo reproductivo corto y un desarrollo embrionario rápido. La fecundación y el desarrollo son externos, condición que facilita el estudio directo de las etapas tempranas de la ontogenia. Además, una de las características más relevantes es que tanto los embriones como las larvas tempranas son transparentes lo que permite el seguimiento visual durante el desarrollo de los distintos tejidos y órganos. Este hecho ha conllevado que la gran mayoría de los estudios realizados se hayan concentrado en diferentes aspectos de las etapas del desarrollo, siendo muy pocos los que han analizado la fisiología del espermatozoide. Se sabe que los espermatozoides de Danio rerio al igual que la gran mayoría de peces no presentan acrosoma. Además, tras la activación de la motilidad, debido al deterioro que les produce el choque hipoosmótico, tienen apenas un minuto para llegar al ovocito y fecundarlo. Por otra parte, al tratarse de un pez con fecundación externa, los espermatozoides están sometidos a una elevada competencia espermática, ya que tienen que competir con los espermatozoides de los otros machos por fecundar los ovocitos. Un estudio previo caracterizó la influencia negativa de la elevada competencia espermática en la descendencia de Danio rerio. Sin embargo, nada se sabe acerca de los cambios fisiológicos antes y tras la activación de la motilidad al someter al espermatozoide de Danio rerio a diferentes niveles de competencia. En la Fase III de este trabajo se analizó el efecto de la competencia espermática a distintos tiempos de activación (30 segundos, 1, 5 y 10 minutos) sobre diferentes biomarcadores en el espermatozoide de Danio rerio. Para ello, se partió de espermatozoides procedentes de machos expuestos a diferentes niveles de competencia espermática, alta competencia (dos machos y una hembra) y baja competencia (un macho y dos hembras). Los resultados mostraron un incremento de espermatozoides con flagelos enrollados y fragmentación de ADN a medida que incrementaba el tiempo de activación. No obstante, los espermatozoides procedentes de machos sometidos a elevada competencia, presentaron significativamente menor porcentaje de espermatozoides con flagelos enrollados tras la activación pero mayor porcentaje de células con fragmentación en el ADN antes de la activación en comparación con las células procedentes de baja competencia. Adicionalmente, mediante morfología y morfometría geométrica (aislando forma y tamaño como variables independientes) se analizaron las distintas partes del espermatozoide (cabeza, pieza intermedia y flagelo) tras 30 segundos de activación en ambos tratamientos de competencia. Los gametos procedentes de machos expuestos a elevada competencia mostraron cabezas de menor tamaño, piezas intermedias más grandes y flagelos más largos que los espermatozoides procedentes de baja competencia. Por lo tanto, los datos sugieren que la presencia de un macho rival podría tener un efecto positivo en el fenotipo del espermatozoide pero un efecto negativo sobre la integridad del ADN. Estos hallazgos proporcionan una perspectiva nueva de como el entorno social puede afectar a los parámetros espermáticos y su influencia en la biología de la reproducción.

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-04-27T13:18:30Z No. of bitstreams: 1 IsabellaOB_TESE.pdf: 902178 bytes, checksum: d42880aee64b712a238f040f4408a579 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-02T15:22:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 IsabellaOB_TESE.pdf: 902178 bytes, checksum: d42880aee64b712a238f040f4408a579 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-02T15:23:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 IsabellaOB_TESE.pdf: 902178 bytes, checksum: d42880aee64b712a238f040f4408a579 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-02T15:23:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IsabellaOB_TESE.pdf: 902178 bytes, checksum: d42880aee64b712a238f040f4408a579 (MD5) Previous issue date: 2016-10-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Acute phase proteins are glycoproteins produced by hepatocytes and released into the bloodstream in response to tissue damage resulting from acute inflammatory processes. Currently, they are considered biomarkers of inflammation or infection, compared with other variables such as hyperthermia, leukocytosis and neutrophilia, but in donkeys have not yet been analyzed. This study aimed to evaluate acute inflammatory response in donkeys submitted to ovariectomy by two different approaches. We randomly selected 18 adult females animals weighing on average 100 kg, which were divided into two groups: Group I, 9 animals were ovariectomized by laparotomy and group II, 9 animals by laparoscopy. After the surgeries were evaluated the following variables in whole blood: blood count, white blood cell count differential cell count, fibrinogen, haptoglobin, albumin, antitrypsin, alpha-1-acid glycoprotein, ceruloplasmin, transferrin, immunoglobulins A and G (acute phase proteins) . In the same time, the peritoneal fluid were measured: number of erythrocytes and leukocytes, cytological analysis differential (leukocytes and mesothelial cells), total protein, pH and acute phase proteins. All variables were analyzed before surgery, 12, 24, 48, 72 hours, 8 and 16 days after surgery. There was an increase (p <0.05) in the number of leukocytes with neutrophilia after surgery, regardless of the surgical serum and peritoneal procedure. Acute phase proteins had different behaviors in blood and peritoneal fluid. For the first time, we identified a P23.000kD protein in serum and peritoneal samples in donkeys. The interest on the role of acute phase proteins in the veterinary medicine, particularly in horses is growing, mainly aiming to use them as early markers of inflammation / Proteínas de fase aguda são glicoproteínas produzidas pelos hepatócitos e liberadas na corrente sanguínea em resposta a dano tecidual, decorrente de processos inflamatórios agudos. Atualmente, são consideradas biomarcadores da resposta inflamatória e infecciosa, quando comparada com outras variáveis como hipertermia, leucocitose e neutrofilia, porém em asininos ainda não foram bem analisadas. Objetivou-se avaliar resposta inflamatória aguda em asininos submetidos à ovariectomia por duas diferentes abordagens. Foram utilizados 18 animais, fêmeas adultas, pesando em média 100 kg, as quais foram divididas em dois grupos, de 09 animais cada, onde grupo I, foram ovariectomizadas por laparotomia e o grupo II por laparoscopia. Após as cirurgias foram avaliadas as seguintes variáveis no sangue total: hemograma, fibrinogênio, haptoglobina, albumina, antitripsina, alfa-1 glicoproteína ácida, ceruloplasmina, transferrina, imunoglobulinas A e G. Nos mesmos momentos, no líquido peritoneal, foram mensuradas: número de hemácias e leucócitos, análise citológica diferencial (leucócitos e células mesoteliais), proteínas totais, pH e proteínas de fase aguda. Todas as variáveis foram analisadas antes das cirurgias, 12, 24, 48, 72 horas, 8 e 16 dias após os procedimentos cirúrgicos. Houve um aumento (p<0,05) do número de leucócitos com neutrofilia após as cirurgias, independente do procedimento cirúrgico, no soro e líquido peritoneal. As proteínas de fase aguda tiveram comportamentos diferentes no sangue e líquido peritoneal. Neste trabalho identificamos, pela primeira vez, a proteína P23.000kD no soro e amostras peritoneais de asininos. O interesse sobre o papel das proteínas de fase aguda na medicina veterinária, em especial em equídeos vem crescendo, principalmente, visando utilizá-las como marcadores precoces do processo inflamatório / 2017-04-26

Submitted by Sandro Camargo (sandro.camargo@unipampa.edu.br) on 2015-03-08T18:46:59Z No. of bitstreams: 1 117110030.pdf: 781395 bytes, checksum: 4d3ce136e6aafcc485b383ab0b275336 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-08T18:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 117110030.pdf: 781395 bytes, checksum: 4d3ce136e6aafcc485b383ab0b275336 (MD5) Previous issue date: 2013-07-30 / O presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar e comparar os parâmetros hematológicos e do líquido peritoneal em equinos de tração urbana naturalmente parasitados e após tratamento com anti-helmíntico. Utilizaram-se 21 equinos de tração, com idades entre dois e 19 anos, sem raça definida e com resultado de exame parasitológico superior a 300 ovos por grama de fezes. Os animais foram submetidos à avaliação física e colheita de fezes, líquido peritoneal e sangue em dois momentos do experimento (dia zero - D0 e dia quinze - D15), sendo realizado tratamento antiparasitário no D0. No fluido peritoneal foram avaliadas as características físicas, bioquímicas, bem como contagem total de células nucleadas e diferenciação das linhagens celulares. No sangue foram determinados valores eritrocitários, leucocitários e bioquímicos, que incluíram proteínas plasmáticas totais, glicose, fibrinogênio, albumina, aspartato-transaminase e fosfatase alcalina. A média de ovos por grama de fezes observada foi de 796,4 ±468,8, com predominância de ovos da ordem Strongylida e Ascaridida. A comparação de todos os parâmetros avaliados não demonstrou diferença significativa entre animais naturalmente parasitados e após administração de anti-helmíntico e as médias se mantiveram dentro dos intervalos de referência, com exceção da contagem total de células nucleadas do líquido peritoneal no D0. No líquido peritoneal, houve predominância de neutrófilos segmentados, seguida por macrófagos, linfócitos e eosinófilos em ambos os momentos de avaliação. Na avaliação do hemograma, houve uma tendência do quadro eritrocitário em se manter próximo aos limites inferiores de referência e leve leucocitose no D0. A infestação parasitária nos animais estudados foi predominantemente moderada, o que oferece poucos riscos clínicos. Presume-se que equinos naturalmente parasitados possuem uma relação parasito-hospedeiro simbiótica, possivelmente devido à constante exposição aos agentes parasitários. E nessa situação, pode-se afirmar que os parâmetros hematológicos e de líquido peritoneal auxiliam, mas não são conclusivos no diagnóstico das parasitoses gastrintestinais crônicas. / This study was conducted with the objective to evaluate and compare the hematological and peritoneal fluid parameters in horses used for traction naturally parasitized and after the use of anthelmintic. Twenty one horses, aged between two and nineteen years old, mixed breed and with results of parasitological examination more than 300 eggs per gram of feces were studied. The animals were subjected to physical assessment and collection of feces, blood and peritoneal fluid in two phases of the experiment (day zero – D0 and day fifteen – D15), with antiparasitic treatment being performed in D0. Peritoneal fluid was evaluated for physical and biochemical features, as well as total count of nucleated cells and differentiation of cells lineages. The blood was determined for erythrocyte, leukocyte and biochemical values, which included plasma protein concentration, glucose, fibrinogen, albumin, aspartate transaminase and alkaline phosphatase. The average number of eggs per gram of feces observed was 796,4 ±468,8, with a predominance of eggs of the order Strongylida and Ascaridida. The comparison of all parameters evaluated showed no significant difference between animals naturally parasitized and after administration of anthelmintic and averages remained within the reference ranges, except for the total count of nucleated cells in the peritoneal fluid in D0. In the peritoneal fluid, there was a predominance of segmented neutrophils, followed by macrophages, lymphocytes and eosinophils in both evaluations. In assessing the complete blood count, there was a trend in the framework erythrocyte remaining close to the lower limits of reference and mild leukocytosis in D0. Parasitic infestation of the animals studied was predominantly moderate, which offers minimal clinical risks. It is assumed that horses naturally parasitized have a symbiotic host-parasite relationship, probably due to the constant exposure to parasites. And in this situation, it can be stated that the hematological and peritoneal fluid parameters help, but they are not conclusive in the diagnosis of chronic gastrointestinal parasites.