Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-16T18:37:13Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Silvana Conceição.pdf: 993066 bytes, checksum: ac16fedc0180b5cad548853e0231eb14 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-10-31T17:04:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Silvana Conceição.pdf: 993066 bytes, checksum: ac16fedc0180b5cad548853e0231eb14 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-31T17:04:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Silvana Conceição.pdf: 993066 bytes, checksum: ac16fedc0180b5cad548853e0231eb14 (MD5) / Tropical Medicine Research Center (TMRC); Instituto Nacional de Ciências e Tecnologia de Doenças Tropicais (INCT-DT); Bolsa de Estudo da CNPq; NIH - National Institute of Health (Grant P50AI30639-16 e R03AI067663-02). / Introdução: A primeira linha de tratamento da leishmaniose tegumentar americana (LTA) é baseada nos derivados do antimonial. A refratariedade ao antimônio é frequente entre os pacientes com LTA. Leishmania (Viannia) braziliensis é a principal causa de LTA no Brasil. A L. (V.) braziliensis causa três formas de leishmaniose na Bahia: leishmaniose cutânea localizada (LC), a mais comum com pequenas lesões auto curáveis até as formas mais grave e de difícil tratamento, a leishmaniose mucosa (LM), e a leishmaniose disseminada (LD). Métodos e Resultados: Neste estudo, foram incluídos 91 casos de LTA (67 LC, 7 LM e 17 LD) de uma região endêmica para L. (V.) braziliensis, chamada Corte de Pedra (CP), no estado da Bahia/Brasil, e os quais apresentaram culturas de parasítos positivas. Foram avaliados: (1) associação entre o genótipo de L.(V) braziliensis e a resposta dos pacientes ao antimoniato de meglumina (Glucantime®); (2) a distribuição geográfica dos pacientes refratários ao glucantime dentro da região afetada; e (3) a resistência da L. (V.) braziliensis ao Glucantime® in vitro. Os parasitas foram genotipados com base no sequenciamento de um único locus polimórfico (que começa na posição 3074 do cromossomo 24) desta população de L. (V.) braziliensis. Para a avaliação da distribuição geográfica dos casos responsivos e refratários, as coordenadas geográficas dos locais de moradia dos pacientes foram adquiridas por GPS e comparados usando o teste de Cusick and Edwards. As coordenadas dos locais de moradia dos pacientes foram plotadas em uma foto de satélite da região para inspeção visual, usando o sistema de informação geográfica (SIG). Foi encontrado que a refratariedade é amplamente distribuída na região, quase que uniformemente, contudo não foi possível detectar associações entre os genótipos dos parasitos e a resposta ao tratamento. A sensibilidade ao antimônio foi avaliada expondo as formas promastigotas da L.(V) braziliensis a concentrações crescentes do antimoniato de meglumina (Glucantime®) in vitro. Os parasitos de pacientes com LM e LD foram significantemente mais resistentes ao antimonial do que aqueles isolados dos casos de LC. Assim, a resistência ao antimônio observada in vitro está de acordo com o que tem sido observado em campo, onde os pacientes com LM e LD tendem a ter uma resposta menor ao tratamento com Glucantime® do que os indivíduos com LC. Embora não tenha sido encontrada associação entre as cepas parasitárias e a resposta ao tratamento nestes pacientes com LTA, na genotipagem dos isolados foi usado um único locus, o qual certamente limitou o poder discriminatório da técnica. Conclusão: Nos estudos futuros, estas associações devem ser repetidas aplicando mais loci polimórficos na genotipagem dos isolados de L. (V.) braziliensis de Corte de Pedra. / Salvador

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 3485858 bytes, checksum: bf6831f74d42e04741add88b4781e3d1 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis is a complex of infectious and parasitic diseases endemic in 88 countries, that constitute a serious public health problem. Several species of the genus Leishmania are the causative agents of disease, among them the species L. (V.) braziliensis associated with different clinical manifestations of American Cutaneous Leishmaniasis (ACL). In the present study were obtained nine isolates of Leishmania sp. from cases of ACL. Seven isolates (87%) from patients residing in the municipalities of Pilões, and one (13%) resident in João Pessoa city, both Paraiba state regions. All nine strains were identified as L. (V.) braziliensis by specific PCR. Analyses of molecular characterization by RAPD-PCR showed that these isolates shared 62.63% revealing genotypic differences among them. However, the isolated AF and JSL, both from disseminated lesions had the highest percentage of shared bands among the isolates. Another molecular technique used was a SSR-PCR using the K7 primer, and it was also able to show polymorphism between isolates. In PCR-RLFP analysis of ITS1, different profiles were found among isolates, MRSS, JMTS, AF, JCTS, JRL showed the same band profile and the isolates JSL, JCNS, MFTS and JAS have each had, profiles different band. The analysis of hsp70 gene region by PCR-RLFP reveled that the isolates JSL, AF, JCTS, JRL, MFTS showed the same band profile and the isolates, MRSS, JMTS, JCNS and JAS had each one, different profiles band. In addition were also observed phenotypic differences between these isolates, since at an given time of cultivation, all showed different behavior, and demonstrate differences in sensitivity to drugs used in the treatment of leishmaniasis. Therefore, these studies show that the isolates of L. (V.) braziliensis obtained in the state of Paraiba demosntraram a significant genetic polymorphism, revealing a high level of intraspecific variation. / As leishmanioses são um complexo de doenças infecto-parasitárias endêmicas em 88 países que constituem um grave problema de saúde pública. Diversas espécies do gênero Leishmania são os agentes causadores da doença, dentre elas a espécie L. (V.) braziliensis associada a diferentes quadros clínicos da Leishmaniose Tegumentar Americana. No presente trabalho foram obtidos nove isolados de Leishmania sp. oriundos de LTA, sendo sete isolados (87%) oriundos de pacientes residentes no município de Pilões, um (13%) da cidade de João Pessoa, ambas regiões, do estado da Paraíba. Todos os nove isolados foram identificados como sendo da espécie L. (V.) braziliensis através de PCR específica. As análises de caracterização molecular pela técnica de RAPD-PCR mostraram que esses isolados compartilharam 62,63% revelando diferenças genotípicas entre elas. Contudo, os isolados AF e JSL, ambos provenientes de lesões disseminadas, tiveram o maior percentual de bandas compartilhadas dentre os isolados. Outra técnica molecular utilizada foi o SSR-PCR com o iniciador K7 que também foi capaz de demontrar polimorfismo entre os isolados. Nas análises de PCR-RLFP das regiões ITS1, foram encontradas perfis diferentes entre os isolados, onde MRSS, JMTS, AF, JCTS, JRL apresentaram o mesmo perfil de bandas e os isolados JSL, JCNS, MFTS e JAS tiveram, cada um, perfis de bandas distintos. Na análise de PCR-RLFP da região do gene hsp70, JSL, AF, JCTS, JRL, MFTS apresentaram o mesmo perfil de bandas e os isolados, MRSS, JMTS, JCNS e JAS perfis de bandas distintos. Adicionalmente foram também observadas diferenças fenotípicas entre estes isolados, visto que em dado momento de cultivo, todos apresentaram comportamento diferenciado, além de demonstrarem diferenças quanto à sensibilidade às drogas utilizadas na terapêutica das leishmanioses. Portanto estes estudos revelam que os isolados de L. (V.) braziliensis obtidos no estado da Paraíba demonstraram um significativo polimorfismo genético, revelando um alto nível de variação intraespecífica.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-08-31T18:55:41Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Natallia Moreira Lopes Leão - 2015.pdf: 2760107 bytes, checksum: 7e60311bb25828c1bc39aa20617c0b2e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-01T12:07:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Natallia Moreira Lopes Leão - 2015.pdf: 2760107 bytes, checksum: 7e60311bb25828c1bc39aa20617c0b2e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T12:07:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Natallia Moreira Lopes Leão - 2015.pdf: 2760107 bytes, checksum: 7e60311bb25828c1bc39aa20617c0b2e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-07-02 / Outro / Leishmaniases comprise a disease group with a great epidemiological and clinical diversity. The detection of IgE can be an important tool for prognosis of American Tegumentary Leishmaniasis (LTA). The objective of this present work was to assess if the immunoglobulin E (IgE), anti - Leishmania can be used as biomarkers for prognosis in LTA. The standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was carried out applying antigenic extract of L. (V.) braziliensis to detect IgE specific for leishmania in LTA patients’ plasmas. It was determined that the dilution which differed positive from negative samples was 1/20 for plasma and 1/100 for peroxidase labeled anti-IgE antibody. Forty LTA patients were assisted in the laboratory of endemic diseases at AnuarAuad Hospital (HDT/GO), Goiânia - GO, between 2009 and 2012. Twenty-seven of those patients showed localized cutaneous leishmaniasis (LCL) and 1 showed mucosal leishmaniasis (LM). Twenty-seven of those patients were male and thirteen were female. The LCL patients’ ages varied between 18 to 65 years and LM patients’ ages varied from 25 to 61 years. The LCL patients showed 1 to 20 lesions whose sizes varied from 0,2 to 7 cm and the duration of the lesion diagnostic varied from 0,5 to 4 months, and in LM patients it varied from 0,5 to 120 months. The positive result of the AH, IDRM, IF and Elisa lab tests for IgG was 80%, 67,5%, 42,5% and 87,5% respectively. A cross - reactivity analysis was performed using samples of patients with blastomycosis, malaria, visceral leishmaniasis (LV), Chagas disease and toxoplasmosis and only one sample from an LV patient (10%) was positive, the test was 98,3% precise. The specific IgE detection occurred in 40% of the LTA patients. No correlation between the quantity of IgE and IDRM results was found. No correlation between the index of IgE and the number of lesions in LCL patients was observed. No association between clinical cure or no cure and the index of IgE reactivity was detected. A higher number of patients’ samples are necessary to obtain more accurate results. / As leishmanioses compreendem um grupo de doenças, com grande diversidade epidemiológica e clínica. A detecção de IgE pode constituir uma ferramenta valiosa para o prognóstico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). O objetivo do presente trabalho foi avaliar se Imunoglobulina E (IgE) anti - Leishmania podem ser utilizados como biomarcadores de prognóstico na LTA. Foi realizada a padronização do ensaio imunoenzimático (ELISA) utilizando extrato antigênico de L. (V.) braziliensis para detecção de IgE específica para leishmânia, nos plasmas de pacientes com LTA. Foi determinado que a diluição que discriminava amostras positivas de negativas era de 1/20 para o plasma e 1/100 para o anticorpo anti-IgE marcado com peroxidase. Dos 40 pacientes com LTA atendidos no ambulatório de endemias do Hospital Anuar Auad (HDT/GO), Goiânia-GO, entre 2009 e 2012, 27 apresentavam leishmaniose cutânea localizada (LCL) e 1 leishmaniose mucosa (LM). Destes pacientes, 27 eram do sexo masculino e 13, feminino. A idade dos pacientes com LCL variou entre 18 a 65 anos e com LM, de 25 a 61 anos. Os pacientes com LCL apresentavam de uma a 20 lesões, os tamanhos das lesões variaram entre 0,2 a 7 cm e o tempo das lesões ao diagnóstico variou de 0,5 a 4 meses e com LM de 0,5 a 120 meses. A positividade dos testes laboratoriais AH, IDRM, IF e Elisa para IgG foi de 80%, 67,5%, 42,5% e 87,5% respectivamente. Foi realizada análise de reatividade cruzada com amostras de pacientes com blastomicose, malária, leishmaniose visceral (LV), doença de chagas e toxoplasmose e apenas uma amostra de paciente com LV (10%) foi reagente, a especificidade do teste foi de 98,3%. A detecção de IgE específica ocorreu em 40% dos pacientes com LTA. Não houve correlação entre as quantidades de IgE e os resultados da IDRM. Não foi observada correlação entre os índices de IgE e o número de lesões em pacientes com LCL. Não foi detectada uma associação entre cura ou não cura clínica e os índices de reatividade de IgE. Um aumento do número de amostras de pacientes é necessário para melhorar a acurácia dos resultados.