Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-01T08:34:02Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danielle de Freitas Mizoguti - 2013.pdf: 1318732 bytes, checksum: 8084d20c2bec9e4264a71581ca4d04b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-01T08:37:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danielle de Freitas Mizoguti - 2013.pdf: 1318732 bytes, checksum: 8084d20c2bec9e4264a71581ca4d04b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-01T08:37:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danielle de Freitas Mizoguti - 2013.pdf: 1318732 bytes, checksum: 8084d20c2bec9e4264a71581ca4d04b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Introduction: Leprosy Type 1 ( T1R) and type 2 reactions ( T2R) are considered the major complicators in the clinical management of leprosy patients. Leprosy reactions can occur before, during or after multidrug therapy (MDT). T1R is associated with exacerbated Th1 type cell mediated immunity (CMI) whereas T2R is associated with Th2 type immunity characterized by strong antibody production and in some cases transitory CMI to M. leprae antigens. Objective: Assess the serological reactivity to LID-1 fusion protein and to PGL-I M. leprae antigens among multibacillary (MB), paucibacillary (PB) leprosy patients that developed reaction at diagnosis or during MDT compared to reaction free MB and PB patients. Material and Methods: Paired serum samples from 73 leprosy patients were tested by ELISA to detect IgG antibodies to LID-1 and IgM responses to PGL-I. Leprosy patients included MB that developed T1R or T2R at diagnosis or during MDT and PB patients that developed T1R at diagnosis or during MDT compared to reaction free MB and PB patients. For T1R and T2R patients, samples collected during reactions and in the absence of reactions were tested and for reaction free patients samples collected at diagnosis and after MDT were tested. Results: The decline of anti LID-1 and anti PGL-I antibodies levels was significant among MB patients with T1R at diagnosis (p <0,05). Among MB patients with T2R at diagnosis and non reactional MB leprosy patients, the decline of antibodies was significant only to LID-1 (p <0,05). Higher levels of anti LID-1 antibodies were observed in MB patients who developed T2R at diagnosis compared with unreactional patients (p = 0.020) and patients who developed T1R at diagnosis (p = 0.008). Moreover, different antibody levels were seen in patients who developed T2R during MDT compared with unreactional MB patients after MDT (p = 0.020). Conclusions: Our data suggest that high anti LID-1 antibody levels may be associated with higher risk of T2R in MB patients. / Introdução: As reações hansênicas (tipo 1/RT1 e tipo 2/RT2) são as principais complicações no manejo clínico de pacientes com hanseníase e podem ocorrer antes, durante e após multidrogaterapia (MDT). A RT1 está associada a exacerbação da imunidade mediada por células (CMI) do tipo Th1 para antígenos do Mycobacterium leprae. Já a RT2 está associada com a resposta imunitária do tipo Th2, caracterizada por forte produção de anticorpos e em alguns casos ativação transitória da CMI. Objetivo: Avaliar a reatividade sorológica a proteína de fusão LID-1 e ao PGL-I do M. leprae em pacientes com hanseníase multibacilares (MB) e paucibacilares (PB) com reação hansênica e em pacientes MB e PB que não desenvolveram reação. Materiais e Métodos: Foram testadas amostras um total de 73 pacientes com hanseníase MB que desenvolveram RT1 ou RT2 ao diagnóstico ou durante MDT e em pacientes PB que desenvolveram RT1 ao diagnóstico ou durante MDT comparados com pacientes MB e PB que não desenvolveram reação hansênica ao diagnóstico nem durante MDT. A presença de IgG anti LID-1 e IgM anti PGL-I foi testada por ELISA. Resultados: O declínio dos níveis de anticorpos anti LID-1 e anti PGL-I foi significativo dentre os pacientes MB que estavam em RT1 ao diagnóstico (p< 0.05). Dentre os pacientes MB que estavam em RT2 ao diagnóstico e pacientes MB não reacionais, o declínio dos anticorpos foi significante apenas para LID-1 (p< 0.05). Níveis mais altos de anticorpos anti LID-1 foram observados nos pacientes MB que desenvolveram RT2 ao diagnóstico quando comparados com pacientes MB que desenvolveram RT1 ao diagnóstico (p=0.008) ou pacientes MB não reacionais (p=0.020). Pacientes MB que desenvolveram RT2 durante a MDT também apresentaram níveis mais altos de anticorpos anti LID-1 comparados com pacientes MB não reacionais após MDT (p=0.020). Conclusões: Nossos resultados sugerem que altos níveis de anticorpos anti LID-1 podem estar associados ao maior risco de desenvolvimento de RT2 em pacientes MB.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-04-10T18:04:35Z No. of bitstreams: 1 rafaelsilvagama.pdf: 1774054 bytes, checksum: b50899947c904ace42800056fa0d9afc (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-04-11T15:19:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rafaelsilvagama.pdf: 1774054 bytes, checksum: b50899947c904ace42800056fa0d9afc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-11T15:19:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rafaelsilvagama.pdf: 1774054 bytes, checksum: b50899947c904ace42800056fa0d9afc (MD5) Previous issue date: 2017-10-30 / O diagnóstico da hanseníase é eminentemente clínico, podendo ser complementado com baciloscopia, histopatologia e testes imunológicos. Métodos bacteriológicos clássicos para identificação de bactérias patogênicas não podem ser aplicados para o diagnóstico de hanseníase, sobretudo pela impossibilidade de cultivo in vitro do M. leprae. O exame histopatológico e a baciloscopia têm sido utilizados como métodos auxiliares para a classificação clínica dos casos. Técnicas moleculares e sorológicas têm sido avaliadas como ferramentas de diagnóstico na hanseníase. Ao contrário da baciloscopia, que requer cerca de 104 organismos por grama de tecido para detecção real, a PCR é uma técnica de alta especificidade e sensibilidade, capaz de detectar 25 fg (10-15g) de DNA de M. leprae. Além disso, a possibilidade de sua utilização em quase todos os tipos de amostras clínicas confere a este método um alto potencial para o diagnóstico diferencial. Os testes sorológicos têm como alvo a detecção de anticorpos específicos contra o M. leprae que indicam infecção. Esses testes podem ser úteis no monitoramento da eficácia da terapia, na determinação da prevalência da doença e na avaliação da distribuição da infecção entre contatos domiciliares. Considera-se que o indivíduo que reside ou tenha residido com o doente de hanseníase apresenta maior risco de adoecimento em relação à população em geral, pelo fato de estarem expostos ao M. leprae. Familiares de pacientes Multibacilar e Paucibacilar devem ser examinados, independente do tempo de convívio. Sugere-se avaliar anualmente, durante cinco anos, todos os contatos não doentes, quer sejam familiares ou sociais. Neste estudo utilizou-se o suporte da Inteligência Artificial (Random Forest) para análise integrada de métodos sorológicos e moleculares, no diagnóstico de novos casos de hanseníase e monitoramento de contatos domiciliares por um período de cinco anos. O estudo foi desenvolvido em Governador Valadares – MG, considerada área endêmica de hanseníase. O desenho proposto é do tipo longitudinal, com coleta de dados cadastrais de todos os casos diagnosticados em 2011 e seus respectivos contatos domiciliares registrados no período de 2011, 2012 e 2016. Um total de 196 indivíduos, sendo 43 casos, 113 contatos domiciliares e 40 indivíduos considerados controles endêmicos que relataram não ter convívio com pacientes com hanseníase nem tão pouco histórico de hanseníase na família foi incluído no estudo. Foram coletadas amostras sangue e de raspado intradérmico dos casos de hanseníase e seus respectivos contatos domiciliares, para análise por qPCR (16S rRNA) e ELISA (anti NO-OLID e LID-1). A análise integrada dos dados foi realizada por meio da Random Forest com o objetivo de melhorar o desempenho dos testes para o diagnóstico de hanseníase. Isoladamente, a qPCR apresentou sensibilidade de 48,8% e especificidade de 100% no diagnóstico de casos de hanseníase. No ensaio de ELISA anti-ND-O-LID a sensibilidade alcançada foi de 57,9% e especificidade de 97,5%, enquanto que no ensaio de anti-LID-1, a sensibilidade e especificidade foram de 63,2% e 92,5%, respectivamente. Entretanto, a análise integrada dos dados por Random Forest, utilizando 10.000 árvores de decisão, com um erro modal de 12,8%, obteve-se uma taxa de sensibilidade de 81,6% e especificidade de 92,5% na predição de novos casos de hanseníase. O modelo de Random Forest foi utilizado para o monitoramento de contatos domiciliares no período de 05 anos. Esta ferramenta de análise identificou entre os contatos, 02 doentes, mesmo antes do diagnóstico clínico. Ao final do período de acompanhamento, 03 contatos domiciliares foram notificados como casos novos de hanseníase. Desta forma, o modelo proposto pela análise Random Forest permitiu diagnosticar casos de hanseníase com alta sensibilidade e especificidade e identificar precocemente novos casos entre os contatos domiciliares durante o monitoramento. / The diagnosis of leprosy is eminently clinical and may be supplemented with bacilloscopy, histopathology and immunological tests. Classical bacteriological methods for the identification of pathogenic bacteria can not be applied for the diagnosis of leprosy, mainly due to the impossibility of in vitro culture of M. leprae. Histopathological examination and smear microscopy have been used as auxiliary methods for the clinical classification of cases. Molecular and serological techniques have been evaluated as diagnostic tools in leprosy. Unlike smear microscopy, which requires about 104 organisms per gram of tissue for actual detection, PCR is a technique of high specificity and sensitivity, capable of detecting 25 fg (10-15g) of M. leprae DNA. In addition, a possibility of its use in almost all types of clinical specimens gives this method a high potential for differential diagnosis. Serological tests are aimed at detecting specific antibodies against M. leprae that indicate infection. These tests may be useful in monitoring therapy efficacy, in determining disease prevalence, and in assessing the distribution of infection between household contacts. It is considered that the individual who resides or has lived with the leprosy patient has a higher risk of becoming ill in relation to the general population due to the fact that they are exposed to M. leprae. Relatives of patients Multibacillary and Paucibacillary should be examined, regardless of the time of conviviality. It is suggested to evaluate annually, for five years, all non-sick contacts, whether family or social. In this study we used the support of Artificial Intelligence (Random Forest) for integrated analysis of serological and molecular methods, in the diagnosis of new cases of leprosy and monitoring of household contacts for a period of five years. The study was developed in Governador Valadares - MG, considered an endemic area of leprosy. The proposed design is of the longitudinal type, with the collection of cadastral data of all cases diagnosed in 2011 and their respective household contacts registered in the period of 2011, 2012 and 2016. A total of 196 subjects, including 43 cases, 113 household contacts and 40 individuals considered endemic controls who reported not having lived with patients with leprosy or a history of leprosy in the family were included in the study. Blood samples and intradermal scrapings were collected from leprosy cases and their respective household contacts for analysis by qPCR (16S rRNA) and ELISA (anti-ND-O-LID and LID-1). The integrated analysis of the data was performed through Random Forest with the objective of improving the performance of the tests for leprosy diagnosis. In isolation, the qPCR showed sensitivity of 48.8% and specificity of 100% in the diagnosis of leprosy cases. In the anti-NDO- LID ELISA the sensitivity reached was 57.9% and specificity was 97.5%, whereas in the anti-LID-1 assay the sensitivity and specificity were 63.2% and 92.5%, respectively. However, the integrated analysis of the data by Random forest, using 10,000 decision trees, with a modal error of 12.8%, obtained a sensitivity rate of 81.6% and specificity of 92.5% in the prediction of new cases of leprosy. The Random Forest model was used to monitor household contacts within a period of 5 years. This analysis tool identified between the contacts, 02 patients, even before the clinical diagnosis. At the end of the follow-up period, 03 household contacts were reported as new cases of leprosy. Thus, the model proposed by the Random Forest analysis allowed the diagnosis of leprosy cases with high sensitivity and specificity and early identification of new cases among household contacts during monitoring.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2018-08-21T12:03:55Z No. of bitstreams: 1 angelicadaconceicaooliveiracoelho.pdf: 3773705 bytes, checksum: e753f755e09e6a5c7102c48ac076e08f (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-08-21T14:22:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 angelicadaconceicaooliveiracoelho.pdf: 3773705 bytes, checksum: e753f755e09e6a5c7102c48ac076e08f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-21T14:22:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 angelicadaconceicaooliveiracoelho.pdf: 3773705 bytes, checksum: e753f755e09e6a5c7102c48ac076e08f (MD5) Previous issue date: 2015-08-14 / PROQUALI (UFJF) / A infecção subclínica pode ser avaliada por meio de teste sorológico, que determina imunoglobulinas circulantes. O objetivo do presente estudo foi analisar a reatividade de diferentes antígenos em casos novos de hanseníase, contatos domiciliares de casos e em população de área endêmica, com o intuíto de identificar o melhor antígeno para o diagnóstico sorológico da hanseníase e detecção de indivíduos infectados pelo Mycobacterium leprae. Trata-se de um estudo transversal de natureza exploratória e analítica. A reatividade anti-LID1, NDO-LID, NDO-HSA e PGL-1 foi avaliada por meio do enzyme-linked immunosorbent assay. Foram analisadas amostras de sangue total em papel de filtro Whatman de 2494 indivíduos da população de sete municípios da microrregião de Almenara e de soro de 94 casos novos de hanseníase e 104 contatos domiciliares de casos residentes no município de Uberlândia. O Banco de Dados foi criado no Software Epi Info versão 3.5.1 e análise realizada no software Statistical Package for the Social Sciences for Windows 18 e no GraphPad Prism versão 5. Para análise estatística foram utilizados os seguintes testes: Kolmogorov-Smirnov, Kruskal-Wallis one-way (H), Mann-Whitney (U) com correção de Bonferroni, kappa, Spearman (rho), teste Qui-quadrado de Pearson e regressão logística binária. Foi observado maior soropositividade no grupo de casos multibacilares (MB), em contatos domiciliares de casos MB e nos indivíduos residentes nos municípios de Almenara e Jequitinhonha. Obteve-se correlação positiva entre a sorologia e o índice baciloscópico, concordância substancial e significativa no grupo de casos novos de hanseníase e correlação positiva para todos os antígenos testados. Os testes anti-LID-1 e anti-NDO-LID apresentaram melhor performance para identificar os contatos domiciliares e ou indivíduos da população infectados pelo M. leprae. O PGL-1 nativo teve maior positividade do que o NDO-HSA para todas as formas clínicas da hanseníase e no grupo de contatos domiciliares. A prevalência de soropositividade na população foi superior à taxa de detecção de casos de hanseníase em todos os municípios avaliados. A faixa etária, a renda familiar, residir em município endêmico, conhecer alguém que teve ou tem hanseníase, ter ou ter tido caso de hanseníase na familia e residir ou ter residido com caso de hanseníase são fatores que podem explicar a diferença de soropositividade anti-NDO-LID. Apenas a faixa etária e conhecer alguém que teve ou tem hanseníase é capaz de explicar a diferença de soropositividade anti-NDO-HSA. E em relação ao LID-1 nenhuma variável foi explicativa. Todos os antígenos analisados podem auxiliar na diferenciação e caracterização da hanseníase MB e na identificação de indivíduos expostos ao M. leprae, porém o NDO-LID apresentou melhor performance na identificação desses indivíduos e dos casos paucibacilares, quando comparado aos testes envolvendo os antígenos LID-1 e NDO-HSA separadamente, portanto fornece benefício adicional a esses antígenos e poderia ser utilizado como ferramenta auxiliar na vigilância epidemiológica da hanseníase. / The subclinical infection can be evaluated by serologic test which determine circulating immunoglobulins. The aim of this study was to analyze the reactivity of different antigens in leprosy cases, household contacts of index cases and the population of the endemic area to identify the best antigen for the diagnosis of leprosy and detection of individuals infected with Mycobacterium leprae. It is a cross-sectional study of exploratory and analytical nature. The reactivity anti-LID-1, NDO-LID, NDO-HAS e PGL-1 were evaluated using the enzymelinked immunosorbent assay. The whole blood in Whatman filter paper of 2494 individuals from the general population of seven municipalities in the micro-Almenara and serum of 94 patients with leprosy and 104 household contacts of patients residing in Uberlândia were analyzed. The database was created in Epi Info software version 3.5.1 and analysis in the software Statistical Package for Social Sciences for Windows 18 and GraphPad Prism version 5. For statistical analysis the following tests were used: Kolmogorov-Smirnov, Kruskal Wallis one-way (H), Mann-Whitney (U) with Bonferroni correction, kappa, Spearman (rho), chisquare test of Pearson and binary logistic regression. Identied higher seropositivity in the group of MB patients, household contacts of MB patients and in individuals living in the municipalities of Almenara and Jequitinhonha. Observed positive correlation between serology test and bacterial index, substantial agreement and significant in patients positive and positive correlation for all antigens. The LID-1 and NDO-LID antigens showed greater ability to identify household contacts or the general population infected with M. leprae, but the performance of the NDO-LID was better. The native PGL-1 had higher seropositivity than the NDO-HSA for all clinical forms of leprosy and household contacts. The seropositivity prevalence in the general population was higher than the detection rate of leprosy cases in all evaluated municipalities. The age, family income, living in a city endemic, knowing someone who had or has leprosy, had or have the case in the family and live or lived with leprosy case are factors that can explain the anti-NDO-LID seropositivity difference. Only the age range and know someone who had or has leprosy is able to explain the anti-NDO-HSA seropositivity difference. And for the LID-1 no variable explained the anti-LID-1 seropositivity difference. All serological tests analyzed can assist in the differentiation and characterization of MB leprosy and the identification of individuals exposed to M. leprae, but NDO-LID performed better in identifying these individuals and PB patients, when compared to the tests involving the LID-1 and NDO-HSA antigens separately, therefore provides additional benefit to these antigens and could be used as an auxiliary tool in epidemiological surveillance of leprosy.