Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar uma cerâmica feldspática micro-particulada quanto à rugosidade superficial, hidrofobicidade e formação in situ do biofilme dentário. Amostras padronizadas da cerâmica foram confeccionadas e divididas em 4 grupos conforme o sistema de acabamento e polimento: glaze (G1); glaze e broca diamantada (G2); glaze, broca diamantada e pontas de borracha (G3); glaze, broca diamantada, ponta de borracha e disco de feltro impregnado com pasta diamantada (G4). Rugosidade foi avaliada antes e após os procedimentos de acabamento e polimento estabelecidos para cada grupo. O ângulo de contato da água deionizada foi avaliado em goniômetro. Dez pacientes usaram dispositivo bucal com amostras dos diferentes grupos durante 8 h. Decorrido o período experimental, o biofilme (n=10) foi analisado em microscopia confocal laser ( biovolume e espessura média) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) (n=5). A rugosidade superficial foi significativamente diferente nos 4 grupos, sendo a ordem crescente de rugosidade G1 < G4 < G3 < G2. Em relação ao ângulo de contato, G1 apresentou a maior hidrofobicidade, não havendo diferenças entre os demais grupos. G1 e G4 foram semelhantes e apresentaram os menores valores de espessura média e biovolume do biofilme. G2 e G3 apresentaram os maiores valores de espessura média e biovolume sendo similares. Correlação positiva foi verificada entre rugosidade superficial e formação de biofilme in situ. As observações em MEV indicaram cocos isolados e diplococos em G1 com pouco material acelular. Em G2, presença de maior número de bactérias aderidas às amostras foi verificada. Em G3 foi verificado material fibrilar com cocos e bastonetes curtos constituindo colônias na superfície. Em G4, as amostras foram recobertas por material granular com poucos cocos isolados aderindo à superfície. / Abstract: This study assessed the effect of different systems of finishing and polishing in a ceramic micro-particulate feldspatic, with respect, the surface roughness, hydrophobicity, topography and morphology analysis using SEM and analysis of biofilms, with respect to its thickness and its average biovolume using MCVL. Specimens (5mmX2mm), were distributed into four groups (n = 10) as, finishing and polishing used: G1: glaze; G2 - drill diamantada (KG Sorensen); G3 - diamantada drill and polishing with rubber tip (KG Sorensen); G4 - diamantada drill and polishing with rubber tip followed by pulp diamantada with disc of felt. Rugosidade was evaluated in rugosímetro (Surftest SJ-301, Mitutoyo) before and after applying the glaze. The hydrophobicity was evaluated by a goniometer (Ramé-Hart - DROPimage, Advanced, USA) Ten patients used a device with the samples for 8h, then they were tested in MCVL. Topography and the morphology were evaluated in SEM. The roughness Ra (μm), biovolume and thickness of the biofilm and were analyzed using ANOVA and Tukey. There was no significant difference with respect to the amount of biovolume factor and the average thickness of biofilm between G2 and G3 and between G1 and G4. G1 and G4, were more hydrophobicity, with respect to G2, G3. There are correlated with roughness and formation of biofilms. There is the possibility of hydrophobicity is linked to lower bacterial adherence. / Orientador: Marco Antonio Bottino / Coorientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Marco Antonio Bottino / Banca: Regina Maria Puppin Rontani / Banca: Carlos Augusto Pavanelli / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-10-10Bitstream added on 2014-06-13T18:35:09Z : No. of bitstreams: 1 brentel_as_me_sjc.pdf: 699454 bytes, checksum: be2fb21f3ef054302d8fc5241d84a0a5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi avaliar uma cerâmica feldspática micro-particulada quanto à rugosidade superficial, hidrofobicidade e formação in situ do biofilme dentário. Amostras padronizadas da cerâmica foram confeccionadas e divididas em 4 grupos conforme o sistema de acabamento e polimento: glaze (G1); glaze e broca diamantada (G2); glaze, broca diamantada e pontas de borracha (G3); glaze, broca diamantada, ponta de borracha e disco de feltro impregnado com pasta diamantada (G4). Rugosidade foi avaliada antes e após os procedimentos de acabamento e polimento estabelecidos para cada grupo. O ângulo de contato da água deionizada foi avaliado em goniômetro. Dez pacientes usaram dispositivo bucal com amostras dos diferentes grupos durante 8 h. Decorrido o período experimental, o biofilme (n=10) foi analisado em microscopia confocal laser ( biovolume e espessura média) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) (n=5). A rugosidade superficial foi significativamente diferente nos 4 grupos, sendo a ordem crescente de rugosidade G1 < G4 < G3 < G2. Em relação ao ângulo de contato, G1 apresentou a maior hidrofobicidade, não havendo diferenças entre os demais grupos. G1 e G4 foram semelhantes e apresentaram os menores valores de espessura média e biovolume do biofilme. G2 e G3 apresentaram os maiores valores de espessura média e biovolume sendo similares. Correlação positiva foi verificada entre rugosidade superficial e formação de biofilme in situ. As observações em MEV indicaram cocos isolados e diplococos em G1 com pouco material acelular. Em G2, presença de maior número de bactérias aderidas às amostras foi verificada. Em G3 foi verificado material fibrilar com cocos e bastonetes curtos constituindo colônias na superfície. Em G4, as amostras foram recobertas por material granular com poucos cocos isolados aderindo à superfície. / This study assessed the effect of different systems of finishing and polishing in a ceramic micro-particulate feldspatic, with respect, the surface roughness, hydrophobicity, topography and morphology analysis using SEM and analysis of biofilms, with respect to its thickness and its average biovolume using MCVL. Specimens (5mmX2mm), were distributed into four groups (n = 10) as, finishing and polishing used: G1: glaze; G2 - drill diamantada (KG Sorensen); G3 - diamantada drill and polishing with rubber tip (KG Sorensen); G4 - diamantada drill and polishing with rubber tip followed by pulp diamantada with disc of felt. Rugosidade was evaluated in rugosímetro (Surftest SJ-301, Mitutoyo) before and after applying the glaze. The hydrophobicity was evaluated by a goniometer (Ramé-Hart - DROPimage, Advanced, USA) Ten patients used a device with the samples for 8h, then they were tested in MCVL. Topography and the morphology were evaluated in SEM. The roughness Ra (μm), biovolume and thickness of the biofilm and were analyzed using ANOVA and Tukey. There was no significant difference with respect to the amount of biovolume factor and the average thickness of biofilm between G2 and G3 and between G1 and G4. G1 and G4, were more hydrophobicity, with respect to G2, G3. There are correlated with roughness and formation of biofilms. There is the possibility of hydrophobicity is linked to lower bacterial adherence.

Biofilms of Actinobacillus succinogenes, grown in a biofilm reactor system, were investigated for structure and cell viability, through microscopic visualisation with a confocal scanning laser microscope (CSLM) and a scanning electron microscope (SEM). Biofilms were sampled and visualised at steady state conditions with the broth containing succinic acid titres between 15 and 21 g/L. All sampled biofilm was 6 days old. Six-day-old biofilms of A. succinogenes showed a heterogeneous biofilm architecture composed of cell micro-colony pillars which varied considerably in thickness, area and shape. Microcolony pillars consisted of a densely packed entanglement of sessile cells. Quantitative analysis revealed that the pillars were mostly large, with a mean pillar diameter of 170 m and a mean thickness of 92 m, although pillar diameter and thickness were variable as they ranged from 25 – 500 m and 30 – 300 m, respectively. In the regions close to the substratum surface, pillars were characterised by having defined borders with a network of channels ranging from 40 – 200 m in width separating them. However, towards the middle of the biofilm depth some of the pillars coalesced. For this reason low cross sectional area coverage of biofilm consistently occurred at the bottom portion of the biofilm whilst the highest coverage was in the middle portion of the biofilm. Regarding cell morphology, very large differences were observed. Planktonic cells were rod-shaped, whereas sessile cells expressed an elongated rod morphology and thus were much longer and thinner compared with planktonic cells. Planktonic cells were 1 – 2 m thick and 4 – 5 m long, while sessile cells were 0.5 – 1 m thick and 5 – 100 m long. Long sessile cells resulted in extensive tangling in microcolony pillars, which may have contributed to the structural stability of the pillars. Fibre-like connections of constant diameter were observed between cells, and between the cells and surface. The diameter of these connections was approximately 20 – 30 nm. Viability stains showed that in the bottom portion (from 0 - 20 m above the substratum surface) of the biofilm, most of the cells were dead. However, the portion of covered area attributed to living cells increased past the middle of the biofilm towards the top part of the biofilm. A high percentage of living cells was thus found towards the top part of the biofilm. Overall, 65% (with 2% standard deviation) of the entire biofilm was composed of dead cells. In this way, the results show that operation at high acid conditions comes at a cost of low overall biomass productivity due to decreased active biomass. / Dissertation (MEng)--University of Pretoria, 2017. / Chemical Engineering / MEng / Unrestricted

A proposta deste trabalho foi analisar um produto experimental (VIPI LTDA, Pirassununga, SP), que através da tecnologia sol-gel, modifica a superfície de resinas acrílicas para base de próteses e forma uma camada de nanopartículas de sílica (NPS) visando diminuir o acúmulo e facilitar a remoção de microrganismos. Dessa forma, inicialmente, confirmou-se a deposição de NPS e formação do revestimento cerâmico em polimetilmetacrilato (PMMA) através de espectroscopia no infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR); e posteriormente, quantificou-se o biofilme de Candida albicans nesta superfície através da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mL) e microscopia confocal (MC). Um total de 51 espécimes (10x10x3mm) de PMMA foi confeccionado e distribuído aos experimentos designados. Para a análise da composição dos espécimes em FTIR, foram avaliados 3 grupos (n=1): CN- espécime que não recebeu tratamento algum; CP- espécime que recebeu a aplicação do primer do produto; CL- espécime que passou tanto pela aplicação do primer como pelo processo sol-gel. Na etapa seguinte, foram utilizados 48 espécimes divididos em 3 grupos (n=16), de acordo com o tipo de polimento: PM3- mecanicamente polido com 3&#x3BC;m de rugosidade média; PM03- mecanicamente polido com 0,3&#x3BC;m de rugosidade; PL- polido quimicamente pelo líquido conforme instruções do fabricante. Anteriormente aos experimentos, os espécimes foram esterilizados por óxido de etileno e, então, imersos em saliva artificial por 2hs para a formação da película adquirida. Em seguida, foram secos e inoculados com 2mL de suspensão de C. albicans (1.107 cel/mL) para adesão das células fúngicas durante 90min. Após esta fase, as amostras foram lavadas em solução salina e imersas em meio estéril (RPMI) para crescimento do biofilme em estufa sob agitação (12hs a 37oC). Metade do número das amostras de cada grupo (n=8) foi destinada a contagem de UFC/mL e a outra metade dos espécimes (n=8), foi designada ao método de MC, que com o auxílio de um software (BioImageL v.2), permitiu a determinação do biovolume total (&#x3BC;m3), biovolume de células viáveis (&#x3BC;m3), biovolume de células não-viáveis (&#x3BC;m3) e área de cobertura do campo pelo biofilme (%). Os dados obtidos pelo FTIR foram analisados através da estatística descritiva. Os resultados obtidos pelos experimentos de quantificação após teste de normalidade Kolmogorov-Smirnov foram analisados através do teste paramétrico ANOVA, seguido do teste de Tukey para comparações entre grupos (p<0,05). Através do FTIR, observou-se a deposição satisfatória da camada de NPS, permitindo assim, o desempenho dos experimentos de quantificação. Os resultados do UFC/ml e MC demonstraram semelhança na quantificação do biofilme entre os grupos PL e PM3, e diferença quando comparados ao grupo de superfícies mais lisas, PM03. Dessa forma, observou-se que o polimento líquido experimental não foi efetivo para a diminuição da colonização de biofilme deC. albicans em superfícies de PMMA. Entretanto, maiores investigações sobre as propriedades de superfície deste revestimento devem ser realizadas, já que o processo sol-gel permite uma facilidade na modificação dessas características, podendo levar ao desenvolvimento de um material de revestimento ideal. / This study investigates an experimental coating (VIPI LTDA, Pirassununga, SP) by sol-gel process that modifies acrylic resin denture base with silicon dioxide nanoparticles (SNP) to decrease C. albicans biofilm growth. Therefore, it was first investigated the presence of sol-gel ceramic coating on polymethylmethacrylate (PMMA) by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR). Then C. albicans biofilms were quantified by colony forming units (CFU/mL) and confocal scanning laser microscopy (CSLM). Fifty-one PMMA specimens were manufactured (10x10x3mm) and assigned to the experiments. To evaluate specimens composition, it was analyzed three groups (n=1): CN- the specimen did not receive any surface treatment; CP- it was applied the coating primer on the specimen surface CL- the specimen was treated with the whole sol-gel process. In the following stage, 48 samples were divided into 3 groups (n=16) according to the polish type: PM3- 3&#x3BC;m of roughness mechanical polish; PM03- 0,3&#x3BC;m of roughness mechanical polish; PL- liquid polish. Samples of experimental group were coated according to manufacturers instructions and all the samples were sterilized with ethylene oxide. After that, they were dipped in artificial saliva for 2hs to acquire the salivary pellicle, and then, dried and inoculated with 2 mL suspension of C.albicans (1.107 cel/mL) for 90 min. Then, specimens were washed and immersed in sterile RPMI solution (37oC for 12h). Half of the samples of each group (n=8) was assigned to each quantification test (UFC/mL and CSLM). By CSLM and software (BioImageL v.2) analysis was possible to obtain the total biovolume (&#x3BC;m3), viable biovolume (&#x3BC;m3), non-viable biovolume (&#x3BC;m3), and covered area (%) by C. albicans biofilm. The data obtained by FTIR were analyzed by descriptive statistic. Whereas the records acquired by the quantification experiments were first analyzed by Kolmogorov-Smirnov normality test and then by one way ANOVA followed by Tukeys test to assess difference between groups (p<0,05). FTIR results showed an adequate SNP deposition, allowing the quantification tests to be performed. UFC/mL and CLSM records showed similarity between PL and PM3 groups and difference when comparing these groups to smoother surfaces group (PM03). Therefore, in this study, the experimental coating was not effective to reduce colonization by C. albicans biofilm on PMMA surfaces. Nevertheless, further investigations are required since sol-gel ceramic coating process eases the features modification of the material, possibly leading to an ideal coating development.

With over a billion people infected world wide, hookworms are considered as important human pathogens, particularly in developing countries which have the highest rates of infections. Hookworms reside in the gastrointestinal tract of the host where they continuously feed on blood, leading to conditions such as chronic irondeficiency anaemia. The majority of blood-feeding parasites rely on proteins found in blood to provide many of their nutritional requirements for growth, reproduction and survival. Of the numerous proteins found in blood, haemoglobin (Hb) is one of the most abundant. In order to acquire amino acids for protein synthesis, it is thought that haematophagous parasites degrade Hb using various classes of endo- and exoproteases, in a manner similar to that which occurs in catabolism of proteins in mammalian cellular lysosomes. This study identified and characterised proteases involved in the Hb degradation process in the human hookworm, Necator americanus, in order to identify potential candidate antigens for a vaccine that interrupts blood-feeding. Red blood cells ingested by hookworms are lysed to release Hb, which is cleaved by various proteases into dipeptides or free amino acids and these are taken up through the gut membrane by amino acid transporters. Proteases expressed in the intestinal tract of hookworms are thought to play a major role in this process and would therefore make good targets for vaccine candidates aimed at interrupting blood-feeding. To identify these proteases, adult hookworms (both N. americanus and Ancylostoma caninum) were sectioned and intestinal tissue was dissected via laser microdissection microscopy. RNA extracted from the dissected tissue was used to generate gut-specific cDNA, which then was used to create plasmid libraries. Each library was subjected to shotgun sequencing, and of the 480 expressed sequence tags (ESTs) sequenced from each species, 268 and 276 contigs were assembled from the N. americanus and A. caninum libraries, respectively. Nine percent of N. americanus and 6.5% of A. caninum contigs were considered novel as no homologues were identified in any published/accessible database. The gene ontology (GO) classification system was used to categorise the contigs to predicted biological functions. Only 17% and 38% of N. americanus and A. caninum contigs, respectively, were assigned GO categories, while the rest were classified as being of unknown function. The most highly represented GO categories were molecular functions such as protein binding and catalytic activity. The most abundant transcripts encoded fatty acid binding proteins, C-type lectins and activation associated secreted proteins, indicative of the diversity of functions that occur in this complex organ. Of particular interest to this study were the contigs that encoded for cysteine and metalloproteases, expanding the list of potential N. americanus haemoglobinases. In the N. americanus cDNA library, four contigs encoding for cathepsin B cysteine proteases were identified. Three contigs from the A. caninum and one contig from the N. americanus cDNA libraries encoded for metalloproteases, including astacin-like and O-sialoglycoprotein endopeptidases, neither of which had previously been reported from adult hookworms. Apart from haemoglobinases, other mRNAs encoding potential vaccine candidate molecules were identified, including anti-clotting factors, defensins and membrane proteins. This study confirmed that the gut of hookworms encodes a diverse range of proteases, some of which are likely to be involved in Hb digestion and have the potential to be hidden (cryptic) vaccine antigens. Four cysteine proteases (Na-CP-2, -3, -4 and -5) were identified from the gut cDNA library of N. americanus. All four proteases belong to the clan CA, family C1, share homology with human cathepsin B and possess a modified occluding loop. Real-time PCR indicated that all transcripts were up-regulated in the adult stage of the hookworm parasite with high levels of mRNA expression detected in gut cDNA. All four proteases were expressed in recombinant form, but only Na-CP-3 was successfully expressed in soluble form in the yeast Pichia pastoris. Proteolytic activity for Na-CP-3 was detected on a gelatin zymogen gel, however no catalytic activity was detected against the class-specific fluorogenic peptides Z-Phe-Arg-AMC and Z-Arg-Arg-AMC. Mass spectrometry analysis of the purified protein suggested that the pro-region had not been processed in trans when the protein was secreted by yeast. Incubation of Na-CP-3 in salt buffers containing dextran sulfate resulted in autoprocessing of the pro-region as detected by Western blot and catalytic activity was detected against Z-Phe-Arg-AMC. Activated Na-CP-3 did not digest intact tetrameric human Hb. The other three cysteine proteases (Na-CP-2, -4, and -5) were expressed in insoluble form in Escherichia coli. Antibodies to all four proteins (Na- CP-2 to 5) immunolocalised to the gut region of the adult worm, supporting mRNA amplification results and strongly indicated that they might play a role in nutrient acquisition. Hb digestion in blood feeding parasites such as schistosomes and Plasmodium spp. occurs via a semi-ordered cascade of proteolysis involving numerous enzymes. In Plasmodium falciparum, at least three distinct mechanistic classes of endopeptidases have been implicated in this process, and at least two classes have been implicated in schistosomes. A similar process is thought to occur in hookworms. An aspartic protease, Na-APR-1, was expressed in P. pastoris and purified protein was shown to cleave the class-specific fluorogenic peptide 7- Methoxycoumarin-4-Acetyl-GKPILFFRLK(DNP)-D-Arg-Amide. Recombinant Na- APR-1 was able to cleave intact human Hb and completely degrade the 16 kDa monomer and 32 kDa dimer within one hour. Recombinant Na-CP-3 was not able to cleave intact Hb, but was able to further digest globin fragments that had previously been digested with Na-APR-1. A clan MA metalloprotease, Na-MEP-1, was identified in gut tissue of N. americanus and was expressed in recombinant form in Hi5 insect cells using the baculovirus expression system. Recombinant Na-MEP-1 displayed proteolytic activity when assessed by gelatin zymography, but was incapable of cleaving intact Hb. However, Na-MEP-1 did cleave globin fragments which had previously been incubated with Na-APR-1 and Na-CP-3. Hb digested with all three proteases was subjected to reverse phase HPLC and peptides were analysed using Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS). A total of 74 cleavage sites were identified within Hb ƒ¿ and ƒÀ chains. Na-APR-1 was responsible for cleavage of Hb at the hinge region, probably unravelling the molecule so that Na- CP-3 and Na-MEP-1 could gain access to globin peptides. All three proteases were promiscuous in their subsite specificities, but the most common P1-P1Œ residues were hydrophobic and/or bulky in nature, such as Phe, Leu and Ala. Antibodies to all three proteins (Na-APR-1, -CP-3, -MEP-1) immunolocalised to the gut region of the worm, further supporting their roles in Hb degradation. These results suggest that Hb degradation in N. americanus follows a similar pattern to that which has been described in Plasomdium falciparum. Studies conducted in this project have identified a number of potential haemoglobinases and have demonstrated that the gut region of the hookworm contains a multitude of proteases which could be targeted for production of new chemotherapies or as vaccine candidates. Results presented here also suggest that the Hb degradation process occurs in an ordered cascade, similar to those which have been reported in other haematophagous parasites. More importantly, it has been confirmed that Na-APR-1 plays a crucial role in the initiation of the Hb degradation process and therefore targeting this molecule as a vaccine candidate could provide high levels of protection against hookworm infection.

A proposta deste trabalho foi analisar um produto experimental (VIPI LTDA, Pirassununga, SP), que através da tecnologia sol-gel, modifica a superfície de resinas acrílicas para base de próteses e forma uma camada de nanopartículas de sílica (NPS) visando diminuir o acúmulo e facilitar a remoção de microrganismos. Dessa forma, inicialmente, confirmou-se a deposição de NPS e formação do revestimento cerâmico em polimetilmetacrilato (PMMA) através de espectroscopia no infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR); e posteriormente, quantificou-se o biofilme de Candida albicans nesta superfície através da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mL) e microscopia confocal (MC). Um total de 51 espécimes (10x10x3mm) de PMMA foi confeccionado e distribuído aos experimentos designados. Para a análise da composição dos espécimes em FTIR, foram avaliados 3 grupos (n=1): CN- espécime que não recebeu tratamento algum; CP- espécime que recebeu a aplicação do primer do produto; CL- espécime que passou tanto pela aplicação do primer como pelo processo sol-gel. Na etapa seguinte, foram utilizados 48 espécimes divididos em 3 grupos (n=16), de acordo com o tipo de polimento: PM3- mecanicamente polido com 3&#x3BC;m de rugosidade média; PM03- mecanicamente polido com 0,3&#x3BC;m de rugosidade; PL- polido quimicamente pelo líquido conforme instruções do fabricante. Anteriormente aos experimentos, os espécimes foram esterilizados por óxido de etileno e, então, imersos em saliva artificial por 2hs para a formação da película adquirida. Em seguida, foram secos e inoculados com 2mL de suspensão de C. albicans (1.107 cel/mL) para adesão das células fúngicas durante 90min. Após esta fase, as amostras foram lavadas em solução salina e imersas em meio estéril (RPMI) para crescimento do biofilme em estufa sob agitação (12hs a 37oC). Metade do número das amostras de cada grupo (n=8) foi destinada a contagem de UFC/mL e a outra metade dos espécimes (n=8), foi designada ao método de MC, que com o auxílio de um software (BioImageL v.2), permitiu a determinação do biovolume total (&#x3BC;m3), biovolume de células viáveis (&#x3BC;m3), biovolume de células não-viáveis (&#x3BC;m3) e área de cobertura do campo pelo biofilme (%). Os dados obtidos pelo FTIR foram analisados através da estatística descritiva. Os resultados obtidos pelos experimentos de quantificação após teste de normalidade Kolmogorov-Smirnov foram analisados através do teste paramétrico ANOVA, seguido do teste de Tukey para comparações entre grupos (p<0,05). Através do FTIR, observou-se a deposição satisfatória da camada de NPS, permitindo assim, o desempenho dos experimentos de quantificação. Os resultados do UFC/ml e MC demonstraram semelhança na quantificação do biofilme entre os grupos PL e PM3, e diferença quando comparados ao grupo de superfícies mais lisas, PM03. Dessa forma, observou-se que o polimento líquido experimental não foi efetivo para a diminuição da colonização de biofilme deC. albicans em superfícies de PMMA. Entretanto, maiores investigações sobre as propriedades de superfície deste revestimento devem ser realizadas, já que o processo sol-gel permite uma facilidade na modificação dessas características, podendo levar ao desenvolvimento de um material de revestimento ideal. / This study investigates an experimental coating (VIPI LTDA, Pirassununga, SP) by sol-gel process that modifies acrylic resin denture base with silicon dioxide nanoparticles (SNP) to decrease C. albicans biofilm growth. Therefore, it was first investigated the presence of sol-gel ceramic coating on polymethylmethacrylate (PMMA) by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR). Then C. albicans biofilms were quantified by colony forming units (CFU/mL) and confocal scanning laser microscopy (CSLM). Fifty-one PMMA specimens were manufactured (10x10x3mm) and assigned to the experiments. To evaluate specimens composition, it was analyzed three groups (n=1): CN- the specimen did not receive any surface treatment; CP- it was applied the coating primer on the specimen surface CL- the specimen was treated with the whole sol-gel process. In the following stage, 48 samples were divided into 3 groups (n=16) according to the polish type: PM3- 3&#x3BC;m of roughness mechanical polish; PM03- 0,3&#x3BC;m of roughness mechanical polish; PL- liquid polish. Samples of experimental group were coated according to manufacturers instructions and all the samples were sterilized with ethylene oxide. After that, they were dipped in artificial saliva for 2hs to acquire the salivary pellicle, and then, dried and inoculated with 2 mL suspension of C.albicans (1.107 cel/mL) for 90 min. Then, specimens were washed and immersed in sterile RPMI solution (37oC for 12h). Half of the samples of each group (n=8) was assigned to each quantification test (UFC/mL and CSLM). By CSLM and software (BioImageL v.2) analysis was possible to obtain the total biovolume (&#x3BC;m3), viable biovolume (&#x3BC;m3), non-viable biovolume (&#x3BC;m3), and covered area (%) by C. albicans biofilm. The data obtained by FTIR were analyzed by descriptive statistic. Whereas the records acquired by the quantification experiments were first analyzed by Kolmogorov-Smirnov normality test and then by one way ANOVA followed by Tukeys test to assess difference between groups (p<0,05). FTIR results showed an adequate SNP deposition, allowing the quantification tests to be performed. UFC/mL and CLSM records showed similarity between PL and PM3 groups and difference when comparing these groups to smoother surfaces group (PM03). Therefore, in this study, the experimental coating was not effective to reduce colonization by C. albicans biofilm on PMMA surfaces. Nevertheless, further investigations are required since sol-gel ceramic coating process eases the features modification of the material, possibly leading to an ideal coating development.

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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O conhecimento da morfologia e ultraestrutura dos helmintos permite a correta classificação destes organismos, bem como fornece subsídios que poderão ser utilizados para diagnóstico e controle. A microscopia laser confocal é uma ferramenta para estudar a organização estrutural de várias espécies de helmintos, possibilitando acesso a detalhes morfológicos não evidenciados pela microscopia óptica. Echinostoma paraensei é um trematódeo, digenético, hermafrodita parasito de numerosos hospedeiros vertebrados. Neste trabalho foi investigado o desenvolvimento dos órgãos reprodutivo e a morfometria de E. paraensei, desde a fase jovem até a adulta, como contribuição ao conhecimento do desenvolvimento reprodutivo desta espécie. Os trematódeos foram recuperados aos 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14 e 21 dias posterior à infecção (dpi) experimental em hamsters. Estes foram corados em carmim clorídrico, desidratados em série alcoólica e montados em lâmina permanente em bálsamo do Canadá, fotografados e medidos usando microscopia de luz de campo claro (MCC) e microscopia de varredura laser confocal (MVLC). Entre 3 e 4 dpi, os primórdios genitais estavam presentes e nenhuma organização do sistema reprodutivo foi visualizada por MCC e MVLC. Os primórdio do ovário, dos testículos e da bolsa do cirro foram visualizados por MCC aos 5 e 6 dpi, no entanto, MVLC dos helmintos aos 5dpi mostra que estes primórdios, o ootipo e o útero estavam presentes, como estruturas individualizadas. A bolsa do cirro apresenta metratermo e o ovário com primórdio do oótipo adjacente aos 7dpi por MVLC. A vesícula seminal, receptáculo seminal, células diferenciadas nos testículos, ducto e reservatório vitelínico e oviducto foram visualizados após 10 dias, enquanto os espermatozóides na vesícula seminal, ovos e oócitos, células vitelínicas, poro e canal de Laurer aos 14 dias. A morfometria evidencia um acelerado crescimento dos órgãos reprodutores a partir do 7 dia. Os testículos apresentam aumento significativo no comprimento do 7 ao 21 dia e o ovário durante o período de 7 à 10 dpi. Aos 21 dpi, todos os helmintos apresentaram glândulas vitelínicas, útero contendo ovos e espermatozóides no oviducto enquanto outros ovos estão sendo formados. As mudanças morfológicas acentuadas durante a gametogênese consistem no aumento do comprimento do helminto, maturação das gônadas, desenvolvimento e maturação das glândulas vitelínicas. O desenvolvimento do helminto como um todo está relacionado à maturação dos órgãos reprodutivo masculino e feminino indicando o investimento deste trematódeo em garantir a produção e eliminação dos ovos ao meio exterior. / The knowledge about morphology and ultra structure of helminthes are great importance in correct classification these organisms. The Scanning Laser Microscopy (LSM) is an important tool to study the structural organization of several helminthes species. Echinostoma paraensei is a trematode, digenetic, hermaphroditic parasite of several hosts. In this study, the development of reproductive organs and the morphometry of E. paraensei from young stage to adult worm were investigated, to contribute knowledge of the reproductive development of this specie. The trematodes were recovered on 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14 and 21 days post infection (dpi) from experimental hamsters. It were dehydrated in alcohol series, stained with hydrochloric carmine, mounted on permanent slide using Canada balsam, photographed and measured using light microscopy (LM) and Scanning Laser Microscopy (LSM). Between 3 and 4 dpi the genital anlage were present and were not observed reproductive system organization by either LM and LSM. The anlage of ovary, testes and Cirruss sac were seen at 5 and 6dpi by LM, however LSM from 5dpi image shows theses anlage, ootype and uterus are present as individualized structure. Cirrus sac showed metraterm and ootype adjacent to primordial ovary were seen at 7 dpi by LSM. The seminal vesicle, seminal receptacle, differentiated cells in the testes, viteline ducts and oviduct were visualized after 10 days infection, while sperms in seminal vesicle, eggs, oocyte, Laurer canal and pore from 14 dpi by LSM. The morphometry shows a rapid growth of reproductive organs from 7th day. The testes have significantly increased length from 7 until 21dpi and ovary from 7 until 10dpi. All helminthes showed vitellines glands, uterus contained eggs and sperm in oviduct while another eggs were forming at 21 dpi. The marked morphologic changes during gametogenesis are increase of body length of helminthes, gonad maturation and development and maturation of vitelline glands. The development of helminthes as a whole is related to maturation of female and male organs of reproductive system showing the investment this trematode taken to ensuring the production, maintenance and delivery the eggs to external environment.

Este estudo se propôs a analisar os efeitos das diferentes larguras temporais de pulso do laser de Er:YAG na rugosidade superficial, na perda de volume do material e na altura do degrau formado em uma Y-TZP (Yttrium-stabilized Tetragonal Zirconia Polycrystal) pré-sinterizada. Foram utilizados 5 blocos de Y-TZP pré-sinterizados destinados ao uso CAD/CAM que foram seccionados, obtendo-se 63 espécimes padronizados. Em seguida, esses espécimes foram lixados com uma sequência decrescente de lixas para padronização da superfície. Os grupos experimentais foram compostos a partir de 1 fator de variação - o tratamento de superfície. Os espécimes foram irradiados com o laser de Er:YAG (Fidelis III Fotona, Eslovênia) - 2,94 ?m, 100 mJ, 15,87J/cm2, 10 Hz, 1W, 7 mm, 60% água/40% ar. Assim formaram-se 7 grupos experimentais (n=9): G1 (50 ?s); G2 (100 ?s); G3 (300 ?s); G4 (600 ?s); G5 (1000 ?s); G6 (Abrasão triboquímica com partículas de 30 ?m); G7 (Sem tratamento). Após os tratamentos de superfície, os espécimes foram sinterizados em forno específico, de acordo com as recomendações do fabricante. Foram capturadas imagens em Microscópio Confocal a Laser 3D de cada espécime e avaliadas por meio de um software. A análise dos grupos irradiados revelou um aumento da rugosidade nos grupos G1, G2, G3 e G4 quando comparados aos grupos G6 e G7. O grupo G5 apresentou superfície totalmente plana e desfavorável para retenção. No que se refere à perda de volume e formação de degrau, os grupos G1, G2 e G3 demonstraram grande perda de volume e grande altura de degrau formado, o que pode levar a uma desadaptação da peça protética. No grupo G4 foram observados valores de rugosidade satisfatórios com pouca perda de volume e pequena altura de degrau formado, semelhante ao que foi notado para a abrasão trioboquímica (G6), podendo ser indicada para tratamento de superfície de Y-TZP pré-sinterizada. A irradiação com o laser de Er:YAG promoveu um padrão morfológico com muitas irregularidades, característico de ablação para os grupos G1, G2, G3 e G4 e, para todos os protocolos utilizados, não foi observada a presença de trincas ou carbonização. Sugere-se que a largura temporal de 600 ?s (G4) seja a mais indicada como alternativa para tratamento de superfície, objetivando a criação de micro-retenções superficiais, com pouca perda de volume de material e que, ao mesmo tempo, não provoque danos à estrutura da cerâmica policristalina. / This study evaluated the effects of different Er:YAG laser pulse width protocols on surface roughness, loss of volume of the material and the step height formed of pre-sintered Yttrium-stabilized tetragonal Zirconia Polycrystal (Y-TZP) by three-dimensional profilometric assessment. Blocks of pre-sintered Y-TZP were cut providing 63 standard 5mm thick samples which were divided by surface treatment, as follows (n=9): G1 (50?s); G2 (100?s); G3 (300?s); G4 (600?s); G5 (1000?s); G6 (tribochemical silica coating); G7 (Untreated). Laser settings: The Er:YAG laser (Fidelis III; Fotona, Ljubljana, Slovenia) 100mJ, 15,87J/cm2, 10Hz, 1W, (60%) and air (40%) cooling. After treated or not, samples were sintered according to the manufacturer\'s recommendations. Roughness, volume loss and step and were analyzed by 3D profilometric assessment with confocal laser microscopy. Irradiated groups showed an increased roughness in the groups G1, G2, G3 and G4 when compared to G6 and G7 groups. The G5 group showed a completely flat and unfavorable surface for retention. The groups G1, G2 and G3 shown great loss of volume and the step height formed, which can lead to a gap on the crowns. In G4 were observed satisfactory roughness with little loss of volume and the step height formed similar to G6. Irrespective of laser protocol, any of the specimens showed presence of cracks and carbonization. It is suggested that the pulse width 600?s (G4) is the most suitable pulse width protocol as an alternative surface treatment, promoting micro-retention, with little loss of volume of material, comparable to gold standard treatment.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O conhecimento da morfologia e ultraestrutura dos helmintos permite a correta classificação destes organismos, bem como fornece subsídios que poderão ser utilizados para diagnóstico e controle. A microscopia laser confocal é uma ferramenta para estudar a organização estrutural de várias espécies de helmintos, possibilitando acesso a detalhes morfológicos não evidenciados pela microscopia óptica. Echinostoma paraensei é um trematódeo, digenético, hermafrodita parasito de numerosos hospedeiros vertebrados. Neste trabalho foi investigado o desenvolvimento dos órgãos reprodutivo e a morfometria de E. paraensei, desde a fase jovem até a adulta, como contribuição ao conhecimento do desenvolvimento reprodutivo desta espécie. Os trematódeos foram recuperados aos 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14 e 21 dias posterior à infecção (dpi) experimental em hamsters. Estes foram corados em carmim clorídrico, desidratados em série alcoólica e montados em lâmina permanente em bálsamo do Canadá, fotografados e medidos usando microscopia de luz de campo claro (MCC) e microscopia de varredura laser confocal (MVLC). Entre 3 e 4 dpi, os primórdios genitais estavam presentes e nenhuma organização do sistema reprodutivo foi visualizada por MCC e MVLC. Os primórdio do ovário, dos testículos e da bolsa do cirro foram visualizados por MCC aos 5 e 6 dpi, no entanto, MVLC dos helmintos aos 5dpi mostra que estes primórdios, o ootipo e o útero estavam presentes, como estruturas individualizadas. A bolsa do cirro apresenta metratermo e o ovário com primórdio do oótipo adjacente aos 7dpi por MVLC. A vesícula seminal, receptáculo seminal, células diferenciadas nos testículos, ducto e reservatório vitelínico e oviducto foram visualizados após 10 dias, enquanto os espermatozóides na vesícula seminal, ovos e oócitos, células vitelínicas, poro e canal de Laurer aos 14 dias. A morfometria evidencia um acelerado crescimento dos órgãos reprodutores a partir do 7 dia. Os testículos apresentam aumento significativo no comprimento do 7 ao 21 dia e o ovário durante o período de 7 à 10 dpi. Aos 21 dpi, todos os helmintos apresentaram glândulas vitelínicas, útero contendo ovos e espermatozóides no oviducto enquanto outros ovos estão sendo formados. As mudanças morfológicas acentuadas durante a gametogênese consistem no aumento do comprimento do helminto, maturação das gônadas, desenvolvimento e maturação das glândulas vitelínicas. O desenvolvimento do helminto como um todo está relacionado à maturação dos órgãos reprodutivo masculino e feminino indicando o investimento deste trematódeo em garantir a produção e eliminação dos ovos ao meio exterior. / The knowledge about morphology and ultra structure of helminthes are great importance in correct classification these organisms. The Scanning Laser Microscopy (LSM) is an important tool to study the structural organization of several helminthes species. Echinostoma paraensei is a trematode, digenetic, hermaphroditic parasite of several hosts. In this study, the development of reproductive organs and the morphometry of E. paraensei from young stage to adult worm were investigated, to contribute knowledge of the reproductive development of this specie. The trematodes were recovered on 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14 and 21 days post infection (dpi) from experimental hamsters. It were dehydrated in alcohol series, stained with hydrochloric carmine, mounted on permanent slide using Canada balsam, photographed and measured using light microscopy (LM) and Scanning Laser Microscopy (LSM). Between 3 and 4 dpi the genital anlage were present and were not observed reproductive system organization by either LM and LSM. The anlage of ovary, testes and Cirruss sac were seen at 5 and 6dpi by LM, however LSM from 5dpi image shows theses anlage, ootype and uterus are present as individualized structure. Cirrus sac showed metraterm and ootype adjacent to primordial ovary were seen at 7 dpi by LSM. The seminal vesicle, seminal receptacle, differentiated cells in the testes, viteline ducts and oviduct were visualized after 10 days infection, while sperms in seminal vesicle, eggs, oocyte, Laurer canal and pore from 14 dpi by LSM. The morphometry shows a rapid growth of reproductive organs from 7th day. The testes have significantly increased length from 7 until 21dpi and ovary from 7 until 10dpi. All helminthes showed vitellines glands, uterus contained eggs and sperm in oviduct while another eggs were forming at 21 dpi. The marked morphologic changes during gametogenesis are increase of body length of helminthes, gonad maturation and development and maturation of vitelline glands. The development of helminthes as a whole is related to maturation of female and male organs of reproductive system showing the investment this trematode taken to ensuring the production, maintenance and delivery the eggs to external environment.