Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2017-05-31T11:58:11Z No. of bitstreams: 1 2015 - Victor Menezes Tunholi Alves.pdf: 1068543 bytes, checksum: f36d6e4d78a70514a148e30e4249805b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-31T11:58:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015 - Victor Menezes Tunholi Alves.pdf: 1068543 bytes, checksum: f36d6e4d78a70514a148e30e4249805b (MD5) Previous issue date: 2015-10-14 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Parasites belonging to the Echinostoma genus are characterized by having a complex biological cycle, with two intermediate hosts and a final habitat restricted to the intestinal lumen of the definitive hosts. These hosts include aquatic birds, mammals (including humans) and occasionally some reptile and fish species. Their first intermediate hosts are freshwater snails, into which the miracidia actively penetrate for development of the next three stages (sporocysts, rediae and cercariae). Freshwater crustaceans, amphibians, fish and snails act as the second intermediate hosts, enabling the formation of metacercariae, the infective larval stage to the definitive host. In this work, Biomphalaria glabrata specimens were experimentally infected with different doses (5 or 50) of E. paraensei miracidia. The snails were dissected one, two, three and four weeks after infection to collect the hemolymph, shells and tissues (gonad-digestive gland complex- GDG). In the hemolymph were quantified glucose concentrations and carboxylic acids (succinic, pyruvic, lactic and oxalic acids), as well as the activity of lactate dehydrogenase (LDH). The storage of tissues was measured glycogen content and oxygen consumption (O2). Changes were observed in glycemia of the snails, in both situations parasitism, with significant increase in glucose levels observed from the third week post infection when compared to the control group. Changes have also been described in relation to the activity of lactate dehydrogenase and are characterized by the increase of its activity in the later periods of infection. In parallel, there was a decrease in glycogen content in storage tissues, being such greater reduction in the digestive gland (larval development site) in comparison to the cephalopedal mass. In addition, the infection by both miracidiais doses resulted in increased levels of oxalic acid and lactic acid, as well as a decline in the content of pyruvic and succinic acids in B. glabrata. The prepatent infection by this equinostomatideo still significantly suppressed the phosphorylation state (state 3 respiration) and basal oxygen consumption (state 1 and 2) in B. glabrata, demonstrating that infection by E. paraensei decreases the capacity of the intermediate host in performing aerobic oxidative reactions. These results demonstrate the reduction in oxidative decarboxylation rate of the reactions that are part of the tricarboxylic acid cycle and acceleration of the process of anaerobic degradation of carbohydrates in the infected snails by lactic acid fermentation, it is essential to ensure the obtaining of energy and the success of the infection. Thus, the results observed in this study demonstrate that infection with five or 50 miracidia of E. paraensei caused significant metabolic changes in B. glabrata snails being exposed to the largest load miracidial showed the greatest damage, featuring a dose-dependent response / Parasitos pertencentes ao g?nero Echinostoma caracterizam por apresentar um ciclo biol?gico complexo, com dois hospedeiros intermedi?rios e s?tio final de infec??o restrito ao l?men intestinal de seus hospedeiros definitivos. Estes hospedeiros s?o representados principalmente por aves aqu?ticas e semi-aqu?ticas, mam?feros, incluindo o homem, e ocasionalmente algumas esp?cies de r?pteis e peixes. Possuem como primeiros hospedeiros intermedi?rios moluscos l?mnicos, onde os mirac?dios penetram ativamente e desenvolvem at? os est?gios de esporocistos, r?dias e cerc?rias. Por sua vez, crust?ceos, anf?bios, peixes e moluscos l?mnicos atuam como segundos hospedeiros intermedi?rios onde ocorre a forma??o de metacerc?rias, est?gios infectantes ao hospedeiro definitivo. Neste estudo, Biomphalaria glabrata foi experimentalmente infectada com diferentes doses miracidiais (5 ou 50) de E. paraensei. Os moluscos foram dissecados ap?s uma, duas, tr?s e quatro semanas de infec??o para a coleta da hemolinfa e tecidos (complexo g?nada-gl?ndula digestiva- GGD e massa cefalopediosa). Na hemolinfa foram quantificadas as concentra??es de glicose e de ?cidos carbox?licos (succ?nico, pir?vico, l?tico e ox?lico), bem como a atividade da lactato desidrogenase (LDH). Nos tecidos de estocagem foram mensurados os conte?dos de glicog?nio e consumo de oxig?nio (O2). Altera??es foram observadas na glicemia dos moluscos, em ambas as situa??es de parasitismo, com significativo aumento dos n?veis de glicose verificado a partir da terceira semana de infec??o quando comparado ao grupo controle. Mudan?as foram tamb?m descritas em rela??o ? atividade da lactato desidrogenase, sendo caracterizadas pelo aumento de sua atividade nos per?odos mais tardios da infec??o. Em paralelo, verificou-se um decr?scimo nos conte?dos de glicog?nio em tecidos de armazenamento, sendo tal redu??o maior na gl?ndula digestiva (s?tio de desenvolvimento larval), em compara??o ? massa cefalopediosa. A infec??o por ambas as doses miracidiais ainda resultou em um aumento dos n?veis de ?cidos ox?lico e l?tico, bem como em um decl?nio nos conte?dos de ?cidos pir?vico e succ?nico em B. glabrata. Significativa supress?o no estado fosforilativo (estado 3 respirat?rio) e no consumo basal de oxig?nio (estado 1 e 2) em B. glabrata infectada por E. paraensei foi demonstrada, indicando que a infec??o por este equinostomat?deo diminui a capacidade do hospedeiro intermedi?rio em realizar rea??es oxidativas aer?bias. Varia??es relevantes relacionadas ao estado mitocondrial desacoplado (estado 3u) de B. glabrata infectada por tal tremat?deo foram tamb?m descritas. Tais resultados demonstram redu??o na taxa de descarboxila??o oxidativa das rea??es que integram o ciclo do ?cido tricarbox?lico e acelera??o do processo de degrada??o anaer?bia de carboidratos nos moluscos infectados, atrav?s da fermenta??o l?tica, essencial para garantir a obten??o de energia e o sucesso da infec??o. Assim, os resultados observados neste estudo demonstram que a infec??o com cinco ou 50 mirac?dios de E. paraensei provocou consider?veis altera??es metab?licas em B. glabrata, sendo que os moluscos expostos a maior carga miracidial apresentaram os maiores danos, caracterizando uma resposta dosedependente.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2013-11-25T12:02:40Z No. of bitstreams: 1 michele_m_santos_ioc_bp_mest_2009.pdf: 2742660 bytes, checksum: 102bef0251233e5e7b6e13cdf0d61433 (MD5) / Approved for entry into archive by Gentil Jeorgina(jeorgina@icict.fiocruz.br) on 2013-11-26T10:59:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 michele_m_santos_ioc_bp_mest_2009.pdf: 2742660 bytes, checksum: 102bef0251233e5e7b6e13cdf0d61433 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-15T13:26:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 michele_m_santos_ioc_bp_mest_2009.pdf: 2742660 bytes, checksum: 102bef0251233e5e7b6e13cdf0d61433 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Estudos acerca da interação molusco-parasito são relevantes para o entendimento dos mecanismos pelos quais algumas espécies ou linhagens de moluscos apresentam-se resistentes ou suscetíveis à infecção a determinados trematódeos. Neste trabalho, Biomphalaria glabrata (isolado do município de Sumidouro, RJ) e as linhagens Biomphalaria tenagophila (isolado do município de São José dos Campos, SP) e Biomphalaria tenagophila (isolado da Reserva do Taim, RS) foram observados após a infecção por Echinostoma paraensei quanto à mortalidade, taxa de infecção, fecundidade e fertilidade. Além disso, estudos histológicos foram realizados no intuito de observar a reação do sistema de defesa interno destes hospedeiros ao parasito. Em relação à suscetibilidade, B. glabrata (SU) foi a mais suscetível, tendo moluscos eliminando cercárias em todas as doses de miracídios, seguida por B. tenagophila (Taim) e B. tenagophila (SJC). A taxa de infectividade foi maior na primeira espécie seguida por B. tenagophila (Taim). Nestas a infectividade se mostrou dependente da dose de miracídios utilizada, ou seja, quanto maior a dose de miracídios, maior a taxa de moluscos infectados. Por outro lado, B. tenagophila (SJC) foi a menos suscetível, apresentando a menor taxa de infectividade, a qual foi dependente da dose de miracídios utilizada. Em relação à mortalidade, B. tenagophila (Taim) apresentou as menores taxas, seguida por B. glabrata (SU). Entretanto B. tenagophila (SJC) apresentou as maiores taxas de mortalidade. As doses de miracídios utilizadas não influenciaram no número de cercárias eliminadas. A fecundidade e fertilidade foram influenciadas pela infecção. Nos moluscos que eliminaram cercárias houve uma redução na fecundidade e na fertilidade, enquanto a maioria dos moluscos que não eliminou cercárias apresentou fecundidade e fertilidade similares às dos controles não expostos a miracídios, suportando a hipótese de interferência parasitária na biologia do molusco. / Studies on the snail-trematode interaction are relevant to the knowledge of the mechanisms by wich some molluscs species or strains become susceptible or resistant to determinated trematode infections. In this work, the mortality rate, infectivity rate, fecundity and fertility of Biomphalaria glabrata (isolate from Sumidouro, RJ) and of the strains Biomphalaria tenagophila (isolate from São José dos Campos, SP) and Biomphalaria tenagophila (isolado da Reserva do Taim, RS) were observed after exposure to Echinostoma paraensei miracidia. In adition, studies on the molluscs histology were made to observe possible reactions of hosts´ internal defense system to the parasite. In relation to the susceptibility, B. glabrata (SU) was the most susceptible of the species studied, in this specie cercarial emergency occured in molluscs of all the miracidia challenge doses, followed by B. tenagophila (Taim) and B. tenagophila (SJC). The infectivity rate was higher in B. glabrata (SU), followed by B. tenagophila (Taim). In these species, the infectivity rate was miracidia dose dependent. Otherwise, B. tenagophila (SJC) was the less susceptible specie presenting the lowest infectivity rates wich were miracidia dose dependent. About mortality, while B. tenagophila (Taim) had the lowest rates, followed by B. glabrata (SU), B. tenagophila (SJC) had the highest mortality rates. Miracidia doses of the challenge did not influenciated the number of cercariae release. The infection has influenciated molluscs´ fecundity and fertility. In molluscs wich had cercarial emergency, a reduction on fecundity and fertility was observed, while most of the molluscs that did not present cercarial emergency had fecundity and fertility similar to the controls not exposed. These results suport the hypotesis of trematode interferences on hosts biology

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2018-01-26T12:38:56Z No. of bitstreams: 1 2010 - Juberlan Silva Garcia.pdf: 6866273 bytes, checksum: 77b115c7b87deb998b7440f5ecb87940 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-26T12:38:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010 - Juberlan Silva Garcia.pdf: 6866273 bytes, checksum: 77b115c7b87deb998b7440f5ecb87940 (MD5) Previous issue date: 2010-12-03 / The trematode Echinostoma paraensei parasitizes the small intestine of rodents, being its natural definitive host Nectomys squamipes. In spite of the great importance of echinostomatides, there are few studies on morphology, biology and physiology of E. paraensei and its interaction with their intermediate and definitive hosts. In the present study 50 Rattus norvegicus (Wistar),adult females were used, 35 were individually infected with 150 E. paraensei metacercariae (Sumidouro strain) and 15 were maintained uninfected, as control group. Weekly, seven infected and three uninfected rodents were euthanized using CO2.The blood was collected to hematological analysis, and serum obtained by centrifugation and used to aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ALKP), gamma-glutamyl transferase (GGT), bilirubin, glucose, total proteins and fractions determinations. Fragments of liver were collected to glycogen determination and histophatological analysis. Adult worms were loaded until third week of infection, being the higher number of worms loaded at first week of inection. The hepatocytes had rounded edges, with signs of impaired nuclear, mild infiltration of polymorphonuclear and sinusoids slightly expanded. The hepatocytes were vacuolated with discrete perivascular and periportal lymphocytic infiltration. The serum biochemical parameters analyzed were increased at the first week of infection, varying onward. Hematological analysis revealed the development of normocytic and normocromic anaemia with anisocytic alteration. In the white blood cells, only a leukopenia was observed at the third week of infection. The present results are discussed. / O tremat?deo Echinostoma paraensei ? um parasito de intestino delgado de roedores, sendo seu hospedeiro definitivo natural Nectomys squamipes. No presente estudo, foram utilizadas 50 f?meas adultas de Rattus norvegicus (Wistar), 35 animais infectados individualmente com 150 metacerc?rias de E. paraensei (linhagem Sumidouro) e 15 animais n?o infectados (controle). Semanalmente, sete animais infectados e tr?s animais controle foram submetidos ? eutan?sia com CO2. O sangue foi coletado para an?lise hematol?gica, e o soro obtido por centrifuga??o, para as determina??es de aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), gamaglutamiltransferase (GGT), fosfatase alcalina (ALKP), bilirrubina, glicose, prote?nas totais e fra??es. Fragmentos de f?gado foram coletados para a determina??o de glicog?nio e para a an?lise histopatol?gica. Vermes adultos foram recuperados at? a terceira semana de infec??o, sendo o maior n?mro de vermes recuperados na primeira semana. Os hepat?citos apresentavam-se com bordos arredondados e alguns sinais de comprometimento nuclear, infiltra??o por polimorfonucleares nos sinus?ides, vacuoliza??o, discreta infiltra??o linfoplasmocit?ria perivascular e periportal com poucas c?lulas mononucleares presentes na luz do ducto biliar, alguns hepat?citos estavam hipotrofiados. As an?lises hematol?gicas revelaram o desenvolvimento de uma anemia normoc?tica normocr?mica, com anisocitose. N?o foram observadas altera??es significativas na s?rie branca, havendo apenas uma leucopenia na terceira semana de infec??o. Os resultados obtidos s?o discutidos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O conhecimento da morfologia e ultraestrutura dos helmintos permite a correta classificação destes organismos, bem como fornece subsídios que poderão ser utilizados para diagnóstico e controle. A microscopia laser confocal é uma ferramenta para estudar a organização estrutural de várias espécies de helmintos, possibilitando acesso a detalhes morfológicos não evidenciados pela microscopia óptica. Echinostoma paraensei é um trematódeo, digenético, hermafrodita parasito de numerosos hospedeiros vertebrados. Neste trabalho foi investigado o desenvolvimento dos órgãos reprodutivo e a morfometria de E. paraensei, desde a fase jovem até a adulta, como contribuição ao conhecimento do desenvolvimento reprodutivo desta espécie. Os trematódeos foram recuperados aos 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14 e 21 dias posterior à infecção (dpi) experimental em hamsters. Estes foram corados em carmim clorídrico, desidratados em série alcoólica e montados em lâmina permanente em bálsamo do Canadá, fotografados e medidos usando microscopia de luz de campo claro (MCC) e microscopia de varredura laser confocal (MVLC). Entre 3 e 4 dpi, os primórdios genitais estavam presentes e nenhuma organização do sistema reprodutivo foi visualizada por MCC e MVLC. Os primórdio do ovário, dos testículos e da bolsa do cirro foram visualizados por MCC aos 5 e 6 dpi, no entanto, MVLC dos helmintos aos 5dpi mostra que estes primórdios, o ootipo e o útero estavam presentes, como estruturas individualizadas. A bolsa do cirro apresenta metratermo e o ovário com primórdio do oótipo adjacente aos 7dpi por MVLC. A vesícula seminal, receptáculo seminal, células diferenciadas nos testículos, ducto e reservatório vitelínico e oviducto foram visualizados após 10 dias, enquanto os espermatozóides na vesícula seminal, ovos e oócitos, células vitelínicas, poro e canal de Laurer aos 14 dias. A morfometria evidencia um acelerado crescimento dos órgãos reprodutores a partir do 7 dia. Os testículos apresentam aumento significativo no comprimento do 7 ao 21 dia e o ovário durante o período de 7 à 10 dpi. Aos 21 dpi, todos os helmintos apresentaram glândulas vitelínicas, útero contendo ovos e espermatozóides no oviducto enquanto outros ovos estão sendo formados. As mudanças morfológicas acentuadas durante a gametogênese consistem no aumento do comprimento do helminto, maturação das gônadas, desenvolvimento e maturação das glândulas vitelínicas. O desenvolvimento do helminto como um todo está relacionado à maturação dos órgãos reprodutivo masculino e feminino indicando o investimento deste trematódeo em garantir a produção e eliminação dos ovos ao meio exterior. / The knowledge about morphology and ultra structure of helminthes are great importance in correct classification these organisms. The Scanning Laser Microscopy (LSM) is an important tool to study the structural organization of several helminthes species. Echinostoma paraensei is a trematode, digenetic, hermaphroditic parasite of several hosts. In this study, the development of reproductive organs and the morphometry of E. paraensei from young stage to adult worm were investigated, to contribute knowledge of the reproductive development of this specie. The trematodes were recovered on 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14 and 21 days post infection (dpi) from experimental hamsters. It were dehydrated in alcohol series, stained with hydrochloric carmine, mounted on permanent slide using Canada balsam, photographed and measured using light microscopy (LM) and Scanning Laser Microscopy (LSM). Between 3 and 4 dpi the genital anlage were present and were not observed reproductive system organization by either LM and LSM. The anlage of ovary, testes and Cirruss sac were seen at 5 and 6dpi by LM, however LSM from 5dpi image shows theses anlage, ootype and uterus are present as individualized structure. Cirrus sac showed metraterm and ootype adjacent to primordial ovary were seen at 7 dpi by LSM. The seminal vesicle, seminal receptacle, differentiated cells in the testes, viteline ducts and oviduct were visualized after 10 days infection, while sperms in seminal vesicle, eggs, oocyte, Laurer canal and pore from 14 dpi by LSM. The morphometry shows a rapid growth of reproductive organs from 7th day. The testes have significantly increased length from 7 until 21dpi and ovary from 7 until 10dpi. All helminthes showed vitellines glands, uterus contained eggs and sperm in oviduct while another eggs were forming at 21 dpi. The marked morphologic changes during gametogenesis are increase of body length of helminthes, gonad maturation and development and maturation of vitelline glands. The development of helminthes as a whole is related to maturation of female and male organs of reproductive system showing the investment this trematode taken to ensuring the production, maintenance and delivery the eggs to external environment.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 522894 bytes, checksum: 671c96196d8b0b7e8b4f7498d0e04248 (MD5) Previous issue date: 2014-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Echinostoma paraensei is a trematode of the genus Echinostoma that can cause echinostomiasis in humans. The aims of this study were to evaluate the ovicidal activity of the isolates VC1 and VC4 of the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia on solid medium containing 2% water-agar(2% WA) on eggs of E. paraensei, selecting the most efficient isolate (assay A), evaluate the ovicidal effect (destruction of eggs) of most effective isolate on supplemented agar culture media (assay B), and to evaluate the ovicidal capacity of crude enzymatic extract of most effective isolate on E. paraensei eggs (assay C). One thousand eggs of E. paraensei (assay A) were placed in Petri dishes containing 2% WA with one isolate of fungus P. chlamydosporia (VC1 or VC4) grown for 10 days, and without fungus as control. Both the treated and control group consisted of six replicates. After 15 days, approximately one hundred eggs were removed from each dish and classified according to the following parameters: type 1 effect, physiological effect without morphological damage to eggshell, where hyphae are observed attached to the shell; type 2 effect, lytic effect with morphological alteration of embryo and egg shell with hyphal penetration through the shell; and type 3 effect, lytic effect with morphological alteration of embryo and eggshell, in addition to hyphal penetration and internal egg colonization. In assay B, E. paraensei eggs were placed in Petri dishes with different supplemented agar culture media: 2% chitin- agar (2% AC), 2% corn-meal-agar (2% CMA), 2% WA and 2% starch- agar (2% SSA) with isolate VC4 (the most effective); in control group were not used fungus. Each treatment consisted of six replicates. After 25 days, one hundred eggs were removed from each dish and the ovicidal effect was evaluated according to the parameters already mentioned. In assay C, one thousand E. paraensei eggs were poured into Petri dishes with 5 ml of isolate VC4 crude extract constituting the treated group. The control group contained one thousand eggs in 10 ml of distilled water in Petri dishes. Each treatment consisted of six replicates. After 7 days, the total number of E. paraensei eggs present on each dish of the treated and control groups were counted according to the methodology described by Mukhtar and Pervaz. In assay A, there was no difference (p > 0.05) in ovicidal activity among the tested isolates; however, the highest percentage for ovicidal activity (type 3 effect) was demonstrated by the isolate VC4. In assay B, the culture medium starch agar showed the best results for the destruction of the eggs at the end of 25 days of interaction, with a percentage of 46.6%. In assay C, the crude extract of VC4 was effective in the destruction of E. paraensei eggs at the end of 7 days, with a percentage reduction of 53%. Results of in vitro experimental assay A, B and C have shown that P. chlamydosporia (VC1 and VC4) had negative influence on the E. paraensei eggs, and thus can be considered as a potential candidate for the biological control of this helminth. / Echinostoma paraensei é um trematóide do gênero Echinostoma que pode causar a equinostomíase em humanos. Os objetivos desse trabalho foram avaliar a atividade ovicida dos isolados VC1 e VC4 do fungo nematófago Pochonia chlamydosporia em meio sólido ágar- água 2% sobre ovos de Echinostoma paraensei, selecionando o isolado mais eficaz (ensaio A); avaliar o efeito ovicida (destruição dos ovos) do isolado mais eficaz em meios de cultura ágar suplementados (ensaio B) e avaliar a capacidade ovicida do extrato bruto enzimático do melhor isolado sobre ovos de E. paraensei (ensaio C). Mil ovos de E. paraensei (ensaio A) foram colocados em placas de Petri contendo ágar-água 2% (AA 2%) com um isolado do fungo P. chlamydosporia crescido (VC1 ou VC4) durante 10 dias, e sem fungo como controle. Seis repetições foram feitas para ambos o grupo tratado e controle. Após 15 dias, cerca de cem ovos foram retirados de cada placa e classificados de acordo com os seguintes parâmetros: tipo 1, efeito fisiológico sem prejuízo morfológico à casca do ovo, onde hifas são observadas aderidas à casca; tipo 2, efeito lítico com alteração morfológica da casca e embrião do ovo, com penetração de hifas através da casca; e tipo 3 efeito lítico com alteração morfológica do embrião e da casca, além de penetração de hifas e colonização interna do ovo. No ensaio B, ovos de E. paraensei foram colocados em placas de Petri com diferentes meios de cultura ágar suplementados: ágar-quitina 2% (AQ 2%), corn-meal-ágar 2% (CMA 2%), ágar-água 2% (AA 2%) e ágar- amido 2% (SSA 2%) com o isolado VC4 (o mais eficaz), no grupo controle não foram utilizados fungos. Seis repetições foram feitas para cada tratamento. Depois de 25 dias, cem ovos foram retirados de cada placa e o efeito ovicida foi avaliado de acordo com os parâmetros já citados. No ensaio C, mil ovos de E. paraensei foram vertidos para placas de Petri com 5ml de extrato bruto do isolado VC4 constituindo o grupo tratado. O grupo controle tinha 1.000 ovos em 10 ml de água destilada nas placas de Petri. Cada tratamento foi constituído por seis repetições. Após 7 dias, foram contados o número total de ovos de E. paraensei presentes em cada placa dos grupos tratado e controle de acordo com a metodologia descrita por Mukhtar e Pervaz. No ensaio A, foi observado que não houve diferença (p>0,05) na atividade ovicida entre os isolados testados, contudo, o maior percentual para a atividade ovicida (efeito do tipo 3) foi demonstrado pelo isolado VC4. No ensaio B, o meio de cultura ágar- amido 2% (SSA 2%) apresentou os melhores resultados para a destruição dos ovos ao final de 25 dias de interação, com um percentual de 46.6%. No ensaio C, o extrato bruto de VC4 demonstrou ser eficaz na destruição dos ovos de E. paraensei ao final de 7 dias com um percentual de redução de 53%. Os resultados dos ensaios experimentais in vitro A, B e C demonstraram que P. chlamydosporia (VC1 e VC4) influenciou de forma negativa sobre os ovos de E. paraensei, e assim pode ser considerado como um potencial candidato a controlador biológico desse helminto.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O conhecimento da morfologia e ultraestrutura dos helmintos permite a correta classificação destes organismos, bem como fornece subsídios que poderão ser utilizados para diagnóstico e controle. A microscopia laser confocal é uma ferramenta para estudar a organização estrutural de várias espécies de helmintos, possibilitando acesso a detalhes morfológicos não evidenciados pela microscopia óptica. Echinostoma paraensei é um trematódeo, digenético, hermafrodita parasito de numerosos hospedeiros vertebrados. Neste trabalho foi investigado o desenvolvimento dos órgãos reprodutivo e a morfometria de E. paraensei, desde a fase jovem até a adulta, como contribuição ao conhecimento do desenvolvimento reprodutivo desta espécie. Os trematódeos foram recuperados aos 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14 e 21 dias posterior à infecção (dpi) experimental em hamsters. Estes foram corados em carmim clorídrico, desidratados em série alcoólica e montados em lâmina permanente em bálsamo do Canadá, fotografados e medidos usando microscopia de luz de campo claro (MCC) e microscopia de varredura laser confocal (MVLC). Entre 3 e 4 dpi, os primórdios genitais estavam presentes e nenhuma organização do sistema reprodutivo foi visualizada por MCC e MVLC. Os primórdio do ovário, dos testículos e da bolsa do cirro foram visualizados por MCC aos 5 e 6 dpi, no entanto, MVLC dos helmintos aos 5dpi mostra que estes primórdios, o ootipo e o útero estavam presentes, como estruturas individualizadas. A bolsa do cirro apresenta metratermo e o ovário com primórdio do oótipo adjacente aos 7dpi por MVLC. A vesícula seminal, receptáculo seminal, células diferenciadas nos testículos, ducto e reservatório vitelínico e oviducto foram visualizados após 10 dias, enquanto os espermatozóides na vesícula seminal, ovos e oócitos, células vitelínicas, poro e canal de Laurer aos 14 dias. A morfometria evidencia um acelerado crescimento dos órgãos reprodutores a partir do 7 dia. Os testículos apresentam aumento significativo no comprimento do 7 ao 21 dia e o ovário durante o período de 7 à 10 dpi. Aos 21 dpi, todos os helmintos apresentaram glândulas vitelínicas, útero contendo ovos e espermatozóides no oviducto enquanto outros ovos estão sendo formados. As mudanças morfológicas acentuadas durante a gametogênese consistem no aumento do comprimento do helminto, maturação das gônadas, desenvolvimento e maturação das glândulas vitelínicas. O desenvolvimento do helminto como um todo está relacionado à maturação dos órgãos reprodutivo masculino e feminino indicando o investimento deste trematódeo em garantir a produção e eliminação dos ovos ao meio exterior. / The knowledge about morphology and ultra structure of helminthes are great importance in correct classification these organisms. The Scanning Laser Microscopy (LSM) is an important tool to study the structural organization of several helminthes species. Echinostoma paraensei is a trematode, digenetic, hermaphroditic parasite of several hosts. In this study, the development of reproductive organs and the morphometry of E. paraensei from young stage to adult worm were investigated, to contribute knowledge of the reproductive development of this specie. The trematodes were recovered on 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14 and 21 days post infection (dpi) from experimental hamsters. It were dehydrated in alcohol series, stained with hydrochloric carmine, mounted on permanent slide using Canada balsam, photographed and measured using light microscopy (LM) and Scanning Laser Microscopy (LSM). Between 3 and 4 dpi the genital anlage were present and were not observed reproductive system organization by either LM and LSM. The anlage of ovary, testes and Cirruss sac were seen at 5 and 6dpi by LM, however LSM from 5dpi image shows theses anlage, ootype and uterus are present as individualized structure. Cirrus sac showed metraterm and ootype adjacent to primordial ovary were seen at 7 dpi by LSM. The seminal vesicle, seminal receptacle, differentiated cells in the testes, viteline ducts and oviduct were visualized after 10 days infection, while sperms in seminal vesicle, eggs, oocyte, Laurer canal and pore from 14 dpi by LSM. The morphometry shows a rapid growth of reproductive organs from 7th day. The testes have significantly increased length from 7 until 21dpi and ovary from 7 until 10dpi. All helminthes showed vitellines glands, uterus contained eggs and sperm in oviduct while another eggs were forming at 21 dpi. The marked morphologic changes during gametogenesis are increase of body length of helminthes, gonad maturation and development and maturation of vitelline glands. The development of helminthes as a whole is related to maturation of female and male organs of reproductive system showing the investment this trematode taken to ensuring the production, maintenance and delivery the eggs to external environment.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-05-02T21:37:15Z No. of bitstreams: 1 2016 - Tatiane Cristina dos Santos Bonfim.pdf: 2465996 bytes, checksum: 94f74695ec8fd235bfbcd7f4a82aec87 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-02T21:37:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016 - Tatiane Cristina dos Santos Bonfim.pdf: 2465996 bytes, checksum: 94f74695ec8fd235bfbcd7f4a82aec87 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / CNPq / The interaction between intermediate hosts and helminths can cause metabolic and reproductive changes in the host snail, they start using their reserves to maintain its vital functions, immune system activation, repair of tissue damage and also to supply the necessary energy for the parasites development. Investigations of co-infection by different helminths can provide essential information about the biology of their co-existence. Our aims are investigate the reproductive changes, evaluate the activity of lactate dehydrogenase and the concentrations of glucose in the hemolymph and glycogen in the digestive gland complex and cephalopedal mass, and also verify histological and histochemical changes of Biomphalaria glabrata experimentally co-infected with Echinostoma paraensei and Angiostrongylus cantonensis. Five groups of snails i.e. uninfected, with single and double infections, either E. paraensei first (E+A) or A. cantonensis first (A+E) were followed; three times a week during four weeks the numbers of egg masses, eggs and hatched snails were counted. Histological and histochemical samples of the ovotestis, albumen gland, digestive gland complex and cephalopedal mass were collected after four weeks as well samples for the biochemical analysis. The number of egg masses/snail, eggs/snail and hatched snails showed significant differences comparing the control group to all infected groups, especially in group E + A, with the majority of values of parameters analyzed lower than 50% of those observed for control snails. A significant decrease in glucose levels and glycogen content, in contrast an increase of lactate dehydrogenase activity was observed in the infected snails. These results indicate intense energy demand that takes the snail increasing the anaerobic degradation of carbohydrates in the infected snails to obtain energy in an attempt to maintain homeostasis. The histological analysis showed that presence of both parasites in the all organs analyzed and the parasites were associated with cell disorganization. / A intera??o entre hospedeiros intermedi?rios e helmintos pode causar altera??es metab?licas e reprodutivas no molusco hospedeiro, que come?am a usar suas reservas para manter as fun??es vitais, na elabora??o de resposta imunol?gica e repara??o de danos teciduais e tamb?m para compensar a drenagem de nutrientes/energia pelos parasitos em desenvolvimento. Investiga??es sobre as co-infec??es por helmintos de esp?cies diferentes podem fornecer informa??es essenciais sobre a biologia da sua co-exist?ncia, refletindo aspectos mais pr?ximos ?queles que encontramos em condi??es naturais. Nossos objetivos foram investigar as altera??es reprodutivas, avaliar a atividade da lactato desidrogenase e as concentra??es de glicose na hemolinfa e glicog?nio no complexo gl?ndula digestiva-g?nada e massa cefalopediosa, e tamb?m verificar altera??es histol?gicas e histoqu?micas de Biomphalaria glabrata experimentalmente co-infectados com Echinostoma paraensei e Angiostrongylus cantonensis. Cinco grupos de moluscos (n?o infectados, com infec??es simples (Echinostoma paraensei ou Angiostrongylus cantonensis) e dupla, seja E. paraensei primeiro (E + A) ou A. cantonensis primeiro (A + E)) foram acompanhados; tr?s vezes por semana durante quatro semanas o n?mero de massas de ovos, n?mero de ovos e n?mero de moluscos eclodidos foram contados. Amostras para a an?lise histol?gica e histoqu?mica do ovoteste, gl?ndula do alb?men, complexo gl?ndula digestiva e massa cefalopediosa foram coletadas ap?s quatro semanas, assim como amostras para a an?lise bioqu?mica. O n?mero de massas de ovos/molusco, ovos/molusco e moluscos eclodidos dos moluscos infectados apresentaram diferen?as significativas quando comparados com o grupo controle, especialmente no grupo E + A, cuja a maioria dos valores dos par?metros analisados foi inferior a 50% dos valores observados para os moluscos controle. Um decr?scimo significativo nos n?veis de glicose e de glicog?nio, em contraste com um aumento de atividade da lactato desidrogenase foi observado nos exemplares infectados. Estes resultados indicam que a demanda de energia intensa leva o molusco infectado ao aumento da degrada??o anaer?bia de carboidratos para obten??o de energia buscando atender ao aumento da demanda energ?tica, numa tentativa de manter a homeostase glic?mica, por?m redu??es significativas s?o observadas. As an?lises histol?gicas e histoqu?micas mostraram a presen?a de ambos os parasitos nos ?rg?os analisados associados com intensa desorganiza??o celular.