Latent feline leukemia virus (FeLV) infections, in which proviral DNA is integrated into host DNA, but not actively transcribed, are suspected to be associated with many diseases. Bone marrow is the suspected site of the majority of latent infections. The purpose of this study was to determine if polymerase chain reaction (PCR) could detect FeLV proviral DNA in bone marrow and provide a method of detecting latent infections. Blood and bone marrow samples from fifty cats and bone marrow from one fetus were collected; sixteen had FeLV-associated diseases. Serum ELISA, blood and bone marrow immunofluorescent antibody test (IFA), and blood and bone marrow PCR were performed on each cat, and IFA and PCR on bone marrow of the fetus. Forty-one cats were FeLV negative. Five cats and one fetus were persistently infected with FeLV. Four cats were discordant; two ELISA positive with other tests negative, one bone marrow IFA negative with other tests positive, and one bone marrow IFA positive with other tests negative. No cats were positive on bone marrow PCR only. These results indicate that PCR can detect FeLV in bone marrow, but no cats in this study harbored FeLV only in the bone marrow. Not all cats with FeLV-associated diseases are persistently or latently infected with FeLV. / Master of Science

A manutenção da infecção latente pelo M. tuberculosis (TBIL) pode ser atribuída à sua capacidade de sobreviver durante anos no organismo humano em um estado não replicativo (dormente). A proteína HspX do M. tuberculosis, induzida sob condições de hipóxia, está fortemente associada com a manutenção da viabilidade do bacilo na TBIL. O presente estudo tem como objetivo, verificar se a superexpressão da proteína HspX altera a expressão de genes envolvidos com a síntese de componentes da parede celular, replicação do DNA e divisão celular de bacilos, assim como, na expressão de genes envolvidos com a resposta imune inata em macrófagos infectados com esses bacilos. O gene hspX foi amplificado pela PCR a partir do DNA do M. tuberculosis H37Rv, clonado no vetor de expressão pFPCA1GFP, e a proteína HspX expressa em M. smegmatis mc2155. As bactérias, nas quais, a presença da proteína recombinante foi confirmada por Western Blot, foram utilizadas, para a análise de expressão gênica tanto em bactérias quanto em macrófagos infectados. O estudo de expressão gênica foi realizado utilizando a RT-qPCR. Quando comparado aos controles, as bactérias que expressavam a proteína HspX apresentaram uma redução na expressão de genes de replicação do DNA e divisão celular, que foi acompanhado por uma tendência a filamentação das células e uma redução no tamanho das colônias. Além disso, nos macrófagos infectados com a bactéria expressando a proteína HspX, houve um aumento tanto da expressão do mRNA quanto da secreção de IL-1b, citocina importante para estabilização do granuloma, e uma redução na expressão de IRGM, gene relacionado com o processo autofágico, importante mecanismo de defesa do hospedeiro contra bactérias intracelulares. Portanto, em conjunto, essas alterações de expressão gênica, em consequência da presença da proteína HspX sugerem uma contribuição, direta ou indireta, dessa proteína para a adaptação morfológica e metabólica da bactéria dormente durante a TBIL, e consequentemente, para a resposta imune inata dos macrófagos infectados favorecendo a viabilidade intracelular dessas bactérias. / The maintenance of Mycobacterium tuberculosis infection latent (TBIL) may be attributed to its ability to persist for years in the host in a non-replicative state (dormant). The HspX protein from M. tuberculosis, induced under hypoxic, is strongly associated with maintaining the bacillus viability in TBIL. This study aims to determine if HspX overexpression chances the expression of genes involved in the synthesis of cell wall components, DNA replication and cell division of bacilli, as well as, the expression of genes involved in innate immune response of macrophages infected. The gene hspX was amplified by PCR from DNA of M. tuberculosis H37Rv, and cloned into the expression vector pFPCA1GFP. The HspX was expressed in M. smegmatis mc2155 and the recombinant protein was confirmed by Western blot. The bacterias expressing HspX were used for gene expression analysis both in bacteria and in infected macrophages by RT-PCRq. In bacterias expressing HspX, it was observed a reduction in expression of genes involved in DNA replication and cell division, and with cells more filamentous and smaller colonies, compared with controls. In addition, in macrophages infected with bacillus expressing HspX, there was an increase in both mRNA expression and secretion of IL-1b, an important cytokine for granuloma stability, and a reduction in expression of IRGM, an autophagic gene, important for host defense mechanism against intracellular bacteria. Together, these results suggest a direct or indirect contribution of HspX protein for metabolic and morphological adaptation of dormant bacteria in TBIL, and for the innate immune response in infected macrophages, improving the bacteria intracellular viability.

A manutenção da infecção latente pelo M. tuberculosis (TBIL) pode ser atribuída à sua capacidade de sobreviver durante anos no organismo humano em um estado não replicativo (dormente). A proteína HspX do M. tuberculosis, induzida sob condições de hipóxia, está fortemente associada com a manutenção da viabilidade do bacilo na TBIL. O presente estudo tem como objetivo, verificar se a superexpressão da proteína HspX altera a expressão de genes envolvidos com a síntese de componentes da parede celular, replicação do DNA e divisão celular de bacilos, assim como, na expressão de genes envolvidos com a resposta imune inata em macrófagos infectados com esses bacilos. O gene hspX foi amplificado pela PCR a partir do DNA do M. tuberculosis H37Rv, clonado no vetor de expressão pFPCA1GFP, e a proteína HspX expressa em M. smegmatis mc2155. As bactérias, nas quais, a presença da proteína recombinante foi confirmada por Western Blot, foram utilizadas, para a análise de expressão gênica tanto em bactérias quanto em macrófagos infectados. O estudo de expressão gênica foi realizado utilizando a RT-qPCR. Quando comparado aos controles, as bactérias que expressavam a proteína HspX apresentaram uma redução na expressão de genes de replicação do DNA e divisão celular, que foi acompanhado por uma tendência a filamentação das células e uma redução no tamanho das colônias. Além disso, nos macrófagos infectados com a bactéria expressando a proteína HspX, houve um aumento tanto da expressão do mRNA quanto da secreção de IL-1b, citocina importante para estabilização do granuloma, e uma redução na expressão de IRGM, gene relacionado com o processo autofágico, importante mecanismo de defesa do hospedeiro contra bactérias intracelulares. Portanto, em conjunto, essas alterações de expressão gênica, em consequência da presença da proteína HspX sugerem uma contribuição, direta ou indireta, dessa proteína para a adaptação morfológica e metabólica da bactéria dormente durante a TBIL, e consequentemente, para a resposta imune inata dos macrófagos infectados favorecendo a viabilidade intracelular dessas bactérias. / The maintenance of Mycobacterium tuberculosis infection latent (TBIL) may be attributed to its ability to persist for years in the host in a non-replicative state (dormant). The HspX protein from M. tuberculosis, induced under hypoxic, is strongly associated with maintaining the bacillus viability in TBIL. This study aims to determine if HspX overexpression chances the expression of genes involved in the synthesis of cell wall components, DNA replication and cell division of bacilli, as well as, the expression of genes involved in innate immune response of macrophages infected. The gene hspX was amplified by PCR from DNA of M. tuberculosis H37Rv, and cloned into the expression vector pFPCA1GFP. The HspX was expressed in M. smegmatis mc2155 and the recombinant protein was confirmed by Western blot. The bacterias expressing HspX were used for gene expression analysis both in bacteria and in infected macrophages by RT-PCRq. In bacterias expressing HspX, it was observed a reduction in expression of genes involved in DNA replication and cell division, and with cells more filamentous and smaller colonies, compared with controls. In addition, in macrophages infected with bacillus expressing HspX, there was an increase in both mRNA expression and secretion of IL-1b, an important cytokine for granuloma stability, and a reduction in expression of IRGM, an autophagic gene, important for host defense mechanism against intracellular bacteria. Together, these results suggest a direct or indirect contribution of HspX protein for metabolic and morphological adaptation of dormant bacteria in TBIL, and for the innate immune response in infected macrophages, improving the bacteria intracellular viability.

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Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sandra Mary Jardim Gomes.pdf: 3616033 bytes, checksum: 466661a021314cea1a4f3a38493b1fd1 (MD5) Previous issue date: 2012-06-29 / Para o controle da Tuberculose (TB) uma das medidas utilizadas no Brasil é o tratamento da infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis (ILTB), que é feita nos Programas de Controle de TB (PCT). A evolução da infecção para a doença durante a vida é estimada em 5-10% em relação a um adulto imunocompetente, porém, na criança estima-se 43%. Esta pesquisa foi um estudo observacional, analítico, que objetivou analisar o perfil epidemiológico e os fatores relacionados ao abandono do tratamento da ILTB. Foram analisados os indivíduos até 15 anos de idade que estavam em tratamento para ILTB, nos PCT dos municípios prioritários, ou seja, os mais populosos da Grande Vitória: Vitória, Vila Velha, Serra e Cariacica, nos locais que utilizam a ficha de notificação do tratamento da ILTB. A ficha foi utilizada como instrumento de coleta dos dados. O período pesquisado foi de julho de 2009 a agosto de 2010. Foram encontrados 144 indivíduos em tratamento para ILTB, sendo 140 (97,22%), a indicação foi de serem contatos de TB, 46 (31,94%) abandonaram o tratamento, e 98 (68,06%) concluíram o tratamento. A maioria dos indivíduos era contato de TB, e quando foi analisada a situação da baciloscopia (BAAR) do caso índice do contato, a maioria tanto do grupo que abandonou, quanto do grupo que concluiu o tratamento, 97,62% e 87,91% (p=0,06), respectivamente, eram positivos. Quanto ao tipo de contato, o domiciliar foi o mais frequente, e também entre os dois grupos, tanto os que abandonaram quanto os que concluíram, totalizaram 81,82% e 84,21% (p=0,72), respectivamente, seguidos de outros, que foram os tios, avós, que moravam próximos. As crianças e adolescentes avaliados tinham na sua maioria cicatriz da vacina BCG (Bacilo de Calmette e Guérin) presentes, e tinha na sua maioria o Rx de tórax normal. Analisou-se também se indivíduos adolescentes (≥10 anos), apresentaram mais chance de abandonar o tratamento da ILTB, em relação às crianças com menos de 10 anos de idade, pois as mesmas necessitam ajuda dos seus cuidadores para uso da medicação, porém, a maioria de ambos os grupos, concluíram o tratamento, adolescentes 75% e crianças 64,13% (p=0,17). Este estudo reforça a necessidade do controle dos contatos dos doentes da TB, identificando prioritariamente as crianças e adolescentes e desenvolvendo estratégias para a adesão ao tratamento da ILTB. O estudo também pode estimular a melhoria do sistema de notificação dos casos de tratamento da ILTB, já que, apesar da orientação do MS, a sua implantação ainda não foi padronizada / Controling of Tuberculosis (TB) one of the measures used in Brazil is the treatment of latent infection by Mycobacterium tuberculosis (ILTB), which is made in the TB Control Program (PCT). The evolution of the infection to disease during the life is estimated at 5-10% related to immunocompetent adult, however, in child is estimated 43%.This research was an observational and analytical study, which aimed to analyze the epidemiological profile and factors related to renunciation of treatment for ILTB. Individuals were analyzed until 15 years old who were undergoing treatment for ILTB, in the PCT of the priority municipalities of Vitória, Vila Velha, Serra and Cariacica, which are the sites that used the notification form of treatment for ILTB. The form was used as a tool for data collection. The research period was between July 2009 and August 2010. 144 individuals were found in treatment for ILTB, and 140 (97,22%), the majority of nomination was TB contacts, 46 (31.94%) abandoned the treatment, and 98 (68.06%) completed the treatment. Most individuals were contacts of TB, and when was analyzed the situation of the bacilloscopy (BAAR) of the index case of contact, the majority of both the group that left, and the group that completed treatment, 97,62% e 87,91% (p=0,06), respectively, were positive. Regarding the type of contact, the home was the most frequent, and also between the two groups, both those abandoned and those who completed, totaled 81,82% e 84,21% (p=0,72), respectively, followed by others, who were uncles, grandparents , who lived nearby. Children and teenagers were evaluated mostly had scar of BCG (Bacillus of Calmette and Guérin) present, and had mostly a normal chest X-ray. Teenagers (≥ 10 years old), were checked if they had more chances to leave the treatment of ILTB, comparing with less than 10 years old, because the same need caregivers help for use of medication, however, the majority of both groups, concluded the treatment, teenagers 75% and children 64,13% (p=0.17). This study reinforces the need to control the contacts of patients, identifying priority children and teenagers and developing strategies for treatment adherence. The study can also stimulate the improvement of notification s system since, despite the orientation of MOH, its implementation has not yet been standardized

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A interleucina-6 (IL-6) à uma importante citocina que exerce papel fundamental na imunopatogÃnese de diversas doenÃas infecciosas. O objetivo deste estudo foi investigar o nÃvel de produÃÃo sistÃmica de IL-6 e aferir o papel funcional do polimorfismo -174 G>C do gene dessa citocina em indivÃduos diagnosticados como portadores de infecÃÃo latente pelo Mycobacterium tuberculosis (ILTB). Para controle, foram utilizados dois grupos de comparaÃÃo: um deles composto por portadores de tuberculose pulmonar ativa (TB) e o outro formado por indivÃduos saudÃveis, doadores de sangue. O grupo ILTB foi composto por 15 indivÃduos, selecionados dentre os contactantes de portadores de TB pulmonar ativa, atendidos no Hospital SÃo Josà de DoenÃas Infecciosas e no Centro de SaÃde da FamÃlia AnastÃcio MagalhÃes. O grupo TB foi formado por 38 pacientes com TB pulmonar ativa, procedentes do Hospital de Messejana, Hospital de Maracanaà e Hospital Geral Dr. CÃsar Cals. O grupo de indivÃduos saudÃveis contava com 63 doadores voluntÃrios de sangue do Centro de Hematologia e Hemoterapia do CearÃ. A dosagem sÃrica de IL-6 foi realizada por meio de um ensaio imunoenzimÃtico (ELISA), com kit especÃfico fornecido pela Invitrogen Corporation. Para purificaÃÃo do DNA, foi utilizado o kit GFX Genomic Blood DNA Purification, da GE Healthcare. O polimorfismo -174G&#61614;C do gene da IL â 6 foi tipificado pela tÃcnica de reaÃÃo em cadeia da polimerase (PCR), utilizando-se iniciadores de sequÃncia especÃfica (PCR-SSP) (One-Lambda). As medianas de concentraÃÃes sÃricas de IL-6 para os grupos ILTB, TB e saudÃveis foram de, respectivamente, 1,7 pg/mL, 4,3 pg/mL e 0,5 pg/mL (p < 0,0001). Nos trÃs grupos estudados, o genÃtipo encontrado com maior frequÃncia foi o G/G [ILTB = (80%); TB = (58,9%); saudÃveis = (62,8%)]. Em conclusÃo, podemos inferir que a IL-6 deve desempenhar um papel importante na manutenÃÃo do estado de latÃncia, haja vista que sua concentraÃÃo, nos indivÃduos com ILTB, foi 3,4 vezes maior que no grupo saudÃvel. Ademais, constatamos que, na populaÃÃo estudada, o polimorfismo -174G&#61614;C nÃo se mostrou funcional no Ãmbito da infecÃÃo latente pelo Mycobacterium tuberculosis. / Interleukin-6 (IL-6) is an important cytokine involved in the pathogenesis of multiple infectious diseases. The aim of this study was to investigate the levels of IL-6 production and to correlate to the -174G>C polymorphism at the IL-6 gene in latent infection with M. tuberculosis (ILTB). As controls, two groups were used. One of them with active pulmonary tuberculosis (TB) patients and the other with healthy blood donors. ILTB group was composed by 15 individuals, selected among active pulmonary TB contacts seen at the Hospital SÃo Josà de DoenÃas Infecciosas and the Centro de SaÃde da FamÃlia AnastÃcio MagalhÃes. TB group had 38 patients with active pulmonary disease seen at the Hospital de Messejana, Hospital de Maracanaà and the Hospital Geral Dr. CÃsar Cals. The third group was composed by 63 healthy blood donors from the Centro de Hematologia e Hemoterapia do CearÃ. Serum levels of IL-6 were measured by an ELISA using specific kits from Invitrogen Corporation. For DNA purification a GFX Genomic Blood DNA Purification kit (GE Healthcare) was used. The -174G&#61614;C polymorphism was analyzed by a SSP-PCR method using One-Lambda kits. Median values of serum levels of IL-6 from ILTB, TB and healthy groups were, respectively, 1.7 pg/mL, 4.3 pg/mL and 0.5 pg/mL (p < 0.0001). For the three studied group, the most frequent genotype found was the G/G (ILTB = 80%; TB = 58.9%; saudÃveis = 62.8%). In conclusion, it is possible to consider that IL-6 should play an important role in the maintenance of latent infection state as its concentrations were 3.4 fold higher in ILTB group than that of healthy controls. Moreover, the -174G&#61614;C polymorpism was not functional in the ILTB group.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Bovine herpesvirus type 5 (BHV-5) is a major etiologic agent of meningo-encephalitis in cattle and establishes lifelong latent infection in trigeminal ganglia and also in other areas of the brain. Colonization of deep areas of the brain with latent viral DNA may have important implications on the pathogenesis of BHV-5 neurological infection upon reactivation. In this study, we investigated the distribution of BHV-5 DNA in the brain of experimentally infected rabbits a laboratory model for BHV-5 infection - prior and subsequently to virus reactivation, using a nested PCR for the glycoprotein B gene. Eighteen rabbits inoculated intranasally with a Brazilian BHV-5 isolate were divided in two groups: group A rabbits (n=8) were euthanized 60 days post-inoculation (pi) for tissue collection; group B (n=7) were submitted to dexamethasone administration at day 60pi for reactivation of latent infection and euthanized for tissue collection 60 days later. To compare, we used two groups of BHV-1-infected rabbits (C, n=3 and D, n=3), each group being submitted to one of the above treatments, respectively. In group A rabbits, viral DNA was consistently detected in trigeminal ganglia (8/8), frequently in cerebellum (6/8), anterior cortex, pons medulla (3/8) and only occasionally in thalamus (2/8), ventro-lateral, dorsal and posterior cortices, midbrain (1/8). In rabbits previously submitted to virus reactivation, viral DNA showed a broader distribution, being detected more frequently besides the TG (7/7) - in ventro-lateral (6/7) and posterior cortices (5/7), pons-medulla and thalamus (4/7) and midbrain (3/7). In contrast, rabbits inoculated with BHV-1 harbored latent viral DNA in a few tissues in addition to TG and did not show significant changes in distribution of viral DNA post-reactivation. These results demonstrate that latency by BHV-5 DNA and not BHV-1 DNA may be established in several areas of the brain of experimentally infected rabbits. Further, dexamethasone-induced virus reactivation is followed by a wider distribution of latent viral DNA, probably due to virus dissemination from the original sites. Thus, it is reasonable to speculate that reactivation of latent infection from deep areas of the brain may contribute to the recrudescence of neurological disease frequently observed upon reactivation of latent BHV-5 infection. / O herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) é um importante agente etiológico de meningoencefalite em bovinos e estabelece infecção latente em seus hospedeiros, principalmente nos gânglios dos nervos sensoriais. No entanto, a colonização de áreas profundas do cérebro com DNA viral pode ter implicações importantes na patogenia da infecção pelo BHV-5 após a reativação da infecção latente. Neste estudo, foi investigada a distribuição do DNA do BHV-5 no cérebro de coelhos infectados experimentalmente, antes e após a reativação da infecção latente, utilizando um nested-PCR para uma seqüência do gene da glicoproteína B. Dezoito coelhos infectados pela via intranasal com um isolado brasileiro de BHV-5 foram divididos em dois grupos: coelhos do grupo A (n=8) foram submetidos a eutanásia 60 dias pós inoculação (pi) para a coleta de tecidos; animais do grupo B (n=7) foram submetidos a administração de dexametasona no dia 60 pi. Para comparação foram utilizados dois grupos de coelhos inoculados com o BHV-1 (C, n=3 e D, n=3), cada grupo sendo submetido a um dos tratamentos acima, respectivamente. Nos animais do grupo A, o DNA viral foi consistentemente detectado no gânglio trigêmeo (8/8), freqüentemente no cerebelo (6/8), com menor freqüência na ponte e córtex anterior (3/8) e ocasionalmente no tálamo (2/8) e córtices ventro-lateral, dorso-lateral e posterior, pedúnculo cerebral e tálamo (1/8). Nos animais previamente submetidos à reativação, a distribuição do DNA viral foi mais ampla, sendo detectado mais consistentemente, além do TG (7/7), nos córtices ventro-lateral (6/7), e posterior (5/7), ponte e tálamo (4/7) e menos freqüentemente no pedúnculo cerebral (3/7). Em contrapartida, os animais inoculados com o BHV-1 apresentaram o DNA viral latente em poucos tecidos além do TG, e não apresentaram alterações importantes na distribuição do DNA viral após a reativação. Esses resultados demonstraram que o DNA latente do BHV-5 - e não o do BHV-1 - pode estar presente em várias áreas do cérebro de coelhos infectados experimentalmente. A reativação induzida por dexametasona resulta na reativação viral e provavelmente na colonização de áreas adicionais no cérebro. Com base nesses resultados pode-se especular que a reativação do DNA viral latente nestas regiões pode contribuir para a recrudescência de doença neurológica observada após a reativação da infecção latente pelo BHV-5.

Das Ziel dieser Arbeit war, die funktionellen Charkteristika von humanen antigenerfahrenen CD4-T-Zellen in Relation zur Expression von IL-7Ra und CCR7 zu untersuchen. Im Rahmen dessen wurden zwei verschiedene experimentelle Ansätze wurden gewählt: Zur Analyse von Populationen, die während einer Primärantwort auftreten, wurden antigenerfahrene CD4-T-Zellen in vitro mit TSST-beladenen dendritischen Zellen stimuliert. Der zweite Ansatz bestand darin, zirkulierende antigenerfahrene CD4-T-Zellen entsprechend ihrer CCR7- und IL7R-Expression zu isolieren, um die heterogenen zirkulierenden T-Zellen zu untersuchen. Die Experimente zeigen, daß IL7RhiCCR7+ T-Zellen Charakteristika zentraler Gedächtniszellen besitzen. IL7RlowCCR7–identifiziert hingegen Zellen mit Effektor-T-Zellmerkmalen. Dementsprechend wiesen IL7RlowCCR7– T-Zellen ein stark verringertes Zellüberleben auf, waren stark beeinträchtigt in darin in Anwesenheit von homöostatischen Zytokinen zu proliferieren und exprimierten nur wenig IL-2. Im Gegenzug überlebten IL7RhiCCR7+ T-Zellen gut, reagierten auf homöostatische Zytokine, sekretierten IL-2 und expandierten nach antigenspezifischer Stimulation. Interessanterweise erkannten ex vivo isolierte IL7Rlow T-Zellen vornehmlich persistierende Antigene. Dies weist darauf hin, daß diese Zellen chronisch aktiviert sind. In vitro konnte demonstriert werden, daß die funktionelle Ausprägung der den zentralen Gedächtniszellen ähnlichen IL7RhiCCR7+ T-Zellen deutlich von der Stärke der Stimulation während der Generierung der IL7RhiCCR7+ T-Zellen abhängt. Dieser Umstand stützt die Hypothese, daß die Quantität der Signale während der primären Stimulation die Richtung der Zelldifferenzierung bestimmt und ein solcher Mechanismus zur Heterogenität der zentralen Gedächtnis-T-Zellen in vivo beiträgt. Zusammenfassend kann man feststellen, daß, sich die Marker CCR7 und IL7R in Kombination als ein wertvoll zur Identifizierung von CD4-Gedächtnis- und –Effektor-T-Zellen erweisen / The aim of this work was to elucidate the functional characteristics of human antigen-experienced CD4 T cells according to the expression of IL7RAlpha and CCR7. Two different approaches were used: in order to analyze the subsets occurring during a primary response, antigen-experienced CD4 cells were analyzed in vitro after priming with the superantigen TSST. The signal strength of TCR-stimulation during the priming was modulated in order to understand how the levels of stimulation might influence the generation of memory-like T cells. The second approach was to isolate circulating CD4 T cells expressing different combinations of CCR7 and IL7R in order to analyze the heterogeneous pool of antigen-experienced cells found under steady state conditions ex vivo. The results revealed that both in vitro and ex vivo the IL7RhiCCR7+ T cell subset corresponds to cells with TCM characteristics whereas IL7RlowCCR7– identifies cells with effector characteristics. Correspondingly, IL7RlowCCR7–CD4 T cells showed low survival rates, impaired proliferation in the presence of homeostatic cytokines and a low IL-2 production, IL7RhiCCR7+ CD4 T cells survived well, responded to homeostatic cytokines, secreted IL-2 and expanded upon antigenic stimulation. Notably, ex vivo isolated IL7Rlow T cells preferentially recognized under steady state conditions persistent antigens, suggesting that these cells are chronically activated. Finally, it was demonstrated that IL7RhiCCR7+ TCM-like cells generated in vitro acquired different functional properties depending on the strength of stimulation during the priming. This fact supports the concept that the amount of signal received during the priming influences the cell fate decision contributing to the heterogeneity of the TCM pool in vivo. In summary, despite some differences observed between in vitro and ex vivo CD4 T cell subsets, the combination of the markers CCR7 and IL7R is useful to distinguish memory- from effector-like CD4 T cells.