Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Moléculas bioativas têm sido isoladas de sementes de Moringa oleifera. As sementes têm sido usadas para tratamento da água para consumo humano devido às suas propriedades coagulantes. Adicionalmente a ausência de contaminação bacteriana em água tratada com sementes de Moringa tem sido descrita. Sementes de plantas são fontes de lectinas, proteínas que interagem com carboidratos e promovem aglutinação de eritrócitos. A capacidade de interação de lectinas com carboidratos resulta nas atividades antimicrobiana e inseticida detectadas nessas proteínas. Atividade hemaglutinante (AH) foi identificada no extrato de sementes de M. oleifera e a lectina (WSMoL) foi isolada por cromatografia em coluna de quitina. Os objetivos deste trabalho foram determinar parâmetros físico-químicos em águas tratadas com extrato aquoso de sementes (MoW), isolar WSMoL através de protocolo previamente estabelecido, caracterizar WSMoL, avaliar as atividades coagulante, antimicrobiana sobre Staphylococcus aureus e Escherichia coli e inseticida sobre Callosobruchus maculatus de preparações de sementes de Moringa. Para isolamento de WSMoL, o extrato de sementes (10%) foi fracionado com sulfato de amônio e a fração (F) de maior AH específica (F0-60%) foi cromatografada em coluna de quitina. WSMoL foi eluída com ácido acético 1 M. Para caracterização estrutural de WSMoL foram realizados ensaios de AH em diferentes condições experimentais, fluorescência e dicroísmo circular (DC). Parâmetros físico-químicos das águas foram alterados após tratamento com MoW. WSMoL com atividade coagulante foi isolada de outros compostos coagulantes por cromatografia em coluna de quitina. O espectro de fluorescência de WSMoL não foi alterado na presença dos ions Mg2+ and Zn2+ ions. DC de WSMoL was típico de uma proteína α-hélice. As atividades antibacteriana e inseticida foram detectadas nas preparações de M. oleifera. As atividades biológicas detectadas indicam o potencial biotecnológico de WSMoL

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1386_1.pdf: 1347604 bytes, checksum: 2922defa9295e522c8371874085d1fbe (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Cramoll é uma lectina purificada das sementes de Cratylia mollis. Possui diferentes formas moleculares, isolectinas ou isoformas (Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 e Cramoll 4), com especificidades distintas para monossacarídeos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiinflamatória de Cramoll 1,4 (preparação contendo Cramoll 1 e Cramoll 4) em camundongos. Cramoll 1,4 foi obtida a partir de fracionamento salino do extrato das sementes, seguido de cromatografia de afinidade em Sephadex G-75. O teste de atividade antiinflamatória de escolha foi o método da medida do edema de pata induzido por carragenina em camundongos. Os animais foram tratados com Cramoll 1,4 (200, 500 e 1000 μg/animal), concanavalina A, Con A, (200 μg /animal) utilizada como lectina controle, ácido acetilsalicílico (7,5 mg/animal), controle positivo, ou NaCl 0,15 M, controle negativo. Após 4 h, os animais foram sacrificados e as patas pesadas. Os resultados mostraram que a Cramoll foi dose dependente e a redução da medida do edema da pata foi mais efetiva em ratos machos (83,6 e 94,2 %, 500 e 1000 μg/animal, respectivamente) em relação às fêmeas (46,4% e 73,9%, 500 e 1000 μg/animal, respectivamente). Nos animais machos a redução plantar pelo uso de Cramoll 1,4 e Con A (200 μg/animal) foi de 76,2 e 75,1 %, respectivamente. Os ensaios mostraram que todas as preparações com lectinas foram mais efetivas que o AAS com exceção da concentração de 200 μg/animal, para as fêmeas, em que houve uma redução de apenas 18,8 %

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Moringa oleifera é uma planta tropical com grande importância econômica e de usos industriais e medicinais. Diferentes partes da planta são aplicadas e o extrato de sementes é comumente usado na purificação de água para consumo humano. Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não-imune que se ligam bioespecificamente a carboidratos, com capacidade de aglutinar células de forma reversível; extração e purificação dessas biomoléculas permite sua aplicação no âmbito biotecnológico. O objetivo deste trabalho foi investigar a atividade hemaglutinante (AH) em extratos de diferentes tecidos de M. oleifera, purificar e caracterizar uma lectina de sementes com propriedades coagulantes (cMoL). AH foi detectada em extratos salinos (NaCl 0,15 M) de flores e raques da inflorescência (5 %, p/v), sementes, folhas e tecido fundamental do tronco e casca do tronco (10 %, p/v). cMoL isolada após extração salina e cromatografia em gel de guar foi ativa na faixa de pH de 4 a 9, termoestável a 100 ºC durante 7 h e aglutinou eritrócitos de coelho e humanos. AH dos extratos dos tecidos e de cMoL foi inibida por carboidratos; azocaseína e asialofetuína aboliram a AH de cMoL. Eletroforese em gel de poliacrilamida em condições redutoras revelou uma banda polipeptídica principal de 26.5 kDa; cMoL nativa é uma proteína básica e foi purificada como uma única banda. A verificação da propriedade coagulante foi realizada utilizando-se uma suspensão de caolin em água (10 g/L) e leitura espectrofotométrica de absorbância a 500 nm. Preparações de sementes e cMoL apresentaram atividade coagulante similar ao sulfato de alumínio, o coagulante sintético mais utilizado no tratamento da água em todo o mundo; após o aquecimento de cMoL não foram observadas diferenças significativas na coagulação. Em conclusão, lectinas estão presentes em diferentes tecidos de M. oleifera; preparações lectínicas de sementes e cMoL podem ser aplicadas no tratamento de água para consumo humano

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Cramoll é uma lectina purificada das sementes de Cratylia mollis. Possui diferentes formas moleculares, isolectinas ou isoformas (Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 e Cramoll 4), com especificidades distintas para monossacarídeos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiinflamatória de Cramoll 1,4 (preparação contendo Cramoll 1 e Cramoll 4) em camundongos. Cramoll 1,4 foi obtida a partir de fracionamento salino do extrato das sementes, seguido de cromatografia de afinidade em Sephadex G-75. O teste de atividade antiinflamatória de escolha foi o método da medida do edema de pata induzido por carragenina em camundongos. Os animais foram tratados com Cramoll 1,4 (200, 500 e 1000 μg/animal), concanavalina A, Con A, (200 μg /animal) utilizada como lectina controle, ácido acetilsalicílico (7,5 mg/animal), controle positivo, ou NaCl 0,15 M, controle negativo. Após 4 h, os animais foram sacrificados e as patas pesadas. Os resultados mostraram que a Cramoll foi dose dependente e a redução da medida do edema da pata foi mais efetiva em ratos machos (83,6 e 94,2 %, 500 e 1000 μg/animal, respectivamente) em relação às fêmeas (46,4% e 73,9%, 500 e 1000 μg/animal, respectivamente). Nos animais machos a redução plantar pelo uso de Cramoll 1,4 e Con A (200 μg/animal) foi de 76,2 e 75,1 %, respectivamente. Os ensaios mostraram que todas as preparações com lectinas foram mais efetivas que o AAS com exceção da concentração de 200 μg/animal, para as fêmeas, em que houve uma redução de apenas 18,8 %

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1571_1.pdf: 1817206 bytes, checksum: 4215ed843eb0d47f57379daac0ef0d15 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas, de origem não imunológica que se ligam reversivelmente e especificamente a carboidratos. Caesalpinia ferrea é uma planta com ampla distribuição no Brasil, sendo utilizada em medicina popular. Neste trabalho a lectina da vagem sem as sementes, de Caesalpinia ferrea (CfePL) foi purificada, caracterizada e avaliada biologicamente. CfePL foi avaliada quanto a potencial ação contra bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e fungos, na inibição do crescimento celular e respiração celular e mitocondrial de Candida albicans e como proteína inseticida para a espécie de cupins Nasutitermes corniger. CfePL foi obtida por fracionamento salino de um extrato bruto a 10% seguida de cromatografia em coluna de quitina. CfePL aglutina eritrócitos de humanos, galinha, coelho e rato, é principalmente inibida por glicoproteínas (caseína, e as do soro de coelho e soro fetal bovino), é termoestável (ativa após aquecimento a 100 C, 12 h), a sua atividade hemaglutinante (AH) é estimulada pelos íons (Ca2+ e Mg2+); e em diferentes valores de pH (4,5; 5,0; 5,5; 7,5) é aumentada, sendo quase totalmente abolida em pH 9,0. Após tratamento com enzimas proteolíticas CfePL manteve-se estável. CfePL migrou com uma única banda na eletroforese para proteínas nativas básicas e uma banda polipeptídica de massa 8 kDa em SDS-PAGE com ou sem agente redutor e cromatografia de filtração em gel. A sua porção carboidrato foi estimada em 6,8%. CfePL inibe o crescimento de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e de fungos, os melhores resultados caracterizados pelos halos de inibição (17mm) foram com Escherichia coli e Colletotrichum gloesporioides, com uma concentração mínima inibitória de 10 μg/mL frente a estes dois microrganismo e a Streptococcus sp.; CfePL (40 μg/ml) inibe totalmente o crescimento celular de C. albicans. Nas concentrações de 25 μg/ml e 40 μg/ml foi observada uma inibição de 30% e 45 %, após 2 h de incubação na respiração celular de C. albicans e na mitocondrial uma inibição de 45% e 90%, respectivamente. CfePL apresenta ação inseticida e não repelente contra N. corniger. CfePL é purificada em quantidades de miligramas por uma metodologia simples, e demonstra ser um potente agente antimicrobiano de baixo custo, com amplo espectro de ação, apresentando, também, ação inseticida

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3114_1.pdf: 994082 bytes, checksum: 200180a1d48386181688ed0a7cc21e5f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho trata da extração de uma lectina da entrecasca de Sideroxylon obtusifolium utilizando planejamento fatorial completo seguido da purificação da lectina através de fracionamento salino e cromatografia de afinidade em quitina, além da caracterização parcial e avaliação da atividade antimicrobiana. Os resultados revelaram que as melhores condições de extração, obtidas através do planejamento fatorial 24 + 4 pontos centrais, foi a na temperatura de 4ºC, com tempo de extração de 4h, em pH 6,0 e com a concentração de NaCl 0,15 M. A partir destes dados, extrações em tampão citrato fosfato e fosfato de sódio, na faixa de pH (6,0 a 7,5) foram efetuados sendo selecionada a extração em tampão citrato fosfato, pH 6,5; o qual apresentou melhor atividade hemaglutinante específica (AHE) com eritrócitos de coelho. O fracionamento salino revelou que a fração 60-80% (F60-80) foi a que apresentou a maior AHE, a qual foi parcialmente inibida por glicose e totalmente inibida por N-acetil-D-glicosamina. A lectina denominada SoBL (Sideroxylon Obtusifolium Bark Lectin) foi obtida da cromatografia em quitina após eluição com ácido acético 1 M. SoBL é uma proteína termoestável, mantendo sua AH até 100ºC, após 30 min de aquecimento. A avaliação da estabilidade frente a diferentes valores de pH indicou que a lectina apresentou maior AH no pH de 5,0. SDS-PAGE mostrou que SoBL é uma lectina de baixa massa molecular (6,0 kDa) e não glicosilada. SoBL (40μg) não inibiu o crescimento das bactérias Bacillus subtilis, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, pseudomonas aeroginosa e Klebsiela pneumoniae e dos fungos do gênero Fusarium. Em conclusão, uma lectina termoestável e de baixa massa molecular foi obtida da entrecasca de S. obtusifolium por cromatografia de afinidade em quitina, a qual aparentemente, não apresentou atividade antimicrobiana

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4549_1.pdf: 1671770 bytes, checksum: c5d987dfca24d06cae7f83b502cb6758 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A lectina ligadora de manose (MBL), membro das lectinas tipo-C, apresenta capacidade de se ligar através de múltiplos sítios a várias estruturas de carboidratos e promover a ativação do complemento. Os baixos níveis da MBL estão relacionados com a maior susceptibilidade as várias doenças infecciosas. Diferentes ensaios utilizados para a determinação da lectina não têm sido eficazes na identificação das várias formas moleculares da MBL presentes na circulação. Este trabalho tem como objetivo avaliar o perfil molecular da MBL no soro de pacientes com hepatite C usando um método de purificação com base em microplacas cobertas com discos de nitrocelulose, seguida a identificação protéica por ensaios de imuno-reconhecimento, SDS-PAGE (redutora e não-redutora) e análise por Western blot. Os resultados do método de purificação mostraram uma boa eficiência de ligação da membrana coberta com manana e a identificação da MBL foi confirmada para todos os genótipos por DOT-ELISA convencional. No geral, poucas bandas foram visualizadas nas amostras submetidas ao ensaio de purificação, os quais podem estar correlacionadas com a quantidade muito pequena de proteína presente. As bandas revelaram algumas diferenças para o padrão de bandeamento entre os genótipos avaliados AA, AO e OO, mostrando marcações acentuadas nas faixas de 50-90 kDa e 180 kDa, sendo equivalentes a variantes estruturais de baixa massa molecular e estruturas de alta massa molecular, respectivamente. Na análise por SDS-PAGE não-redutora, foram visualizadas uma larga faixa de massas moleculares, tais como as formas triméricas (3x3), dímeros, e bandas de subunidades estruturais da MBL identificadas em algumas amostras, sobretudo nos indivíduos com genótipo tipo selvagem AA. No Western blot, foi confirmado a presença das formas de baixa e alta massas semelhantemente ao observado nos géis de eletroforese, com destaque na detecção de formas de 128 e 32 kDa. Estes resultados sugerem um método para purificação protéica simplificado e de baixo custo para a MBL, o qual foi possível avaliar um perfil diferenciado das formas moleculares presentes no soro de pacientes infectados pelo vírus HCV. Vale ressaltar que este é um importante passo para uma maior elucidação da relação estrutura/genótipo e função da MBL em relação a hepatite C e que pode ser de fundamental importância na resposta ao tratamento

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4554_1.pdf: 903119 bytes, checksum: 8c2c43808642f2ef63195fbd7730400c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lectinas, proteínas que reconhecem específica e reversivelmente carboidratos, podem ser purificadas por cromatografia de afinidade. O gênero Bauhinia (Fabaceae) inclui espécies nativas ou introduzidas, usadas no tratamento de diabetes. A atividade hemaglutinante (AH) detectada em várias espécies de Bauhinia está associada à presença de lectinas. Uma lectina específica para galactose (BmoLL) foi previamente purificada em folhas de B. monandra e disponível em quantidades de miligramas (Coelho & da Silva, Phytochem. Anal., 11, 1-6, 2000). Este trabalho teve por objetivo isolar em elevada pureza uma lectina de raiz de B. monandra (BmoRL), bem como a avaliação de sua atividade antimicrobiana frente a fungos fitopatogênicos do gênero Fusarium. Raíz secundária de B. monandra foi extraída com tampão citrato-fosfato 10 mM, pH 6,5 (10 %, p/v), contendo NaCl 0,15 M (tampão selecionado), por 16 h, a 4 oC. O fracionamento salino foi realizado com sulfato de amônio (F 0-60%) durante 4 h, em temperatura ambiente; o precipitado foi dialisado em água destilada, seguido de tampão selecionado. Cromatografia em coluna de gel de guar foi efetuada para purificar a lectina; o suporte foi equilibrado com tampão selecionado e a eluição da proteína foi procedida com galactose 0,05 M em tampão selecionado. Eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE, 12%, p/v) revelou a pureza de BmoRL; BmoRL é uma glicoproteína, como detectado pela coloração com reagente de Schiff. BmoRL apresentou elevada AH específica (AHE) com eritrócitos de coelho (17.430) e não foi estimulada em presença de íons (Ca+2 e Mg+2). BmoRL revelou melhor AHE com os tampões citrato fosfato 10 mM em pH 7,0, contendo NaCl 0,15 M e fosfato de sódio 10 mM em pH 6,5 e 7,5. Ensaio em diferentes temperaturas revelou que BmoRL perdeu a atividade a 70 ºC. BmoRL foi totalmente inibida por D(+)-galactose e D(+)-raffinose; asocaseína, ovoalbumina e asialofetuína inibiram parcialmente a AH da lectina. Sob condições desnaturantes e redutoras, BmoRL apresentou uma única banda glicosilada, com aparente massa molecular de 26 kDa. BmoRL mostrou atividade contra fungos fitopatogênicos, especialmente, F. solani com inibição do crescimento de 30%. O perfil cromatográfico de BmoRL indica que uma lectina pode ser purificada de raízes secundárias de B. monandra com gel de guar, em quantidades de miligramas, com atividade antifúngica

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4598_1.pdf: 1586782 bytes, checksum: 07bfe23695c0334a5cdb6360439f704e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lectinas, proteínas ou glicoproteínas que se ligam reversivelmente a carboidratos com diferentes graus de seletividade, são encontradas em uma variedade de organismos e estão envolvidas em numerosos processos celulares. Neste trabalho foi avaliada a presença de lectina(s) em Guettarda platypoda D. C., planta conhecida vulgarmente como angélica . As raízes dessa planta têm sido utilizadas em medicina popular para o tratamento de diferentes enfermidades. Extratos brutos a 10% (p/v) de raízes íntegras, entrecasca da raiz, folhas, flores, frutos, pecíolos, pedúnculos, caules, ramificação do caule e gemas foram obtidos em NaCl 0,15 M; extratos da entrecasca da raiz foram ainda avaliados em diferentes tampões e valores de pH (citrato-fosfato pH 3,0-7,0; TRIS-HCl pH 7,5-9,0; fosfato de sódio pH 6,0- 7,5). Todos os extratos foram submetidos a fracionamento com sulfato de amônio (F 0-60%), diálise e ensaios de atividade hemaglutinante (AH) com diferentes tipos de eritrócitos. Todos os tecidos avaliados apresentaram atividade hemaglutinante; folhas e gemas revelaram as maiores atividades hemaglutinante específicas com eritrócitos glutarizados de coelho. A fração selecionada com a lectina da entrecasca da raiz (GplaRL) foi obtida em tampão citrato-fosfato 0,01 M em NaCl 0,15 M (pH 5,5). AH de GplaRL foi parcialmente inibida com glicose e sacarose. O grau de pureza foi avaliado através de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) para proteínas nativas ácidas e em condições desnaturantes/redutoras; foram reveladas duas bandas. GplaRL foi adsorvida em coluna cromatográfica de quitina, levando à obtenção de um pico, o qual revelou uma única banda em PAGE para proteínas nativas ácidas. GplaRL parece ser a primeira lectina mencionada no gênero Gettarda

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5237_1.pdf: 1035133 bytes, checksum: 5ec2bfbb8cbff27797cf3b6731903771 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Para avaliar a eficiência da histoquímica com lectinas no mapeamento do perfil de carboidratos do sistema verme-granuloma e vasos sanguíneos em epidídimo e funículo espermático de pacientes infectados com Wuchereria bancrofti foram utilizadas lectinas conjugadas a peroxidase (Concanavalina A, Con A; lectina de germe de trigo, WGA; Lotus tetragonolobus agglutinin, LTA; peanut agglutinin, PNA; Ulex europeus I, UEA I). Os resultados demonstraram que as lectinas utilizadas reconheceram de forma diferenciada o verme, o granuloma e os vasos linfáticos e sanguíneos nos tecidos estudados. UEA I marcou de forma intensa o verme e o granuloma filariais bem como o epitélio dos vasos linfáticos e sanguíneos no epidídimo. No funículo espermático a UEA reconheceu apenas carboidratos no verme. A WGA apresentou, no epidídimo, uma marcação moderada dos vermes e granulomas, marcando fracamente os vasos sanguíneos ao passo que no funículo espermáticoo verme foi moderadamente marcado enquanto que o granuloma e os vasos foram fracamente marcados. Epidídimos marcados com LTA apresentaram marcação de moderada-intensa do verme e o granuloma, não reconhecendo o epitélio dos vasos sanguíneos e linfáticos. Esta mesma lectina marcou fracamente o verme no funículo espermático. Con A marcou fraca apenas o verme, tanto no epidídimo quanto no funículo espermático. Apenas o granuloma no epidídimo foi marcado fracamente pela PNA que não reconheceu nenhuma estrutura no funículo espermático. Os resultados da histoquímica com lectinas evidenciam o perfil de carboidratos do verme e estruturas histológicas do epidídimo e funículo espermático humanos de maneira diferenciada apresentado estas proteínas como sondas auxiliares específicas quanto ao diagnosticados com filariose bancroftiana