O objetivo do trabalho foi realizar investigação sobre ocorrência de ranavirose, infecção causada por vírus do gênero Ranavirus, família Iridoviridiae, em anfíbios anuros silvestres nos municípios de Porto Ferreira e Pirassununga, cidades da região centro-leste do estado de São Paulo, Brasil, utilizando diagnóstico molecular. Ao todo, 40 anuros adultos silvestres da espécie Leptodactylus fuscus foram capturados nos municípios citados, sendo coletados três órgãos alvos (fígado, baço e rins) de replicação viral, com registro de eventuais alterações macroscópicas nesses órgãos, e dos quais extraiu-se DNA. Na sequência, realizou a reação em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando-se primers específicos para o gene MCP (major capsid protein) de Frog Virus 3 (FV3), ranavírus circulante no Brasil, com isolado de FV3 pertencente ao biobanco do Laboratório de Higiene Zootécnica da FZEA-USP empregado como controle positivo e água livre de nuclease como controle negativo. Como resultados, em relação às alterações macroscópicas, somente um espécime apresentou hepatoesplenomegalia e hipopigmentação do coração. No entanto, ao diagnóstico molecular, nenhum dos 40 animais amostrados foi positivo à ranavirose. Tal resultado pode estar associado tanto a fatores intrínsecos (espécie, idade, resposta imune) como extrínsecos ao hospedeiro (alterações ambientais, patogenicidade viral). Em paralelo, em rãs de criação comercial, surtos por FV3 já foram detectados em vários ranários do país; contudo, essa é a primeira vez que uma prospecção para ranavirose é realizada especificamente com representantes da espécie Leptodactylus fuscus, em municípios da região centro-leste do estado de São Paulo. Assim, são necessárias mais pesquisas com espécies silvestres de rãs, particularmente no entorno de ranários com histórico de animais positivos para FV3, para melhor conhecimento da epidemiologia e dinâmica de transmissão da ranavirose entre rãs silvestres. / The objective of this study was to investigate the occurrence of ranavirus infection caused by virus belonging to genus Ranavirus, Iridoviridiae family, in wild anuran amphibians from Porto Ferreira and Pirassununga municipalities, located in the central-eastern region of the state of São Paulo, Brazil, using molecular diagnostics. In all, 40 wild adult anurans of the species Leptodactylus fuscus were captured in the mentioned municipalities, and three target organs (liver, spleen and kidneys) of the viral replication were collected, being possible macroscopic changes in these organs recorded, and from which DNA was extracted. In the sequence, the polymerase chain reaction (PCR) was carried out using primers specific for the MCP (major capsid protein) gene of Frog Virus 3 (FV3), a circulating ranavirus in Brazil, with a FV3 isolate belonging to the biobank of the Laboratory of Zootechnical Hygiene of FZEA-USP employed as positive control and nuclease-free water as negative control. As a result, in relation to macroscopic alterations, only one specimen showed hepatosplenomegaly and heart hypopigmentation. However, for molecular diagnostics, none of the 40 animals sampled were positive for ranavirus. This result may be associated to both intrinsic (species, age, immune response) and extrinsic (environmental changes, viral pathogenicity) factors to the host. In parallel, FV3 outbreaks have already been detected in several frog farms in the country. However, this is the first time that a prospection for ranavirus infection is performed specifically with specimens of the Leptodactylus fuscus from municipalities in the central-eastern region of the state of São Paulo. Thus, more studies on wild-type frogs are needed, particularly in the settings of frog farms with positive animal history for FV3, to better understand the epidemiology and dynamics of ranavirus transmission among wild frogs.

O canto de anúncio é o principal sinal emitido pelos machos durante a estação reprodutiva e geralmente apresenta duas funções básicas: a atração de fêmeas coespecíficas receptivas sexualmente e o anúncio da posição de um macho para outros machos coespecíficos / heteroespecíficos, ajudando a manter o espaçamento entre os indivíduos vocalizando. A importância do canto de anúncio em anuros como mecanismo primário de isolamento reprodutivo foi extensivamente documentado na literatura e, em decorrência disso, os cantos tem se mostrado altamente valiosos na determinação da identidade das espécies, com aplicação potencial em abordagens macroevolutivas e zoogeográficas. O gênero Leptodactylus atualmente abriga 89 espécies, distribuídas do sul da América do Norte e ao longo de toda a extensão neotropical, do México e Antilhas até a Argentina e Uruguai, cujas espécies são atualmente classificadas em cinco grupos fenéticos. O grupo de L. fuscus é formado por 27 espécies que se distribuem desde o sul do México até o sul do Uruguai e norte da Argentina. Leptodactylus cunicularius foi descrito da Serra do Cipó, área serrana pertencente à porção meridional do complexo da Serra do Espinhaço, e posteriormente, citado de outras três regiões serranas do estado de Minas Gerais. O presente estudo tem como objetivo específico acessar dados bioacústicos e morfológicos/morfométricos de populações previamente atribuídas a Leptodactylus cunicularius, visando a caracterização de populações e o reconhecimento de espécies potencialmente novas. Para isso, analisamos espécimes adultos e cantos de anúncio de oito populações, incluindo a população topotípica, sendo que algumas populações foram previamente atribuídas a L. cunicularius, e outras populações eram desconhecidas até o presente momento. Cinco populações foram reconhecidas como distintas de L. cunicularius através de dados morfológicos/morfométricos e/ou bioacústicos. As outras duas populações ainda estão sob análise. Regiões serranas podem representar áreas de endemismo para anfíbios anuros, ao passo que em algumas delas, é possível detectar congruência biogeográfica para outros grupos de anuros, incluindo espécies próximas e populações confinadas a essas regiões sob complexos de espécies ainda não estudados. / The advertisement call is the main acoustic signal emitted by males during the reproductive season, and usually plays two basic roles: the attraction of conspecific females sexually receptive, and the advertisement of a males position to other conspecific / heteroespecific males, contributing to keep the distance among calling individuals. The importance of the advertisement call in anurans as a primary mechanism of reproductive isolation has been extensively documented in the literature, so that calls have been recognized as very useful to the recognition of species identity, in addition to potential application on macro-evolutionary and zoogeographic approaches. The genus Leptodactylus currently comprises 89 species, distributed from southern North America and throughout the Neotropics, from Mexico and Antilles to Argentina and Uruguay, whose species are today encompassed within five phonetic groups. The L. fuscus group includes 27 species distributed from southern Mexico to southern Uruguay and northern Argentina. Leptodactylus cunicularius was described from the Serra do Cipó, a montane region belonging to the southern secton of the Serra do Espinhaço mountain range, and later, cited from other three montane regions in the State of Minas Gerais. The aim of the present study is to assess bioacoustic and morphological/morphometric data of populations previously assigned to Leptodactylus cunicularius so as to the characterization of populations and the recognition of potentially new species. We analyzed adult specimens and advertisement calls of eight populations, including the topotypic population, considering that some populations were previously assigned to L. cunicularius, and other populations have been unreported so far. Five populations were recognized as different from L. cunicularius based on morphological/morphometric and/or bioacoustic data. The other two populations are still under analysis. Montane regions might represent endemism areas for anuran amphibians, since in some regions, it is already possible to detect biogeographic congruence concerning other anuran groups, including related species and populations restricted to these regions under complex of species unstudied.

O canto de anúncio é o principal sinal emitido pelos machos durante a estação reprodutiva e geralmente apresenta duas funções básicas: a atração de fêmeas coespecíficas receptivas sexualmente e o anúncio da posição de um macho para outros machos coespecíficos / heteroespecíficos, ajudando a manter o espaçamento entre os indivíduos vocalizando. A importância do canto de anúncio em anuros como mecanismo primário de isolamento reprodutivo foi extensivamente documentado na literatura e, em decorrência disso, os cantos tem se mostrado altamente valiosos na determinação da identidade das espécies, com aplicação potencial em abordagens macroevolutivas e zoogeográficas. O gênero Leptodactylus atualmente abriga 89 espécies, distribuídas do sul da América do Norte e ao longo de toda a extensão neotropical, do México e Antilhas até a Argentina e Uruguai, cujas espécies são atualmente classificadas em cinco grupos fenéticos. O grupo de L. fuscus é formado por 27 espécies que se distribuem desde o sul do México até o sul do Uruguai e norte da Argentina. Leptodactylus cunicularius foi descrito da Serra do Cipó, área serrana pertencente à porção meridional do complexo da Serra do Espinhaço, e posteriormente, citado de outras três regiões serranas do estado de Minas Gerais. O presente estudo tem como objetivo específico acessar dados bioacústicos e morfológicos/morfométricos de populações previamente atribuídas a Leptodactylus cunicularius, visando a caracterização de populações e o reconhecimento de espécies potencialmente novas. Para isso, analisamos espécimes adultos e cantos de anúncio de oito populações, incluindo a população topotípica, sendo que algumas populações foram previamente atribuídas a L. cunicularius, e outras populações eram desconhecidas até o presente momento. Cinco populações foram reconhecidas como distintas de L. cunicularius através de dados morfológicos/morfométricos e/ou bioacústicos. As outras duas populações ainda estão sob análise. Regiões serranas podem representar áreas de endemismo para anfíbios anuros, ao passo que em algumas delas, é possível detectar congruência biogeográfica para outros grupos de anuros, incluindo espécies próximas e populações confinadas a essas regiões sob complexos de espécies ainda não estudados. / The advertisement call is the main acoustic signal emitted by males during the reproductive season, and usually plays two basic roles: the attraction of conspecific females sexually receptive, and the advertisement of a males position to other conspecific / heteroespecific males, contributing to keep the distance among calling individuals. The importance of the advertisement call in anurans as a primary mechanism of reproductive isolation has been extensively documented in the literature, so that calls have been recognized as very useful to the recognition of species identity, in addition to potential application on macro-evolutionary and zoogeographic approaches. The genus Leptodactylus currently comprises 89 species, distributed from southern North America and throughout the Neotropics, from Mexico and Antilles to Argentina and Uruguay, whose species are today encompassed within five phonetic groups. The L. fuscus group includes 27 species distributed from southern Mexico to southern Uruguay and northern Argentina. Leptodactylus cunicularius was described from the Serra do Cipó, a montane region belonging to the southern secton of the Serra do Espinhaço mountain range, and later, cited from other three montane regions in the State of Minas Gerais. The aim of the present study is to assess bioacoustic and morphological/morphometric data of populations previously assigned to Leptodactylus cunicularius so as to the characterization of populations and the recognition of potentially new species. We analyzed adult specimens and advertisement calls of eight populations, including the topotypic population, considering that some populations were previously assigned to L. cunicularius, and other populations have been unreported so far. Five populations were recognized as different from L. cunicularius based on morphological/morphometric and/or bioacoustic data. The other two populations are still under analysis. Montane regions might represent endemism areas for anuran amphibians, since in some regions, it is already possible to detect biogeographic congruence concerning other anuran groups, including related species and populations restricted to these regions under complex of species unstudied.

O objetivo do trabalho foi realizar investigação sobre ocorrência de ranavirose, infecção causada por vírus do gênero Ranavirus, família Iridoviridiae, em anfíbios anuros silvestres nos municípios de Porto Ferreira e Pirassununga, cidades da região centro-leste do estado de São Paulo, Brasil, utilizando diagnóstico molecular. Ao todo, 40 anuros adultos silvestres da espécie Leptodactylus fuscus foram capturados nos municípios citados, sendo coletados três órgãos alvos (fígado, baço e rins) de replicação viral, com registro de eventuais alterações macroscópicas nesses órgãos, e dos quais extraiu-se DNA. Na sequência, realizou a reação em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando-se primers específicos para o gene MCP (major capsid protein) de Frog Virus 3 (FV3), ranavírus circulante no Brasil, com isolado de FV3 pertencente ao biobanco do Laboratório de Higiene Zootécnica da FZEA-USP empregado como controle positivo e água livre de nuclease como controle negativo. Como resultados, em relação às alterações macroscópicas, somente um espécime apresentou hepatoesplenomegalia e hipopigmentação do coração. No entanto, ao diagnóstico molecular, nenhum dos 40 animais amostrados foi positivo à ranavirose. Tal resultado pode estar associado tanto a fatores intrínsecos (espécie, idade, resposta imune) como extrínsecos ao hospedeiro (alterações ambientais, patogenicidade viral). Em paralelo, em rãs de criação comercial, surtos por FV3 já foram detectados em vários ranários do país; contudo, essa é a primeira vez que uma prospecção para ranavirose é realizada especificamente com representantes da espécie Leptodactylus fuscus, em municípios da região centro-leste do estado de São Paulo. Assim, são necessárias mais pesquisas com espécies silvestres de rãs, particularmente no entorno de ranários com histórico de animais positivos para FV3, para melhor conhecimento da epidemiologia e dinâmica de transmissão da ranavirose entre rãs silvestres. / The objective of this study was to investigate the occurrence of ranavirus infection caused by virus belonging to genus Ranavirus, Iridoviridiae family, in wild anuran amphibians from Porto Ferreira and Pirassununga municipalities, located in the central-eastern region of the state of São Paulo, Brazil, using molecular diagnostics. In all, 40 wild adult anurans of the species Leptodactylus fuscus were captured in the mentioned municipalities, and three target organs (liver, spleen and kidneys) of the viral replication were collected, being possible macroscopic changes in these organs recorded, and from which DNA was extracted. In the sequence, the polymerase chain reaction (PCR) was carried out using primers specific for the MCP (major capsid protein) gene of Frog Virus 3 (FV3), a circulating ranavirus in Brazil, with a FV3 isolate belonging to the biobank of the Laboratory of Zootechnical Hygiene of FZEA-USP employed as positive control and nuclease-free water as negative control. As a result, in relation to macroscopic alterations, only one specimen showed hepatosplenomegaly and heart hypopigmentation. However, for molecular diagnostics, none of the 40 animals sampled were positive for ranavirus. This result may be associated to both intrinsic (species, age, immune response) and extrinsic (environmental changes, viral pathogenicity) factors to the host. In parallel, FV3 outbreaks have already been detected in several frog farms in the country. However, this is the first time that a prospection for ranavirus infection is performed specifically with specimens of the Leptodactylus fuscus from municipalities in the central-eastern region of the state of São Paulo. Thus, more studies on wild-type frogs are needed, particularly in the settings of frog farms with positive animal history for FV3, to better understand the epidemiology and dynamics of ranavirus transmission among wild frogs.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The genus Leptodactylus has wide distribution and it can be found in many physiographic and climatic zones. This fact has raised questions about the taxonomy of this genus because many species that are considered of great geographic distribution has shown to be two or more closely related. The species Leptodactylus fuscus and Leptodactylus latrans, both widely spread, are found in the state of Sergipe in the Caatinga biome and little is known about the ecology, biology and diversity between and within populations that occupy this exclusively Brazilian biome. Therefore, the present study aimed to characterize the species L. fuscus and L. latrans, which occur in different fragments of Caatinga from the state of Sergipe, using cytogenetic and morphometric data. The karyotypes of populations from the municipalities of Carira, Poço Redondo and Tobias Barreto were analyzed by conventional staining techniques, C-band and Ag-RON. The species showed similar cytogenetic patterns, without evidence of species-specific markers; however some variations in morphology and bands were observed when compared to the karyotypes described in the literature. In morphometric analysis, 21 different characters were analyzed in the two species in each location, showing that populations of L. fuscus presented no significant differences between them; however variations were found in samples of L. latrans, mainly on the size of the specimens. The analyzed data showed that there were no cytogenetic and morphometric differences within the L. fuscus populations and that the morphometric variations observed in L. latrans may be due to environmental effects. / O gênero Leptodactylus tem ampla distribuição geográfica e está presente nas mais diversas zonas climáticas e fisiográficas. Esse fato tem levantado questionamentos de caráter taxonômico, pois muitas espécies consideradas de grande distribuição geográfica têm mostrado tratar-se de duas ou mais espécies estreitamente relacionadas. As espécies Leptodactylus fuscus e Leptodactylus latrans, ambas de ampla distribuição, são encontradas no Estado de Sergipe no bioma Caatinga e pouco se conhece sobre a ecologia, biologia e diversidade inter e intrapopulacional em populações que ocupam este bioma exclusivamente brasileiro. Nesse sentido, o presente estudo teve como objetivos caracterizar através de dados citogenéticos e morfométricos as espécies L. fuscus e L. latrans de ocorrência em diferentes fragmentos de Caatinga do Estado de Sergipe. Os cariótipos das populações dos municípios de Carira, Poço Redondo e Tobias Barreto foram analisados, por meio de técnicas de coloração convencional, Banda C e Ag-RON. Os exemplares estudados apresentaram padrões citogenéticos bastante similares, sem evidências de marcadores espécie-específicos; porém, algumas variações de morfologia e bandas foram observadas quando comparadas aos cariótipos já descritos na literatura. Nas análises morfométricas, 21 caracteres foram analisados nas duas espécies, em cada uma das localidades, mostrando que as populações de L. fuscus não apresentaram diferenças significativas entre elas; contudo variações foram encontradas nas amostras de L. latrans, principalmente quanto ao tamanho dos espécimes coletados. Os dados analisados conjuntamente mostram que populações de L. fuscus não diferem citogenética e morfometricamente entre si e as variações morfométricas observadas em L. latrans podem ser devidas aos efeitos ambientais.

Orientador: Reinaldo José da Silva / Abstract: Species differ in their environmental preferences, leading to processes in the community based in gradient variations that decrease as the distance increases. This process diminishes faster in heterogeneous landscapes, especially in solid areas of bands like South American open diagonally, that is characterized by horizontal stratification environments, presenting a landscape mosaic that extends from the Caatinga to the regions of Chaco, through the Pantanal. The Cerrado, Pantanal and Caatinga are characterized by great diversity of vertebrate anuran species, including the host Leptodactylus fuscus. These regions are inserted in the open diagonal South American. The composition and the relationship between parasite-host infra-populations of helminth species associated with L. fuscus specimens were described in three different regions of Brazil. Amphibians are found in a variety of habitats and exhibit different reproductive and behavioral patterns, considered good models to study parasitology. The study evaluated if there is a decay on the similarity between geographically distant communities and concluded that these two variables are positively associated. This study assessed 155 hosts and found a total of 16 taxa: Aplectana membranosa, Aplectana pintoi, Schankiana formosula, Cosmocerca podicipinus, Oswaldocruzia lopesi, Oxyascaris necopinus, Glypthelmins linguatula, Catadiscus cf. marinholutzi, Physaloptera sp., Physalopteroides sp., Rhabdias sp., metacercariae (Diplostomid... (Complete abstract click electronic access below) / Resumo: As espécies diferem em suas preferências ambientais, isto conduz a processos na comunidade baseados em variações de gradiente que decrescem com o aumento da distância, sobretudo em faixas de áreas contínuas como a diagonal aberta sul-americana, apresentando um mosaico paisagístico que se estende desde a Caatinga até as regiões do Chaco. O Cerrado, Pantanal e Caatinga são caracterizados pela grande diversidade de espécies de vertebrados anuros, incluindo o hospedeiro Leptodactylus fuscus, e estas regiões estão inseridas na diagonal aberta Sul Americana. Foi descrita a composição e a relação entre parasita-hospedeiro de infra-populações das espécies de helmintos associados com espécimes do Leptodactylus fuscus em três regiões diferentes do Brasil. Os anfíbios são encontrados em uma variedade de habitats e exibem diversos padrões reprodutivos e comportamentais, por isso são considerados bons modelos de estudo para a parasitologia. O trabalho avaliou se ha um decaimento na similaridade entre comunidades geograficamente distantes, e concluiu que estas duas variáveis se associam positivamente. Foram avaliados 155 espécimes de hospedeiros totalizando 16 taxas de helmintos, Aplectana membranosa, Aplectana pintoi, Schankiana formosula, Cosmocerca podicipinus, Oswaldocruzia lopesi, Oxyascaris necopinus, Glypthelmins linguatula, Catadiscus cf. marinholutzi, Physaloptera sp., Physalopteroides sp., Rhabdias sp., metacercárias da Família Diplostomidae, nematodas da Família Cosmocercidae, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre