Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-04-04T13:24:02Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final- WILIAN OLIVEIRA.pdf: 1510952 bytes, checksum: 9058b21042c585177d09b07cc902395e (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-07-06T12:57:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Final- WILIAN OLIVEIRA.pdf: 1510952 bytes, checksum: 9058b21042c585177d09b07cc902395e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T12:57:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Final- WILIAN OLIVEIRA.pdf: 1510952 bytes, checksum: 9058b21042c585177d09b07cc902395e (MD5) / CAPES / Lectinas são proteínas que se ligam especificamente a resíduos de açúcar e estão envolvidas no processo de reconhecimento celular e sinalização em diversas vias metabólicas. O objetivo deste estudo foi isolar, purificar e investigar a atividade biológica das lectinas de Crotalaria spectabilis R. quanto a sua capacidade de hemaglutinação e aglutinação das linhagens bacterianas: Leptospira biflexa e L. interrogans. Para extração das proteínas, as sementes foram moídas e suas células lisadas em solução NaCl 0,15 M. Após essa etapa, as proteínas foram precipitadas com acetona e sulfato de amônio, dialisadas, liofilizadas e purificadas por cromatografia de filtração e troca iônica. A quantificação proteica foi realizada pelo método de Bradford e o perfil eletroforético obtido por SDS-PAGE. Para testar a atividade biológica das lectinas foram utilizados ensaios de hemaglutinação bem como de aglutinação das linhagens bacterianas. Em nossos resultados, o método de precipitação proteica por acetona resultou em maior extração quando comparado ao método por sulfato de amônio. A lectina de C. spectabilis R. apresentou um peso molecular de 30 kDa e os ensaios de hemaglutinação foram positivos para a proteína. Assim, concluimos que nas sementes de C. spectabilis R. existem lectinas com capacidade de reconhecer receptores presentes na membrana de eritrócitos humanos e promover aglutinação celular. Por fim, as lectinas da planta C. spectabilis R. também foram capazes de aglutinar L. interrogans e L. biflexa, sendo esta reposta mais acentuada na linhagem patogênica. / Lectins are proteins that bind carbohydrate residues with affinity and are involved in the process of cell recognition and signaling in different metabolic pathways. The aim of this study was to isolate, purify and investigate the biological activity of the Crotalaria spectabilis R. lectins in terms of hemagglutination and agglutination capacity of the bacterial strains: Leptospira biflexa and L. interrogans. For protein extraction, the seeds were milled and their cells lysed in 0,15 M NaCl solution. After this step, the proteins were precipitated with acetone and ammonium sulfate, dialyzed, lyophilized and purified by filtration chromatography and ion exchange, respectively. Protein quantification was performed by the Bradford method and the electrophoretic profile by SDS-PAGE. For testing the biological activities of lectins, hemagglutination assays were used as well agglutination of the bacterial strains. In our results, protein precipitation method by acetone resulted in higher yield when compared to ammonium sulfate. The C. spectabilis R. lectin presented a molecular weight of 30 kDa and the hemagglutination assays were positives for the protein. Thus, we conclude that in the C. spectabilis R. seeds there are lectins with capacity to recognize receptors present in the human erythrocytes membrane and to promote cell agglutination. At last, the seed lectin C. spectabilis R. was also able to agglutinate L. interrogans and L. biflexa, this response being stronger in the pathogenic strain.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-25T20:45:34Z No. of bitstreams: 1 Cleiton Silva Santos Desfecho da infecao experimental....pdf: 2262422 bytes, checksum: b3abf43dd8996e46ce0c116bfc304bf2 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-25T20:45:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cleiton Silva Santos Desfecho da infecao experimental....pdf: 2262422 bytes, checksum: b3abf43dd8996e46ce0c116bfc304bf2 (MD5) Previous issue date: 2011 / Universidade Federal da Bahia. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O modelo murino oferece múltiplas ferramentas para estudos imunológicos e genéticos. Alguns estudos avaliando a infecção por leptospiras patogênicas em camundongos mutantes ou transgênicos vêem sendo relatados, no entanto, o uso mais amplo desses modelos experimentais é limitado por nossa pouca compreensão sobre o desfecho da infecção por leptospiras patogênicas em linhagens murinas selvagens. Neste estudo, relatamos o desfecho da infecção por Leptospira interrogans sorovar Copenhageni cepa Cop em quatro linhagens murinas selvagens amplamente usadas em pesquisa básica: A, CBA, BALB/c e C57BL/6. Os desfechos avaliados foram sobrevida, presença de lesões renais, carga de leptospiras nos rins, títulos de anticorpos aglutinantes séricos e níveis séricos de IgG específica anti-Leptospira. Como esperado, nenhuma linhagem mostrou-se susceptível à doença aguda letal. As linhagens A e C57BL/6 apresentaram maior carga renal de leptospiras, enquanto os camundongos CBA e C57BL/6 apresentaram lesões renais mais graves. Por outro lado, camundongos BALB/c demonstraram notável resistência inclusive à leptospirose subclínica. / The mouse disease model has the advantage of a broad array of immunological and genetic tools available for basic research. Some studies on transgenic and/or mutant mouse strains as models for experimental leptospirosis have been reported; however, the wider use of such models is hampered by our poor understanding of the outcome of experimental leptospiral infection among the different mouse strains available. We studied the outcome of infection by a virulent strain of Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae strain Cop in four commonly used wildtype mouse strains: A, CBA, BALB/c and C57BL/6. The endpoints evaluated in this study were survival, presence of kidney lesions, leptospiral load in kidney samples, microscopic agglutination test (MAT) titre and anti-leptospiral IgG antibody levels. As expected, none of the mouse strains were susceptible to lethal leptospirosis. However, these strains developed specific pathologies associated with sub-lethal leptospirosis. The A and C57BL/6 strains exhibited a high leptospiral load in kidney samples, the CBA and C57BL/6 strains developed severe inflammatory lesions, while the BALB/c strain proved to be the most resistant to sub-clinical leptospirosis.

Orientador: Luis Antonio Mathias / Banca: Anna Monteiro Correia Lima / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Raul José Silva Gírio / Banca: Raphaella Barbosa Meirelles Bartoli / Resumo: Com o objetivo de analisar as diferentes formas de interpretação dos resultados em pesquisas epidemiológicas com Leptospira spp., em quatro espécies de hospedeiros, as concordâncias entre os resultados da soroaglutinação microscópica (SAM) contra 24 sorovariedades foram testadas por meio do coeficiente Kappa. Os resultados obtidos com o cálculo clássico da soroprevalência, o método da sorovariedade mais provável (SMP) com 24 e oito antígenos e três variações do SMP foram comparados por meio da intersecção entre os intervalos de confiança de 95%. As concordâncias entre sorovariedades nos resultados da SAM indicam que a maioria das coaglutinações ocorre dentro do esperado pelo acaso e que não é possível atribuí-las apenas a reações cruzadas. O SMP resultou em soroprevalências menores que as obtidas pelo método clássico. Quanto mais antígenos são utilizados na SAM, menores serão a soroprevalências para cada sorovariedade, demonstrando que a bateria de antígenos interfere nos resultados. As diferentes formas de calcular o resultado do SMP mostraram ser coeficientes diferentes, que podem confundir os leitores, caso não sejam bem definidos nos trabalhos. Conclui-se que o método clássico de cálculo da soroprevalência seria o mais indicado, respeitando-se as limitações da SAM na conclusão das pesquisas. / Abstract: Aiming to analyze the different ways of interpreting the results of epidemiological research with Leptospira spp. in four host species, the agreement between the results in the microscopic agglutination test (MAT) against 24 serovars was tested by the Kappa coefficient. The results with the classic seroprevalence method, the most likely serovar method (SMP) with 24 and eight antigens and three variations of the SMP were compared by the intersection of the 95% confidence intervals. Agreements between serovars in the results of MAT indicate that most co-agglutinations occur randonly, and cross-reactions can not assign as the only cause of them. The SMP resulted in lower seroprevalences than those obtained by the classical method. The more antigens are used in MAT, lower the seroprevalences for each serovar, demonstrating that the antigen battery interferes with the results. The different ways of calculating the result of the SMP proved to be different coefficients, which may confuse readers, if they are not well defined in the research. It was concluded that the classic seroprevalence would be the most appropriate method of calculation, respecting the limitations of the MAT in the research's conclusions. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-12Bitstream added on 2014-06-13T19:15:43Z : No. of bitstreams: 1 guerraneto_g_me_jabo.pdf: 348832 bytes, checksum: c1e9389f44fc98cf291fae81d2fe881a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Levantamentos sorológicos em todo o mundo têm demonstrado o envolvimento de diferentes espécies silvestres na epidemiologia da da leptospirose, como roedores, edentatas, carnívoros, marsupiais e artiodáctilos. São poucos os estudos sobre a leptospirose em animais silvestres cativos, especialmente com animais neotropicais, onde a literatura é ainda mais escassa. Com o objetivo de determinar a freqüência de anticorpos contra Leptospira spp. em felídeos neotropicais e identificar os sorovares de maior predominância nas diferentes espécies estudadas, foram colhidas amostras sanguíneas de 359 felídeos de cativeiro provenientes de 41 instituições localizadas em 41 cidades nos Estados de São Paulo, Minas Gerais e Rio de Janeiro. Dos 359 soros sangüíneos, 46 (12,81%) foram reagentes no teste de soroalglutinação microscópica (SAM). As espécies de felídeos que apresentaram amostras reagentes foram: Panthera onca, Puma concolor; Leopardus pardalis, Leopardus tigrinus e Herpailurus yagouaroundi. Os felídeos .das espécies Leopardus wiedii, Oncifelis colocolo e Oncifelis geoffroy não foram reagentes. O sorovar Grippotyphosa foi o mais freqüente (39,13%) e a maior freqüência de soros reagentes foi para a espécie Leopardus pardalis (20,54%). As freqüências de animais reagentes, com exceção das jaguatiricas, quando comparadas estatisticamente entre os Estados de São Paulo e Minas Gerais não apresentaram diferença significativa. Os exames das amostras de felídeos pertencentes às instituições no Estado do Rio de Janeiro não foram suficientes para verificar a presença de anticorpos contra Leptospira spp.

El objetivo del presente estudio fue determinar la frecuencia de anticuerpos contra ocho serovares de Leptospira en porcinos provenientes de crianza tecnificada y no tecnificada del valle de Lima. Con este fin se colectaron muestras de sangre de porcinos (n= 338) durante el beneficio en dos mataderos de la ciudad de Lima para la detección de anticuerpos contra Leptospira sp., mediante la prueba de microaglutinación. El 86.1 ± 3.7% (291/338) de las muestras fue positivo a uno o más serovares de Leptospira sp. El 89.9± 4.5% (152/169) y el 82.2 ± 5.8% (139/169) de las muestras de porcinos de crianza tecnificada y no tecnificada respectivamente tuvieron anticuerpos contra Leptospira sp. El serovar icterohaemorrhagiae, pomona y georgia fueron los más difundidos en la población de porcinos de ambos tipos de crianza. No se detectaron anticuerpos contra los serovares bratislava y grippothyphosa. Los títulos de anticuerpos tuvieron un rango entre 1: 100 a 1:800 en animales de crianza tecnificada, mientras que en animales de crianza no tecnificada alcanzaron un rango de 1: 100 a 1:1600. El 45.3% de los títulos entre 400 a 1600 fueron de crianza no tecnificada frente al 16.4% de los títulos en animales de crianza tecnificada. Anticuerpos a más de un serovar fue detectado en los animales de ambos tipos de crianza en donde las infecciones por los serovares icterohaemorrhagiae y pomona fueron los más frecuentes. Las variables tipo de crianza, edad y sexo no constituyeron factores de riesgo para la infección por Leptospira sp. Palabras clave: porcinos, microaglutinación, anticuerpos, Leptospira sp., serovar. / --- The objective of the present study was to determine the frequency of antibodies against eight serovars of Leptospira in pigs originating of technified and no technified breeding from the valley of Lima. To this end were collected blood samples of pigs (n = 338) during the sacrifice at two slaughterhouses of the city of Lima for the detection of antibodies against Leptospira sp., by means of the microaglutination test. 86.1 ± 3.7% (291/338) of samples was positive to one or more serovars of Leptospira sp. 89.9 ± 4.5% (152/169) and 82.2 ± 5.8% (139/169) of samples in pigs originating of technified and no technified breeding, respectively, had antibodies against Leptospira sp. The serovars icterohaemorrhagiae, pomona and georgia were the most extended in pig population of both types of breeding. No antibodies were detected against the serovars bratislava and grippothyphosa. The antibody titles had a range between 1:100 to 1:1600 in animals of both types of breeding, but 45.3% of the animals with titles between 400 to 1600 were of no technified breeding versus 16.4 % in the animals of technified breeding. Antibodies to more of a serovar were detected in the animals of both types of breeding in where the infections for the serovars icterohaemorrhagiae and pomona were the most frequent. The variables type of breeding, sex, and age not constitute factors of risk for the infection for Leptospira sp., in this two type of pigs operations. Keywords: pigs, microaglutination, antibodies, Leptospira sp., serovar.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Se recolectaron 130 muestras de suero desde 236 animales de los Órdenes Carnivora, Ungulata y Primates mantenidos en cautiverio en el Parque Zoológico Buin Zoo, y se determinó la presencia de anticuerpos para 9 serovares de Leptospira interrogans usando la Prueba de Microaglutinación (MAT). Trece (10%) de los sueros fueron reaccionantes a uno o más de los serovares. No existió diferencia significativa entre sexos donde 8,6% y 11,7% de las hembras y los machos respectivamente, fueron positivos. La edad tampoco resultó ser determinante, pese a que el 84,6% de los seropositivos son >36 meses. La ubicación dentro del zoológico no tiene relación significativa con los seropositivos, pese a que del total de seroreactivos, un 53,8% pertenecieron al sector C. Sin embargo, la seroprevalencia fue significativamente alta (p<0.05) en Ungulados (20,4%) en comparación a Carnívoros (3,8%) y Primates (3,4%). De los siete serovares detectados en este estudio, el más frecuente fue Autumnalis, presente en el 53,4% de los seropositivos. La mayoría de los animales reaccionantes presentaron títulos ≤1:200, a excepción de un Chrysocyon brachyurus que presentó una titulación de 1:400 frente al serovar Hardjo. En conclusión, la población ha estado expuesta a L. interrogans, pero presentando una baja seroprevalencia

Orientador: Raul José Silva Gírio / Banca: Luís Antonio Mathias / Banca: Angela Cleusa de Fatima Banzatto de Carvalho / Banca: Sílvio Arruda Vasconcellos / Banca: Sonia Regina Pinheiro / Resumo: A leptospirose e a brucelose são duas das mais importantes enfermidades da esfera reprodutiva em bovinos, podendo ser transmitidas durante a utilização de técnicas de reprodução assistida. Este trabalho visa pesquisar a presença e a ação da Leptospira spp. e da Brucella spp. em fetos e oócitos bovinos. Foram colhidas amostras do sangue de 512 vacas encaminhadas para o abate em um frigorífico do Estado de São Paulo; dessas, 212 foram utilizadas para a pesquisa de Leptospira spp. e Brucella spp. nos fetos, e 300 foram utilizadas para pesquisa desses agentes no líquido folicular e nos oócitos. Amostras de órgãos fetais (rim, fígado, baço e pulmão), conteúdo estomacal fetal, placenta materna e líquido folicular (LF) foram submetidas às técnicas de cultivo em meio próprio para crescimento de Leptospira spp (Fletcher) e Brucella spp. (Brucella-ágar) e à técnica de reação em cadeia da polimerase multiplex (PCRm) para ambos os agentes. Os oócitos provenientes de vacas sorologicamente negativas para leptospirose e brucelose foram maturados em meio contaminado com Leptospira interrogans sorovar Pomona, sendo uma parte em meio sem antibiótico e outra com antibiótico. Os oOOtos provenientes de fêmeas sorologicamente positivas para leptospirose foram maturados em meio de maturação esterilizado, sendo uma parte sem antibiótico e outra com antibiótico, e oOOtos provenientes de vacas sororreagentes para brucelose foram maturados em meio estéril sem antibiótico. Após a maturação, parte dos oócitos foi encaminhada para PCRm, e outra parte fixada em lâmina e corada pelas técnicas de Levaditi e- imunoistoquímica para a pesquisa de Leptospira spp.. Entre as 512 vacas avaliadas, 234 (45,70%) foram reagentes na soroaglutinação microscópica (SAM) e 50 (9,76%) sororreagentes na prova do antígeno acidificado tamponado (AA T), sendo 34 (6,64%)...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leptospirosis and brucellosis are two of the most important diseases of the reproductive sphere in bovines, being able to be transmitted during the use of assisted reproduction techniques. This work aims to research the presence and the action of Leptospira spp. and Brucella spp. in bovine fetus and oocytes. Blood samples of 512 slaughtered cows, were collected in a slaughterhouse in the State of São Paulo. Of these, 212 were used for the research of Leptospira spp. and Brucella spp. in the fetus, and 300 were used for research of these agents in the follicular liquid and the oocytes. Samples of fetal organs (kidney, liver, spleen and lung), fetal stomach content, maternal placenta and follicular liquid (FL) were submitted to the techniques of cultivation for the growth of Leptospira spp. (Fletcher) and Brucella spp. (Brucella-agar) and the technique of PCRmultiplex for both agents. The oocytes from serological negative cows for leptospirosis and brucellosis were matured in a contaminated media with Leptospira interrogans serovar Pomona, being a part without antibiotic and another one with antibiotic. The oocytes from serologically positive females for leptospirosis were matured in a sterilized environment, being a part without antibiotic and another with antibiotic and oocytes from cows seroreacting, from brucellosis were matured in sterile environmenta without antibiotic. Afier the maturation, part of the oocytes were directed to PCRm and another part settled in the blade and dyed by the Levaditi technique and immunohistochemical for the research of Leptospira spp.. Among the 512 evaluated cows, 234 (45,70%) reacted to the microscopic seroagglutination (MAT) and 50 (9,76%) reacted to the Rose Bengal Plate Test (RBPT), being 34 (6,64%)...(Complete abstract, access undermentioned eletronic address) / Doutor

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / La leptospirosis es una enfermedad de distribución mundial, que afecta tanto a animales como a humanos. Es transmitida por la orina de todo animal infectado dentro de los cuales los roedores son uno de los más reconocidos, además de poder ingresar al organismo a través de elementos contaminados como alimentos o el agua de bebida, e incluso por mucosa o piel erosionada. Leptospira interrogans serovar canícola, Leptospira interrogans serovar icterohaemorragiae, Leptospira interrogans serovar pomona y Leptospira interrogans serovar grippotyphosa afectan a caninos, porcinos, equinos y bovinos. Existe especial preocupación ante la posibilidad de infeccion con esta bacteria, produciendo cuadros de signología variada, desde fiebres oscilantes, enfermedad renal, hemorragias, e incluso la muerte. Producto de las características de esta enfermedad, y de los múltiples serovares patógenos de este agente, se hacen necesarios métodos diagnósticos con los cuales se pueda detectar la leptospirosis y diferenciar sus serovares, en lo posible, de una forma rápida, exacta y por su condición de enfermedad infecciosa, segura. Es así como surge la interrogante de un método diagnóstico diferencial de cuatro serovares patógenos de Leptospira, plasmados en el objetivo de esta Memoria de Titulo, añadiendo al protocolo, la participación de la enzima de restricción: BccI, del cual se obtendrán fragmentos de distinto tamaño que permitirían la discriminación entre los serovares expuestos anteriormente. Como conclusión para este estudio, la detección de Leptospira interrogans mediante PCR fue exitosa, demostrando que los partidores diseñados son específicos para este agente. No así con la diferenciación de los 4 serovares de Leptospira, debido a que la enzima de restricción escindió la doble hebra de ADN, en los 4 serovares, entregando resultados distintos a los esperados. / Leptospirosis is a world disease, affecting both animals and humans, which is transmitted by all infected animal, having the rodents as the most recognized, or enters the body through contaminated elements such as food or drinking water, and even by mucosa or eroded skin. Leptospira interrogans serovar canícola, Leptospira interrogans serovar icterohaemorragiae, Leptospira interrogans serovar pomona y Leptospira interrogans serovar grippotyphosa affect canines, pigs, horses and cattle, making it a concern since it affects pets and productive animals, producing varied signology, from oscillating fever, kidney disease, hemorrhages, to death. Due to the characteristics of this disease, and of the number of pathogenic serovars of the causative agent of this disease, diagnostic methods are necessary in order to detect leptospirosis and to differentiate its serovars in a fast, accurate and because of its infectious, safe condition. This is how the question of a differential diagnosis method of four Leptospira serovars, expressed in the objective of this work, through the molecular technique of the polymerase chain reaction (PCR), arises, adding the action of the restriction enzyme BccI, and thus generate fragments of different size for the differentiation of the serovars discussed above, by recognition of the gene encoding a lipoprotein membrane, LipL32. As conclusion for this study, the detection of Leptospira interrogans by PCR was successful also proving that the primers designed for the realization of the method are specific for this agent. Not so with the differentiation of the 4 serovars of Leptospira, because the restriction enzyme cleaves the doublé strand of DNA, in the 4 serovars, delivering different results than expected.

Thesis (Ph.D.)--Murdoch University, 2007. / Thesis submitted to the Division of Health Sciences. Includes bibliographical references (p. 171-192).

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Jaqueline Oliveira (jaqueoliveiram@gmail.com) on 2008-12-03T15:55:33Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_HugoDeAlmeidaSilva.pdf: 1378682 bytes, checksum: 3890c0001da50032e86de35c261d77c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-02-16T14:52:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_HugoDeAlmeidaSilva.pdf: 1378682 bytes, checksum: 3890c0001da50032e86de35c261d77c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-02-16T14:52:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_HugoDeAlmeidaSilva.pdf: 1378682 bytes, checksum: 3890c0001da50032e86de35c261d77c5 (MD5) / Uma varredura em busca de atividades proteolíticas em bactérias patogênicas e não-patogênicas do gênero Leptospira identificou a presença de atividade aminopeptidolítica apenas nas primeiras. Visando a esclarecer este achado, o presente trabalho propôs caracterizar bioquímicamente a enzima potencialmente responsável pela atividade leucil-aminopeptidásica presente apenas em sorovares patogênicos de Leptospira. Por meio da clonagem do gene pepA, que codifica uma provável leucilaminopeptidase (LAP) citossólica, obtivemos a forma recombinante ativa da enzima, que possui características filogenética e bioquímica semelhantes àquelas enzimas da família M17 das metalopeptidases. Assim como outras enzimas dessa família, essa LAP recombinante demonstrou atividade catalítica sobre o substrato L-Leu-AMC, com uma atividade ótima em pH 8,5, e termofilia com temperatura ótima de 50 °C. Além disso, a enzima exibiu comportamento típico de cinética clássica de Michaelis-Menten. É inibida irreversivelmente por EDTA, apesar de outras LAPs serem reativadas por cofatores iônicos. Aparentemente, a enzima forma um oligômero de 320 kDa, apresentando dependência dessa forma para sua atividade sobre o substrato L-Leu-AMC, em gel de eletroforese. Adicionalmente, foi produzido soro -HaLAP em camundongos isogênicos, demonstrando a antigenicidade da enzima e possibilitando a posterior utilização de anticorpos em outros estudos sobre a expressão diferenciada dessa peptidase durante infecções. Esse trabalho abre caminho para a elucidação de novos mecanismos operando exclusivamente em membros patogênicos de bactérias do gênero Leptospira. _________________________________________________________________ ABSTRACT / Screening proteolytic activities in non-pathogenic and as well in pathogenic bacteria of the genus Leptospira, we identified the presence of aminopeptydolitic activity in the latter only. Aiming at clarification of this finding, this work led to the biochemical characterization of the enzyme which appears to be responsible for the leucyl-aminopeptydase activity present in pathogenic Leptospira serotypes. By the cloning og the pepA gene coding a putative cytosolic leucyl-aminopeptidase (LAP), we obtained the active recombinant enzyme, showing phylogenetic and biochemical features similar to those present in the M17 metallopeptidase enzymes family. Like other enzymes belonging to this family, recombinant LAP revealed catalytic activity upon L-Leu-AMC substrate, with optimal activity at pH 8.5, and a slight termophilic behavior, with its optimal temperature at 50 °C. Besides, the enzyme presented typical Michaelis-Menten kynetics. It is irreversibly inhibited by EDTA, although other LAPs shows reactivation towards ionic cofactors. Apparently, the enzyme forms a 320 kDa oligomer, structure which the activity on the L-Leu-AMC substrate in eletrophoresis gel seems to be dependent. In adittion, the antiserum against -HaLAP produced in isogenic mice showed its high antigenicty. This finding suggests that the enzyme could be employed to produce specific antibody, which could be useful in clarifying the differential expression of the peptidase in the course of severe infections. This work opens a new avenue that may lead to elucidation of novel mechanisms exclusively associated with pathogenic species within the genus Leptospira.