Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Se recolectaron 130 muestras de suero desde 236 animales de los Órdenes Carnivora, Ungulata y Primates mantenidos en cautiverio en el Parque Zoológico Buin Zoo, y se determinó la presencia de anticuerpos para 9 serovares de Leptospira interrogans usando la Prueba de Microaglutinación (MAT). Trece (10%) de los sueros fueron reaccionantes a uno o más de los serovares. No existió diferencia significativa entre sexos donde 8,6% y 11,7% de las hembras y los machos respectivamente, fueron positivos. La edad tampoco resultó ser determinante, pese a que el 84,6% de los seropositivos son >36 meses. La ubicación dentro del zoológico no tiene relación significativa con los seropositivos, pese a que del total de seroreactivos, un 53,8% pertenecieron al sector C. Sin embargo, la seroprevalencia fue significativamente alta (p<0.05) en Ungulados (20,4%) en comparación a Carnívoros (3,8%) y Primates (3,4%). De los siete serovares detectados en este estudio, el más frecuente fue Autumnalis, presente en el 53,4% de los seropositivos. La mayoría de los animales reaccionantes presentaron títulos ≤1:200, a excepción de un Chrysocyon brachyurus que presentó una titulación de 1:400 frente al serovar Hardjo. En conclusión, la población ha estado expuesta a L. interrogans, pero presentando una baja seroprevalencia

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / La leptospirosis es una enfermedad de distribución mundial, que afecta tanto a animales como a humanos. Es transmitida por la orina de todo animal infectado dentro de los cuales los roedores son uno de los más reconocidos, además de poder ingresar al organismo a través de elementos contaminados como alimentos o el agua de bebida, e incluso por mucosa o piel erosionada. Leptospira interrogans serovar canícola, Leptospira interrogans serovar icterohaemorragiae, Leptospira interrogans serovar pomona y Leptospira interrogans serovar grippotyphosa afectan a caninos, porcinos, equinos y bovinos. Existe especial preocupación ante la posibilidad de infeccion con esta bacteria, produciendo cuadros de signología variada, desde fiebres oscilantes, enfermedad renal, hemorragias, e incluso la muerte. Producto de las características de esta enfermedad, y de los múltiples serovares patógenos de este agente, se hacen necesarios métodos diagnósticos con los cuales se pueda detectar la leptospirosis y diferenciar sus serovares, en lo posible, de una forma rápida, exacta y por su condición de enfermedad infecciosa, segura. Es así como surge la interrogante de un método diagnóstico diferencial de cuatro serovares patógenos de Leptospira, plasmados en el objetivo de esta Memoria de Titulo, añadiendo al protocolo, la participación de la enzima de restricción: BccI, del cual se obtendrán fragmentos de distinto tamaño que permitirían la discriminación entre los serovares expuestos anteriormente. Como conclusión para este estudio, la detección de Leptospira interrogans mediante PCR fue exitosa, demostrando que los partidores diseñados son específicos para este agente. No así con la diferenciación de los 4 serovares de Leptospira, debido a que la enzima de restricción escindió la doble hebra de ADN, en los 4 serovares, entregando resultados distintos a los esperados. / Leptospirosis is a world disease, affecting both animals and humans, which is transmitted by all infected animal, having the rodents as the most recognized, or enters the body through contaminated elements such as food or drinking water, and even by mucosa or eroded skin. Leptospira interrogans serovar canícola, Leptospira interrogans serovar icterohaemorragiae, Leptospira interrogans serovar pomona y Leptospira interrogans serovar grippotyphosa affect canines, pigs, horses and cattle, making it a concern since it affects pets and productive animals, producing varied signology, from oscillating fever, kidney disease, hemorrhages, to death. Due to the characteristics of this disease, and of the number of pathogenic serovars of the causative agent of this disease, diagnostic methods are necessary in order to detect leptospirosis and to differentiate its serovars in a fast, accurate and because of its infectious, safe condition. This is how the question of a differential diagnosis method of four Leptospira serovars, expressed in the objective of this work, through the molecular technique of the polymerase chain reaction (PCR), arises, adding the action of the restriction enzyme BccI, and thus generate fragments of different size for the differentiation of the serovars discussed above, by recognition of the gene encoding a lipoprotein membrane, LipL32. As conclusion for this study, the detection of Leptospira interrogans by PCR was successful also proving that the primers designed for the realization of the method are specific for this agent. Not so with the differentiation of the 4 serovars of Leptospira, because the restriction enzyme cleaves the doublé strand of DNA, in the 4 serovars, delivering different results than expected.

Leptospirose é uma doença infecciosa emergente cujos agentes etiológicos são espécies patogênicas do gênero Leptospira. Leptospiras patogênicas possuem inúmeros genes específicos codificando proteínas com funções desconhecidas, sugerindo que as leptospiras apresentam fatores de virulência únicos. Adesinas bacterianas são importantes fatores de virulência e, assim, a identificação de adesinas conservadas em espécies patogênicas de Leptospira pela construção de bibliotecas genômicas expostas na superfície de bacteriófagos (shotgun phage display), seguida por seleção em células e/ou componentes da matriz extracelular (biopanning), pode revelar novos antígenos e alvos para o tratamento e prevenção da leptospirose. Bibliotecas foram construídas com o DNA genômico de L. interrogans fragmentado e o fagomídeo pG8SAET, sendo testadas algumas abordagens para clonagem como a ligação entre extremidades cegas (blunt-end) e técnicas baseadas em ligação entre extremidades coesivas, incluindo a obtenção de ORESTES e a utilização de adaptadores em grampo. Apesar de serem encontradas algumas limitações, a clonagem por ligação blunt-end se mostrou a mais eficiente para a construção de bibliotecas, sendo adotada para a construção de três bibliotecas em maior escala. A seleção de novas possíveis adesinas a partir das bibliotecas construídas foi realizada em células eucarióticas através da metodologia BRASIL. A primeira biblioteca (BBT1) exibiu 106 clones totais, a partir da qual foram selecionados quatro proteínas em fase apenas com a proteína VIII do fago (pVIII). No entanto, nenhuma delas seria exposta por programas de predição na bactéria. Outras duas bibliotecas foram construídas (BBT2 e BBT3), as quais obtiveram um número ideal de clones para uma ampla cobertura do genoma (>2x107 clones). Por apresentar maior proporção de clones válidos, a BBT2 foi utilizada para a seleção de adesinas, resultando em onze clones em fase com pVIII e/ou sequência sinal do fago. Análises por programas de predição revelaram três proteínas hipotéticas, denominadas LepA962, LepA069 e LepA388, as quais poderiam estar expostas ou ser secretadas pela bactéria, sugerindo uma possível função de adesina. O estudo da proteína LepA388 levou ao reconhecimento de outras doze proteínas semelhantes e pertencentes a uma família paráloga contendo um domínio denominado DUF_61, motivo de função desconhecida presente em proteínas compartilhadas somente entre as espécies patogênicas mais virulentas de Leptospira. Por esta razão, a proteína LepA388 foi a mais estudada. A clonagem de três porções da proteína (LepA388P, LepA388NR e LepA388F) para expressão heteróloga resultou em proteínas recombinantes insolúveis e, considerando a riqueza em resíduos de cisteína presente em sua estrutura, não foi possível renaturá-las adequadamente. Diante dos obstáculos encontrados, apenas a porção contendo a sequência apresentada pelo fago (LepA388P) foi utilizada para obtenção de antissoros em camundongos, os quais apresentaram altos títulos, demonstrando a alta imunogenicidade da proteína LepA388P. O reconhecimento de proteínas nativas da família paráloga DUF_61 em extratos de diferentes sorovares de Leptospira não foi observado, assim como sua expressão in vitro a partir de bactérias em diferentes condições de cultivo. Estudos adicionais sobre a expressão in vivo e funções dos membros desta família são necessários para uma compreensão mais ampla de seu papel na biologia de leptospiras e, possivelmente, na patogênese da leptospirose. / Leptospirosis is an emerging infectious disease whose etiologic agents are pathogenic species of the genus Leptospira. Pathogenic leptospires have countless specific genes encoding proteins with unknown functions, suggesting that leptospires have unique virulence factors. Bacterial adhesins are important virulence factors and so the identification of conserved adhesins in pathogenic Leptospira species from shotgun phage display libraries, followed by selection (biopanning) in cells and/or extracellular matrix components, can reveal new antigens and strategies for leptospirosis treatment and prevention. Libraries were constructed using fragmented genomic DNA from L. interrogans and pG8SAET phagemid vector. Cloning approaches included blunt-end ligation and techniques based in cohesive-end ligation, such as ORESTES strategy and hairpin linkers. Despite some limitations, cloning by blunt-end ligation was the most efficient for library construction, being adopted for the construction of three libraries on a larger scale. Selection of new possible adhesins was performed by biopanning of the libraries in eukaryotic cells through BRASIL methodology. The first library called BBT1 exhibited approximately 106 total clones, and its biopanning resulted in four proteins fused to phage protein VIII, but none of them were expected to be exposed by the bacteria. Other libraries were built (BBT2 and BBT3) which reached the expected number of clones to obtain a larger genome representation (> 2x107 clones). Since it showed the highest proportion of positive clones, BBT2 was selected to perform a second biopanning, resulting in eleven proteins fused to phage protein VIII and/or signal peptide. In silico analysis revealed three hypothetical proteins, named LepA962, LepA069 and LepA388, that would be exposed or secreted by the bacteria, suggesting a possible adhesin function. The study of LepA388 protein led to the recognition of twelve other similar proteins belonging to a paralogous family that contains a domain called DUF_61, domain of unknown function that is present in proteins shared only among the most virulent pathogenic species of Leptospira. For this reason, the LepA388 protein was the most studied. The cloning of three portions of the protein (LepA388P, LepA388NR and LepA388F) for heterologous expression resulted in insoluble recombinant proteins, and given the presence of many cysteine residues in its structure, it was not possible to renature them appropriately. In face of the imposed obstacles, only the portion containing the sequence presented by the bacteriophage (LepA388P) was used to obtain antisera in mice, which showed high titers, demonstrating the high immunogenicity of the protein LepA388P. Recognition of native DUF_61 paralogous family proteins in extracts from distinct Leptospira serovars was not observed, as well as its in vitro expression from bacteria cultured in different conditions. Additional studies on the in vivo expression and functions of members of this family are needed for a broader understanding of their role in leptospiral biology and possibly in the pathogenesis of leptospirosis.

A leptospirose é uma zoonose disseminada mundialmente, causada por bactérias do gênero Leptospira. A melhor maneira de contornar o problema é por de medidas preventivas, já que a contenção da proliferação de roedores é inviável e não há vacina eficaz disponível. Estratégias de genômica funcional têm identificado um grande número de proteínas a serem estudadas. Esse fato aliado a dados da literatura, que identificaram proteínas envolvidas na patogenicidade e que são expressas somente em condição de virulência, levou à proposição da utilização da proteômica para canalizar os estudos. A metodologia envolveu obtenção de extratos protéicos de leptospiras retiradas de animais infectados, sua separação por gel bidimensional, e identificação dos spots por espectrometria de massas. O objetivo central foi a identificação de proteínas expressas em bactérias virulentas e ausentes nas não-virulentas. A identificação dessas proteínas pode facilitar a busca de proteínas envolvidas na virulência e infecção da leptospirose. Adicionalmente, é um avanço no esclarecimento da biologia e patogenicidade das leptospiras, bem como para o reconhecimento de candidatos potenciais para a composição de vacinas e/ou métodos diagnósticos mais eficientes. / Leptospirosis, one of the most spread zoonosis worldwide, is caused by bacteria of the genus Leptospira. Preventive measures are the best way to control the disease due to the difficulty to impair the proliferation of rodents and because no efficient vaccine is currently available. Functional genomics strategies have pointed a large number of proteins that could be important immunogens. This fact allied to published data reporting the identification of proteins involved in pathogenesis that are expressed only in virulent strains, led us to propose the use of proteomics as a tool to narrow down these studies. The methodology involved the preparation of protein extracts from tissuederived leptospires, separation by two-dimensional gel and identification of the spots by mass spectrometry. The central objective was to identify proteins expressed only in virulent bacteria. The identification of these proteins could help the search for proteins involved in virulence with a role during infection. Additionally, the data presented here represent a large step to clarify the biology and pathogenicity of leptospires, as well as the identification of potentially important vaccine candidates and/or proteins to compose more efficient diagnostic methods.

O Pantanal é considerado uma das maiores planícies inundáveis do mundo e possui uma rica biodiversidade. Das onze espécies de tatus registradas no Brasil, sete ocorrem no Pantanal. Os tatus dividem suas áreas de vida com diversas outras espécies silvestres e com o gado, pois a produção extensiva de bovinos de corte é a principal atividade econômica da região. Estudos anteriores demonstraram exposição à Brucella abortus e Leptospira interrogans em diversas espécies silvestres no Pantanal, porém sabe-se pouco quanto à exposição e/ou presença desses agentes em tatus neste bioma. Dessa forma, o presente estudo teve por objetivo determinar a prevalência de anticorpos anti-Brucella e anti-Leptospira interrogans através do teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e Soroaglutinação Microscópica (SAM) em amostras de soro de tatus de vida livre, provenientes do Pantanal da Nhecolândia e realizar a pesquisa direta do DNA dos agentes através do emprego da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em amostras de sangue. Foram testados 48 indivíduos de quatro espécies, sendo Dasypus novemcinctus (n=2), Cabassous unicinctus (n=8), Euphractus sexcinctus (n=16) e Priodontes maximus (n=22). Não foi observado produto amplificado pela PCR em nenhum animal testado, da mesma forma, nenhum tatu apresentou anticorpos anti-Brucella pelo AAT. Na sorologia para L. Interrogans foi encontrada prevalência de 31,25 % (5/16) em E. sexcinctus e 18,18% (4/22) em P. maximus. Esses indivíduos foram positivos para os sorovares Autumnalis/Butembo, Cynopteri/Cynopteri e Pomona/Pomona, com títulos variando de 1: 200 a 1: 1600. Os resultados obtidos reforçam a importância da vigilância de patógenos em populações de vida livre, especialmente quando existe contato com animais de produção, além de contribuir para o conhecimento de agentes infecciosos em tatus da região do Pantanal. / Pantanal is considered one of the worlds largest wetlands. Seven of the eleven species of armadillos that occur in Brazil, from a total of 21 recognized species in the world, have been recorded in this area. The main local economic activity is beef cattle production, which leads to intense wildlife-livestock contact, potentially increasing wildlife exposure to several pathogens, including those with zoonotic and economic relevance. Previous studies demonstrated that several wildlife species have been exposed to Brucella abortus and Leptospira interrogans in Pantanal; however, the exposure and/or presence of zoonotic pathogens in armadillos in this biome is still poorly understood. In order to address this question, we employed conventional polymerase chain reaction (PCR), the Rose Bengal Test (RBT) and the Microscopic Agglutination Test (MAT) to investigate the exposure and/or infection by Brucella abortus and Leptospira interrogans in blood samples of four armadillos species: nine-banded armadillo (Dasypus novemcinctus) (n=2), southern naked-tailed armadillo (Cabassous unicinctus) (n=8), yellow armadillo (Euphractus sexcinctus) (n=16) and giant armadillo (Priodontes maximus) (n=22) caught at Nhecolândia, Pantanal, Brazil. We did not detect Brucella abortus by PCR or exposure to this pathogen via the RBT in the evaluated armadillos. On the other hand, the Microscopic Agglutination Test (MAT) detected Leptospira interrogans exposure in 31.25 % (5/16) of E. sexcinctus and 18.18% (4/22) P. maximus specimens. These individuals were positive to serovars Autumnalis/Butembo, Cynopteri/Cynopteri and Pomona/Pomona, this latter with titers ranging from 1:200 to 1:1600. Our results reinforce the importance of pathogen surveillance in wildlife living in areas of livestock production and further contribute to the study of zoonotic pathogens in armadillos in the Pantanal region.

Em Leptospira interrogans algumas proteínas com capacidade de ligação aos componentes de matriz extracelular foram identificadas e, em sua maioria, são fatores de virulência. Phage display é considerada uma técnica poderosa na identificação de novos ligantes, inclusive de moléculas adesinas, importantes no primeiro estágio de infecção do hospedeiro. A técnica de shotgun phage display foi utilizada visando à obtenção de ligantes à células de mamíferos. Quatro bibliotecas, por inserção de fragmentos aleatórios obtidos por sonicação do DNA de L. interrogans nos fagomídeos pG8SAET (BBT1 e BBT2) e pG3DSS (BBT5 e BBT6), foram construídas. As bibliotecas BBT1 e BBT5 contém insertos maiores e as BBT2 e BBT6 contém insertos menores, com tamanhos médios de 1500 pb e 350 pb, respectivamente. Após ensaio de panning da BBT5 contra células de mamíferos e soro fetal bovino, as sequências de clones selecionados foram analisadas quanto a orientação correta e se a fusão estava em fase com a proteína pIII. As proteínas codificadas pelos genes LIC11719, LIC10769, LIC13143 e LIC12976 foram selecionadas com estas características. Os genes que codificam a LIC12976, LIC10768, LIC10769 e LIC13418, tiveram sua conservação avaliada em diferentes sorovares da espécie patogênica L. interrogans e no sorovar Patoc da espécie de vida livre L. biflexa. As proteínas LIC12976 (selecionada pela técnica de phage display) e LIC13418 (selecionada por ferramentas de bioinformática) tiveram suas sequências amplificadas por PCR, clonadas em pGEM T easy, subclonadas em vetor de expressão pAE e expressas na fração celular correspondente ao corpúsculo de inclusão em E. coli BL21 (DE3) Star pLysS e E. coli BL21 SI, respectivamente. Após renaturação e purificação destas proteínas por cromatografia de afinidade a metal bivalente, um grupo de cinco animais BALB/c fêmeas foi imunizado. Ambas as proteínas se mostraram imunogênicas com títulos dos soros policlonais 1:256000 e 1:512000, respectivamente. Em ensaio de Western Blot os soros foram específicos no reconhecimento das proteínas recombinantes e as proteínas nativas foram verificadas em extratos de sorovares patogênicos de L. interrogans. Em ensaios de adesão, as proteínas recombinantes aderiram às células A31, LLC-PK1 e Vero e especificamente à laminina. Em ensaios de interferência em células usando laminina houve um aumento da adesão das proteínas recombinantes, o que pode ser explicado pela ligação da laminina às células e uma maior ligação das LICs estudadas. Em ensaio de localização celular usando imunofluorescência e microscopia eletrônica, foi observado que ambas as proteínas se encontram na superfície da L. interrogans. No experimento de desafio animal, a LIC12976 e a LIC13418 não se mostraram protetoras. Este trabalho contribuiu para a identificação das novas adesinas LIC13418 e LIC12976 que podem participar da virulência de leptospiras patogênicas envolvendo a primeira etapa da infecção na interação patógeno-hospedeiro / In Leptospira interrogans, proteins capable to bind to extracellular matrix components have been identified and most of them are important virulence factors. Phage display is a powerful technique to identify new ligands, including adhesin molecules that are important in the first stage of host infection. A shotgun phage display technique was used in order to obtain cell ligands. Four libraries were constructed by inserting random fragments obtained by sonication of L. interrogans DNA into phagemids pG8SAET (BBT1 and BBT2) and pG3DSS (BBT5 and BBT6). The libraries BBT1 and BBT5 contain larger inserts and BBT2 and BBT6 contain smaller inserts, with 1500 bp and 350 bp average sizes, respectively. After panning of BBT5 against mammalian cells and bovine fetal serum, the sequences of selected clones were analyzed for correct orientation and fusion with pIII protein. The proteins encoded by genes LIC11719, LIC10769, LIC13143 and LIC12976 were selected. The genes LIC12976, LIC10768, LIC10769 and LIC13418 were evaluated for their conservation in different pathogenic serovars of L. interrogans and free-living L. biflexa serovar Patoc. Proteins LIC12976 (selected by phage display technique) and also LIC13418 that was selected by bioinformatic tools, were amplified by PCR, cloned into pGEM T easy, subcloned into expression vector pAE and expressed in cellular fraction corresponding to the inclusion body in E. coli BL21 (DE3) Star pLysS and E. coli BL21 SI, respectively. After protein renaturation protocol and purification by affinity chromatography, a group of five BALB/c mice was immunized with the purified proteins. Both proteins were shown to be immunogenic with 1:256000 and 1:512000 polyclonal sera titers, respectively. In Western blot the sera were specific to recognize recombinant proteins and native proteins were detected in pathogenic L. interrogans serovars extracts. In binding assays, recombinant proteins bind to A31, LLC-PK1 and Vero cells and specifically to laminin. In interference cell assay using laminin there was an increase of recombinant protein bindings, which can be explained by the laminin binding to cells and further binding of the recombinant LICs. In cellular localization assay using immunofluorescence and electron microscopy, it was observed that both are surface proteins of L. interrogans. In the animal challenge, the LIC12976 and LIC13418 were not protective. As a whole, this work contributed to the identification of LIC12976 and LIC13418 as new adhesins and they can participate in the virulence of pathogenic Leptospira in the first stage of host pathogen interaction.

O Pantanal é considerado uma das maiores planícies inundáveis do mundo e possui uma rica biodiversidade. Das onze espécies de tatus registradas no Brasil, sete ocorrem no Pantanal. Os tatus dividem suas áreas de vida com diversas outras espécies silvestres e com o gado, pois a produção extensiva de bovinos de corte é a principal atividade econômica da região. Estudos anteriores demonstraram exposição à Brucella abortus e Leptospira interrogans em diversas espécies silvestres no Pantanal, porém sabe-se pouco quanto à exposição e/ou presença desses agentes em tatus neste bioma. Dessa forma, o presente estudo teve por objetivo determinar a prevalência de anticorpos anti-Brucella e anti-Leptospira interrogans através do teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e Soroaglutinação Microscópica (SAM) em amostras de soro de tatus de vida livre, provenientes do Pantanal da Nhecolândia e realizar a pesquisa direta do DNA dos agentes através do emprego da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em amostras de sangue. Foram testados 48 indivíduos de quatro espécies, sendo Dasypus novemcinctus (n=2), Cabassous unicinctus (n=8), Euphractus sexcinctus (n=16) e Priodontes maximus (n=22). Não foi observado produto amplificado pela PCR em nenhum animal testado, da mesma forma, nenhum tatu apresentou anticorpos anti-Brucella pelo AAT. Na sorologia para L. Interrogans foi encontrada prevalência de 31,25 % (5/16) em E. sexcinctus e 18,18% (4/22) em P. maximus. Esses indivíduos foram positivos para os sorovares Autumnalis/Butembo, Cynopteri/Cynopteri e Pomona/Pomona, com títulos variando de 1: 200 a 1: 1600. Os resultados obtidos reforçam a importância da vigilância de patógenos em populações de vida livre, especialmente quando existe contato com animais de produção, além de contribuir para o conhecimento de agentes infecciosos em tatus da região do Pantanal. / Pantanal is considered one of the worlds largest wetlands. Seven of the eleven species of armadillos that occur in Brazil, from a total of 21 recognized species in the world, have been recorded in this area. The main local economic activity is beef cattle production, which leads to intense wildlife-livestock contact, potentially increasing wildlife exposure to several pathogens, including those with zoonotic and economic relevance. Previous studies demonstrated that several wildlife species have been exposed to Brucella abortus and Leptospira interrogans in Pantanal; however, the exposure and/or presence of zoonotic pathogens in armadillos in this biome is still poorly understood. In order to address this question, we employed conventional polymerase chain reaction (PCR), the Rose Bengal Test (RBT) and the Microscopic Agglutination Test (MAT) to investigate the exposure and/or infection by Brucella abortus and Leptospira interrogans in blood samples of four armadillos species: nine-banded armadillo (Dasypus novemcinctus) (n=2), southern naked-tailed armadillo (Cabassous unicinctus) (n=8), yellow armadillo (Euphractus sexcinctus) (n=16) and giant armadillo (Priodontes maximus) (n=22) caught at Nhecolândia, Pantanal, Brazil. We did not detect Brucella abortus by PCR or exposure to this pathogen via the RBT in the evaluated armadillos. On the other hand, the Microscopic Agglutination Test (MAT) detected Leptospira interrogans exposure in 31.25 % (5/16) of E. sexcinctus and 18.18% (4/22) P. maximus specimens. These individuals were positive to serovars Autumnalis/Butembo, Cynopteri/Cynopteri and Pomona/Pomona, this latter with titers ranging from 1:200 to 1:1600. Our results reinforce the importance of pathogen surveillance in wildlife living in areas of livestock production and further contribute to the study of zoonotic pathogens in armadillos in the Pantanal region.

Embora camundongos sejam resistentes à infecção por Leptospira interrogans, eles têm sido pouco utilizados para se entender os mecanismos imunes efetores contra esta bactéria. Adler & Faine mostraram em 1976 que esta resistência é dependente da resposta imune, uma vez que camundongos imunossuprimidos tornavam-se suscetíveis à L. interrogans. Outros autores mostraram que camundongos portadores de imunodeficiência grave combinada também morriam após inoculação de L. interrogans. Sabendo da importância do Sistema Complemento em infecções bacterianas, investigamos se animais C5 deficientes (C5-) são mais suscetíveis à infecção por L. interrogans que animais C5 normais (C5+). Observamos que camundongos C5- possuem menores porcentagens de linfócitos T CD8+ na circulação periférica e maiores níveis de IL-12p40 no rim e de TNF e IL-6 no pulmão que os animais C5+. Animais C57Bl/6 (B6) C5+ possuem maior porcentagem de linfócitos T CD4+ que B6 C5-, além de lesões hepáticas mais intensas, mostrando um efeito dependente de C5 e do fundo genético dos camundongos. / Although mice are resistant to Leptospira interrogans infection, they are not usual models to study the imune response against this bacteria. Adler and Faine demonstrated in 1976 the importance of the imune response, since immunosuppressed mice were suceptible to L. interrogans. Other authors showed that mice that had severe combined immunodeficiency also died when inoculated with L. interrogans. Due to the activity of the Complement System in infections, we analyzed whether C5 deficient (C5-) mice are more susceptible than C5 sufficient (C5+) mice to L. interrogans infection. C5- mice have lower percentages of T CD8+ lymphocytes in peripheral circulation and upper levels of IL-12p40 in the kidney and TNF and IL-6 in the lungs than C5+ mice. C57Bl/6 (B6) C5+ mice has higher percentages of T CD4+ lymphocytes than B6 C5- mice, in addition to stricter liver injures, exhibiting an effect dependent of C5 and of the genetic background.

Embora camundongos sejam resistentes à infecção por Leptospira interrogans, eles têm sido pouco utilizados para se entender os mecanismos imunes efetores contra esta bactéria. Adler & Faine mostraram em 1976 que esta resistência é dependente da resposta imune, uma vez que camundongos imunossuprimidos tornavam-se suscetíveis à L. interrogans. Outros autores mostraram que camundongos portadores de imunodeficiência grave combinada também morriam após inoculação de L. interrogans. Sabendo da importância do Sistema Complemento em infecções bacterianas, investigamos se animais C5 deficientes (C5-) são mais suscetíveis à infecção por L. interrogans que animais C5 normais (C5+). Observamos que camundongos C5- possuem menores porcentagens de linfócitos T CD8+ na circulação periférica e maiores níveis de IL-12p40 no rim e de TNF e IL-6 no pulmão que os animais C5+. Animais C57Bl/6 (B6) C5+ possuem maior porcentagem de linfócitos T CD4+ que B6 C5-, além de lesões hepáticas mais intensas, mostrando um efeito dependente de C5 e do fundo genético dos camundongos. / Although mice are resistant to Leptospira interrogans infection, they are not usual models to study the imune response against this bacteria. Adler and Faine demonstrated in 1976 the importance of the imune response, since immunosuppressed mice were suceptible to L. interrogans. Other authors showed that mice that had severe combined immunodeficiency also died when inoculated with L. interrogans. Due to the activity of the Complement System in infections, we analyzed whether C5 deficient (C5-) mice are more susceptible than C5 sufficient (C5+) mice to L. interrogans infection. C5- mice have lower percentages of T CD8+ lymphocytes in peripheral circulation and upper levels of IL-12p40 in the kidney and TNF and IL-6 in the lungs than C5+ mice. C57Bl/6 (B6) C5+ mice has higher percentages of T CD4+ lymphocytes than B6 C5- mice, in addition to stricter liver injures, exhibiting an effect dependent of C5 and of the genetic background.

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