Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-24T02:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é uma desordem maligna resultante da proliferação clonal de células progenitoras T ou B. Conforme os protocolos de tratamento para LLA, em torno de 80 % das crianças diagnosticadas com LLA entram em remissão completa. No entanto, o tratamento de pacientes adultos com LLA tem demonstrado poucas melhorias nas últimas duas décadas, devido à resistência apresentada pelos linfoblastos leucêmicos à quimioterapia. As chalconas são precursoras dos flavonóides presentes nas plantas superiores e exercem uma ampla variedade de efeitos farmacológicos. Mudanças nas moléculas das chalconas podem resultar em diferentes atividades biológicas. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi investigar a sensibilidade de células de LLA de origem murina L-1210 a uma série de onze chalconas sintéticas derivadas do 2-naftaldeído, bem como os mecanismos citotóxicos envolvidos. A triagem preliminar da citotoxicidade da série de chalconas mostrou que apenas as chalconas (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(2'-hidroxi-4',6'-dimetoxi-fenil)-2-propen-1-ona (chalcona 1), (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(3',4',5'-trimetoxi-fenil) -2- propen-1-ona (chalcona 2), (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(3'-metoxi-4'-hidroxi -fenil) -2- propen-1-ona (chalcona 9) e (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(2',5'-dimetoxi-fenil)-2- propen-1-ona (chalcona 11) apresentavam efeito citotóxico significativo. A análise da exposição da fosfatidilserina pela Anexina V-FITC mostrou que a morte celular induzida por essas quatro chalconas ocorreu por indução da apoptose. Para estudar os mecanismos pelos quais esses compostos provocaram apoptose, foi realizada a avaliação do ciclo celular e da expressão da proteína p53, Bcl-2, Bax e caspase 3. Os resultados obtidos mostram que as chalconas 1, 2, 9 e 11 aumentaram a expressão da p53; envolvem as proteínas da via mitocondrial, diminuindo a expressão de Bcl-2 e aumentando a expressão de Bax; aumentando a expressão da caspase 3 ativa e, atuam de maneira diferente no ciclo celular. A chalcona 1 causou bloqueio celular na fase G0/G1 e as chalconas 9 e 11 na fase G2/M. Esses resultados sugerem que a atividade distinta das chalconas derivadas do mesmo núcleo fundamental nas vias de sinalização apoptótica tem correlação direta com a respectiva estrutura química. Mais estudos precisam ser realizados para o completo entendimento das vias pelas quais essas chalconas induzem a apoptose, no entanto, os resultados obtidos apresentam-se promissores para o desenvolvimento de novos fármacos antineoplásicos. Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a malignant disorder resulting from a clonal proliferation of T or B lymphoid cells progenitors. According to the multicenter protocols, about 80 % of all children diagnosed with ALL reach a complete remission. However, the treatment of adults has shown few improvements over the last two decades, because of leukemic lymphoblasts' resistance to chemotherapy. Chalcones are precursors of flavonoids in higher plants and display a wide variety of pharmacological effects. Changes in chalcones molecules can result in different biological activities. The aim of the present work was to investigate the cytotoxicity of eleven synthetic chalcones derived from 2-naftaldehyde in murine acute lymphoblastic leukemia cells. A preliminary screening of chalcones series showed that only (2E)-3-(2-naftalenil)-1-(2'-hydroxy- 4',6'- dimethoxy-phenyl)-2-propen-1-one (chalcone 1), (2E) 1-(3',4',5'-trimethoxyphenyl)-3-(2-naphtyl)-2-propen-1-one (chalcone 2), 2E)-1-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)-3-(2-naphtyl)-2-propen-1-one (chalcone 9) and (2E)-1-(2',5'-dimethoxyphenyl)-3-(2-naphtyl)-2-propen-1-one (chalcone 11) have a significant cytotoxic effect. The analysis of the exposure of phosphatidylserine by Anexina V-FITC showed that these chalcones induced cell death by apoptosis. To investigate the mechanism of apoptosis, the cell cycle and p53, Bcl-2, Bax and caspase 3 expression were evaluated. The results showed that chalcones 1, 2, 9 and 11 increased p53 expression; involved mitochondrial apoptosis pathway, reducing the expression of Bcl-2 and increasing the expression of Bax; increasing the expression of active caspase 3 and act differently in the cell cycle. Chalcone 1 blocked cell cycle progression on the G0/G1 phase and chalcones 9 and 11 on G2/M phase. In spite of these four chalcones are derivated from 2-naftaldehyde, they showed different effects on cell cycle and p53, Bcl-2, Bax and caspase 3. These observations strongly suggest a straighter relation between cytotoxic activity and chemical structure. More investigations are necessary in order to understand the mechanisms that chalcones induce apoptosis, however, the results obtained are promising for the development of new antineoplasic drugs.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T06:20:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T00:59:30Z : No. of bitstreams: 1 183506.pdf: 3172236 bytes, checksum: d0f26079bd5b4a9bb6a659d1c2b0c9bb (MD5) / O presente trabalho avaliou, através de técnicas moleculares, bioquímicas e farmacológicas, o efeito citotóxico do óxido nítrico (NO) e do taxol sobre células linfoblásticas leucêmicas. Foi investigado o envolvimento do NF-kB e a importância da glutationa na citotoxicidade causada pelo NO e pelo taxol. Os resultados obtidos, demonstraram que o efeito citotóxico do NO e do taxol sobre células leucêmicas linfoblásticas parecem atuar em vias muito semelhantes, ou seja, ambos apresentaram ações independentes de alterações no citoesqueleto, inibiram a atividade do NF-kB e depletaram os níveis de glutationa (GSH). Além disso, quando associados, apresentaram efeito citotóxico sinérgico. Sendo assim, concluímos que o NO e o taxol, além de diminuírem os níveis de glutationa intracelular, o que sensibiliza as células aos danos oxidativos e nitrosativos, também impedem o restabelecimento dos níveis normais de GSH intracelular, através da inibição da atividade do NF-kB.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2012-10-22T06:58:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é uma desordem maligna resultante da proliferação clonal de células progenitoras linfóides de linhagem T ou B. Conforme os protocolos de tratamento multicentro Berlin-Frankfurt-Münster (BFM), em torno de 80% das crianças diagnosticadas com LLA entram em remissão completa. No entanto, o tratamento de pacientes adultos com LLA, tem demonstrado modestas melhorias nas últimas duas décadas, devido à resistência apresentada pelos linfoblastos leucêmicos à quimioterapia, o que resulta na persistência à doença ou em recaída e, finalmente, causa a morte do paciente. Apenas 40% de pacientes adultos com leucemia linfoblástica aguda (LLA) entram em remissão completa com a terapia de indução hiper-CVAD (hiperciclofosfamida, vincristina, adriamicina, dexametasona). Vários estudos demonstraram que drogas antimicrotúbulos, que afetam a polimerização e despolimerização da tubulina, têm atividade citotóxica na LLA. Em trabalhos anteriores demonstramos que o taxol é citotóxico para células de linhagem linfoblástica leucêmica de origem humana (CEM) e murina (L-1210). Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi investigar o envolvimento da atividade do NF-kB e dos níveis de glutationa na resistência à apoptose induzida por compostos antimicrotúbulos, taxol e vincristina, e comparar a depleção dos níveis de GSH com a atividade da bomba de efluxo MRP, em células de linhagem de leucemia linfoblástica aguda humana. Os resultados demonstraram que tanto o taxol como a vincristina induziram a apoptose de maneira concentração-dependente em células CEM, porém, o taxol foi mais citotóxico do que a vincristina. Além disso, apenas o taxol depletou os níveis de GSH de maneira significante e inibiu a atividade do NF-kB, mesmo quando em associação com a ciclofosfamida. Esses resultados sugerem que o efeito citotóxico do taxol nas células CEM é mais eficaz do que o da vincristina pois, além de ter diminuído os níveis de glutationa intracelular, inibiu a atividade da MRP e impediu o restabelecimento dos níveis normais de GSH, através da inibição da atividade do NF-kB.

[pt] Esta tese propõe uma metodologia, baseada em procedimentos quantitativos, para estimação do risco de evento adverso (recaída ou morte) em crianças portadoras de Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA). A metodologia proposta foi implementada e analisada utilizando dados de grupo de crianças diagnosticadas no Setor de Hematologia do Instituto de Puericultura e Pediatria Martagão Gesteira (IPPMG) da UFRJ e no Serviço de Hematologia Hospital Universitário Pedro Ernesto (HUPE) da UERJ que constituem uma considerável parcela dos casos de LLA na infância registrados no Rio de Janeiro nos últimos anos. A estimação do risco de recaída foi realizada através de um modelo de Redes Neurais após uma seqüência de procedimentos de pré- tratamento de variáveis e de refinamentos do método no que concerne a saída alvo da rede. O tratamento das variáveis é fundamental uma vez que o número reduzido de amostras é uma característica intrínseca deste problema. Embora a LLA seja o câncer mais freqüente a infância, sua incidência é de aproximadamente 1 caso por 100 mil habitantes por ano. Os resultados encontrados foram satisfatórios obtendo-se um percentual de acerto de 93% (fora da amostra) para os pacientes que recaíram quando comparados com o método classicamente utilizado na clínica médica para a avaliação do risco de recidiva (método do grupo BFM). Espera-se que os resultados obtidos possam vir a dar subsídios às condutas médicas em relação à estimativa do risco de recidiva dos pacientes, portanto, podendo vir a ser útil na modulação da intensidade da terapêutica. / [en] In this it is proposed a methodology, based on quantitative procedure, to estimate the adverse event risk (relapse or death) in Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) in children. This methodology was implemented and analyzed in a dataset composed by children diagnosed and treated at the hematology service of the Instituto de Puericultura e Pediatria Martagão Gesteira (IPPMG) in the Federal University of Rio de Janeiro and of the Hospital Universitário Pedro Ernesto (HUPE) in the University of state of Rio de Janeiro. This group constitutes a considerable fraction of the ALL cases in childhood registered in the last few years in Rio de Janeiro. The relapse risk was estimated by a Neural Networks model after a sequence of variable pre-treatment procedures. This treatment has a fundamental importance due to the small number of cases (an intrinsic characteristic of this problem). Although, the ALL is the most frequent cancer in childhood, it incidence is approximately just 1 case for 100 000 inhabitants by year. The obtained results may be considered excellent when compared with the classical risk estimative method used in the medical clinics (BFM risk). A perceptual of successes of 93% (out-of-sample) in no- relapse patients was achieved. We expect that the obtained results may subsidize medical conduct concerning the risk of adverse event and so it could be useful in the treatment intensity modulation.