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Preparação e caracterização de lipossomas encapsulando acido azelaico, bleomicina e 5-fluorouracil para a aplicação na terapia de melanomas

Costa, Carla Andreia Miranda da 27 July 2000 (has links)
Orientador: Angela Maria Moraes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T02:57:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_CarlaAndreiaMirandada_M.pdf: 3794622 bytes, checksum: 8d6dcff32793d56790b11dbb1a4f2cab (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A pesquisa envolvendo o uso de veículos para a liberação controlada de agentes anti-câncer no interior de tumores tem-se intensificado nos últimos anos. Dentre os veículos testados destacam-se os lipossomas, ou vesículas lipídicas. Este trabalho teve por objetivo a preparação e caracterização de lipossomas encapsulando compostos de interesse na terapia de melanomas, em formulações potencialmente adequadas para administração por via dermatológica. Os encapsulamento em lipossomas de 5-fluorouracil e bleomicina, em caráter detalhado, e de ácido azelaico, em caráter preliminar, foram avaliados empregando-se diferentes métodos de incorporação. As formulações preparadas foram caracterizadas quanto às concentrações finais de lipídios e de drogas e quanto aos diâmetros médios das vesículas. Os lipossomas encapsulando 5-fluorouracil, por terem apresentado melhor eficiência de encapsulamento, tiveram sua estabilidade de estocagem e na presença do tenso ativo C12Es avaliadas, para a verificação da integridade da bicamada lipídica.A bleomicina foi incorporada aos lipossomas através de encapsulamento ativo por gradiente de pH e de injeção de etanol. Ambas as técnicas resultaram em reduzida eficiência de encapsulamento. O encapsulamento do 5-fluorouracil pelos métodos de hidratação do filme lipídico, incorporação ativa empregando gradiente de pH, injeção de etanol e evaporação em fase reversa indicaram que a última técnica foi a mais adequada do ponto de vista da eficiência de encapsulamento, porém este processo ainda pode ser otimizado. Na presença do tensoativo, verificou-se que a droga promove estabilização das vesículas. Quando estocados a 4°C, estes lipossomas não sofreram agregação ou fusão no período de um mês, tendo, entretanto, liberado praticamente toda a droga encapsulada neste período.O encapsulamento de ácido azelaico mostrou-se promissor, entretanto a quantificação da droga encapsulada não pôde ser efetuada / Abstract: The investigation with vehicles for controlled release of anticancer agents into tumors has been intensified in the last years. Among the vehicles tested, outstand liposomes or lipid vesicles, for drug delivery. The aim of this work was the preparation and characterization of liposomes entrapping compounds of interest in melanoma therapy with potential to be topically administered.The entrapment of 5-fluorouracil and bleomycin in liposomes, in a detailed forro, and of azelaic acid, in a preliminary forro, were analyzed using different incorporation methods. The formulations werw evaluated for stability both concerning to storage and in the presence ofthe surfactant C12Es, to verify the lipid bilayer integrity. Bleomycin was incorporated in liposomes by active loading with pH gradients and by ethanol injection. Both methods have resulted in low encapsulation efficiency.The entrapment of 5-tluorouracil was tested by the hydration of a dríed lipid film, active loading with pH gradients, ethanol injection and reverse-phase evaporation demonstrating that the last method was the most efficient in terms of encapsulation capacity, however this process should be optimized. In the presence ofthe surfactant, it was observed that the drug promotes the stabilization of these vesicles. When stored at 4°E, these lipo_ showed no fusion or aggregation during a month, however the drug was completely released ITom the vesicles in this period. The loading of azelaic acid seemed to be feasible, however the quantification of the encapsulated¿ drug could not be performed. / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química
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Obtenção, caracterização e estudo in vitro de microesferas de PLLA e da blenda PLLA/PEO para liberação controlada do cloridrato de vancomicina

Ceroni Filho, Alberto Sergio, 1973- 03 August 2018 (has links)
Orientador : Eliana Aparecida de Rezende Duek / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:50:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CeroniFilho_AlbertoSergio_M.pdf: 5591536 bytes, checksum: 4e6e13eb7c0734147a5f95f65ad3fa7d (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado
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Preparação e caracterização de lipossomas contendo tetracaína

PEREIRA, Ana Karina Vidal 11 1900 (has links)
Submitted by Nayara Passos (nayara.passos@ufpe.br) on 2015-03-04T11:59:53Z No. of bitstreams: 2 2012-Dissertacao-AnaKarina-Pereira.pdf: 1701318 bytes, checksum: 441acaeece317d63724810b05bbaef11 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T11:59:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 2012-Dissertacao-AnaKarina-Pereira.pdf: 1701318 bytes, checksum: 441acaeece317d63724810b05bbaef11 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-11 / Reuni/Propesq / Este estudo relata o desenvolvimento e caracterização de uma formulação lipossomal contendo o anestésico local tetracaína, visto que o emprego de lipossomas na área farmacêutica tem encontrado ampla aceitação, não somente na terapia clínica como no segmento da cosmética, podendo atuar veiculando os princípios ativos no organismo, tecidos ou células e aumentando sua eficácia terapêutica. O presente estudo teve como objetivo a incorporação do fármaco tetracaína em lipossomas e a caracterização das formulações lipossomais obtidas. Os lipossomas foram preparados utilizando a técnica de hidratação do filme seco de lipídios seguida de sonicação, sendo compostos pelo fosfolipídio lecitina de soja. Inicialmente foi realizado um planejamento experimental do tipo DCCR (Delineamento Composto Central Rotacional) visando otimizar as condições de sonicação das partículas contendo 100% de lipídio. A determinação do raio hidrodinâmico e distribuição do tamanho das vesículas foi realizada por meio de espalhamento de luz a laser, sendo a condição ótima de sonicação estabelecida a uma potência de 16 KHz e tempo de 3 minutos, obtendo-se tamanhos menores que 800 nm. Em seguida, as formulações lipossomais foram realizadas de duas formas: incorporando-se o fármaco na fase hidrofílica ou na fase lipofílica. Em ambos os casos, foram realizados planejamentos experimentais do tipo DCCR, tendo como variáveis investigadas a relação lipídio/colesterol e a concentração de tetracaína, e como variáveis resposta a eficiência de encapsulação e o diâmetro médio das vesículas. A eficiência de encapsulação foi avaliada por meio da técnica de ultracentrifugação a 30.000 rpm por duas horas (10 oC), sendo a concentração de tetracaína determinada por espectrofotometria a 310 nm. A máxima eficiência de encapsulação (39,7%) foi obtida na fase hidrofílica para uma concentração de tetracaína de 8,37 mg/mL e relação lipídio/colesterol de 79,5:20,5 %. Os lipossomas contendo tetracaína apresentaram estabilidade de aproximadamente 30 dias quando armazenados em suspensão a 4o C, sem alterações nos aspectos macro e microscópico.
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Estudo da incorporação e liberação de um extrato de algas vermelhas em membranas de hidrogel / IMMOBILIZATION AND RELEASE STUDY OF A RED ALGA EXTRACT IN HYDROGEL MEMBRANES

Amaral, Renata Hage 30 July 2009 (has links)
Os hidrogéis estão dentre as matrizes poliméricas mais utilizadas em tecnologia farmacêutica em razão de sua vasta aplicação e funcionalidade, especialmente em sistema de liberação de fármacos. Tendo em vista o grande avanço nas inovações dos produtos cosméticos, tanto por meio da introdução de novos princípios ativos quanto pelas matrizes utilizadas para liberação controlada dos mesmos, o objetivo deste trabalho foi incorporar e avaliar a liberação de um princípio ativo natural, o ArctAlg®, em membranas de hidrogel, de modo a obter um dispositivo de liberação para fins cosméticos. O ArctAlg® é um extrato aquoso que possui uma excelente ação anti-oxidante, lipolítica, anti-inflamatória e citoestimulante. Foi realizado o estudo das propriedades mecânicas, físicoquímicas e a biocompatibilidade in vitro das membranas de hidrogéis de poli(vinil- 2- pirrolidona) (PVP) e poli(vinil álcool) (PVA) obtidas pela reticulação por radiação ionizante. A caracterização físico-química das matrizes poliméricas foi obtida pelos ensaios de fração gel e intumescimento e o de biocompatibilidade in vitro pelo ensaio de citotoxicidade pelo método de incorporação do vermelho neutro. No ensaio de fração gel tanto o hidrogel de PVP quanto o de PVA apresentaram um alto grau de reticulação. O hidrogel de PVP apresentou uma maior porcentagem de intumescimento em relação ao de PVA e no ensaio de citotoxicidade os hidrogéis mostraram-se atóxicos. A propriedade citoestimulante do ArctAlg® foi verificada no ensaio de citoestimulação com células fibroblásticas de pele de coelho, em que foi evidenciado um aumento de cerca de 50% das células quando em contato com 0,5% do princípio ativo. As membranas de hidrogel preparadas com 3% de ArctAlg® foram submetidas ao ensaio de liberação em incubadora a 37ºC e as alíquotas coletadas durante o ensaio foram quantificadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Os resultados obtidos na cinética de liberação mostraram que as membranas de hidrogel de PVP liberaram cerca de 50% do ArctAlg® incorporado e as de PVA em cerca de 30%. No ensaio de citoestimulação do ArctAlg® liberado, o dispositivo de PVP apresentou um aumento em cerca de 80% da população celular em relação ao controle do ensaio, mostrando ser o dispositivo mais indicado para ser utilizado em processos de reparação cutânea. / In pharmaceutical technology hydrogel is the most used among the polymeric matrices due to its wide application and functionality, primarily in drug delivery system. In view of the large advance innovations in cosmetic products, both through the introduction of new active agents as the matrices used for its controlled release, the objective of this study was to evaluate the release and immobilization of a natural active agent, the Arct\'Alg® in hydrogel membranes to obtain a release device for cosmetics. Arct\'Alg® is an aqueous extract which has excellent anti-oxidant, lipolytic, anti-inflammatory and cytostimulant action. Study on mechanical and physical-chemical properties and biocompatibility in vitro of hydrogel membranes of poly(vinyl-2- pyrrolidone) (PVP) and poly(vinyl alcohol) (PVA) obtained by ionizing radiation crosslinking have been performed. The physical-chemical characterization of polymeric matrices was carried out by gel fraction and swelling tests and biocompatibility by in vitro test of cytotoxicity by using the technique of neutral red incorporation. In the gel fraction test, both the PVP and PVA hydrogel showed a high crosslinking degree. The PVP hydrogel showed a greater percentage of swelling in relation to PVA and the cytotoxicity test of the hydrogels showed non-toxicity effect. The cytostimulation property of Arct\'Alg® was verified by the cytostimulation test with rabbit skin cells, it was showed an increase at about 50% of the cells when in contact with 0,5% of active agent. The hydrogel membranes prepared with 3% of Arct\'Alg® were subjected to the release test in an incubator at 37°C and aliquots collected during the test were quantified by high performance liquid chromatography (HPLC). The results obtained in the kinetics of release showed that the PVP hydrogel membranes released about 50% of Arct\'Alg® incorporated and the PVA hydrogel membranes at about 30%. In the cytostimulation test of released Arct\'Alg®, the PVP device showed an increase at about 80% of cell population in relation of test control, showing to be the greater device to be used in processes of skin repair.
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Estudo da incorporação e liberação de um extrato de algas vermelhas em membranas de hidrogel / IMMOBILIZATION AND RELEASE STUDY OF A RED ALGA EXTRACT IN HYDROGEL MEMBRANES

Renata Hage Amaral 30 July 2009 (has links)
Os hidrogéis estão dentre as matrizes poliméricas mais utilizadas em tecnologia farmacêutica em razão de sua vasta aplicação e funcionalidade, especialmente em sistema de liberação de fármacos. Tendo em vista o grande avanço nas inovações dos produtos cosméticos, tanto por meio da introdução de novos princípios ativos quanto pelas matrizes utilizadas para liberação controlada dos mesmos, o objetivo deste trabalho foi incorporar e avaliar a liberação de um princípio ativo natural, o ArctAlg®, em membranas de hidrogel, de modo a obter um dispositivo de liberação para fins cosméticos. O ArctAlg® é um extrato aquoso que possui uma excelente ação anti-oxidante, lipolítica, anti-inflamatória e citoestimulante. Foi realizado o estudo das propriedades mecânicas, físicoquímicas e a biocompatibilidade in vitro das membranas de hidrogéis de poli(vinil- 2- pirrolidona) (PVP) e poli(vinil álcool) (PVA) obtidas pela reticulação por radiação ionizante. A caracterização físico-química das matrizes poliméricas foi obtida pelos ensaios de fração gel e intumescimento e o de biocompatibilidade in vitro pelo ensaio de citotoxicidade pelo método de incorporação do vermelho neutro. No ensaio de fração gel tanto o hidrogel de PVP quanto o de PVA apresentaram um alto grau de reticulação. O hidrogel de PVP apresentou uma maior porcentagem de intumescimento em relação ao de PVA e no ensaio de citotoxicidade os hidrogéis mostraram-se atóxicos. A propriedade citoestimulante do ArctAlg® foi verificada no ensaio de citoestimulação com células fibroblásticas de pele de coelho, em que foi evidenciado um aumento de cerca de 50% das células quando em contato com 0,5% do princípio ativo. As membranas de hidrogel preparadas com 3% de ArctAlg® foram submetidas ao ensaio de liberação em incubadora a 37ºC e as alíquotas coletadas durante o ensaio foram quantificadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Os resultados obtidos na cinética de liberação mostraram que as membranas de hidrogel de PVP liberaram cerca de 50% do ArctAlg® incorporado e as de PVA em cerca de 30%. No ensaio de citoestimulação do ArctAlg® liberado, o dispositivo de PVP apresentou um aumento em cerca de 80% da população celular em relação ao controle do ensaio, mostrando ser o dispositivo mais indicado para ser utilizado em processos de reparação cutânea. / In pharmaceutical technology hydrogel is the most used among the polymeric matrices due to its wide application and functionality, primarily in drug delivery system. In view of the large advance innovations in cosmetic products, both through the introduction of new active agents as the matrices used for its controlled release, the objective of this study was to evaluate the release and immobilization of a natural active agent, the Arct\'Alg® in hydrogel membranes to obtain a release device for cosmetics. Arct\'Alg® is an aqueous extract which has excellent anti-oxidant, lipolytic, anti-inflammatory and cytostimulant action. Study on mechanical and physical-chemical properties and biocompatibility in vitro of hydrogel membranes of poly(vinyl-2- pyrrolidone) (PVP) and poly(vinyl alcohol) (PVA) obtained by ionizing radiation crosslinking have been performed. The physical-chemical characterization of polymeric matrices was carried out by gel fraction and swelling tests and biocompatibility by in vitro test of cytotoxicity by using the technique of neutral red incorporation. In the gel fraction test, both the PVP and PVA hydrogel showed a high crosslinking degree. The PVP hydrogel showed a greater percentage of swelling in relation to PVA and the cytotoxicity test of the hydrogels showed non-toxicity effect. The cytostimulation property of Arct\'Alg® was verified by the cytostimulation test with rabbit skin cells, it was showed an increase at about 50% of the cells when in contact with 0,5% of active agent. The hydrogel membranes prepared with 3% of Arct\'Alg® were subjected to the release test in an incubator at 37°C and aliquots collected during the test were quantified by high performance liquid chromatography (HPLC). The results obtained in the kinetics of release showed that the PVP hydrogel membranes released about 50% of Arct\'Alg® incorporated and the PVA hydrogel membranes at about 30%. In the cytostimulation test of released Arct\'Alg®, the PVP device showed an increase at about 80% of cell population in relation of test control, showing to be the greater device to be used in processes of skin repair.
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β-tcp modificado com pluronic® para liberação controlada de agentes aplicados na regeneração óssea em tratamento de osteoporose /

Ambrosio, Luísa Barrella January 2019 (has links)
Orientador: Rodrigo Fernando Costa Marques / Resumo: A osteoporose é uma doença do tecido ósseo causada pela desregulação hormonal, que atinge uma grande parcela da população, principalmente mulheres pós-menopausa. Uma das principais consequências da osteoporose são fraturas, que ocorrem devido a diminuição da densidade óssea causada pela doença. Atualmente, busca-se uma maior eficácia em tratamentos, unificando a engenharia de tecidos e a liberação controlada de fármacos, em um sistema de drug delivery. Os compósitos são uma alternativa aos tratamentos atuais por unir em um só material as propriedades das cerâmicas e dos polímeros biodegradáveis, apresentando melhores características físicas, de biodegradabilidade e biocompatibilidade. A utilização de compósitos biocompatíveis e biodegradáveis na entrega de agentes osteogênicos, como fármacos, íons, proteínas ou sinalizadores celulares, tem se apresentado eficiente para utilização no tratamento de fraturas ósseas, com resultados positivos de osteoindução, osteintegração e reabsorção por parte do tecido, indicando o favorecimento da regeneração óssea. Desta maneira, a proposta deste trabalho foi o preparo de materiais compósitos cerâmico-polmérico para suporte de liberação controlada de agentes osteogênicos. Foram preparados compósitos de fosfato de cálcio na fase β e de copolímero Pluronic®, no qual incorporou-se íons cobalto, os fármacos alendronato ou o ranelato de estrôncio, para o estudo da liberação controlada destes agentes, visando o uso como enxerto ósseo no tratamento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre
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Síntese e caracterização de sólidos de coordenação biocompatíveis para incorporação de fármacos /

Alves, Renata Carolina. January 2017 (has links)
Orientadora: Regina Célia Galvão Frem / Banca: Adelino Vieira de Godoy Netto / Banca: Marllus Chorilli / Resumo: Dentre os sólidos de coordenação, destacam-se os Metal-Organic Frameworks (MOFs), que são polímeros de coordenação com estrutura aberta contendo poros potencialmente vazios. Por serem cristalinos, porosos, leves e possuírem valores elevados de área superficial e considerável estabilidade térmica, essa nova classe de compostos vem sendo aplicada em diversas áreas como armazenamento e separação de gases, catálise heterogênea, drug delivery, sensores químicos, entre outras. A possibilidade de construção desses materiais porosos usando bioelementos e ligantes orgânicos biocompatíveis ou com atividade biológica deu origem aos BioMOFs (Metal-Organic Frameworks Biocompatíveis). Esses compostos, além das características já descritas anteriormente, possuem baixa ou nenhuma citotoxicidade frente a células humanas, sendo adequados então para serem investigados como sistemas de liberação de fármaco. Dentro dessa perspectiva, o objetivo principal deste trabalho consistiu na síntese, caracterização e avaliação do potencial de liberação do fármaco modelo diclofenaco de sódio de sólidos de coordenação baseados no ligante biológico adenina e íons cobre (II). Foram sintetizados dois compostos, CUBA e BioMOF-Cu, sendo o primeiro um cluster heptanuclear inédito e o segundo, um BioMOF já reportado na literatura. Experimentos de fisissorção de N2 revelaram a natureza não porosa do cluster CUBA e baixa área superficial de 55,13 m2 g-1. No entanto, há poros de superfície com diâmetro médio de 35,87 ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among the coordination solids, we highlight the Metal-Organic Frameworks (MOFs), which are coordination polymers that have open structure containing potentially void pores. Because they are crystalline, porous, light and have high surface area values and considerable thermal stability, this new class of compounds has been applied in several areas such as gas separation, heterogeneous catalysis, drug delivery, chemical sensors, among others. The possibility of building porous materials using biocompatible or biologically active organic elements and binders gave rise to BioMOFs (Biocompatible Metal-Organic Frameworks). These compounds, in addition to the features already described above, do not require any cytotoxicity to human cells, being suitable for the drug delivery systems. In this perspective, the main objective of this work was to synthesize, characterize and evaluate the release potential of the diclofenac sodium model of coordination solids based on the biological binder adenine and copper (II) ions. Two compounds, CUBA and BioMOF-Cu, were synthesized, the first being an unpublished heptanuclear cluster and the second, a BioMOF already reported in the literature. Nitrogen adsorption experiments revealed a non-porous nature of the CUBA cluster and surface area of 55.13 m2 g-1. However, there are surface pores with an average diameter of 35.87 nm. With regard to BioMOF-Cu, it has a microporous nature with a surface area of 505 m2 g-1. (60.7% and 84.7% for CUBA and BioMO... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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"Desenvolvimento de uma matriz polimérica para incorporação e liberação controlada de papaína" / "Development of a polymeric matrix for incorporation and controlled release of papain"

Zulli, Gislaine 29 January 2007 (has links)
A papaína é uma enzima proteolítica extraída do látex das folhas e frutos do mamão verde adulto. Tem sido amplamente utilizada como agente debridante de escaras e cicatrizante de feridas. No entanto, apresenta baixa estabilidade, o que limita seu uso a formulações de manipulação extemporânea ou de curto prazo de validade. O objetivo deste trabalho foi incorporar a papaína em uma matriz polimérica de modo a obter um sistema de liberação controlada do fármaco. Polímeros de aplicação médica foram selecionados e inicialmente avaliados quanto à sua citotoxicidade. Os polímeros não-citotóxicos foram submetidos ao ensaio de irritação cutânea primária in vivo em animais, para avaliar sua capacidade de causar irritação na pele humana. Diversas membranas foram preparadas com os polímeros considerados adequados para aplicação biomédica para incorporação da papaína. As membranas preparadas com 2% de papaína foram selecionadas para serem submetidas ao ensaio de liberação com células de difusão de Franz. Parte dessas membranas foi irradiada com raios γ na dose de 25 kGy para esterilização do material. As membranas irradiadas e não-irradiadas foram testadas simultaneamente a fim de verificar se a radiação γ interferiria no perfil de liberação do fármaco. Os resultados do ensaio de liberação indicaram que o fármaco é liberado de maneira constante durante as 12 horas iniciais do experimento. A análise, por Microscopia Eletrônica de Varredura, das membranas irradiadas revelou que as membranas formadas são bastante densas e que seus poros são pequenos. / Papain is a proteolytic enzyme extracted from the latex of green papaya leaves and fruits. It has been widely used as debridant for scars and wound healing agent. However, papain presents low stability, which limits its use to extemporaneous or short shelf life formulations. The purpose of this study was to entrap papain into a polymeric matrix in order to obtain a drug delivery system. Polymers of medical application were selected and firstly assessed for cytotoxicity. Non-cytotoxic polymers were evaluated for primary cutaneous irritation test in vivo in animals, in order to verify if they are able to cause irritation to human skin. Many membranes were prepared with the polymers considered suitable for biomedical application for papain entrapment. Membranes containing 2% papain were selected to be evaluated in the releasing test using Fanz diffusion cells. Some of these membranes were irradiated by γ rays with 25 kGy dose for material sterilization. Irradiated and non-irradiated membranes were simultaneously assessed in order to verify if γ radiation interferes on drug releasing profile. Results obtained from releasing test indicated the drug is released in a constant manner over 12 hours in the beginning of the experiment. Scanning Eletronic Microscopy analysis of the irradiated membranes revealed that membranes are very dense and its pores are small.
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Apresentação de antígenos e liberação controlada como ferramentas para melhoramento para vacinas de segunda geração / Antigen presentation and controlled release as tools to second generation vaccines improvement

Quintilio, Wagner 16 November 2005 (has links)
Esta tese envolveu o estudo de encapsulação de vacina bivalente contra difteria e tétano de uso adulto (dT) em microesferas de ácido poli(láctico-coglicólico) (PLGA), com o objetivo de desenvolver uma formulação que induzisse uma resposta protetora com um número reduzido de doses, ou preferencialmente de apenas uma dose. Para ter sucesso, uma formulação como tal deve ter um perfil de liberação de antígeno que simule as múltiplas doses que recebem o indivíduo. Assim, nesta tese são mostrados os resultados dos experimentos de caracterização bioquímica e imunológica da formulação citada, sem o uso de estabilizadores protéicos, a fim de reduzir a complexidade do sistema em estudo. Do ponto de vista das proteínas encapsuladas, tal caracterização envolveu estudos de fluorescência, de dicroísmo circular, de atividade antigênica e determinação por HPLC da degradação durante o processo de encapsulação. Do ponto de vista da formulação, foram realizados ensaios de degradação in vitro e de atividade imunogênica in vivo, em camundongos e cobaias. Os dados obtidos indicaram que a encapsulação em microesferas de PLGA de vacina dT, sem o uso de estabilizadores, permitiu a produção de uma formulação vacinal viável, capaz de estimular uma resposta imunológica protetora e de memória, abrindo caminho para o desenvolvimento da tecnologia de produção de vacinas polivalentes encapsuladas em microesferas de PLGA. / The study on encapsulating a bivalent single dose vaccine against diphtheria and tetanus for adults (dT) within PLGA microspheres is described in this thesis. A successful single dose vaccine must show an antigen release profile mimicking the several doses a person should receive during the life. Therefore, results from the immunological and biochemical characterization of the formulation, prepared without protein stabilizers, is showed here. From the encapsulated protein point of view the characterization involved fluorescence, circular dichroism, antigenicity and HPLC analysis. From the formulation point of view, there were performed in vitro release assays and immunogenicity on mice and on guinea-pigs. The results indicated that the dT microencapsulation within PLGA microspheres without protein stabilizers lead to the production of a viable vaccine formulation, able to elicit protective and memory immune response.
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Obtenção de um sistema de liberação modificada contendo clorexidina e avaliação de seu efeito em biofilmes orais patogênicos / Obtention of a modified release system containing chlorhexidine and evaluation of its effect on pathogenic oral biofilms

Paiva, Maria Carolina Bonjovanni de 29 September 2017 (has links)
Considerando que a obtenção de uma formulação farmacêutica pode ser melhor planejada se algumas condições biológicas inerentes à cavidade oral forem contempladas e que os sistemas de liberação modificada podem ser ferramentas para o controle de doenças orais, o objetivo do trabalho é obter uma formulação contendo clorexidina, avaliando seu efeito sobre os mesmos. Este trabalho foi dividido em duas etapas, sendo que a primeira envolveu a obtenção da formulação mais adequada aos experimentos biológicos e a segunda avaliou seus efeitos sobre biofilmes patogênicos orais. Assim, formulações com diferentes concentrações de clorexidina foram preparadas e avaliadas visualmente em relação à sua integridade física nas condições de crescimento dos biofilmes, seguido de ensaio de liberação em meio estático utilizando tampão como meio de dissolução (meio de dissolução convencional). A formulação selecionada foi submetida a ensaios de liberação em meio estático contendo os diferentes caldos de cultura bacterianos como meio de dissolução. Na segunda etapa do trabalho, o efeito da formulação selecionada foi avaliado em biofilmes cariogênicos de Streptococcus mutans ou biofilmes periodontopatogênicos de Porphyromonas gingivalis. Biofilmes de S. mutans (n=6) ou P. gingivalis (n=3) foram formados em caldos de cultura sob lâminas de vidro por 6 e 3 dias, respectivamente, sendo expostos a um dos seguintes tratamentos: 1) Formulação contendo 92% de quitosana e 8% de hidroxipropil metilcelulose (CV, como controle do veículo) ou 2) Formulação contendo 82% de quitosana, 8% de hidroxipropil metilcelulose e 10% de clorexidina (CHX, grupo experimental). Um grupo sem exposição à formulação foi incluído como controle negativo (CN). Após o período experimental, a viabilidade bacteriana, o pH dos biofilmes e a quantificação de clorexidina liberada para os caldos de cultura foram determinados. Os dados foram analisados estatisticamente por teste de Tukey-Kramer e Tukey, sendo o nível de significância estabelecido em 5%. Os resultados sugerem que ainda que a liberação de clorexidina da formulação nos caldos de cultura de S. mutans e P. gingivalis tenha sido menor se comparada ao meio de dissolução convencional (p<0,05), o efeito biológico promovido foi observado para ambos os biofilmes. Para o pH dos biofilmes de S. mutans, os grupos CN e CV não apresentaram diferença entre si (p>0,05), mas apresentaram quedas de pH maiores se comparados à CHX (p<0,05). CHX também resultou em menor viabilidade bacteriana dos biofilmes se comparada aos controles (p<0,05), que não apresentaram diferença entre si (p>0,05). Para P. gingivalis também houve mais morte celular nos biofilmes expostos à CHX (p<0,05) mas CV também apresentou perda de viabilidade em comparação à CN (p<0,05). Apesar da liberação de clorexidina da formulação ter sido dificultada pela presença dos microrganismos, os resultados sugerem que o sistema de liberação obtido foi capaz de diminuir a patogenicidade dos biofimes de Streptococcus mutans e de Porphyromonas gingivalis. Assim, o presente estudo sugere a importância de aliar os estudos de diferentes áreas de conhecimento de forma a contribuir no planejamento das formulações, vislumbrando futuros benefícios clínicos para o controle das doenças orais. / Considering that obtaining a pharmaceutical formulation can be better planned if some biological conditions inherent to the oral cavity are contemplated and that the modified release systems may be tools for the control of oral diseases, the aim of the work is to obtain a formulation containing chlorhexidine and evaluate its effect in pathogenic biofilms. This work was divided in two stages, the first involved obtaining the most appropriate formulation for biological experiments and the second evaluate its effect on oral pathogenic biofilms. Thus, formulations with different concentrations of chlorhexidine were prepared and evaluated visually for their physical integrity under the biofilm growth conditions, followed by the static media release assay using buffer as the dissolution medium (conventional dissolution medium). The selected formulation was subjected to static release tests containing the different bacterial culture broths as the dissolution medium. In the second stage of the work, the effect of the selected formulation was evaluated in cariogenic biofilms of Streptococcus mutans or periodontopathogenic biofilms of Porphyromonas gingivalis. Biofilms of S. mutans (n = 6) or P. gingivalis (n = 3) were formed in culture broths under glass slides for 6 and 3 days respectively, being exposed to one of the following treatments: 1) Formulation containing 92 % of chitosan and 8% of hydroxypropyl methylcellulose (CV, vehicle control) or 2) Formulation containing 82% of chitosan, 8% of hydroxypropyl methylcellulose and 10% of chlorhexidine (CHX, experimental group). A group without exposure to the formulation was included as negative control (CN). After the experimental period, bacterial viability, biofilms pH and quantification of chlorhexidine released into the culture broths were determined. Data were statistically analyzed by Tukey-Kramer and Tukey test with a level of significance of 5%. Results suggest that although chlorhexidine release from formulation in the culture broths of S. mutans and P. gingivalis was lower compared to the conventional dissolution medium (p <0.05), the treatment promoted biological effect for both biofilms. Regarding S. mutans biofilms pH, CN and CV groups showed no difference (p> 0.05), but showed higher pH drops when compared to CHX (p <0.05). CHX also resulted in lower bacterial viability of biofilms compared to controls (p <0.05), which did not show any difference (p> 0.05). For P. gingivalis, there was higher cell death in the biofilms exposed to CHX (p <0.05) and CV presented loss of viability compared to CN (p <0.05). Although the release of chlorhexidine from the formulation has been hampered by the presence of microorganisms, results suggest that the release system was able to reduce the pathogenicity of Streptococcus mutans and Porphyromonas gingivalis biofilms. Thus, the present study suggests the importance of combining studies from different areas of knowledge in order to contribute to the design of formulations aiming future clinical benefits for the oral diseases control.

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