Desarrolla una metodología de preparación de esférulas de quitosano en las que se ha inmovilizado la enzima papaína. Además, se desarrolló un procedimiento propuesto en el artículo “Determinación de la concentración de quitosano en polvo por viscosimetría capilar” comprobándose la dependencia de la viscosidad relativa frente a la concentración. En la enzima inmovilizada se ha estudiado comparativamente respecto de la enzima en solución, las actividades enzimáticas. Colateralmente, se realizaron pruebas de medición de diámetro y concentración de quitosano en esférulas, además de la determinación de concentración de papaína inmovilizada. Se ha determinado que la actividad enzimática de la papaína inmovilizada dio una actividad de 40 y 30 PU/mg respecto de la actividad enzimática en solución que dio 50 y 40 PU/mg. De estos resultados se ha podido inferir que aun cuando las concentraciones de papaína inmovilizada son menores respecto de las concentraciones en solución, la actividad enzimática inmovilizada es menor en 10 PU/mg. La misma que puede atribuirse a que el factor entrópico y termodinámico juega un papel importante en los sistemas catalíticos inmovilizados en comparación con los sistemas en solución en donde el factor cinético juega un papel más preponderante. Finalmente y de manera complementaria se determinó que el proceso de inmovilización ocurrió en esférulas de quitosano de 2,268 ± 0,0005 mm de diámetro con 0,0645 mg/mL de concentración de quitosano, las cuales lograron inmovilizar entre 12 a 18,56 mg/kg (miligramos de papaína por kilogramo de quitosano). De los resultados obtenidos en esta tesis, pueden desprenderse aplicaciones enzimológicas del sistema papaína-quitosano y análogas para otras enzimas y en general para procesos que involucren proteasas. / Tesis

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-09-29T04:08:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334780.pdf: 1774651 bytes, checksum: 3a00463e83b14f409708530ff3bdd778 (MD5) Previous issue date: 2015 / Os polissacarídeos provenientes das plantas são uma fonte interessante de aditivos para diversas indústrias, principalmente para a indústria alimentícia, farmacêutica e química. A mucilagem é composta quimicamente por água, pectinas, açúcares e ácidos orgânicos. O jaracatiá [Carica quercifolia (A. St.-Hil) Hieron] pertence à família Caricaceae e ao gênero Vasconcellea, sua caracterização é importante, visto que os dados referentes à espécie são escassos na literatura. A partir deste estudo foi possível propor aplicações, contribuindo, assim, com a preservação da espécie e o aproveitamento de novas fontes vegetais (biodiversidade brasileira). Foi determinada sua composição proximal, bem como análise dos grupos funcionais, composição mono e polisssacarídica, comportamento reológico e térmico. Após a caracterização, a reticulação da mucilagem foi proposta com o intuito de obter um adsorvente para proteínas. As características da mucilagem antes e após a reticulação foram determinadas, sendo identificados os grupos funcionais antes e após a reticulação, bem como a capacidade de adsorção das mucilagens reticuladas. A mucilagem liofilizada do jaracatiá apresentou em torno de 10,14 % de cinzas, 5,51 % de fibra alimentar, 37,52 % de carboidratos totais, 16,49 % de açúcares redutores, 3,66 % de lipídeos e a 16,04 % de proteína total; a atividade antioxidante foi de 27,46 % DPPH sequestrado e o teor de fenólicos de 173,19 mg·L-1 EAG. Com a pré-purificação a maior mudança foi em relação aos carboidratos totais, que diminuíram para 15,23 %, devido a eliminação dos açúcares redutores. O efeito antimicrobiano foi mais acentuado frente a Staphylococcus aureus do que para Escherichia coli. Os monossacarídeos identificados foram Rha, Ara, Xyl, Gal, Glc, GalA. A análise para RMN indicou que os polissacarídeos principais são compostos por uma porção de arabinogalactanas do tipo I. Os espectros FTIR mostraram que houve mudança química com a reticulação e, devido à multiplicidade de grupos funcionais o material apresenta superfície reativa. A mucilagem reticulada pode ser utilizada em processos de separação de proteínas. O mecanismo cinético que controla o processo de adsorção foi melhor representado pelo modelo de pseudo-segunda ordem e em relação a isoterma de adsorção o modelo que melhor se ajustou foi o de Freundlich. Na análise termogravimétrica, observou-se que acima de 523 K (250 ºC) o uso do material se torna inviável.<br> / Abstract : Polysaccharides from plants are an interesting source of additives for various industries, mainly for the food, pharmaceutical and chemical industries. Mucilage is chemically composed of water, pectins, sugars and organic acids. The jaracatiá [Carica quercifolia (A. St.-Hil) Hieron] belongs to the Caricaceae family and Vasconcellea genus. Its characterization is important since data on the species is scarce. With this study, it was possible to propose applications, contributing to the preservation of the species and the use of new plant sources (Brazilian biodiversity). Its proximate composition as well as the analysis of functional groups, mono and polysaccharide composition, rheological and thermal behavior were determined. After the characterization, the mucilage crosslinking was proposed in order to obtain a protein adsorbents. The characteristics of mucilage before and after crosslinking were measured, identifying functional groups before and after crosslinking, as well as the adsorption capacity of the crosslinked mucilage. The freeze-dried mucilage of the jaracatiá presented around 10.14% ash, 5.51% dietary fiber, 37.52% of total carbohydrates, 16.49% of reducing sugars, 3.66% lipids and 16.04% total protein. The antioxidant activity was 27.46% sequestered DPPH and the phenolic content of 173.19 mg L-1 GAE. With the pre-purification, the biggest change was observed for total carbohydrates, which decreased to 15.23% due to elimination of reducing sugars. The antimicrobial effect was more pronounced against Staphylococcus aureus than Escherichia coli. The monosaccharides identified were Rha, Ara, Xyl, Gal, Glc and GalA. The NMR spectra indicated that the major polysaccharides are composed of a portion of type I arabinogalactans. The FTIR spectra showed that there was a chemical change with the crosslinking and because of the multiplicity of functional groups the material has a reactive surface. The crosslinked mucilage may be used in protein separation processes. The kinetic mechanism that controls the adsorption process was best represented by the pseudo-second-order model. The model that best fit the sorption isotherm was the Freundlich. The thermogravimetric analysis showed that it is unfeasible the processing of this material above 523 K (250 °C).

Orientador: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Banca: Luiz Juliano / Banca: Vitor Marcelo Silveira Bueno Brandão de Oliveira / Banca: Marcos Roberto de Mattos Fontes / Banca: Paula Rahal Liberatore / Resumo: As peptidases ou proteases hidrolisam ligações peptídicas. Apesar de todas terem essa característica funcional comum, elas diferem acentuadamente no seu grau de especificidade. O conhecimento da especificidade das cisteíno-peptidase, nos fornece valiosas informações que podem levar a uma melhor compreensão da relação estrutura-função, do papel fisiológico destas enzimas, ou para o desenho de inibidores seletivos. Pela caracterização realizada, a Fastuosaina, uma cisteíno peptidase extraída de frutos verdes de gravatá (Bromelia fastuosa) possui um pH ótimo próximo do neutro, semelhante à Bromelina do talo e do fruto, por enquanto para a Papaína, que possui um pH ótimo de 6,3. Em relação à estabilidade térmica, a Fastuosaina mostrou ser mais resistente à desnaturação, seguida pela Papaína, a Bromelina do fruto e por último a Bromelina do talo. / Abstract: Peptidases, also known as proteases, hydrolyse peptide bonds with different specificities. Knowing their preferences for cleavage sites, gives valuable informations that can lead to a better understanding of the structure-function relationships, their physiological role, or for design of selective inhibitors. We performed a characterization of Fastuosain, a cystein-peptidase isolated from unripe fruits of "gravatá" (Bromelia fastuosa), which showed an optimum pH near 7.0, as found also for stem and fruit bromelains. Papain showed a lower value, at pH 6.3. Concerning its thermal stability, Fastuosain showed higher resistance to denaturation, followed by Papain, Fruit and Stem Bromelain. / Doutor

Muitas estratégias são indicadas a fim de suplantar a baixa permeabilidade de fármacos através da epiderme, umas delas, a de incluir promotores de penetração em formulações farmacêuticas e/ou cosméticas, formulados em sistemas terapêuticos transdérmicos (TTS). Estas substâncias são passíveis de modificar os domínios proteicos da epiderme e removerem provisoriamente a resistência da barreira do estrato córneo, permitindo o acesso dos fármacos aos tecidos viáveis através da circulação sistêmica. A natureza do veículo tópico é conhecida por desempenhar um papel importante na promoção da absorção dentro e através da pele. Os veículos tópicos convencionais, como pomadas, cremes ou géis, exercem predominantemente seus efeitos ao liberar o medicamento na superfície, e as moléculas dos fármacos, então, se difundem através de suas camadas. Os hidrogéis foram obtidos a partir de material polimérico reticulado por processo de radiação ionizante. A cafeína foi escolhida como substância modelo de permeação dérmica, por ser hidrofílica. Entretanto, para que a molécula penetre na barreira cutânea, deve ser associada a promotores de absorção cutânea. A papaína tem sido aplicada na pele íntegra como agente promotor de penetração e absorção cutânea. As enzimas interferem na absorção percutânea de fármacos por duas formas: como um potencializador de penetração e retardador de absorção. Neste trabalho, foram sintetizadas membranas de hidrogéis com poli (N-2- vinil - pirolidona) (PVP), poli (etilenoglicol) (PEG), poli (etilenoglicol diacrilato) (PEG-DA), cafeína e gel de papaína formado de polímero sintético pré-neutralizado para estudo da cinética de permeação cutânea, utilizando ecdise de cobra (Boa Constrictor) como membrana modelo de permeação. As membranas de hidrogel preparadas, foram caracterizadas por análise de termogravimetria (TG), calorimetria exploratória diferencial (DSC), intumescimento, fração gel, microscopia eletrônica de varredura (MEV), e realizados ensaios de permeação dérmica em células de Franz e tomografia de coerência óptica (OCT). O teste de permeação \"in vitro\" desses hidrogéis na ecdise foram satisfatórios, comprovando a eficácia da papaína como promotora de permeação dérmica e contribuindo, assim, para futuros trabalhos que possam explorar ainda mais essa área de entrega de fármacos. / Many strategies are indicated for supplanting the low permeability of pharmaceuticals through the epidermis, one of them to include developers of access in cosmetics formulations, produced in Transdermal Drug Systems. Those substances are capable of modifying the protein dominates of the epidermis and temporarily remove the resistant barrier of the stratum cornea, allowing this way, the access to the pharmaceutical to the viable fabric through the systemic circulation. The nature of the topic vehicle is known for developing an important role of the absorption inside and through the skin. The conventional ways, as ointments, creams or gels, predominated theirs effects by liberating the medication in the superficies, so the pharmaceutical molecules defund beyond their layers. The hydrogels were got from the polymeric reticulate material for ionizing radiation process. The caffeine was chosen as a substance model of the dermis permeation, due to be hydrophilic. Moreover, for the molecule access, it is necessary to the developers of dermal absorption. The papain has been applied in the integra skin as agent promoter of access and dermal absorption. The enzymes interfere in the dermal absorption of the pharmaceutical in two forms: as optimizing, as well as, retarding absorption. This essay we could synthesized hydrogel membranes as Poly (N -2 - vinyl-pirolidon) (PVP), Poly(ethylene glycol) (PEG), Poly (ethylene glycol) diacrylate (PEG-DA), caffeine and papain gel formed by polymeric synthetic pre-neutralized for the studies of kinetic of dermal access for using ecdysis of a snake (Boa constrictor) as a membrane model of access. The membranes of hydrogel prepared for this essay were characterized by thermogravimetric analysis (TGA), differential scanning calorimetry (DSC), swelling, gel fraction, scanning electron microscopy (SEM), and rehearsal of dermal access in Franz cells and optical coherence tomography (OCT). The test of permeation in vitro was satisfactory evidencing the efficacies of papain as a developer of dermal permeation, as well as, contributing for the future work that can explore even more this area of pharmaceutical delivery.

A papaína é uma enzima proteolítica extraída do látex das folhas e frutos do mamão verde adulto. Tem sido amplamente utilizada como agente debridante de escaras e cicatrizante de feridas. No entanto, apresenta baixa estabilidade, o que limita seu uso a formulações de manipulação extemporânea ou de curto prazo de validade. O objetivo deste trabalho foi incorporar a papaína em uma matriz polimérica de modo a obter um sistema de liberação controlada do fármaco. Polímeros de aplicação médica foram selecionados e inicialmente avaliados quanto à sua citotoxicidade. Os polímeros não-citotóxicos foram submetidos ao ensaio de irritação cutânea primária in vivo em animais, para avaliar sua capacidade de causar irritação na pele humana. Diversas membranas foram preparadas com os polímeros considerados adequados para aplicação biomédica para incorporação da papaína. As membranas preparadas com 2% de papaína foram selecionadas para serem submetidas ao ensaio de liberação com células de difusão de Franz. Parte dessas membranas foi irradiada com raios &#947; na dose de 25 kGy para esterilização do material. As membranas irradiadas e não-irradiadas foram testadas simultaneamente a fim de verificar se a radiação &#947; interferiria no perfil de liberação do fármaco. Os resultados do ensaio de liberação indicaram que o fármaco é liberado de maneira constante durante as 12 horas iniciais do experimento. A análise, por Microscopia Eletrônica de Varredura, das membranas irradiadas revelou que as membranas formadas são bastante densas e que seus poros são pequenos. / Papain is a proteolytic enzyme extracted from the latex of green papaya leaves and fruits. It has been widely used as debridant for scars and wound healing agent. However, papain presents low stability, which limits its use to extemporaneous or short shelf life formulations. The purpose of this study was to entrap papain into a polymeric matrix in order to obtain a drug delivery system. Polymers of medical application were selected and firstly assessed for cytotoxicity. Non-cytotoxic polymers were evaluated for primary cutaneous irritation test in vivo in animals, in order to verify if they are able to cause irritation to human skin. Many membranes were prepared with the polymers considered suitable for biomedical application for papain entrapment. Membranes containing 2% papain were selected to be evaluated in the releasing test using Fanz diffusion cells. Some of these membranes were irradiated by &#947; rays with 25 kGy dose for material sterilization. Irradiated and non-irradiated membranes were simultaneously assessed in order to verify if &#947; radiation interferes on drug releasing profile. Results obtained from releasing test indicated the drug is released in a constant manner over 12 hours in the beginning of the experiment. Scanning Eletronic Microscopy analysis of the irradiated membranes revealed that membranes are very dense and its pores are small.

A papaína é uma enzima proteolítica extraída do látex das folhas e frutos do mamão verde adulto. Tem sido amplamente utilizada como agente debridante de escaras e cicatrizante de feridas. No entanto, apresenta baixa estabilidade, o que limita seu uso a formulações de manipulação extemporânea ou de curto prazo de validade. O objetivo deste trabalho foi incorporar a papaína em uma matriz polimérica de modo a obter um sistema de liberação controlada do fármaco. Polímeros de aplicação médica foram selecionados e inicialmente avaliados quanto à sua citotoxicidade. Os polímeros não-citotóxicos foram submetidos ao ensaio de irritação cutânea primária in vivo em animais, para avaliar sua capacidade de causar irritação na pele humana. Diversas membranas foram preparadas com os polímeros considerados adequados para aplicação biomédica para incorporação da papaína. As membranas preparadas com 2% de papaína foram selecionadas para serem submetidas ao ensaio de liberação com células de difusão de Franz. Parte dessas membranas foi irradiada com raios &#947; na dose de 25 kGy para esterilização do material. As membranas irradiadas e não-irradiadas foram testadas simultaneamente a fim de verificar se a radiação &#947; interferiria no perfil de liberação do fármaco. Os resultados do ensaio de liberação indicaram que o fármaco é liberado de maneira constante durante as 12 horas iniciais do experimento. A análise, por Microscopia Eletrônica de Varredura, das membranas irradiadas revelou que as membranas formadas são bastante densas e que seus poros são pequenos. / Papain is a proteolytic enzyme extracted from the latex of green papaya leaves and fruits. It has been widely used as debridant for scars and wound healing agent. However, papain presents low stability, which limits its use to extemporaneous or short shelf life formulations. The purpose of this study was to entrap papain into a polymeric matrix in order to obtain a drug delivery system. Polymers of medical application were selected and firstly assessed for cytotoxicity. Non-cytotoxic polymers were evaluated for primary cutaneous irritation test in vivo in animals, in order to verify if they are able to cause irritation to human skin. Many membranes were prepared with the polymers considered suitable for biomedical application for papain entrapment. Membranes containing 2% papain were selected to be evaluated in the releasing test using Fanz diffusion cells. Some of these membranes were irradiated by &#947; rays with 25 kGy dose for material sterilization. Irradiated and non-irradiated membranes were simultaneously assessed in order to verify if &#947; radiation interferes on drug releasing profile. Results obtained from releasing test indicated the drug is released in a constant manner over 12 hours in the beginning of the experiment. Scanning Eletronic Microscopy analysis of the irradiated membranes revealed that membranes are very dense and its pores are small.

Orientador: Winston Bonetti Yoshida / Coorientador: Luciana Patrícia Fernandes Abbade / Banca: José Aderval Aragão / Banca: Marcone Lima Sobreira / Banca: Beatriz Gultton Renaud / Banca: Marcelo José Almeida / Resumo: A UV traduz um dos estágios mais avançados da doença venosa crônica (DVC), e esta apresenta elevada morbidade pela sua cronificação e recidivas frequentes. Constitui importante problema de saúde pública por alterar a qualidade de vida do indivíduo e elevar o ônus público, já que os tratamentos são longos e dispendiosos. Apesar dos fatores de risco e a etiopatogenia desta doença serem conhecidos, grande parte da população usuária do sistema público de saúde não possui diagnóstico e tratamento precoces da DVC, resultando assim em evolução clínica tormentosa da doença. A dificuldade de avaliação com profissionais especializados predispõe a evolução da UV. Quando manejadas de formas inadequadas, as UVs tendem a tornar crônico o processo de cicatrização e ficam sujeitas a complicações como colonização crítica e infecção de partes moles. Esta revisão procura reunir informações atualizadas sobre a epidemiologia da DVC (enfocando principalmente dados do Brasil). Além disso, serão discutidos os fatores de risco, a etiopatogenia da UV e suas manifestações clínicas. Finalmente será feita uma atualização sobre os métodos auxiliares do processo de cicatrização da UV, expondo os avanços ao conhecimento relacionados a esta área, incluindo o preparo do leito da úlcera. O objetivo é propor mudanças que favoreçam a quebra do ciclo pernicioso da UV / Abstract: The VU is one of the most advanced stage' s chronic venous disease (CVD), and it has a high morbidity, because your recidivates are chronics and happens frequently. It is an important public health problem, because it modifies the quality of an individual and put up the public costs, since the medical treatment are longs and expensive. In spite of the risk factors and the studies of this disease are knew, a very part of the population, that use the public health utilities, don't have diagnosis and CVD'S precocious medical treatment, for this reason the disease evolution is very hard. There is the evolution of the VU, because it is very difficult to evaluate it with an expert professional. The VUs can become chronics in a healing process, when they are badly controlled; they can dominate it and contaminate the soft parts. The objective of this revision is to join current in formations about CVD's epidemiology (mainly Brazilian documents). Besides, the risk factors, the VU's path physiology and their clinic manifestations will be discussed Finally, will be done an update about the auxiliary methods of the VU's healing process, showing the know advances in this area, and how to prepare an ulcer bed. The object is to suggest changes that finish the VU's pernicious cycle / Doutor

Orientador: Pedro de Oliva Neto / Banca: Valéria Marta Gomes de Lima / Banca: Rubens Monti / Resumo: Durante a de fermentação alcoólica industrial, contaminações são comuns no meio fermentativo, causadas por bactérias e/ou leveduras selvagens. Um dos principais problemas devido a contaminações microbianas é a floculação das leveduras, responsável por dificuldades operacionais na indústria e implicações econômicas. A floculação pode ser resolvida por um tratamento enzimático à base de proteases, que agem na parede celular da levedura, substituindo o tratamento convencional, que emprega ácido sulfúrico. No entanto, o tratamento enzimático é economicamente inviável para a aplicação industrial. Para reduzir esses custos, o presente trabalho estudou duas técnicas para reutilizar a atividade catalítica da papaína. A primeira foi baseada na recuperação da enzima livre pela centrifugação da suspensão de leveduras. A segunda foi a imobilização da enzima nos suportes quitina e bagaço de cana (celulose). A enzima foi imobilizada em quitina tratada ou não com glutaraldeído, empregando diferentes concentrações de polietilenoimina, perfazendo 6 diferentes protocolos de imobilização em quitina. A imobilização em bagaço de cana foi efetuada pela ativação da celulose com ácido periódico. A quantidade de proteína imobilizada e os rendimentos da atividade da enzima imobilizada foram muito baixos nas técnicas de imobilização. A atividade específica da enzima imobilizada, no entanto, foi satisfatória em algumas imobilizações, com exceção daquelas que utilizaram suporte tratado com glutaraldeído, mostrando o efeito negativo desse reagente sobre a papaína e a importância do aprimoramento dessa técnica. A suspensão de leveduras tratada com papaína livre foi centrifugada e esse processo foi realizado 14 vezes, usando a mesma papaína recuperada. O uso de SDS nesse processo para potencializar a desfloculação celular... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: During the industrial alcoholic fermentation contaminations are common due to bacterium and/or wild yeasts in the wort. One of the principal problems due to microbial contaminations is the yeasts flocculation, responsible by industrial operational difficulties and economic implications. The flocculation can be solved by protease enzymatic treatment, which acts on the yeast cellular wall, changing the conventional treatment, which employs sulfuric acid. However, the enzymatic treatment is economically impracticable for industrial application. In order to reduce these costs, this work studied two techniques to reuse the catalytic activity of papain. The first one was based on the free enzyme recuperation by yeast suspension centrifugation. The second one was the enzyme immobilization on chitin and sugar cane bagasse (cellulose) supports. The enzyme was immobilized on treated or nontreated chitin with glutaraldehyde, using different concentrations of polyethylenimine, resulting in 6 different immobilization techniques on chitin. The immobilization on cane bagasse was made by cellulose activation with periodic acid. The quantity of immobilized protein and its activity yields were very low in the immobilization techniques. Nevertheless, the specific activity of the immobilized enzyme was satisfactory in several immobilizations, except those which have used treated-support with glutaraldehyde, showing the negative effect of this reagent on papain and the importance of improvement of this technique. The yeast suspension treated with free papain in solution was centrifuged and this process was done 14 times, using the same recovered papain. The use of SDS in this process to improve the cell deflocculation wasn't efficient. The yeast cell suspension centrifugation after free-enzyme treatment must be studied to industrial purposes. / Mestre

O presente trabalho avaliou, por medida de conteúdo protéico, análise eletroforética, por determinação da atividade proteolítica e verificação da estabilidade dessa atividade, matérias-primas papaína de dois fabricantes. Formulações géis de Carbopol® 940, Natrosol® 250 HHR e Pluronic® F127, contendo matéria-prima papaína a 1%, foram desenvolvidas e avaliadas quanto à estabilidade e a eficácia in vitro da atividade proteolítica. Os estudos de estabilidade foram conduzidos por medida da atividade proteolítica da papaína, utilizando a caseína como substrato, em amostras armazenadas sob diferentes condições de temperatura e umidade. A eficácia da ação proteolítica in vitro foi avaliada em gel de poliacrilamida, contendo gelatina como substrato. A matéria-prima do fabricante B apresentou maior conteúdo protéico e maior atividade proteolítica do que a matériaprima do fabricante A. Ambas matérias-primas demonstraram estabilidade da atividade funcional, quando armazenadas a 4°C, por um período de 6 meses. Quando armazenadas a 30°C/70%UR e a 40°C/70%UR, houve perda acentuada dessa atividade. A medida da atividade proteolítica das formulações, após 48 horas de sua preparação, mostrou que apenas 8% da atividade funcional total foi detectada. Este resultado pode indicar interação entre a papaína e os componentes das formulações, levando a uma perda da atividade proteolítica, ou uma redução da velocidade da reação enzimática. Os estudos da estabilidade da atividade funcional mostraram que ambas formulações foram estáveis, quando armazenadas a 4°C, por 6 meses. Entretanto, quando armazenadas a 30°C/70%UR e a 40°C/70%UR, foi observada rápida redução da atividade proteolítica, em função do tempo de armazenamento. A avaliação da atividade proteolítica das formulações em gel de poliacrilamida, adicionado de gelatina como substrato, após 6 horas de incubação a 37°C, demonstrou que a formulação gel de Carbopol® 940 foi a mais eficaz, até mesmo superior à formulação extemporânea de matéria-prima papaína 1%, em solução aquosa. Este resultado evidencia que esse polímero foi o mais adequado para veicular a papaína. Além disso, foi o que apresentou maior eficácia proteolítica no teste in vitro. Dessa forma, esta formulação poderá ser empregada para auxiliar o processo de cicatrização de feridas e queimaduras, nos diferentes níveis assistenciais de saúde, com garantia de eficácia, segurança e qualidade. / The present work evaluated by content of protein measurement, electrophoresis, proteolytic activity determination and verification of this activity stability, raw materials of papain obtained from two manufacturers. Gel formulations of Carbopol® 940, Natrosol® 250 HHR and Pluronic® F127, and containing 1% of papain, were developed and evaluated with regard to stability and in vitro efficacy of proteolytic activity. The stability studies were conducted by papain proteolytic activity measurement, using casein as substrate and the samples were stored under different conditions of temperature and humidity. The in vitro efficacy of proteolytic activity was evaluated using polyacrylamide gel containing gelatin as substrate. The raw material obtained from manufacturer B showed higher content of protein and higher proteolytic activity than the one from manufacturer A. Both raw materials showed functional stability when stored at 4°C during 6 months. When stored at 30°C/70% RH and at 40°C/70% RH, there was significant loss of these activities. The measure of formulations proteolytic activity, after 48 hours from its preparation, showed that only 8% of the total activity was detected. This result might indicate possible interactions between papain and formulation components, which lead to a loss in the proteolytic activity or a reduction in the speed of enzymatic reaction. The functional stability studies showed that all formulations were stable when stored at 4°C during 6 months. However, when stored at 30°C/70%RH and 40°C/70%RH, it was observed fast decrease in the proteolytic activity as a function of storage time. The evaluation of formulations proteolytic activity in polyacrylamide gel, added with gelatin as substrate, after 6 hours of incubation at 37°C, showed that Carbopol® 940 gel formulation was the most efficient, being also better than the formulation recently prepared with 1% of papain raw material in aqueous solution. This result demonstrates that this polymer was the most adequate to be incorporated with papain. Besides this, it was the one that showed higher proteolytic efficacy in the in vitro test. Then, this formulation might be employed to help in the wound and burns cicatrisation process, in the different levels of health assistance, with efficacy, security and quality guarantee.

O diabetes mellitus é um transtorno metabólico que leva a uma deficiência na secreção de insulina, na sua ação ou em ambos. O mau controle glicêmico pode acarretar em diversas complicações, entre elas, o pé diabético, que é o responsável pela maior parte de amputações não traumáticas dos membros inferiores e gera um custo muito alto para o tratamento de feridas e de cicatrização das amputações. A tecnologia tem proporcionado a criação de novos métodos de tratamento, como as membranas de hidrogel veiculadoras de fármaco. Com isso o nosso objetivo foi testar a eficiência do hidrogel com papaína no tratamento de úlceras em pés diabéticos. A pesquisa foi realizada no município de Porto Nacional (TO) com todos os pacientes portadores de pé diabéticos que deram entrada no HRPPN de 01 de outubro de 2014 a 31 de outubro de 2015, que se encaixavam dentro dos critérios de inclusão do trabalho e assinaram o TCLE. Para a análise socioeconômica aplicou-se um questionário com perguntas objetivas. Para a aplicação da membrana, as feridas foram lavadas com soro fisiológico a 0,9% e os curativos foram realizados de acordo com o protocolo do hospital e trocados a cada 24 horas. Utilizou-se uma planilha de diagnóstico para realizar o acompanhamento diário das feridas. Dezoito pacientes participaram do estudo, sendo que, 16 deles foram internados devido ao pé diabético e ao DM descompensado. 50% dos pacientes eram do sexo feminino e 50% do masculino, todos com idade entre 29 anos e 80 anos. 22% fazem uso de hipoglicemiante oral e insulina e os outros 78% usam apenas hipoglicemiante oral. 82% têm companheiro ou é casado e a maior parte não possui renda ou recebe até um salário mínimo (61%). Quanto à escolaridade, 28% são analfabetos e 34% não concluíram o ensino médio. 50% dos pacientes são naturais de Porto Nacional e 11% de outros estados. Quanto ao conhecimento que os pacientes tinham das complicações que tem como causa o DM, o pé diabético foi a única citada por todos, as demais complicações eram desconhecidas por muitos; somente um paciente tem ciência de todas as complicações. Dos 18 pacientes, 7 puderam ser tratados com a membrana de hidrogel com papaína, mas como não houve melhora significativa, a membrana teve que ser substituída pelo curativo convencional. A membrana não aderiu à pele saudável e nem na ferida, uma vez que apresentou rigidez, fato que pode ter retardado o processo de cicatrização, já que o curativo não envolveu a ferida completamente. A membrana também apresentou baixa taxa de absorção do exsudato, fazendo com que as feridas ficassem maceradas. A cisteína, composto presente na membrana, fez com que ela liberasse um forte odor que causou repulsa nos pacientes e seus familiares, fato que desmotivou o paciente a querer realizar o tratamento. Dados estes resultados, infere-se que a utilização do hidrogel com papaína não trouxe melhora para as feridas do pé diabético, houve um leve desbridamento em algumas feridas, mas sem cicatrização. / Diabetes mellitus is a metabolic disorder that leads to a deficiency in insulin secretion, its action or both. Poor glycemic control can lead to a number of complications, including diabetic foot, which is responsible for most non- traumatic lower limb amputations and generates a very high cost for wound healing and amputation healing. The technology has provided the creation of new treatment methods, such as drug-bearing hydrogel membranes. Our aim is to test the efficiency of papain hydrogel in the treatment of diabetic foot ulcers. The study was carried out in the municipality of Porto Nacional (TO) with all patients with diabetic foot who entered the HRPPN from October 1, 2014 to October 31, 2015, who fit within the inclusion criteria of the work and signed The TCLE. For the socioeconomic analysis a questionnaire with direct questions was applied. For the application of the membrane the wounds were washed with 0.9% saline and the dressings were performed according to the hospital protocol and changed every 24 hours. A diagnostic worksheet was used to perform the daily follow-up of the wounds. Eighteen patients participated in the study, and 16 of them were hospitalized due to diabetic foot and decompensated DM. 50% of the patients were female and 50% were male, all aged between 29 years and 80 years. 22% use oral hypoglycemic and insulin and the other 78% only use oral hypoglycemic. 82% have a partner or are married and most of them have no income or receive up to a minimum wage (61%). As for schooling, 28% are illiterate and 34% did not finish high school. 50% of the patients are from Porto Nacional and 11% from other states. As for the patients\' knowledge of the complications caused by DM, the diabetic foot was the only one mentioned by all, the other complications were unknown by many; only one patient is aware of all the complications. From 18 patients, 7 could be treated with the papain hydrogel membrane, but as there was no significant improvement, the membrane had to be replaced by the conventional dressing. The membrane did not adhere to healthy skin or even to the wound, since it presented rigidity, a fact that may have delayed the healing process since the dressing did not involve the wound completely. The membrane also had a low absorption rate of the exudate, causing the wounds to become macerated. The cysteine, a compound present in the membrane, caused it to release a strong odor that caused disgust in patients and their families, a fact that discouraged the patient from wanting to perform the treatment. Given these results, it was inferred that the use of the papain hydrogel did not improve the wounds of the diabetic foot, there was a slight debridement in some wounds, but without healing.