Submitted by Murilo Chuba Rodrigues null (murilo_rodrigues16@hotmail.com) on 2017-01-15T23:54:58Z No. of bitstreams: 1 com ficha - DISSERTAÇÃO MURILO CHUBA RODRIGUES final.pdf: 1233777 bytes, checksum: a9ee0c1b152d7b53ba3a570c43045cc0 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-19T17:58:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rodrigues_mc_me_bot.pdf: 1233777 bytes, checksum: a9ee0c1b152d7b53ba3a570c43045cc0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-19T17:58:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rodrigues_mc_me_bot.pdf: 1233777 bytes, checksum: a9ee0c1b152d7b53ba3a570c43045cc0 (MD5) Previous issue date: 2016-12-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo avaliou os efeitos da administração oral de meloxicam nas respostas metabólicas, inflamatórias e de fase-aguda em bovinos de corte recebendo um desafio de lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano (Exp. 1; d -1 a d 6) ou vacina contra patógenos respiratórios (Exp. 2; d 7 a d 21). Vinte e um novilhos (n=11) e novilhas (n=10) foram alocados em baias individuais no d -15 e receberam água, mistura de sais minerais e vitaminas, e feno de alfafa ad libitum até d 21. No d -1, os animais foram classificados por sexo e peso corporal (PC) e designado para um dos três tratamentos a seguir: 1) Administração via oral de Meloxicam (1mg/Kg PC, diariamente; Carlsbad Technologies Inc., Carlsbad, CA, EUA) do d -1 até d 6 (MEL8); 2) Administração via oral de Meloxicam (1mg/Kg PC; Carlsbad Technologies Inc., Carlsbad, CA, EUA) no d 0 e de monoidrato de lactose (1mg/Kg PC; Avantor Performance Materials, Center Valley, PA, EUA) no d -1 e do d 1 até d 6 (MEL1); ou 3) Administração via oral de monoidrato de lactose (1mg/Kg PC, diariamente; Avantor Performance Materials, Center Valley, PA, EUA) do d -1 até d 6 (CON). Para o Experimento 1, no d 0, os animais receberam infusão intravenosa de LPS (0,5 μg/Kg PC; Escherichia coli 0111:B4, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) simultaneamente à administração do tratamento. Temperatura retal (RTEMP) foi medida, e amostras de sangue coletadas nas horas −2, 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 24, 36, 48, 60, 72, 96, 120, e 144 h relativa à administração de LPS. Não foram detectados efeitos de tratamentos (P ≥ 0,36) para RTEMP, concentração sérica de Fator de Necrose Tumoral Alfa (TNFα), concentrações plasmáticas de haptoglobina, cortisol, insulina e leptina, assim como para expressão de RNAm sanguíneo para TNFα e ciclooxigenase-2 (COX2), contudo todas as variáveis se elevaram (P < 0,01) dentre os tratamentos, após administração de LPS. No Experimento 2, os animais receberam os mesmos tratamentos para os quais foram designados no Exp. 1, dos dias d 7 até d 13 e foram vacinados contra patógenos respiratórios juntamente com a administração dos tratamentos no d 8. Amostras de sangue foram coletadas e RTEMP registradas nos mesmos momentos realizados no Exp. 1 com adição das horas 168, 240 e 336 h relativas ao momento da vacinação. Nenhum efeito de 27 tratamento foi detectado (P ≥ 0,26) para RTEMP, nem para nenhumas das mesmas concentrações plasmáticas e séricas avaliadas no Exp. 1, e concentrações séricas de anticorpos contra Mannheimia haemolytica ou títulos contra Vírus Sincicial Bovino, Herpesvirus-1, Diarreia Viral Bovina vírus-1, e Vírus Parainfluenza-3. Todas as variáveis aumentaram (P < 0,01) dentre os tratamentos após a vacinação, exceto para TNFα sérico e títulos contra Diarreia Viral Bovina vírus-1 (P ≥ 0,40). Coletivamente, este estudo não encontrou evidencias de que administração oral de meloxicam, nas doses e intervalos adotados, mitigaram reações metabólicas, inflamatórias e de fase-aguda desencadeadas pela infusão de LPS ou vacinação contra doenças respiratórias. / This study evaluated the effects of oral meloxicam administration on metabolic, inflammatory, and acute-phase responses of beef cattle receiving a lipopolysaccharide (LPS) challenge (Exp. 1; d −1 to 6) or vaccinated against respiratory pathogens (Exp. 2; d 7 to 21). Twenty-one Angus steers (n = 11) and heifers (n = 10) were housed in individual pens on d −15 and were offered free-choice water, mineral-vitamin mix, and hay until d 21. In Exp. 1, cattle were ranked on d −1 by sex and BW and assigned to 1) oral meloxicam administration (1 mg/kg BW daily) from day −1 to 6 (MEL8), 2) oral meloxicam administration (1 mg/kg BW) on d 0 and oral lactose monohydrate administration (1 mg/kg BW) on d −1 and from d 1 to 6 (MEL1), or 3) oral lactose monohydrate administration (1 mg/ kg BW daily) from d −1 to 6 (CON). On d 0, cattle received an intravenous LPS bolus (0.5 μg/kg BW) concurrently with treatment administration. Rectal temperature (RTEMP) was assessed, and blood samples were collected at −2, 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 24, 36, 48, 60, 72, 96, 120, and 144 h relative to LPS administration. No treatment effects were detected (P ≥ 0.36) for RTEMP, concentrations of serum tumor necrosis factor α (TNFα), plasma haptoglobin, cortisol, insulin, and leptin, as well as blood mRNA expression of TNFα and cyclooxygenase-2, although all variables increased (P < 0.01) across treatments after LPS administration. In Exp. 2, cattle received the same treatments that they were assigned to in Exp. 1 from d 7 to d 13 and were vaccinated against respiratory pathogens concurrently with treatment administration on d 8. Blood samples were collected, and RTEMP was assessed as in Exp. 1 in addition to 168, 240, and 336 h relative to vaccination. No treatment effects were detected (P ≥ 0.26) for RTEMP, the same plasma and serum variables evaluated in Exp. 1, and serum concentrations of antibodies against Mannheimia haemolytica or serum titers against bovine respiratory syncytial virus, bovine herpesvirus-1, bovine viral diarrhea virus-1, and parainfluenza-3 virus. All variables increased (P < 0.01) across treatments after vaccination, except for serum TNFα and titers against bovine viral diarrhea virus-1 (P ≥ 0.40). Collectively, this study found no evidence that oral meloxicam administration, at the doses and intervals utilized herein, mitigated the metabolic, inflammatory, and acute-phase reactions elicited by LPS administration or vaccination against respiratory pathogens.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA12MA041.pdf: 1697230 bytes, checksum: 74b9e77e48f98afc5d376bca4273d481 (MD5) Previous issue date: 2012-07-27 / Endotoxemia is one of the most difficult problems of diagnostic and treatment, due to the initiate of an exaggerated inflammatory response, culminating with the involvement of multiple organs. Ketamine has anti-inflamatory effects in several species, however, in cats this effect haven t yet been proven. The objective of this study was to evaluate the clinical and anti-inflamatory effects of ketamine in subanesthetic doses, before or after LPS injection in cats. Nine health male cats were used in a crossover study. After fasting for 12 hours and 6 hours of water, were administered dexmedetomidine (5 ug kg-1) and butorphanol (0.3 mg kg- 1), by intramuscular injection, for inserting a catheter into the jugular vein and into the cephalic vein. The next day, the animals were randomized and divided into three groups: lipopolysaccharide (LPS, n=9) who received a bolus of NaCl 0,9% solution (0.05 ml kg-1), followed by continuous infusion (IC) LPS (2 ug kg-1 h-1) the rate of 2 ml h-1 kg-1, four hours, ketamine/LPS (C/LPS, n=9) who received a bolus of ketamine (0.5 mg kg-1), followed by the IC of ketamine (10 ug kg-1 min-1) and LPS (2 ug kg-1 h-1) the rate of 2 ml kg-1 h-1 for two hours and, after infusion of LPS (2 ug kg-1 h-1) at the same rate for two hours; LPS/ketamine (LPS/C, n=9), which received IC LPS (2 ug kg-1 h-1) for two hours and, after bolus injection of ketamine (0.5 mg kg-1), the same IC (10 ug kg-1 min-1) and LPS (2 ug kg-1 h-1) at the same rate for two hours. All treatments were diluted in NaCl 0,9% and administered intravenously. The parameters measured were the following moments: M-15, before begin IC of LPS and 5 (M5) 30 (M30), 60 (M60), 90 (M90), 120 (M120), 150 (M150), 180 (M180), 240 (M240), 360 (M360), 480 (M480), 600 (M600) and 720 (M720) minutes after the start of the IC. In addition, we evaluated the clinical, biochemical and hemogram 1440, 2880 and 4320 minutes after the start of IC LPS. We observed higher values of heart rate (HR) of M5 to M120 in C/LPS and lowest values of M150 to M240 and of M600 to M720 in the LPS compared to other treatments. Were also observed of M5 in the C/LPS, M60 in the LPS/C and of M90 in the LPS to M720 higher values of HR compared to M-15. Systolic blood pressure showed up in all groups under the M360 at M720 compared to baseline. In all treatments there was an increase in rectal temperature of M600 to M60 in relation of M-15. The levels of glucose and lactate increased of M120 to M360 in relation of baseline in all groups. The leukocytes were reduced by up to M60 at M360 in all treatments compared to M-15. The triglyceride is submitted to high M720 M1440 from baseline in all groups. The conclusion was that subanesthetic doses of ketamine showed minimal changes in cardiovascular parameters, with increased heart rate. Ketamine administered before or after LPS injection isn t softened or reversed the detrimental effects that in cats submitted to experimental endotoxemia by continuous infusion of LPS / A endotoxemia é um dos problemas com maiores dificuldades de diagnóstico e tratamento, devido ao desencadeamento de uma resposta imunológica exacerbada, culminando com o envolvimento de múltiplos órgãos. A cetamina possui efeitos anti-inflamatórios em diversas espécies, entretanto, em felinos esse ainda não foi comprovado. Objetivou-se neste estudo, avaliar os efeitos clínicos e anti-inflamatórios da administração de cetamina, em doses subanestésicas, previamente ou após a indução da endotoxemia em felinos. Foram utilizados nove gatos machos, hígidos, sendo autocontroles. Após jejum alimentar de 12 horas e hídrico de seis horas, administrou-se dexmedetomidina (5 ug kg-1) e butorfanol (0,3 mg kg-1), pela via intramuscular, para inserção de um cateter na veia jugular e na veia cefálica. No dia seguinte, os animais foram sorteados e alocados em três grupos: lipopolissacarídeo (LPS, n=9), os quais receberam bolus de solução de NaCl 0,9% (0,05 ml kg-1), seguida por infusão contínua (IC) de LPS (2 ug kg-1 h-1) na taxa de 2 ml kg-1 h-1, durante quatro horas; cetamina/LPS (C/LPS, n=9), os quais receberam bolus de cetamina (0,5 mg kg-1), seguido da IC de cetamina (10 ug kg-1 min-1) e LPS (2 ug kg-1 h-1) na taxa de 2 ml kg-1 h-1 por duas horas e, após, infusão de LPS (2 ug kg-1 h-1) na mesma taxa por mais duas horas; LPS/Cetamina (LPS/C, n=9), os quais receberam IC de LPS (2 ug kg-1 h-1), por duas horas e, logo após bolus de cetamina (0,5 mg kg-1), IC da mesma (10 ug kg-1 min-1) e LPS (2 ug kg-1 h-1) na mesma taxa por duas horas. Todos os tratamentos foram diluídos em NaCl 0,9% e administrados pela via intravenosa. Os parâmetros foram mensurados nos momentos: M-15, antes do início da IC de LPS e 5 (M5) 30 (M30), 60 (M60), 90 (M90), 120 (M120), 150 (M150), 180 (M180), 240 (M240), 360 (M360), 480 (M480), 600 (M600) e 720 (M720) minutos após o início da IC. Além disso, avaliou-se os parâmetros clínicos, hemograma e bioquímico após o início da IC de LPS. A frequência cardíaca (FC) foi maior de M5 a M120 no C/LPS e menor de M150 a M240 e M600 a M720 no LPS em relação aos outros tratamentos. De M5 no C/LPS, de M60 no LPS/C e de M90 no LPS até a M720 a FC foi maior em relação a M-15. A pressão arterial sistólica foi menor em todos os grupos de M360 a M720 em relação ao basal. Em todos os tratamento observou-se aumento da temperatura retal de M60 a M600 em relação a M-15. Os valores de glicose e lactato elevaram-se de M120 a M360 em relação ao basal nos três grupos. Os leucócitos apresentaram-se diminuídos de M60 a M360 em todos os tratamentos em relação a M-15. Os triglicerídeos apresentaram-se elevados de M720 a M1440 em relação ao basal em todos os grupos. Conclui-se que doses subanestésicas a cetamina apresentou mínimas alterações nos parâmetros cardiovasculares, com aumento da frequência cardíaca. A cetamina administrada previamente ou após a indução da endotoxemia não amenizou ou reverteu os efeitos deletérios dessa, em gatos submetidos à endotoxemia experimental através da infusão contínua de lipopolissacarídeo

Orientadora: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Banca: João Martins Pizauro Junior / Banca: Luiz Alberto Colnago / Resumo: O estabelecimento da simbiose é baseado em um complexo diálogo entre o rizóbio e a planta hospedeira. Polissacarídeos de superfície de origem rizobiana aparentam ser essenciais para o processo de infecção. A composição dos EPSs das estirpes de Rhizobium tropici SEMIA 40]7 e SEMIA 4080 diferiram quantitativamente. Os quatro tipos de fontes de carbono têm efeitos diferentes na concentração da galactose e glicose, sendo maior para SEMIA 4080 cultivada em meio contendo sacarose. Mesmo a estirpe SEMIA 4080, apresentando grande quantidade de exopolissacarídeos liberado na cultura, não apresenta diferenças significativas no número de nódulos em relação às inoculações com a estirpe SEMIA 4077, sendo esta última, a que apresenta pior desempenho quanto à massa seca dos nódulos. / Abstract: The establishment of symbiosis is based on a complex molecular dialogue between rhizobia and host plant. Rhizobial surface polysaccharides appear to be essential for the infection processo The EPSs composition produced by Rhizobium tropici SEMIA 4077 and SEMIA 4080, differed quantitatively from one another. . Four types •of culture. media showed differential effects on the concentrations of the galactose and glucose, particularly the SEMIA 4080 strain, which was cultivated in sucrose medium. Even though the SEM IA 4080 strain produced a large quantity of EPS in culture, it was not significantly different from the number of nodules related to inoculations using strain SEMIA 4077. / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo do presente estudo foi investigar o envolvimento do estresse oxidativo na lesão pulmonar aguda (LPA) induzida por lipopolissacarídeo (LPS) e as repercussões inflamatórias, estruturais e funcionais, através de análises bioquímicas de estresse oxidativo, prova de função pulmonar, análise histológica e RT-PCR para citocinas e fatores de transcrição pró-inflamatórios. Na primeira etapa foram utilizados camundongos machos C57BL6 foram divididos em sete grupos: Grupo controle (CTR) (50 &#956;L de solução fisiológica) administrados via intratraqueal [it], LPS 6 horas (10 &#956;L de LPS) [it], LPS 12 horas (10 &#956;L de LPS) [it], LPS 24 horas (10 &#956;L de LPS) [i], LPS 48 horas (10 &#956;L de LPS). Para verificar que as alterações observadas eram estresse oxidativo dependentes camundongos machos C57BL6 foram pré-tratados com N-acetilcisteína (NAC) 1 hora antes do estímulo com LPS e sacrifícados 24 horas depois do estímulo com LPS. Os animais foram divididos da seguinte forma: Grupo LPS 24 horas (10 &#956;L) [it], grupo NAC 40 mg/kg (gavagem) + LPS (10 &#956;L) [it] e grupo NAC 100 mg/kg (gavagem) + LPS (10 &#956;L) [it]. O sistema antioxidante enzimático protegeu o pulmão do estresse oxidativo nas primeiras 12 horas. O estresse oxidativo foi caracterizado em 24 horas e em 48 horas observou-se falência do sistema antioxidante enzimático. Parâmetros de função pulmonar se mostraram alterados nos grupo estimulados com LPS principalmente no grupo LPS. A elastância (p<0,001), resistência de via aérea periférica (&#916;P2) (p<0,001), resistência de via aérea central (&#916;P1) (p<0,001) e resistência de via aérea total (&#916;Ptot) (p<0,001) se mostraram principlamente alteradas no grupo LPS 24 horas. O pré-tratamento com NAC impediu o aumento dos parâmetros de elastância (p<0,001), resistência de via aérea periférica (&#916;P2) (p<0,001) resistência de via aérea central (&#916;P1) (p<0,05) e resistência de via aérea total (&#916;Ptot) (p<0,001) comparado com o grupo LPS 24 horas. As alterações histológicas como espessamento de septo alveolar, influxo de células inflamatórias e hemorragia mostraram-se tempo dependentes. O pré-tratamento NAC impediu as alterações observadas nos grupo estimulados com LPS. Alterações inflamatórias foram observadas no grupo estimulado com LPS como IL-6 (p<0,001), iNOS (p<0,001), COX2 (p<0,05), TNF-&#945; (p<0,001) e NF&#954;B (p<0,001) quando comparados ao grupo controle. O pré-tratamento com NAC impediu o aumento desses parâmetros como IL-6 (p<0,001), iNOS (p<0,001), COX2 (p<0,05), TNF-&#945; (p<0,05) e NF&#954;B (p<0,001) quando comparados ao grupo LPS 24 horas. Nossos resultados sugerem que o estresse oxidativo desempenha um papel importante nas respostas inflamatórios, estruturais e funcionais no modelo de LPA induzido por LPS e que essas alterações são estresse oxidativo dependentes. / The aim of this study was to investigate the involvement of oxidative stress in acute lung injury (ALI) induced by lipopolysaccharide (LPS) and inflammatory effects, structural and functional, through biochemical analysis of oxidative stress, pulmonary function test, histological and RT-PCR for cytokines and transcription factors pro-inflammatory. In the first stage were used C57BL6 male mice were divided into seven groups: control group (CTR) (50 &#956;L saline) administered via intratracheal [it], LPS 6 hours (10 &#956;L of LPS) [it], LPS 12 hours (10 &#956;L of LPS) [it], LPS 24 hours (10 &#956;L of LPS) [it], LPS 48 hours (10 &#956;L of LPS). To confirm that the observed changes were dependent on oxidative stress in C57BL6 male mice were pretreated with N-acetylcysteine (NAC) 1 hours before stimulation with LPS and sacrificed 24 hours after stimulation with LPS. The animals were divided as follows: LPS group 24 hours (10 &#956;L) [it], NAC group 40 mg / kg (gavage) + LPS (10 &#956;L) [it] NAC group and 100 mg / kg (gavage) + LPS (10 &#956;L) [it]. The enzymatic antioxidant system protected the lungs against oxidative stress in the first 12 hours. Oxidative stress was characterized in 24 hours and 48 hours there was failure of the enzymatic antioxidant system. Pulmonary function parameters were shown in the altered group stimulated with LPS mainly in the LPS group. Elastance (p <0,001), peripheral airway resistance (&#916;P2) (p <0,001), central airway resistance (&#916;P1) (p <0,001) and total airway resistance (&#916;Ptot) (p <0,001) if especially in the group showed altered LPS 24 hours. Pretreatment with NAC prevented the increase in elastance parameters (p <0,001), peripheral airway resistance (&#916;P2) (p <0,001) central airway resistance (&#916;P1) (p <0,05) and resistance total airway (&#916;Ptot) (p <0,001) compared with the LPS group 24 hours. Histological changes such as thickening of alveolar septa, inflammatory cells and hemorrhage proved to be time dependent. The NAC pretreatment prevented the changes observed in the group stimulated with LPS. Inflammatory changes were observed in the group stimulated with LPS and IL-6 (p <0,001), iNOS (p <0,001), COX2 (p <0,05), TNF-&#945; (p <0,001) and NF&#954;B (p <0,001) compared with the control group. Pretreatment with NAC prevented the increase of these parameters as IL-6 (p <0,001), iNOS (p <0,001), COX2 (p <0,05), TNF-&#945; (p <0,05) and NF&#954;B ( p <0,001) when compared with LPS 24 hours. Our results suggest that oxidative stress plays an important role in inflammatory responses, structural and functional model of ALI induced by LPS and that these changes are dependent oxidative stress.

A própolis é uma substância resinosa, cujas atividades antibacteriana, antiinflamatória, antiviral, fungicida, imuno estimulante, cicatrizante e de anestésico local tem sido valorizadas no uso clínico. O lipopolissacarídeo (LPS) é reconhecidamente uma endotoxina e pode induzir processos inflamatórios. Os objetivos deste trabalho foram: a) analisar in vitro as seguintes propriedades do extrato de própolis verde: 1) perfil físico químico 2) Concentração Inibitória Mínima (CIM) frente à endotoxina da bactéria gram negativa Escherichia coli; e 3) sua atividade imunorregulatória sobre leucócitos de baço de ratos; b) analisar &Prime;in vivo&Prime; a ação do Extrato Etanólico de Própolis (EEP) 10% e 90% e do Extrato de Própolis Puro (EPP), em alvéolos dentais contaminados ou não com lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano. Para o estudo in vivo 35 ratos foram submetidos às exodontias dos primeiros molares superiores direito e esquerdo, os quais, imediatamente tiveram o alvéolo dental direito contaminado com 0,1µL de lipopolissacarídeo (LPS) (100µg/kg) e o esquerdo sem tal contaminação. Os grupos com (n=7) para cada tratamento, após 2 semanas: GI- Controle Negativo (CN) - sem tratamento; GII- Tratados com Extrato de Própolis puro (EPP) GIII- Tratados com pasta de própolis a 90% (P90); GIV- Tratados com pasta de própolis a 10% (P10); e, GV- Tratado com veículo das pastas (SB) foram analisados. Os alvéolos foram removidos, desmineralizados, processados pela técnica histológica de rotina, submetidos a secções sistematizadas a 6 µm de espessura e corados em H.E. O volume de osso formado, foi avaliado por contagem de pontos, usando um Sistema Teste sobreposto as imagens capturadas com auxílio de uma câmera acoplada a um microscópio. Observada a normalidade dos dados, procedeu-se o teste ANOVA fatorial e Tukey-Kramer test (p<0,05). In vitro determinou-se a propriedade da própolis, sua CIM e atividade imunorregulatória. In vivo os alvéolos dentais contaminados com lipopolissacarídeo bacteriano e tratados com a própolis verde apresentou maior área de osso neoformado, quando comparado aos demais grupos experimentais. O alvéolo não contaminado e tratado com própolis pura mostrou maior área de fibras colágenas. / Propolis is a resinous substance, whose antibacterial, antiinflammatory, antiviral, antifungal, immune stimulant, and local anesthetic wound healing properties has been considered for clinical practice. The lipopolysaccharide (LPS) is recognized as an endotoxin and can induce inflammatory processes. Our objectives were: a) to analyze in vitro the following properties of green propolis extract: 1) physicochemical profile of green propolis sample, 2) Minimum Inhibitory Concentration (MIC) against endotoxin from gram negative Escherichia coli and 3) its immunoregulatory activity using leukocytes from the spleen of mice,. b) analyze in vivo, the action of propolis ethanol extract (EEP) 10% and 90% and Pure Propolis Extract (EPP) in dental alveoli or not contaminated with lipopolysaccharide (LPS) bacterial. For in vivo study, 35 rats were subjected to extractions of maxillary first molars, right and left, which immediately had the right dental socket contaminated with 0.1 µL of lipopolysaccharide (LPS) (100µg/kg) and left without such contamination. They were divided into groups (n = 7) for each sample after 2 weeks, according to the treatment in the right and left alveoli: GI-Negative Control (NC) - no treatment, GII-Treated Pure Propolis Extract (EPP) GIII-Treated folder with propolis 90% (P90), GIV-Treated folder with propolis 10% (P10) and GV-Treated folder with vehicle (SB). The alveoli were removed, demineralized, processed by routine histologic technique, submitted to systematic sections (6 microns) of thick and stained with HE for histological analysis to assess the new bone tissue volume by point counting method, using a Test system on images captured with the aid of a digital camera attached to a microscope. Observed data normality, we proceeded to ANOVA and Tukey-Kramer tests (p <0.05). In vitro, it was determined the propolis properties, CIM and immunoregulatory activity. In vivo, the alveoli contamined with bacterian lipopolysaccharide and treated with green propolis induced higher bone formation when compared to other groups. The non contamined alveoli and treated with pure propolis showed more quantity of collagen fibers.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Sandro Goulart Martins.pdf: 1751968 bytes, checksum: 5b9ca031a010c34548d163a4d3f4c4ec (MD5) Sandro Goulart Martins.pdf.jpg: 3484 bytes, checksum: a6f188aafedb364f7d4cfae19736c877 (MD5) Previous issue date: 2011-07-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Carbon Nanotube (CNT) are cylindrical structures of carbon with chemical and physical properties that make them potentially useful in mechanical applications and electrical microscopic scale. Its name is on the feature to its diameter, being hundreds of times thinner than a human hair and more invisible for the most powerful electron microscopes. Contamination of nanomaterials for therapeutic application-diagnosis can occur at any stage of the process. One of the major contaminants is lipopolysaccharide (LPS). Once infected removal is difficult, since the LPS are resistant to high temperatures and pH extremes. The objective of this work is to determine LPS in Wall Carbon Nanotube Multi (NTCPM) and Carbon Nanotubes Wall Multiple carboxyl (NTCPM-COOH). For testing in vitro, splenocytes were isolated from BALB/c mice. The detection of LPS was performed using the method of gel in tube, Limulus Amebocyte Lysate (LAL) gelation method and plate with a sensitivity of 1UE/mL, the NTC were sterilized in an autoclave, oven and autoclave Pasteur in three cycles. LPS was detected in the sample that was not sterile and has suffered only one autoclave cycle, already formed and autoclaved at 3 cycles was removed all the LPS. Cell viability and proliferation test were performed in sterilized and unsterilized samples at a concentration of 10ng/mL. The results showed no significant difference (p <0.05) in the test cell viability of splenocytes, although it was observed a slight decrease in the concentration of LPS with sterile materials, since the LPS decreases cell proliferation and a increased frequency of cells directly proportional to the concentrations of suspensions NTCPM time of 48 hours. / Os Nanotubos de Carbono (NTC) são estruturas cilíndricas de carbono com propriedades químicas e físicas que as tornam potencialmente úteis em aplicações mecânicas e elétricas em escala microscópica. O seu nome se da em característica ao seu diâmetro, sendo ele centenas de vezes mais fino que um fio de cabelo e invisível para os potentes microscópios ópticos. Contaminação de nanomateriais para aplicação diagnóstico-terapêutica pode ocorrer em qualquer fase do processo. Um dos maiores contaminantes é o lipopolissacarídeo (LPS). Uma vez contaminado a remoção é difícil, pois o LPS é resistente a grande temperaturas e pH extremos. O objetivo deste trabalho é determinar LPS em Nanotubos de Carbono de Parede Múltipla (NTCPM) e Nanotubos de Carbono de Parede Múltipla Carboxilados (NTCPM-COOH). Para os testes in vitro, esplenócitos foram isolados de camundongos BALB/c fêmeas. A detecção de LPS foi feita através do método de gelificação em tubo, Limulus Amebocyte Lysate (LAL) e método de gelificação em placa com sensibilidade de 1UE/mL, os NTC foram esterilizados em autoclave, forno de Pasteur e autoclavagem em 3 ciclos. O LPS foi detectado na amostra que não foi esterilizada e que sofreu apenas um ciclo de autoclave, já o formado e o autoclavado em 3 ciclos foi removido todo o LPS. A viabilidade celular e o teste de proliferação foram realizados nas amostras esterilizadas e não esterilizadas na concentração de 10ng/mL. Os resultados encontrados indicaram que não houve diferença significativa (p<0,05) no teste de viabilidade celular de esplenócitos, embora tenha sido observada uma ligeira diminuição da concentração de LPS com os materiais esterilizados, pois o LPS diminui a proliferação de células e um aumento na freqüência de células diretamente proporcional às concentrações das suspensões de NTCPM no tempo de 48 horas.

Tendo em vista a importância fisiológica e comportamental da relação entre ovelha e cordeiro, este trabalho teve por objetivo confirmar o perfil de alterações fisiológicas do lipopolissacarídeo (LPS) em ovelhas no terço final da gestação e se mães estressadas durante a gestação apresentam maior disponibilidade e estabilidade quanto aos cuidados maternos com seus filhos, intencionando minimizar prejuízos ao longo da vida como compensação das adversidades sofridas durante a gestação, além de analisar a influencia deste estresse na gestação sobre os parâmetros reprodutivos dos cordeiros. Foram utilizadas 39 ovelhas prenhes, mestiças da raça Santa Inês, nulíparas, com idade média de 12 meses e média de 45 kg de peso vivo (PV), dando origem aos 17 cordeiros machos que também fizeram parte do experimento. As ovelhas gestantes foram divididas em dois tratamentos, TF e TC, devido à indução ou não de LPS no final da gestação. Foram avaliadas alterações fisiológicas e a relação materna destes animais até a idade da desmama dos cordeiros, assim como análises do desenvolvimento reprodutivo destes animais até completarem um ano de idade. Os dados comportamentais foram analisados pela teoria de modelos lineares generalizados proposta por Nelder e Wenderburn (1972), as medidas fisiológicas e os parâmetros reprodutivos, após análise de variância foram comparadas pelo teste F e t de stundent ao nível de 5% de significância, utilizando-se o procedimento GLIMMIX do software SAS para todas as análises. Houve diferenças em relação ao cortisol sanguíneo e a temperatura retal (P&lt;0,05) devido à ação do LPS durante a gestação. Cordeiros desafiados pelo LPS durante a gestação apresentaram maiores dificuldades de aprendizado e memória aos 30 dias de vida durante um teste cognitivo em um labirinto (P&lt;0,05). Sendo encontrados também diferentes perfis (P&lt;0,05), entre os tratamentos, no que diz respeito aos cuidados maternos medidos segundo a interação comportamental entre ovelha e cordeiro, do momento do parto até a idade da desmama destes animais. Os índices de mamada e o início do consumo de alimentos sólidos pelos cordeiros apresentaram-se como uma boa prática de observação para se mensurar a capacidade de independência dos cordeiros. Para os dados reprodutivos houve efeito de tempo, em relação à idade da puberdade fisiológica ao início da maturidade sexual dos animais, para a maioria das variáveis analisadas (P&lt;0,05), havendo efeito também de tratamento para a qualidade espermática dos cordeiros neste mesmo período (P&lt;0,01). O LPS provoca alterações fisiológicas em ovelhas no final da gestação, influencia nos cuidados maternos e na capacidade cognitiva dos cordeiros, assim como altera a qualidade espermáticas de machos do durante a puberdade fisiológica até o início da maturidade sexual. / Considering the physiological and behavioral importance of the relationship between sheep and lamb, this study aimed to confirm the profile of LPS physiological changes in sheep in the final third of gestation, and if mothers who are stressed during pregnancy present greater availability and stability regarding care maternal with their children, intending to minimize losses during the life as compensation of the adversities suffered during the gestation, besides analyzing the influence of this stress in the gestation on the reproductive parameters of the lambs. Thirty - nine pregnant ewes of Santa Inês breed, nulliparous, with a mean age of 12 months and an average of 45 kg of live weight were used, giving birth to the 17 male lambs that were also part of the experiment. Pregnant ewes were divided into two treatments, FT and CT, due to the induction or not of LPS at the end of gestation. Physiological and physiological values were evaluated in relation to the animals up to the weaned age of the lambs, as well as the responses to the reproductive development of the animals until one year of age. The behavioral data were analyzed by the theory of generalized linear models proposed by Nelder and Wenderburn (1972), the physiological measures and the reproductive parameters, after analysis of variance were compared by the test F et de stundent at the 5% level of significance, the SAS software GLIMMIX procedure is used for all analyzes. There were differences in blood cortisol and rectal temperature (P&lt;0.05) due to the action of LPS during pregnancy. Lambs challenged by LPS during gestation presented greater learning difficulties and memory at 30 days of life during a cognitive test in a labyrinth (P&lt;0.05). Different profiles (P&lt;0.05) were also found among the treatments, in relation to the maternal care measured according to the behavioral interaction between sheep and lamb, from the moment of delivery until the weaning age of these animals. Feeding rates and the onset of solid food intake by lambs were a good observational practice in order to measure lambs\' independence. For the reproductive data, there was a time effect, in relation to the age of physiological puberty at the beginning of the sexual maturity of the animals, for most of the analyzed variables (P&lt;0.05), also having an effect on the sperm quality of the lambs in this same period (P&lt;0.01). LPS causes physiological changes in sheep at the end of gestation, influences maternal care and cognitive ability of lambs, as well as alter the sperm quality of males during physiological puberty until the onset of sexual maturity.

Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de verificar a possível influência do estresse gestacional, pela indução de Lipopolissacarídeo (E. coli) sobre a relação materno filial e desempenho do cordeiro, assim como o estresse da desmama sobre o desempenho em confinamento e nas características da carcaça. A execução do experimento aconteceu de dezembro de 2013 a julho de 2014 no anexo do Laboratório de Biometeorologia e Etologia localizado no setor de caprino e ovinocultura da Prefeitura do Campus Administrativo da Universidade de São Paulo em Pirassununga-SP. Foram utilizadas 43 ovelhas multíparas, mestiças da raça Santa Inês e 55 cordeiros, crias provenientes da IATF dessas ovelhas com sêmen de macho White Dorper. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado (DIC) tendo um fatorial 3 x 2 como o esquema de distribuição dos tratamentos composto por 3 grupos durante a gestação (controle (Gc), aplicação de LPS aos 70 (&plusmn;7 dias) dias de gestação (Gi) e o aos 120 (&plusmn;7 dias) dias de gestação (Gf)) combinando com 2 tipos de desmama (desmama controlada (Dc) e desmama abrupta (Da)). As médias foram comparadas pelo teste F e teste t de Student (PDIFF), com um nível de significância de 5%. No primeiro experimento o objetivo foi analisar a influência do estresse, gerado pelo uso de LPS, em diferentes períodos gestacionais sobre os níveis de cortisol e temperatura retal das ovelhas, o comportamento materno filial, os níveis de cortisol logo após o parto, peso ao nascer (PN) dos cordeiros e o tempo gasto para a primeira mamada. Os animais foram delineados n os 3 grupos: Gc, Gi e Gf. Na fase intermediária da gestação, analisando o ritmo circadiano do cortisol e da TR para os tratamentos Gc e Gi pela interação entre tratamento e tempo foram observados maiores valores de cortisol e TR para Gi (P&lt;0,05). Na fase final com a mesma interação entre tratamento e tempo, os maiores valores de cortisol e temperatura durante o ritmo circadiano foram de Gf (P&lt;0,05). Para as avaliação do comportamento materno filial, as observações das posturas e das atividades tanto das ovelhas quando dos cordeiros, foram analisadas pela interação entre tratamento e tipo de parto (P&lt;0,05). Também houve interação entre tratamento e o tipo de parto para o tempo a primeira mamada tendo o tratamento Gf em situação de parto duplo apresentado o maior tempo, não sendo diferente apenas do tratamento Gi também com parto duplo (P&lt;0,05). Analisando o PN, a interação aconteceu entre tratamento e sexo com os menores valores observados para o tratamento Gf quando comparados aos demais tratamentos (P&lt;0,05). O LPS alterou os níveis de cortisol durante o ritmo circadiano, assim como o estresse durante a gestação influenciou no comportamento materno filial. Os animais submetidos ao estresse durante o terço final da gestação apresentaram maior gasto de tempo para ingerir colostro e pesos mais leves no nascimento. No segundo experimento o objetivo foi avaliar a eficiência da desmama controlada ou abrupta em reduzir o impacto do estresse durante a gestação em relação ao desempenho de cordeiros. Foram utilizados 47 cordeiros, 22 machos e 25 fêmeas distribuídos em 6 tratamentos: GcDc, GcDa, GiDc, GiDa, GfDc e GfDa. Foram analisados os níveis de cortisol sanguíneo e a TR da desmama controlada e na comparação entre os dois tipos de desmama, peso a desmama (PD) e os dados de desempenho em confinamento pela ingestão de matéria seca (IMS), conversão alimentar (CA), eficiência alimentar (EA), ganho médio diário (GMD) e medidas pós-abate. Houve efeito fixo do estresse durante a gestação e dos dias para os níveis de cortisol durante a DC (P&lt;0,05), para a temperatura retal foi observado efeito fixo de sexo, dia e tempo (P&lt;0,05). No dia de entrada dos animais no confinamento houve efeito fixo de tempo (colheitas durante o dia) e tipo de desmama, com maiores valores de cortisol para a primeira colheita do dia (P&lt;0,05) e para a desmama abrupta quando comparada com a controlada (P&lt;0,05), neste mesmo dia para a TR foi observado efeito fixo de tempo, sendo a primeira colheita menor que as demais (P&lt;0.05). Nas colheitas de 24 horas e 48 após a entrada dos animais no confinamento Da apresentou maior nível de cortisol do que DC (P&lt;0,05), e feito contrario foi observado para TR. Dc apresentou maior peso a desmama que Da (P&lt;0,05). Houve interação entre estresse na gestação e sexo para IMS e GMD, com menores valores para machos de Gf (P&lt;0,05), não havendo diferenças significativas para CA e EA em nenhum tratamento. Nas análises pós - abate, os menores valores foram observados para Gf e Da. A desmama controlada pode reduzir os efeitos do estresse durante a gestação, melhorando o desempenho de cordeiros, assim como cordeiros machos quando desafiados na fase final da gestação são mais suscetíveis que fêmeas. / This study was developed with the objective to investigate the possible influence of gestational stress by inducing Lipopolysaccharide (E. coli) on maternal and filial relationship performance of the lamb, as well as the stress of weaning on feedlot performance and on characteristicsin housing. Running the experiment took place from December 2013 to July 2014 in the Annex to Biometeorology and Ethology Laboratory located in goat and sheep production sector of Administrative Campus Hall, Universidade de São Paulo in Pirassununga-SP. We used 43 multiparous sheep, crossbred Santa Inês and 55 lambs, calves from AIFT those sheep with male White Dorper semen. The experimental design was completely randomized having a 3 x 2 factorial as the distribution pattern of treatments consists of 3 groups during pregnancy (control (Cg), application of LPS to 70 (&plusmn; 7) days of gestation (Ig) and at 120 (&plusmn; 7) days of gestation (Fg)) combined with two types of weaning (controlled weaning (Cw) and abrupt weaning (Aw)). Means were compared by F test and Student\'s t test (PDIFF), with a 5% significance level. In the first experiment the objective was to analyze the influence of stress, generated by the use of LPS in different gestational periods on the levels of cortisol and body temperature of sheep, filial maternal behavior, cortisol levels immediately after parturition, birth weight (BW) of the lambs and the time spent for the first feeding. The animals were allotted in three groups: Cg, Ig and Fg. In the middle stage of pregnancy, analyzing the circadian rhythm of cortisol and RT for the treatment Cg and Ig by the interaction between treatment and time showed higher cortisol levels to Ig and RT (P&lt;0.05). In the final stage with the same interaction between treatment and time increased cortisol and temperature values during the circadian rhythm were Fg (P&lt;0.05). For the evaluation of filial maternal behavior, observations of the postures and activities of both the sheep when the lambs were analyzed by the interaction between treatment and type of delivery (P&lt;0.05). There was also an interaction between treatment and the type of parturition to the time the first feeding with the Fg treatment in dual labor situation presented as long, not being different only Ig treatment also double parturition (P&lt;0.05). Analyzing the BW, the interaction occurred between treatment and sex with the lowest values observed for Fg treatment compared to the other treatments (P&lt;0.05). LPS altered levels of cortisol during the circadian rhythm, and stress during pregnancy the influenced filial maternal behavior. The animals subjected to stress during the final third of gestation had higher expenditure of time to ingest colostrum and lighter weights at birth. In the second experiment the objective was to evaluate the efficiency of the subsidiary or abrupt weaning to reduce the impact of stress during pregnancy in relation to the performance of lambs. We used 47 lambs, 22 male and 25 female, comprised of 6 treatments: CgCw, CgAw, IgCw, IgAw, FgCw and FgAw. Blood cortisol levels were analyzed and the TR controlled weaning and the comparison between the two types of weaning, weaning weight (WW) and performance data in confinement for dry matter intake (DMI), feed conversion (FC), feed efficiency (FE), average daily gain (ADG) and post-slaughter measures. There was fixed effect of stress during pregnancy and days to cortisol levels during the Cw (P&lt;0.05) for the rectal temperature was observed fixed effect sex, day and time (P&lt;0.05). On receipt of the animals was fixed effect confined in time (during harvest day) and type of weaning, with higher cortisol values for the first harvest day (P&lt;0.05) and the abrupt weaning compared with controlled (P&lt;0.05) in the same day for the TR was observed fixed effect of time, the first harvest less than the others (P&lt;0.05). At harvest 24 hours and 48 hours after entering of animals in the feedlot had higher cortisol levels than Cw (P&lt;0.05) and made opposite was observed for TR. Dc showed higher weaning weight that Aw (P&lt;0.05). There was interaction between stress during pregnancy and sex for DMI and ADG, with lower values for males of Gf (P&lt;0.05), with no significant differences for FC and FE in any treatment. In analysis post - slaughter, the lowest values were observed for Fg and Aw. From Controlled weaning can reduce the effects of stress during pregnancy, improving the performance of lambs males, and lambs when challenged in late pregnancy are more susceptible than females.

Em estudo anterior, observamos que o Met-RANTES, antagonista de receptores CCR1 e CCR5 para quimiocinas, injetado pela via endovenosa (i.v.) reduziu a resposta febril induzida pelo lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli, demonstrando o envolvimento da quimiocina RANTES (Regulada sob ativação, expressa e secretada por células T normais) nesta resposta. Além disso, a injeção intrahipotalâmica (i.h.) da RANTES dose-dependentemente aumentou a temperatura corporal de ratos, o qual foi caracterizado como febre, pois foi acompanhada de redução da temperatura da cauda, uma resposta termorregulatória para retenção de calor. Observamos também, que a RANTES aumenta a concentração de prostaglandinas no fluido cerebroespinhal (CSF) e que a febre por ela induzida é sensível aos inibidores não-seletivos para as ciclooxigenases e seletivo para COX-2 (Machado et al., 2007). No presente estudo, aprofundamos a investigação sobre os mediadores, incluindo as prostaglandinas, envolvidos na resposta febril induzida pela RANTES. Verificamos que o paracetamol reduziu, enquanto o diclofenaco de sódio aboliu a resposta febril induzida pela RANTES. Ainda, a injeção i.h. da RANTES promoveu significativa expressão do RNAm para COX-2 no hipotálamo, confirmando ser a COX-2 a enzima responsável pela síntese de prostaglandinas envolvidas no efeito pirogênico desta quimiocina. Através da administração de corante in situ e de cortes histológicos, pode-se averiguar o trajeto da cânula bem como a profundidade alcançada pela agulha durante a injeção na área pré-óptica hipotalâmica anterior (AH/POA). Padronizamos a dose do Met-RANTES (i.h.) que não seria capaz de alterar a temperatura retal dos animais. Posteriormente, avaliou-se o efeito de diferentes doses do Met-RANTES, administrado via intrahipotalâmica, na resposta febril induzida pelo LPS ou pela RANTES. Entretanto, nas doses administradas o pré-tratamento com o antagonista não foi capaz de reduzir a febre induzida por ambos os estímulos. Contudo, o Met-RANTES (i.v.) reduziu a febre induzida pelo TNF-alfa (i.h.), reproduzindo resultados anteriores. O pré-tratamento com Met-RANTES (i.v.) não modificou a febre induzida pela injeção central de interleucina (IL)-6, fator liberador de corticotropina (CRF) e bradicinina (BK). Adicionalmente, a injeção de LPS (i.v.) ou TNF-alfa (i.h.) elevou a concentração da RANTES no tecido hipotalâmico. Antalarmina (antagonista de receptores CRF1) e alfa-helical CRF9-41 (antagonista de receptores CRF1 e CRF2) que reduziram a febre induzida pelo CRF, não alteraram a febre induzida pela administração i.h. da RANTES. O antagonista de receptores B1 (DALBK) que reduziu a segunda fase da resposta febril induzida pela BK, não foi capaz de modificar a febre induzida pela RANTES. Da mesma forma, o antagonista de receptores B2 (Hoe-140) que reduziu a resposta febril induzida pela BK durante todo o período de experimentação, não modificou a febre promovida pela RANTES. Por outro lado, verificamos que o anticorpo anti-IL-6 administrado i.h. reduziu a febre induzida pela IL-6 e pela RANTES. Ainda, a injeção de LPS (i.v.) ou RANTES (i.h.) elevou a concentração de IL-6 no CSF, mas não de IL-1 e TNF-. A RANTES promoveu ativação do fator nuclear-kB (NF-kB) e aumentou a expressão do RNAm para as citocinas IL-1beta, TNF-alfa e IL-6 no hipotálamo dos animais. O pré-tratamento com Met-RANTES reduziu, na 2,5 e 6 h, a neutrofilia induzida pelo LPS. Em síntese, nossos resultados demonstram que durante a resposta febril induzida pelo LPS, este induz a síntese de TNF-alfa o qual promove a síntese da quimiocina RANTES que, ativando os receptores CCR1 e CCR5 promove a transmigração do NF-kB do citoplasma para o núcleo e a subseqüente síntese de IL-6 e de COX-2, esta última, a responsável pela síntese de prostaglandina E2 (PGE2), um dos mediadores finais da resposta febril induzida pelo LPS. Além disso, a RANTES parece ser um mediador da resposta de fase aguda, uma vez que, promove dois sinais importantes desta resposta, febre e neutrofilia. / We showed before that Met-RANTES, CCR1 and CCR5 receptor antagonist, intravenously injected (i.v.) reduced fever induced by lipopolysaccharide (LPS, E. coli), demonstrating the involvement of RANTES (Regulated on activation, normal T cells expressed and secreted) in this response. Also, intrahypothalamic (i.h.) injection of RANTES dose-dependently increased body temperature of rats, this increase was characterized as fever, because it was accompanied of a reduction in the tail skin temperature, a thermoregulatory response for heat retention. We also verified that RANTES increased the concentration of prostaglandin (PG)E2 in the cerebrospinal fluid (CSF), which was sensible to non-selective and selective blockers to cyclooxygenase (COX)-2 (Machado et al., 2007). In the present study, it was investigated which others mediators, including prostaglandins, are involved in the RANTES-induced fever. The effect of paracetamol and sodium diclofenac on fever induced by RANTES was also investigated. Paracetamol reduced, while sodium diclofenac abolished the RANTES-induced fever. The intrahypothalamic (i.h.) RANTES injection promoted a significant COX-2 mRNA expression in the hypothalamus, confirming the role of the COX-2 enzyme in the synthesis of prostaglandin involved in the pyrogenic effect of this chemokine. Through administration of dye in situ and histological analyses, we confirmed that the injection in the preoptic area of the anterior hypothalamus (AH/POA) was correct. Subsequently, we evaluated the effect of different doses of Met-RANTES (i.h.) in the fever induced by both LPS and RANTES. Centrally injected, Met-RANTES did not modify the fever induced by LPS or RANTES. On the other hand, Met-RANTES (i.v.) reduced TNF-alpha-induced fever, but did not modify the fever induced by interleukin (IL)-6, corticotrophin releasing factor (CRF) and bradykinin (BK). Additionally, the injection of LPS (i.v.) or TNF-alpha (i.h.) increased RANTES concentration in the hypothalamus. Antalarmin (a CRF receptor 1 antagonist) and alpha-helical CRF9-41 (CRF 1 and 2 receptor antagonist) that reduced CRF-induced fever did not modify the fever induced by RANTES (i.h.). DALBK (bradykinin B1 receptor antagonist) that reduced the second phase of BK-induced fever did not modify RANTES-induced fever. In the same way, Hoe-140 (bradykinin B2 receptor antagonist) that reduced the fever induced by BK during the whole period of observation, did not modify RANTES-induced fever. On the other hand, we verified that anti-rat IL-6 antibody (i.h.) reduced the fever induced by both IL-6 and RANTES. In addition, the administration of LPS (i.v.) or RANTES (i.h.) increased the CSF IL-6 concentration, but not of IL-1 and TNF-. RANTES promoted nuclear factor-kB (NF-kB) activation and increased IL-1beta, TNF-alpha and IL-6 mRNA expression in the hypothalamus. Pretreatment of the animals with Met-RANTES reduced the LPS-induced neutrophilia. In synthesis, our results suggest that in the fever induced by LPS, RANTES induces TNF- synthesis, which promotes the synthesis of RANTES that, activating CCR1/CCR5 receptors, promotes NF-kB transmigration of cytoplasm to the nucleus and subsequent synthesis of IL-6 and COX-2. The latter, in turn, is responsible by (PGE2) synthesis, one of the final mediators of the febrile response induced by LPS. Moreover, RANTES seem to be a mediator of the acute phase response since it promoted two important signs of this response, fever and neutrophilia.

A sepse é caracterizada por uma produção excessiva de mediadores inflamatórios, acompanhada de taquicardia e hipotensão. Experimentalmente, a administração de endotoxina (Lipopolissacarídeo, LPS) em doses relativamente elevadas induz choque endotoxêmico, sendo um bom modelo de estudo da sepse. Diversos grupos têm demonstrado ações antiinflamatórias e antitumorais do citral, um composto do óleo essencial de Cymbopogon citratus. Nosso laboratório demonstrou ação antipirética do citral em modelo de febre induzida por LPS, acompanhada de redução nos níveis de citocinas plasmáticas e de prostaglandina E2 (PGE2) no plasma e área pré óptica do hipotálamo (POA), importante região termorregulatória. A hipótese testada neste trabalho foi a de que o citral atenua a hipotensão provocada pela endotoxina, além de amenizar as alterações termoregulatórias. Todos os procedimentos foram executados de acordo com os princípios éticos de experimentação animal, aprovados pelo comitê de ética local (CEUA 2015.1 1214 58-2). Foi realizado o implante de cânulas na artéria e veia femoral para registro da pressão arterial e administração de LPS (1,5 mg/kg) ou salina apirogênica 0,9% além do implante de datalogger na cavidade peritoneal de ratos Wistar, para registro da temperatura corporal. No dia do registro, 30 minutos antes da administração de LPS ou salina, os animais receberam citral (100 mg/kg) ou tween 80 a 1% (veículo) por via oral. Os parâmetros cardiovasculares e temperatura corporal foram registrados por 300 minutos após os respectivos tratamentos. Os valores de pressão arterial média (PAM) e frequência cardíaca (FC) foram coletados a cada 10 minutos após o tratamento e a temperatura corporal foi registrada pelo datalogger em intervalos de 5 minutos. Em outro protocolo foi realizado apenas o implante de cânula na veia femoral dos animais de todos os grupos para administração de LPS ou salina, coleta de sangue para dosagem de interleucina 6, PGE2, nitrito e nitrato e corticosterona e coleta do encéfalo para dosagem de PGE2 e PGD2. As diferenças estatísticas entre os grupos foram analisadas pelo teste ANOVA two-way seguido por pós teste de Newman-Keuls, com o nível de significância adotado de p < 0,05. A administração de LPS provocou queda na PAM eaumento na FC. Tais respostas não foram afetadas pela administração prévia de citral. O LPS também induziu febre e aumento nas concentrações plasmáticas de interleucina - 6 (IL-6), óxido nítrico (NO), PGE2 e corticosterona. Esses parâmetros não foram alterados pela pré- administração de Citral. No entanto, o citral provocou redução na produção de PGD2 naPOA, sem alterar a de PGE2 nesta região. Podemos concluir que o citral não previne as alterações nos parâmetros cardiovasculares no modelo de endotoxemia em ratos, porém reduz a produção de um mediador termorregulatório e inflamatório do sistema nervoso central (a PGD2), sem alterar a produção de outros mediadores inflamatórios a nível periférico (no plasma). Portanto, em um modelo mais agressivo de inflamação sistênica o citral não se mostrou suficiente para proteger o organismo das ações deletérias do LPS. / Sepsis is characterized by the overproduction of inflammatory mediators, accompanied by tachycardia and hypotension. Experimentally, administration of endotoxin (Lipopolysaccharide, LPS) in relatively high doses induces endotoxemic shock, a widely used model of sepsis in rats. Several groups have demonstrated anti-inflammatory and antitumor roles of citral, an essential oil compound of Cymbopogon citratus. Emilio-Silva et al. (2017) have shown an antipyretic role of citral in a model of LPS-induced fever, accompanied by a reduction of cytokines and prostaglandin E2 plasma levels and in the preoptic area of hypothalamus (POA), the hierarchically most important thermoregulatory region. We hypothesized that citral attenuates the LPS-induced hypotension, besides mitigating the thermoregulatory adjustments in rats. All procedures were performed in agreement with ethical guidelines for animal experimentation aproved by the local ethical committee (CEUA 2015.1 1214 58-2). Femoral artery and vein were implanted with cannulas for blood pressure recording and LPS (1.5 mg/kg) or 0.9% apyrogenic saline injection. In a second surgical procedure a datalogger was implanted into the peritoneal cavity for measurements of body temperature. All surgical procedures were performed under Ketamin/xilazin (100/10 mg/kg) anesthesia. One day after arterial catheterization, 30 minutes prior to LPS or saline administration, the animals received either citral (100 mg / kg) or 1% tween 80 (vehicle) oralstarly. The cardiovascular parameters and body temperature were recorded for 300 minutes after the respective treatments. Mean blood pressure (MAP) and heart rate (HR) were collected every 10 minutes after treatments and body temperature was recorded by the datalogger at 5 minute intervals. Blood samples were obtained in another set of rats for interleukin-6, PGE2, nitrite and nitrate and corticosterone analyses. The brain was removed for PGE2 and PGD2 analyses. Statistical differences between groups were analyzed by the two-way or one-way ANOVA test followed by Newman-Keuls post-test, with significance level adopted at p <0.05. As expected, LPS administration caused a decrease in MAP and an increase in HR, and these responses were not affected by citral. LPS also induced fever and increased plasma levels of interleukin - 6 (IL - 6), nitric oxide (NO), prostaglandin E 2 andcorticosterone. These parameters were also not altered by citral. On the other hand, citral caused a reduction in prostaglandin D2 concentration in the POA, but failed to alter PGE2 levels in this region. Our data are consistent with the notion that citral does not affect changes in cardiovascular and thermoregulatory parameters. Consistently, citral also caused no changes in both LPS-induced peripheral inflammatory mediators (in plasma) and in the POA, except PGD2. Therefore, in our model which mimetic a fairly critical situation, citral may not be sufficient to protect the organism from the deleterious actions of LPS. Financial support: FAPESP / CAPES.