SOUZA, A. G. Efeitos comportamentais e neuroquímicos da liraglutida e da associação com o levetiracetam em camundongos submetidos ao modelo de abrasamento induzido por pentilenotetrazol. 2017. 69 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Farmacologia Pós-Graduação (posgfarmacologia@gmail.com) on 2017-08-03T15:36:51Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_agsouza.pdf: 1295426 bytes, checksum: 7573184b4e3eb70f396c61efe46a2430 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-04T12:12:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_agsouza.pdf: 1295426 bytes, checksum: 7573184b4e3eb70f396c61efe46a2430 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-04T12:12:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_agsouza.pdf: 1295426 bytes, checksum: 7573184b4e3eb70f396c61efe46a2430 (MD5) Previous issue date: 2017-07-04 / Epilepsy is one of the most prevalent neurological diseases in the world and 30% of patients are refractory to treatment. In addition, studies show a close relationship between epilepsy and psychiatric comorbidities. Kindling has been widely used as a model for studying epilepsy and different neuropsychiatric disorders associated with it. Studies have shown that levetiracetam (LEV) reduces the severity of seizures in animals in the pentilenotetrazole (PTZ)-induced kindling model, but there is a growing concern with possible neurobehavioral adverse reactions due to its use. On the other hand, there is evidence of the promising effects of the use of GLP-1 receptor agonists, such as liraglutide (LIRA), in brain disorders. Thus, the present study aims to investigate the behavioral and neurochemical effects of liraglutide in mice treated or not with levetiracetam submitted to PTZ- induced kindling model. Male mice received PTZ on alternate days for 21 days; before to PTZ administration, the animals were treated with LIRA and / or LEV or saline. Observation of the stages of convulsion by the Racine scale and the behavioral tests Open Field, Elevated Plus Maze and Forced Swim, to evaluate of anxiety-like and depressive-like behaviors, and Passive Shock Avoidance and Novel Object Recognition, to verify cognitive performance, were carried out. Moreover, alterations in oxidative stress in the prefrontal cortex (CPF), hippocampus (HC) and striatum (CE); and in brain derived neurotrophic factor (BDNF) in HC were evaluated. The LIRA, alone, delayed the establishment of the kindling, but was not able to avoid it; prevented the anxiety-like and depressive-like behaviors caused by the PTZ- induced kindling and at the dose of 150μg / kg had a beneficial effect on spatial and aversive memory. In the neurochemical parameters, LIRA 150, associated with LEV, reduced nitrite levels in HC and CPF and MDA in all areas; increased levels of GSH also in the three areas and of BNDF in HC. The LEV, on the other hand, showed anti-kindling potential and reduced the parameters of oxidative damage, but it was not able to prevent the similar anxiety-like and depressive-like behaviors and the cognitive dysfunction, caused by the PTZ- induced kindling. Therefore, it is suggested that association with LIRA (150 μg / kg) may be considered promising for the treatment of comorbidities associated with epilepsy, since it has beneficial effects on neurobehavioural functions, without interfering with the anticonvulsant potential of LEV. / A epilepsia é uma das enfermidades neurológicas mais prevalentes no mundo e 30 % dos pacientes apresentam refratariedade ao tratamento. Além disso, estudos mostram uma estreita relação entre a epilepsia e comorbidades psiquiátricas. O abrasamento tem sido amplamente usado como modelo para estudar a epilepsia e diferentes alterações neuropsiquiátricas associadas a ela. Estudos mostram que o levetiracetam (LEV) reduz a gravidade das convulsões em animais no modelo de abramento por pentilenotetrazol (PTZ), porém há uma crescente preocupação com possíveis reações adversas neurocomportamentais devido ao seu uso. Por outro lado, existem evidências dos efeitos promissores do uso de agonistas dos receptores de GLP-1, como a liraglutida (LIRA), em distúrbios cerebrais. Dessa forma, o presente estudo se propõe a investigar os efeitos comportamentais e neuroquímicos da liraglutida em camundongos, tratados ou não com o levetiracetam, no modelo de abrasamento induzido por pentilenotetrazol. Camundongos machos receberam PTZ em dias alternados, por 21 dias; antes da administração de PTZ os animais foram tratados com LIRA e/ou LEV ou salina. Realizaram-se a observação dos estágios de convulsão pela escala de Racine e os testes comportamentais Campo Aberto, Labirinto em Cruz Elevado e Nado Forçado, para avaliação de comportamentos ansiogênico e depressivo símiles e Esquiva Passiva e Reconhecimento do Objeto Novo, para verificar a performance cognitiva. Além disso, alterações no estresse oxidativo no córtex pré-frontal (CPF), hipocampo (HC) e corpo estriado (CE); e ainda no fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) no HC foram avaliadas. A LIRA, sozinha, retardou o estabelecimento do abrasamento, mas não foi capaz de evitá-lo; preveniu os comportamentos ansiedade e depressão provocados pelo modelo de abrasamento por PTZ e na dose de 150μg/kg teve efeito benéfico na memória espacial e aversiva. Nos parâmetros neuroquímicos, a LIRA 150, associada ao LEV, reduziu o os níveis de nitrito no HC e CPF e de MDA em todas as áreas; aumentou os níveis de GSH também nas três áreas e de BNDF no HC. O LEV, por sua vez, mostrou potencial anti-kindling e reduziu os parâmetros de lesão oxidativa, porém não foi capaz de prevenir os comportamentos ansiedade e depressão símiles e a disfunção cognitiva, provocados pelo abrasamento por PTZ. Sendo assim, sugere-se que associação com a LIRA (150 μg/kg) pode ser considerada promissora para tratamento de comorbidades associadas à epilepsia, visto que esta apresentou efeitos benéficos sobre as funções neurocomportamentais, sem interferir no potencial anticonvulsivante do LEV.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-11T20:55:37Z No. of bitstreams: 1 2018_FernandaCerqueiraBarrosoOliveira.pdf: 3937903 bytes, checksum: c7eeda63b5f9b3de9cafa6141116b43e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-14T19:30:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_FernandaCerqueiraBarrosoOliveira.pdf: 3937903 bytes, checksum: c7eeda63b5f9b3de9cafa6141116b43e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-14T19:30:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_FernandaCerqueiraBarrosoOliveira.pdf: 3937903 bytes, checksum: c7eeda63b5f9b3de9cafa6141116b43e (MD5) Previous issue date: 2018-07-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); e Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF). / Introdução: A liraglutida é um análogo do peptídeo 1 semelhante ao glucagon (GLP-1) de ação prolongada utilizado como agente anti-hiperglicemiante no tratamento do diabetes tipo 2. Recentemente, foi aprovado para o tratamento da obesidade, e a redução de peso é atribuída principalmente à indução de saciedade. Entretanto, dados de estudos pré-clínicos recentes indicam que a liraglutida também pode aumentar o gasto energético por ativação dos adipócitos termogênicos marrons e bege. Para explorar este efeito, foram realizados ensaios em cultura de células e estudo in vivo com camundongos C57BL/6 alimentados com dieta hiperlipídica (DHL). Métodos: Camundongos C57Bl/6 machos com obesidade induzida por DHL foram distribuídos aleatoriamente em 4 grupos e tratados com solução salina (veículo), agonista β3-adrenérgico CL316,243, liraglutida ou liraglutida em combinação com CL316,243. A liraglutida foi administrada por via intraperitoneal durante 21 dias (200 μg/kg, duas vezes ao dia) e o CL316,243 foi administrado por via intraperitoneal, do dia 17 ao dia 21 (1 mg/kg/d, durante 5 dias). Foram avaliados ganho de peso, ingestão de energia e eficiência calórica. Dois depósitos diferentes de TAB (inguinal e epididimal, TABsc e TABvis) e o depósito de tecido adiposo marrom interscapular (TAMi) foram utilizados para determinação da adiposidade, análise histológica, taxa de consumo de oxigênio e expressão relativa de Ucp-1, Dio2, Scl16a2 (MCT8), Scl16a10 (MCT10), Thra e Thrb, por RT-qPCR. Foi avaliado também o efeito da liraglutida em células mesenquimais C3H10T1/2 induzidas a se diferenciar em adipócitos com meio completo (contendo isometilbutilxantina, dexametasona e insulina), e em pré-adipócitos 3T3-L1 induzidos a se diferenciar com meio completo ou em presença de insulina. Resultados: O tratamento com liraglutida reduziu o ganho de peso corporal, o consumo de energia, a eficiência calórica e a adiposidade visceral e subcutânea, quando comparado com o tratamento com salina. No TAMi, a liraglutida não alterou os níveis de RNAm de Ucp1, mas induziu a expressão da proteína UCP1 e a taxa de consumo de oxigênio em comparação com a solução salina, e os últimos efeitos foram aditivos aos do tratamento com CL316,243. Além disso, a liraglutida induziu significativamente a expressão de Dio2 e Scl16a2 no TAMi. No TABsc e TABvis, o cotratamento com liraglutida e CL316,243 induziu significativamente a expressão do RNAm da Ucp1 e da proteína UCP1, quando comparada com solução salina. Foi observado, também, aumento da taxa de consumo de oxigênio induzido por CL316,243 nos animais tratados com liraglutida, no TABsc. Não houve mudanças significativas nos níveis de RNAm de Dio2 em resposta ao tratamento com a liraglutida em ambos os depósitos de TAB, mas uma indução significativa de Scl16A2. Não houve modificação significativa da expressão de Scl16a10, Thra e Thrb em nenhum dos depósitos. Em cultura de células, foi observado efeito adipogênico fraco da liraglutida em pré-adipócitos 3T3-L1 induzidos a se diferenciar com insulina. Conclusão: Nossos achados sugerem que o tratamento com a liraglutida induz o amarronzamento do TAB e aumenta a capacidade termogênica do TAB e do TAM, através de um mecanismo que pode envolver o aumento da ativação hormônio tireoidiano no TAM. Além disso, os efeitos da liraglutida sobre a expressão de Ucp1 e consumo de oxigênio foram aditivos aos da sinalização β3-adrenérgica, uma via clássica de ativação da termogênese adaptativa. Isso sugere que os agonistas dos receptores de GLP-1 podem aumentar o gasto de energia ativando adipócitos termogênicos e abre novos horizontes para tratar a obesidade. / Background: Liraglutide is a long-acting glucagon-like peptide 1 (GLP-1) receptor agonist used as an anti-hyperglycemiant agent in type 2 diabetes and recently approved as an anti-obesity agent. Weight loss is mainly attributed to induction of satiety, but data from recent studies indicate it may also increase energy expenditure by activating both brown and beige adipocytes. Objective: To investigate the effects of liraglutide on thermogenic adipocytes in obese mice and in cell culture. Methods: Male C57Bl/6 mice with high fat diet-induced obesity were randomly assigned into 4 groups and treated with saline (vehicle), the β3-adrenergic agonist CL316,243, liraglutide or liraglutide and CL316,243. Liraglutide was administered intraperitoneally for 21 days (200 μg/kg, twice daily) and CL316,243 was administered intraperitoneally from day 17 to day 21 (1 mg/kg/d, once daily, for 5 days). Weight gain, energy intake and metabolic efficiency were determined. Two different WAT (inguinal and epidydimal, scWAT and visWAT) and the interscapular brown adipose tissue (iBAT) depots were excised for determination of adiposity, histological analysis, oxygen consumption rates, and relative expression of Ucp-1, Dio2, Scl16a2 (MCT8), Scl16a10 (MCT10), Thra and Thrb, by RT-qPCR. The effect of liraglutide in cell culture was investigated in mesenchymal C3H10T1/2 cells and 3T3-L1 pre-adipocytes. Results: Liraglutide treatment reduced body weight gain, energy intake, metabolic efficiency, visceral and subcutaneous adiposity, when compared with saline treatment. In iBAT, liraglutide did not change Ucp1 mRNA levels but induced UCP1 protein expression and oxygen consumption rate when compared with saline, and the latter effects were additive to those of treatment with CL316,243. Moreover, liraglutide significantly induced D2 mRNA expression, in addition to significantly increasing Scl16a2 levels. In scWAT and visWAT, liraglutide and CL316,243 cotration induced an indication of Ucp1 mRNA and UCP1 protein when compared to saline. In addition, liraglutide enhanced CL316,243-induced increase in oxygen consumption rate. There were no significant changes in Dio2 levels in response to liraglutide treatment in both WAT depots, but a significant induction of Scl16A2. Moreover, liraglutide showed a weak adipogenic effect in 3T3-L1 pre-adipocytes induced to differentiate in the presence of insulin. Conclusion: Our findings suggest that liraglutide treatment induces browning of WAT and increases the thermogenic capacity of both WAT and BAT, through a mechanism that may involve increased thyroid hormone activation in BAT. In addition, the effects of liraglutide on Ucp1 expression and oxygen consumption were additive to those of β3-adrenergic signalling, a classical pathway of adaptive thermogenesis activation. This suggests that GLP-1 receptor agonists may increase energy expenditure by activating thermogenic adipocytes, and opens new horizons to treat obesity.

Orientadora : Profª Drª Giseli Klassen / Coorientadora : Profª Drª Edneia A. S. R. Cavalieri / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia). Defesa: Curitiba, 22/03/2017 / Inclui referências : f. 65-73 / Resumo: O câncer de mama é o mais diagnosticado e a principal causa de morte por câncer no mundo entre as mulheres. A propagação metastática das células tumorais é responsável por aproximadamente 90% das mortes por este câncer. A progressão dos carcinomas, que culminam nas metástases, está associada com a perda de características epiteliais e a aquisição de fenótipo mesenquimal pelas células tumorais, processo este denominado de transição epitélio-mesênquima (TEM). A identificação de fármacos já aprovados em novas indicações terapêuticas para outras doenças, como o câncer, é conhecida como reposição de fármacos. Isto é possível devido às origens moleculares comuns de diversas doenças. Estudos recentes mostram que agonistas do receptor de GLP-1, como a exenatida, apresentam efeitos pró-apoptóticos e seletivos em células tumorais, especialmente em linhagens tumorais de mama. A liraglutida é um análogo de GLP-1 mais estável que a exenatida, utilizada na terapia da diabetes mellitus do tipo 2. Diante disso, o objetivo do estudo foi avaliar o efeito in vitro da liraglutida em células tumorais de câncer de mama. A viabilidade celular com este fármaco foi testada nas concentrações de 10, 30, 50, 70 e 100 nM tanto nas linhagens tumorais de mama, MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-436, como na linhagem normal de mama HB4a. A liraglutida não apresentou efeito inibitório de viabilidade nas linhagens. A partir deste teste, foram feitos os ensaios de migração celular, análises de expressão gênica dos marcadores da TEM, como o CDH1, marcador epitelial, e o VIM, marcador mesenquimal, assim como para as análises de metilação do promotor desses genes, com a concentração de 30 nM de liraglutida. Os resultados mostraram que a liraglutida diminuiu em aproximadamente 40% a migração das linhagens mesenquimais MDA-MB- 231 e MDA-MB-436. Em ambas as linhagens houve aumento significativo da expressão de CDH1, associada com a desmetilação do promotor deste gene. Além disso, foi feito a indução da TEM na linhagem epitelial MCF-7, após exposição com o fator de crescimento epidermal (EGF), e este ensaio apresentou aumento da migração celular, juntamente com o aumento da expressão dos genes VIM e SNAIL e diminuição de CDH1, alterações estas características da indução da TEM. O tratamento na linhagem MCF-7 com liraglutida, nas células tratadas com EGF, inibiu a motilidade celular e a expressão de CDH1, revertendo a indução da TEM causada pelo EGF. Como conclusão, os dados obtidos mostram que a liraglutida afeta o potencial migratório das linhagens tumorais de mama, pela redução de migração celular e pelo aumento da expressão de CDH1. Palavras-chave: Câncer de mama; TEM; Liraglutida. / Abstract: Breast cancer is the most commonly diagnosed cancer and the main cause of cancer death in the world among women. The propagation of metastatic tumor cells is responsible for approximately 90% of human breast cancer death. Carcinoma progression, which results in metastasis, is associated with the loss of epithelial features, and the acquisition of a mesenchymal phenotype by tumor cells, and this process is called of epithelial mesenchymal transition (EMT). Drug repurposing is the identification of new therapeutic indications for already approved drugs in others pathologies, like cancer. This is possible because of the common molecular origins of diverse diseases. Recent studies with Glucagon-like-peptide-1 (GLP-1) receptor agonists, as exenatide, has showed pro-apoptotic and selective effects in tumor cells, especially in breast cancer cell lines. Liraglutide is a human GLP-1 analogue more stable than exenatide, used in type 2 diabetes mellitus therapy. Then, the aim of this study was to evaluate the in vitro effects of liraglutide on breast cancer cell lines. The cell viability with liraglutide was tested in the concentrations of the 0, 10, 30, 50, 70 and 100 nM both in breast cancer, MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-436, and normal breast, HB4a, cell lines. Liraglutide does not affect the cell viability in the cell lines. From this assay, the following assays were done with 30 nM of liraglutide: wound healing, analyses of gene expression of EMT markers, like CDH1 epithelial marker and VIM mesenchymal marker and DNA methylation of promoter from CDH1 and VIM. The results showed that liraglutide decreased nearly 40% the cell migration of the mesenchymal cell lines MDA-MB-231 and MDA-MB-436. These two cell lines had up regulation of CDH1, associated with demethylation of this gene. Furthermore, the epithelial cell line MCF-7 was induced to EMT, after stimulation with epidermal growth factor (EGF), and it resulted in an increased cell motility and up regulation of mesenchymal markers VIM and SNAIL and decreased of CDH1, these alterations are characteristics of EMT. Treatment of MCF-7 cells with a combined stimulation of EGF and liraglutide inhibited the motility and decreased levels of CDH1, reverting EGFinduced EMT. In summary, these data showed that liraglutide affects the migratory behavior of the breast cancer cell lines by the reduction of cell migration and up regulation of CDH1. Key words: Breast cancer; EMT; Liraglutide.

Analisamos a ação da liraglutida na flora intestinal e perda de peso de dois modelos de obesidade: por dieta hiperlipidica (HFD) e obesidade genética (ob/ob). Os modelos foram tratados com o fármaco durante duas semanas. Perfis metabólicos foram feitos por meio de testes glicêmicos e insulínicos, histologia do fígado, região cecal e coxins gordurosos, ingestão alimentar, peso corporal e metagenômica do conteúdo cecal. O tratamento induziu perda de peso com melhora dos níveis glicêmicos e redução da inflamação na região cecal e do fígado e foi capaz de reduzir o acúmulo de gordura hepática promovendo a redução da EHNA. A metagenômica mostrou mudança taxonômica geral, bem como a abundância relativa de bactérias envolvidas com peso e controle glicêmico:redução de Proteobacterias e aumento de Akkermansia muciniphila. Apresentamos evidências do fármaco revertendo DGHNA/EHNA e a perda de peso associados às mudanças da microbiota. Sugerimos uma lista de alvos bacterianos que podem interferir no metabolismo energético para o controle clinico de doenças metabólicas. / The study analyzed the effects of liraglutide on gut microbiota and weight-loss in two obesity model: induced by high fat diet (HFD) and genetic obese mice (ob/ob). Models were treated with liraglutide for two weeks. Metabolic profiles were measured by glycemic and insulin test, histological liver, cecal region and fat pad morphologies, food intake, body weight and metagenomic of cecal contents. The treatment induced weight-loss, improvement of glycemic parameters and reduction of inflammatory cells in the cecum and the liver and reduced fat accumulation in liver reverting NASH. The metagenomic showed a general changed in taxonomic structure as well the relative abundance of weight-relevant:reduction of Proteobacteria and increases of Akkermansia muciniphila. We showed evidences that liraglutide leads to improvement of NASH and weight loss associated with changes in microbiota. Moreover, by the profile of the gut microbiota, we present a bacterial target list that may affect energetic metabolism inducing a metabolic clinical controlled profile.

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2017-07-18T12:45:18Z No. of bitstreams: 1 FERNANDA_CRISTINA_DE_MESQUITA_TES.pdf: 3705815 bytes, checksum: d4984b596a690199bbc567a00b9a5f63 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-07-28T18:46:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FERNANDA_CRISTINA_DE_MESQUITA_TES.pdf: 3705815 bytes, checksum: d4984b596a690199bbc567a00b9a5f63 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-28T18:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FERNANDA_CRISTINA_DE_MESQUITA_TES.pdf: 3705815 bytes, checksum: d4984b596a690199bbc567a00b9a5f63 (MD5) Previous issue date: 2017-03-17 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Liver fibrosis is the wound healing response to repeated injury of the liver. This process begins with the damage of the parenchymal cells and subsequent inflammation, characterized by the rupture of the hepatic architecture associated to the increase of the expression of the components of the extracellular matrix. The development of hepatic fibrosis is based on the activation of hepatic stellate cells (HSC) that undergo phenotypic changes and are characterized by loss of vitamin A deposition and increased cell proliferation, triggering hepatic microcirculatory dysfunction and fibrogenesis in patients with chronic liver disease (CLD). Liraglutide is a GLP-1 agonist (glucagon-like peptide 1) well established as an antidiabetic drug, but also has anti-inflammatory properties, in addition to the effectiveness for NAFLD (non-alcoholic fatty liver disease). Therefore, the aim of this study was to evaluate the effects of liraglutide on the HSC phenotype and liver microvascular function using diverse pre-clinical models of CLD. The results obtained demonstrate that Liraglutide de-activated human and rat HSC phenotype through a GLP1-Rindependent mechanism. Liraglutide did not affect the HSC viability but decreased cell proliferation. CLD-rats receiving liraglutide exhibited significantly lower portal pressure (-20%) with a consequent reduction in intrahepatic vascular resistance. There was also a marked improvements in hepatic vascular function, fibrosis, HSC phenotype and sinusoidal endothelial phenotype. The anti-fibrotic effects of liraglutide were confirmed in human liver tissue. In conclusion, this study demonstrates for the first time that liraglutide improves hepatic sinusoidal endothelium in clinically relevant experimental models of cirrhosis, which leads to improvement in fibrosis and portal hypertension, and therefore is valid in the treatment of advanced chronic liver disease. / A fibrose hep?tica ? a resposta cicatricial do f?gado ? les?es repetidas. Este processo inicia com o dano das c?lulas parenquimatosas e consecutiva inflama??o, caracterizado pelo rompimento da arquitetura hep?tica associada ao aumento da express?o dos componentes da matriz extracelular. O desenvolvimento da fibrose hep?tica ? baseado na ativa??o das c?lulas hep?ticas estreladas (HSC) que sofrem mudan?as fenot?picas e se caracterizam pela perda do dep?sito de vitamina A e aumento da prolifera??o celular, desencadeando disfun??o microcirculat?ria hep?tica e fibrog?nese nos pacientes com doen?a hep?tica cr?nica (CLD). A liraglutida ? um an?lago do GLP-1 (glucagon-like peptide 1) bem estabelecido como f?rmaco antidiab?tico, mas que tamb?m possui propriedades antinflamat?rias, al?m da efetividade para NAFLD (doen?a hep?tica gordurosa n?o alco?lica). Por essa raz?o, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da liraglutida sobre o fen?tipo das HSC e a fun??o microvascular hep?tica utilizando diversos modelos pr?-cl?nicos de CLD. Os resultados obtidos demonstram que a liraglutida desativou o fen?tipo das HSC humanas e de ratos atrav?s de um mecanismo independente do receptor GLP1. A liraglutida n?o afetou a viabilidade das HSC mas diminuiu a prolifera??o celular. Os ratos com CLD que receberam liraglutida apresentaram press?o portal significativamente menor (-20%) com consequente redu??o da resist?ncia vascular intra-hep?tica. Houve tamb?m uma acentuada melhoria na fun??o vascular hep?tica, fibrose, fen?tipo das HSC e fen?tipo endotelial sinusoidal. Os efeitos anti-fibr?ticos da liraglutida tamb?m foram confirmados em tecido hep?tico humano. Como conclus?o, este estudo demonstra pela primeira vez que a liraglutida melhora o endotelio sinusoidal hep?tico em modelos experimentais clinicamente relevantes de cirrose, o que leva a melhora no quadro fibr?tico e na hipertens?o portal e, portanto, pode ser v?lido no tratamento da doen?a hep?tica cr?nica avan?ada.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para obtenção do título de Doutora em Ciências da Saúde. / A doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa, caracterizada por uma perda progressiva de neurônios, levando a uma perda acentuada de memória. A principal fisiopatologia da DA é o acúmulo do peptídeo β-amilóide (βA) e a formação dos emaranhados neurofibrilares, causado pela hiperfosforilação da tau. Atualmente, estudos indicam que a Diabetes mellitus 2 (DM2) e DA apresentam mecanismos biológicos semelhantes, tais como, disfunção na sinalização da insulina, neuroinflamação e perda de memória. Até o momento, sabe-se que o tratamento para a DA é apenas paliativo, não interrompe a progressão da doença. Além disso, sabe-se que mulheres apresentam maiores riscos para o desenvolvimento de DA. Sendo assim, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da liraglutida, um agonista do peptídeo semelhante ao glucagon tipo 1, sobre a memória espacial, memória de habituação ao campo aberto e neuroinflamação em camundongos Black C57/BL6 machos ou fêmeas, com 3 ou 12 meses de idade. Para isso, o experimento foi dividido em duas etapas: etapa 1 corresponde aos animais com 3 meses de idade e etapa 2, aos animais com 12 meses de idade. Primeiramente foi realizado uma curva dose-resposta na Etapa 1. Os animais foram submetidos à administração de oligômeros βA1-42 (OβA1-42 - 400pmol) intracerebroventricular (i.c.v.). Decorridas 24 horas da administração de OβA1-42 foi iniciado o tratamento via subcutânea (s.c) com liraglutida (0,001 mg/kg, 0,01 mg/kg ou 0,1 mg/kg) durante 17 dias. Foi avaliada a memória espacial pelos testes de labirinto octogonal e labirinto em Y e a memória de habituação no campo aberto, e no 18º dia, 24 horas após a última administração de liraglutida, os animais foram mortos e o hipocampo foi dissecado para análises dos níveis de citocinas (fator de necrose tumoral α -TNFα-, Interleucina 1β - IL-1β-, IL-4 e IL-10). Os animais machos com 3 meses que receberam administração i.c.v de OβA1-42 mostraram dano na memória espacial tanto no labirinto octogonal quanto no labirinto em Y e na memória de habituação ao campo aberto. O tratamento com liraglutida (0,001 e 0,01 mg/kg) reverteu o dano da memória espacial. Na memória de habituação ao campo aberto, o tratamento com liraglutida (0,01 e 0,1 mg/kg), reverteu o dano induzido pelo OβA1-42. Já nas fêmeas, os animais que receberam OβA1-42 tiveram dano somente no tempo, mas não nos erros totais para encontrar a recompensa, indicando dano na memória espacial, e também apresentaram dano na memória de habituação ao campo aberto e liraglutida (0,01 e 0,1 mg/kg) foi capaz de reverter esse dano. Nos parâmetros inflamatórios, nos machos, liraglutida (0,01 mg/kg) sozinha e OβA1-42, induziram aumento dos níveis de TNF-α e liraglutida (0,001 e 0,01 mg/kg) reverteu o efeito induzido pelo OβA1-42. Já nas fêmeas, o OβA1-42 induziu aumento dos níveis de TNFα, IL-1β, IL-4 e IL-10, e o tratamento com liraglutida (0,01 e 0,1mg/kg) reverteu este efeito. Nos animais com 12 meses de idade, foi realizado o tratamento com liraglutida (0,01 mg/kg), dose com melhor resposta em animais com 3 meses. Foi possível observar que nos machos, a liraglutida reverteu o dano na memória espacial (tempo para encontrar a comida) causado pelo envelhecimento e pelo OβA1-42 no último dia do teste do labirinto octagonal. A liraglutida também reverteu o dano na memória espacial, avaliada no labirinto em Y, causado pelo OβA1-42. Na memória de habituação, a liraglutida reverteu o dano do envelhecimento (somente no parâmetro cruzamentos). Quanto às citocinas, o tratamento com 0,01 mg/kg de liraglutida, diminuiu os níveis de IL-4 e IL-10 nos animais que receberam injeção i.c.v de OβA1-42. Já nas fêmeas com 12 meses de idade, no labirinto octagonal e em Y, não houve diferença entre os grupos. Porém na habituação ao campo aberto, o tratamento com liraglutida conseguiu melhorar a memória de habituação. Já nos níveis de citocinas, o tratamento com 0,01 mg/kg de liraglutida, diminuiu os níveis de TNF-α, IL-4 e IL-10 causados pelos OβA1-42. Os resultados apresentados mostram que a liraglutida apresenta efeito protetor, em machos e fêmeas com 3 ou 12 meses submetidos ao modelo animal de demência induzido pelos OβA1-42. Este estudo é pioneiro em mostrar o efeito do tratamento com liraglutida em 7 machos e fêmeas. Neste sentido, este estudo mostra a importância dos estudos sobre as diferenças comportamentais entre os sexos nas doenças e em seus tratamentos.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-06-23T22:08:46Z No. of bitstreams: 1 CybelleDeArrudaNavarroSilva_DISSERT.pdf: 2719237 bytes, checksum: 5983626d9febc0f41a27b59d3cdc29e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-06-29T18:39:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CybelleDeArrudaNavarroSilva_DISSERT.pdf: 2719237 bytes, checksum: 5983626d9febc0f41a27b59d3cdc29e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T18:39:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CybelleDeArrudaNavarroSilva_DISSERT.pdf: 2719237 bytes, checksum: 5983626d9febc0f41a27b59d3cdc29e0 (MD5) Previous issue date: 2014-09-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A obesidade ? considerada mundialmente como sendo uma doen?a grave, ocupando o quinto lugar em ?ndice de ?bitos. Em 2009 e 2010 foi lan?ado o medicamento denominado Victoza? com o objetivo de reduzir peso em indiv?duos portadores de diabetes mellitustipo 2, evitando assim o surgimento de outras doen?as associadas. O agravante ? que indiv?duos obesos n?o diab?ticos est?o fazendo uso desta subst?ncia em busca do emagrecimento, mesmo quando n?o autorizado pela ANVISA. Assim o objetivo desta pesquisa ?avaliar o efeito do Victoza? nos tecidos muscular e adiposo e nos par?metros bioqu?micos em camundongos Swiss obesos n?o diab?ticos. O estudo foi aprovado pela Comiss?o de ?tica no Uso de Animais - CEUA (Protocolo n?003/2014), onde foram utilizados 74 animais (camundongos Swiss). Na fase inicial deste estudo, realizou-se um estudo piloto (n = 10) divididos em grupo controle (CON) (n = 5) e grupo cafeteria (CAF) (n = 5) para a padroniza??o do melhor card?pio para indu??o a obesidade atrav?s de uma dieta de cafeteria. Nos animais do grupo CAF a adiposidade intra-abdominal (0,74 ? 0,05 mg) foi tida como par?metro para visualiza??o da efic?cia do experimento. Posteriormente foi realizado o estudo base para esta pesquisa onde foram utilizados animais (n = 64) divididos em 8 grupos. O grupo dos obesos (CAF) foram divididos da seguinte forma: obesidade + exerc?cio + Victoza? (OEV) (n = 8), obesidade + exerc?cio + salina (OES) (n = 8), obesidade + Victoza? (OV) (n = 8) e obesidade + salina (OS) (n = 8). O grupo dos n?o obesos (CON) foram divididos em: exerc?cio + Victoza? (EV) (n = 8), exerc?cio + salina (ES) (n = 8), Victoza? (V) (n = 8) e solu??o salina (SS) (n = 8). No andamento do estudo os animais passaram pelos seguintes processos: indu??o a obesidade atrav?s da dieta de cafeteria, seguidos do protocolo de exerc?cio atrav?s da nata??o aer?bia, tratamento com a subst?ncia teste via intraperitoneal (200 ?g/mL/kg). Ap?s, os animais foram eutanasiados sendo avaliados: a massa dos tecidos muscular e adiposo e os par?metros bioqu?micos. Verificou-se que o Victoza? reduziu a massa de tecido adiposo (0,32 ? 0,05 mg), quando comparados ao grupo salina (0,53 ? 0,07 mg). Verificou-se tamb?m que n?o houve altera??es no tecido muscular do grupo tratado com Victoza? (5,53 ? 0,05 g) quando comparado ao grupo salina (1,33 ? 0,06 g). Com rela??o aos estudos bioqu?micos ficou evidenciado que houve altera??es nestes par?metros, no entanto um importante marcador que ? a glicose, foi alterado mas de maneira a n?o tornar os animais diab?ticos. Assim, conclui-se a import?ncia da pratica da atividade f?sica unida ? utiliza??o do Victoza? para um melhor resultado em termos de ganho de massa magra e perda de tecido adiposo gerando assim um resultado satisfat?rio na busca da qualidade de vida e preven??o de doen?as. / Obesity is a chronic metabolic disease characterized by adipose tissue formation excess leading to an increase in body fat mass, of multifactorial origin, produced mainly by poor eating habits combined with a sedentary lifestyle. Data consider obesity as a serious disease that affects the world's population, ranking fifth in death rates. Faced with this situation, individuals seek, increasingly, means to lose weight with less physical effort and food. In 2009 and 2010 the drug liraglutide was lauched in order to reduce weight in individuals with diabetes mellitus type 2, thus avoiding the emergence of other diseases. The aggravating factor is that obese nondiabetic individuals are making use of this substance, even if its use is not authorized by ANVISA (Brazilian Health Surveillance Agency). Thus the objective of this research is to evaluate the effect of liraglutide for muscle or fat tissues and biochemical parameters in Swiss mice submitted to cafeteria diet and physical activity. The study was approved by the Ethics Committee on Animal Use - CEUA (n?003 Protocol / 2014). For this study 74 animals (Swiss mice) were used, divided as follows: in the initial phase of this study, we carried out a pilot study (n = 10) divided into a control group (PCON) (n = 5) and cafeteria group (PCAF) (n = 5), in order to evaluate a cafeteria diet which was both attractive to the animals and that could provide an increase in adipose tissue. After the induction of the diet, animals were euthanized and as a result, the animals in the PCAF group showed an intra-abdominal adiposity 0.74 ? 0.05 g, taken as the parameter for increasing fat in animals. Subsequently the study base was conducted for this research where animals were used (n = 64) divided into 2 groups: the Cafeteria Study Base Group (EBCAF) divided as follows: cafeteria + exercise + liraglutide (CEL) (n = 8), cafeteria + exercise + saline (CES) (n = 8), cafeteria + liraglutide (CL) (n = 8) and cafeteria + saline (CS) (n = 8). The Chow Study Base group (EBR) was divided into: exercise + liraglutide (EL) (n = 8), exercise + saline + (ES) (n = 8), liraglutide (L) (n = 8) and saline solution (SS) (n = 8). All animals went through the submission process to the cafeteria diet, followed by exercise protocol through swimming and treatment with the test substance intraperitoneally (200 mg / mL / kg). After the treatments, the animals were euthanized and had the following parameters evaluated: the muscle tissue mass, adipose tissue mass and biochemical parameters. It was observed that the processing done with the exercise-associated liraglutide reduced adipose tissue mass significantly (0.32 ? 0.05 g) compared to the saline group (0.53 ? 0.07 g). There were no changes in the muscle tissue of the group which was treated and exercised (1.39 ? 0.03 g) compared to the saline group (1.33 ? 0.03 g). Regarding biochemical parameters it was evident that there were changes in these parameters. Interesting to note that, although blood glucose values have been changed, the animals did not become diabetic. Thus, it appears that physical activity together with liraglutide is eficcient to the loss of intraabdominal adipose tissue and the maintenance of lean body mass thereby generating a satisfactory result in the pursuit of quality of life and disease prevention.

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-06-05T17:25:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Daiane Didek.pdf: 2147992 bytes, checksum: fb8c4ca29516a68c37c8dc766dc39e8f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-05T17:25:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Daiane Didek.pdf: 2147992 bytes, checksum: fb8c4ca29516a68c37c8dc766dc39e8f (MD5) Previous issue date: 2018-03-23 / Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Paraná / A liraglutida é um análogo do peptídeo semelhante ao glucagon-1 (GLP-1), já utilizada comercialmente para o tratamento da Diabetes mellitus tipo 2, que também mostra resultados na redução da ingestão alimentar e consequente redução do peso corporal. A associação do exercício físico com a liraglutida pode ser um importante meio de controle do metabolismo lipídico e ocasionalmente tratamento de alterações metabólicas como a obesidade. O objetivo do nosso trabalho foi avaliar o efeito da liraglutida, análogo do GLP-1 associado ao exercício físico nos parâmetros metabólicos, bioquímicos e antropométricos de ratos normais e obesos, induzidos por dieta de cafeteria. O experimento iniciou-se aos 21 dias de vida dos animais, estes foram divididos em oito grupos: Quatro controles (CON) recebendo ração padrão e agua ad libitum; quatro obesos (OBESO) recebendo a dieta de cafeteria ad libitum, adicionada a dieta padrão; subdivididos em (CON LIRA e OBESO LIRA) recebendo injeções subcutâneas de liraglutida dos 80 aos 90 dias de vida; (CON EXE LIRA e OBESO EXE LIRA) com intervenção da liraglutida e submetidos a natação por 15 minutos, três dias por semana e (CON EXE e OBESO EXE) somente com intervenção do exercício físico. Os resultados dos animais obesos demonstraram que a liraglutida reduziu, somente o consumo alimentar no final do experimento. O exercício físico mostrou melhores resultados na redução da gordura mesentérica, epididimal, retroperitoneal, níveis circulantes de glicose, índice de Lee, ganho de peso dos 80-90 dias de vida e aumentou o peso da glândula adrenal nos animais obesos, nos animais controle reduziu o peso do pâncreas, índice de Lee e colesterol total. A associação do exercício físico com a liraglutida apresentou melhores resultados na redução do peso corporal no final do experimento, redução do consumo dos 80-90 dias de vida, peso do fígado, níveis circulantes de triglicerídeos e insulina, índice HOMA-IR, nos animais obesos, porém aumentou o TNF-α nos animais obesos e controles. Concluímos que a intervenção com o exercício físico foi eficaz na redução de alguns parâmetros relacionados ao desenvolvimento da obesidade, porém a sua associação com a liraglutida por 10 dias mostra melhores resultados na redução do peso corporal, consumo alimentar e parâmetros bioquímicos, em animais obesos obtidos por dieta de cafeteria. / Liraglutide is an analog of the Glucagon-like peptide-1 (GLP-1), already commercially used for the treatment of Type 2 Diabetes Mellitus, which also shows results in the reduction of food intake and consequent reduction of body weight. The association of physical exercise with liraglutide may be an important means of controlling lipid metabolism and, occasionally, the treatment of metabolic disorders such as obesity. The objective of our study was to evaluate the effect of liraglutide, GLP-1 analog associated with physical exercise on metabolic, biochemical and anthropometric parameters of normal and obese rats, induced by the cafeteria diet. The experiment started at the 21 days of life of the animals, which these divided into eight groups: Four controls (CON) receiving standard chow and water ad libitum; four obese (OBESO) receiving the cafeteria diet ad libitum, added to the standard diet. The animals were further subdivided into (CON LIRA and OBESO LIRA) receiving subcutaneous injections of liraglutide from 80 to 90 days of life; (CON EXE LIRA and OBESO EXE LIRA) with intervention of liraglutide and submitted to swimming for 15 minutes, three days a week and (CON EXE and OBESO EXE) only with physical exercise intervention. The results of obese animals show that liraglutide reduced only food intake at the end of experiment. The physical exercise show better results in the reduction of the mesenteric, epididymal, retroperitoneal fat pad, circulating levels of glucose, Lee index, weight gain from 80-90 days of life and increased adrenal gland weight in obese animals, in control animals reduced the weight of the pancreas, Lee index and total cholesterol. The association of exercise with liraglutide show better results in reducing body weight at the end of the experiment, food intake of the 80-90 days of life, liver weight, circulating levels of triglycerides and insulin, HOMA-IR index, in obese animals, but increased the TNF-α in obese and control animals. We conclude that the intervention with physical exercise was effective in reducing some parameters related to the development of obesity, but its association with liraglutide for 10 days show that better results in reducing body weight, food intake and biochemical parameters in obese animals obtained by cafeteria diet.

Os praguicidas organofosforados (OPs) são amplamente utilizados na indústria química e na agricultura em todo o mundo. Muitos deles são potenciais causadores da \"Neuropatia Retardada Induzida por Organofosforados\" (NRIOP), caracterizada pela degeneração distal de axônios do sistema nervoso central e periférico (degeneração do tipo Walleriana). O praguicida triclorfom (dimetil 2,2,2-tricloro-1-hidroxietil fosfonato) tem sido utilizado em larga escala na produção agrícola e também no controle de vetores transmissores de várias doenças. Há relatos de efeitos neuropáticos em seres humanos expostos ao triclorfom, mas apesar disso, o seu potencial neuropático e seus mecanismos de neurotoxicidade ainda não foram elucidados. Assim, no presente estudo foram avaliados os mecanismos de toxicidade do praguicida OP triclorfom utilizando linhagem SH-SY5Y de neuroblastoma humano como modelo, e também foram avaliados possíveis agentes neuroprotetores em células tratadas com o bem estabelecido indutor da neuropatia mipafox. Foram utilizados como possíveis neuroprotetores: a amilorida e nimodipino (bloqueadores de canais de cálcio tipo T e L respectivamente), MDL 28170 (inibidor (III) de calpaína) e liraglutida (um agonista do \"glucagon like peptide\" -GLP-1). Foram usados o mipafox, como modelo de indução da NRIOP e o paraoxon, como modelo não indutor da NRIOP. Os ensaios de inibição e reativação da esterase susceptível à neuropatia (ESNp) e de citotoxicidade mostraram que somente o mipafox e o triclorfom apresentaram inibição e envelhecimento da ESNp superiores a 70% em concentrações com baixa toxicidade, condição compatível com a indução da NRIOP. A ativação das calpaínas foi observada apenas no tratamento com mipafox, efeito este inibido pela nimodipina, amilorida e pelo MDL 28170. Triclorfom e o mipafox causaram elevação significativa nos níveis de cálcio intracelular e da caspase-3, além de inibir significativamente o crescimento de neuritos. Os três OPs avaliados foram capazes de diminuir a captação da glicose, que foi aumentada nos grupos tratados com mipafox associado com neuroprotetores. As quatro substâncias utilizadas como possíveis neuroprotetoras reduziram significativamente o dano causado pelo mipafox sobre os neuritos. O modelo usado no estudo mostrou-se apropriado para a caracterização dos OP neuropáticos, pois permitiu a diferenciação dos efeitos do mipafox (neuropático) e do paraoxon (não-neuropático). Os dados obtidos indicam que o triclorfom tem potencial indutor de NRIOP, e a amilorida, nimodipino liraglutida e MDL apresentaram potencial neuroprotetor / Organophosphorus (OP) pesticides are widely used in the chemical industry and agriculture around the world. \"Organophosphate Induced Delayed Neuropathy\" (OPIDN) is characterized by distal degeneration of axons of the central and peripheral nervous system (Wallerian-type degeneration). The OP trichlorfom (dimethyl 2,2,2-trichloro-1-hydroxyethyl phosphonate) has been used in large scale in agricultural production and also for the control of vectors that are transmitter of diseases. There are reports of neuropathic effects in humans exposed to trichlorfon, but despite this, its neuropathic potential and mechanisms of neurotoxicity have not yet been elucidated. Thus, in the present study we evaluated the mechanisms of toxicity of trichlorfom and possible neuroprotective agents in SH-SY5Y human neuroblastoma cells treated with the well-established neuropathy inducer mipafox. The following neuroprotective agents were used: amyloride and nimodipine (T and L-type calcium channel blockers, respectively), MDL 28170 (calpain inhibitor (III) and liraglutide (a \"glucagon-like peptide\" - GLP-1 agonist). Mipafox was used as neuropathic OP and paraoxon was used as a non-neuropathic OP. Inhibition and reactivation assays of neurpathy target esterase (NTE) and cytotoxicity showed that only mipafox and trichlorfon showed inhibition and aging of 70% of the NTE in concentrations that presented low toxicity, consistent with development of OPIDN. Activation of calpain was observed only in the treatment with mipafox, an effect inhibited by nimodipine, amyloride and MDL 28170. Triclorfom and mipafox caused significant increase in the levels of intracellular calcium, caspase-3 and significantly inhibiting neurite growth. All three OPs assessed in this work caused a decrease in glucose uptake, which was increased in groups treated whith mipafox plus neuroprotectors. Substances used as possible neuroprotective agents significantly reduced the inhibitory effect of mipafox on neurite outgrowth. The model used in the study proved to be appropriate for characterizing neuropathic OPs, because it allowed a differentiation of the effects of mipafox (neuropathic) and paraoxon (non-neuropathic). The data obtained indicate that trichlorfonm has potential in cause OPIDN. Amiloride, nimodipine, MDL and liraglutide have presented potential neuroprotective effects