Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-29Bitstream added on 2014-06-13T20:29:37Z : No. of bitstreams: 1 bonsaglia_ecr_me_botib.pdf: 226759 bytes, checksum: ef86655bccf56a9c4ddbb9892ff626f5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Listeria monocytogenes é uma bactéria frequentemente encontrada em vários alimentos crus, como carne, queijo e legumes. Está amplamente distribuída no ambiente causando a contaminação de alimentos durante seu processamento. Atualmente, a contaminação por L. monocytogenes nas indústrias alimentícias é considerada um dos maiores problemas de segurança alimentar, pois uma vez presente na linha de processamento à bactéria dificilmente é eliminada pela grande capacidade em formar biofilme. A formação de biofilmes em equipamentos pode levar a sérios problemas de higiene e perdas econômicas devido à deterioração dos alimentos e deficiência dos equipamentos. Além disso, a contaminação por patógeno representa um grande risco para saúde. A incidência de listeriose é baixa, mas a taxa de letalidade é alta. Muitos dos focos principais de listeriose têm sido associados ao consumo de alimentos contaminados, especialmente os produtos lácteos. Assim, esse trabalho teve como objetivo analisar a capacidade de formação de biofilme, por 32 cepas de L. monocytogenes isoladas de diferentes alimentos, em diferentes materiais (aço inoxidável, vidro e poliestireno) e temperaturas (4º, 20º, 35ºC) observando a presença do gene luxS e também testar a eficácia de dois sanitizantes alcalino clorado, utilizados para sanitização de planta de processamento de alimentos. Os resultados demonstraram que entre as 32 cepas testadas 25 (78,1%) foram positivas para o gene luxS e a bactéria foi capaz de produzir biofilme em todos os materiais e temperaturas testadas, apresentando maior frequência de cepas produtoras nos materiais hidrofílicos (96,7% vidro e 95,6% inox) do que no hidrofóbico (28%). Os testes com sanitizantes mostraram que as concentrações recomendadas podem ser eficazes desde que utilizados em tempo mínimo... / Listeria monocytogenes is frequently found in many raw foods such as meat, cheese and vegetables, is widely distributed in the environment causing contamination of food during processing. Currently, contamination by L. monocytogenes in food is considered a major food security problems, because once present in the processing line, this bacteria is hardly eliminated by the great ability to form biofilm. The formation of biofilms on equipment can lead to serious health and economic losses due to spoilage and disability equipment. Furthermore, contamination pathogen is a great risk to health. The listeriosis incidence is low, but the fatality rate is high. Many of the main focuses of listeriosis have been linked to consumption of contaminated food, especially dairy products. Thus, this study aimed to analyze 32 strains of L. monocytogenes isolated from different foods to form biofilms on different materials (stainless steel, glass and polystyrene) and temperatures (4 º, 20 º, 35 º C) for the presence of the gene luxS and also test the effectiveness of two sanitizers alkaline chlorine used to sanitize the plant food processing. The results showed that the strains tested 25 (78.1%) were positive for the gene and the bacterium was able to produce biofilm in all materials and temperatures tested, with higher frequency of hydrophilic materials in producing strains (96.7% glass and 95.6% stainless) than in the hydrophobic (12.4%). The tests show that the sanitizing recommended concentrations may be effective if used in minimum time of 30 minutes for the product A and 15 for the product B has led to the elimination of 16 (50%) of the strains tested. We conclude that the gene luxS may be involved in the regulation of biofilm formation, but shouldn’t be the only one, once luxS-negative strains were also producers. We conclude... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Vera Lúcia Mores Rall / Banca: José Paes de Almeida Nogueira / Banca: Ary Fernandes Junior / Resumo: Listeria monocytogenes é uma bactéria frequentemente encontrada em vários alimentos crus, como carne, queijo e legumes. Está amplamente distribuída no ambiente causando a contaminação de alimentos durante seu processamento. Atualmente, a contaminação por L. monocytogenes nas indústrias alimentícias é considerada um dos maiores problemas de segurança alimentar, pois uma vez presente na linha de processamento à bactéria dificilmente é eliminada pela grande capacidade em formar biofilme. A formação de biofilmes em equipamentos pode levar a sérios problemas de higiene e perdas econômicas devido à deterioração dos alimentos e deficiência dos equipamentos. Além disso, a contaminação por patógeno representa um grande risco para saúde. A incidência de listeriose é baixa, mas a taxa de letalidade é alta. Muitos dos focos principais de listeriose têm sido associados ao consumo de alimentos contaminados, especialmente os produtos lácteos. Assim, esse trabalho teve como objetivo analisar a capacidade de formação de biofilme, por 32 cepas de L. monocytogenes isoladas de diferentes alimentos, em diferentes materiais (aço inoxidável, vidro e poliestireno) e temperaturas (4º, 20º, 35ºC) observando a presença do gene luxS e também testar a eficácia de dois sanitizantes alcalino clorado, utilizados para sanitização de planta de processamento de alimentos. Os resultados demonstraram que entre as 32 cepas testadas 25 (78,1%) foram positivas para o gene luxS e a bactéria foi capaz de produzir biofilme em todos os materiais e temperaturas testadas, apresentando maior frequência de cepas produtoras nos materiais hidrofílicos (96,7% vidro e 95,6% inox) do que no hidrofóbico (28%). Os testes com sanitizantes mostraram que as concentrações recomendadas podem ser eficazes desde que utilizados em tempo mínimo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Listeria monocytogenes is frequently found in many raw foods such as meat, cheese and vegetables, is widely distributed in the environment causing contamination of food during processing. Currently, contamination by L. monocytogenes in food is considered a major food security problems, because once present in the processing line, this bacteria is hardly eliminated by the great ability to form biofilm. The formation of biofilms on equipment can lead to serious health and economic losses due to spoilage and disability equipment. Furthermore, contamination pathogen is a great risk to health. The listeriosis incidence is low, but the fatality rate is high. Many of the main focuses of listeriosis have been linked to consumption of contaminated food, especially dairy products. Thus, this study aimed to analyze 32 strains of L. monocytogenes isolated from different foods to form biofilms on different materials (stainless steel, glass and polystyrene) and temperatures (4 º, 20 º, 35 º C) for the presence of the gene luxS and also test the effectiveness of two sanitizers alkaline chlorine used to sanitize the plant food processing. The results showed that the strains tested 25 (78.1%) were positive for the gene and the bacterium was able to produce biofilm in all materials and temperatures tested, with higher frequency of hydrophilic materials in producing strains (96.7% glass and 95.6% stainless) than in the hydrophobic (12.4%). The tests show that the sanitizing recommended concentrations may be effective if used in minimum time of 30 minutes for the product A and 15 for the product B has led to the elimination of 16 (50%) of the strains tested. We conclude that the gene luxS may be involved in the regulation of biofilm formation, but shouldn't be the only one, once luxS-negative strains were also producers. We conclude... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Infecções por Listeria monocytogenes têm sido frequentemente relatadas em vários casos de surtos de infecção alimentar pelo mundo. Logo, a preocupação em tornar produtos alimentares de larga escala livres destes patógenos tem aumentado ao longo dos anos. Uma das estratégias mais eficazes são a utilização de bacteriocinas como agentes conservantes, prevenindo a multiplicação bacteriana durante os processos de fabricação, estocagem e distribuição dos produtos. A nisina é uma das bacteriocinas mais conhecidas, sendo empregada na indústria alimentícia por muitos anos. Seu mecanismo de atividade antimicrobiana principal é através da formação de um complexo, juntamente com um precursor de parede celular (lipídio II), que formam poros na membrana celular, causando o extravasamento de conteúdos celulares vitais e a perda de estabilidade eletrolítica, levando à morte celular. Entretanto, algumas evidências apontam para mecanismos alternativos, mas ainda desconhecidos, de morte celular. Uma das abordagens interessantes é por meio da análise dos processos celulares (comparado a uma condição não tratada com nisina) através de metodologias proteômicas. Os cultivos bacterianos foram tratados com concentrações subletais de nisina e os extratos proteicos foram processados em espectrometria de massas em tandem acoplado a um sistema de cromatografia líquida (LC-MS/MS). Os resultados mostraram expressão diferencial de algumas proteínas que atuam contra o estresse oxidativo, como a catalase e proteínas de armazenamento de íons ferrosos. Também verificou-se a superexpressão de uma HSP, a qual pode alterar o dobramento correto de algumas proteínas como a de divisão celular FtsZ. Por fim, a subexpressão de uma chaperona responsável pelo correto dobramento das penicillin binding proteins (PBPs) e a superexpressão de enzimas responsáveis pela síntese de lipídios precursores da membrana celular podem apontar para um sistema de divisão celular alternativo, agindo provavelmente como uma resposta à presença de membranas cobertas por complexos nisina e lipídio II. / Listeria monocytogenes infections have been frequently reported in many food poisoning outbreaks around the world. Therefore, the concern about protecting largely-scale food products from these pathogens has been rising over the years. One of the most efficient strategies is using bacteriocins as a conserving agent, preventing the growth of pathogenic bacteria during the production, storage and distribution of the product. Nisin is a well-known bacteriocin, which has been applied in the food industry for many years. Its main antimicrobial mechanism is based in forming a cell membrane pore creator complex, which coupled with a cell wall precursor (lipid II), leads to the leakage of essential cell life compounds and the loss of electrolytic stability, causing the cell death. However, recent evidences lead to an alternative, but still unknown, cell death mechanism. One interesting approach is analyzing the cell processes (compared to a non-nisin treated condition) by a proteomic approach. The L. monocytogenes cells were treated with a sublethal concentration of nisin and the protein extracts were ran through a tandem mass spectrometry attached to a liquid chromatography system (LC-MS/MS). The results showed differential expression of some agents against oxidative stress such as catalase and ferrous ions storage proteins. Furthermore, it had also presented upregulation of a HSP which can alter the correct folding of other proteins, such as the FtsZ cell division protein. Finally, the downregulation of a chaperone that is responsible of the correct folding of penicillin binding proteins (PBPs) and the superexpression of some enzymes related to the production of cell membrane lipids could point out to a different bacterial cell division system, acting probably as a response to the nisin-lipid II complexes covered cell membranes.

Orientador: Pilar Rodriguez de Massaguer / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-27T09:01:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_MariaAparecidaDeSouza_D.pdf: 42087057 bytes, checksum: 3e85cff2165cd49bfdcfc2a84fc58581 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Arnaldo Yoshiteru Kuaye / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-11T23:44:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Passos_MariaHelenaCastroReis_D.pdf: 44844774 bytes, checksum: ccf6e139e22145e43467dd180f6fcd44 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O resumo podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic digital document / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:07:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_DanielaStellati_M.pdf: 2712981 bytes, checksum: f273fff53873a08de4a7dd843f3fd785 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Neste trabalho, investigamos os efeitos do extrato hidroalcoólico de Tabebuia avellanedae (EHT A) sobre o crescimento e diferenciação dos precursores hematopoéticos da medula óssea e do baço em animais infectados com Listeria monocytogenes. Foram também avaliadas alterações no peso do baço, atividade estimuladora de colônias do soro e a resistência dos animais à infecção. Durante 7 dias os camundongos BALB/c foram tratados com o EHTA com as doses de 125 mg/Kg , 250, 500 e 1O00mgIKg!dia por gavagem. Finalizando este período, os animais foram infectados com uma dose subletal de Listeria monocytogenes (4 x 104 bactérias/animal) e sacrificados 24, 48 e 72 horas após a infecção. Também foi realizada uma curva de sobrevida, utilizando uma dose letal da bactéria (4 x 106bactérias / animal), onde foi avaliada a resistência dos animais à infecção. Nossos resultados demonstraram um decréscimo significativo no número de precursores hematopoéticos na medula óssea dos animais infectados com Listeria monocytogenes. Além do mais, também foi observado hematopoese extramedular no grupo infectado em 48 e 72 horas após a infecção. No entanto, quando os camundongos foram previamente tratados com EHTA (125,250 e 500mglKg) a mielossupressão induzida pela infecção foi revertida, com a recuperação dos níveis normais de CFU-GM. Em relação à produção de fatores estimuladores de colônias de células hematopoéticas, observamos uma maior atividade estimuladora da produção de CFU-GM no soro dos animais infectados. Os grupos tratados com EHTA (125, 250 e 500mglKg) e infectados com Listeria aumentou significativamente a atividade estimuladora de colônias do soro, na indução do número de CFU-GM em relação aos resultados encontrados em animais infectados e não tratados. Em contraste ao aumento no peso do baço em animais infectados, nos animais previamente tratados com EHT A apresentaram uma normalização no peso desse órgão. O tratamento com EHTA (125, 250 e 500mg/Kg!dia) aumentou a resistência dos animais infectados com Listeria, em 15, 30 e 30% respectivamente / Abstract: In this work, we ivestigated the effects of Tabebuia avellanedae extract (TAHE) on the growth and differentiation ofbone marrow and spleen hematopoietic progenitors in Listeria monocytogenes infected mice. Serum colony stimulating activity, weight changes of spleen and resistance ofthe animaIs as they faced infection were also evaluated. For a period of 7 days BALB/c mice were treated daily with 125, 250, 500 and 1O00mgIKg/day ofTAHE by gavage. At the end of this period, the animaIs were infected intraperitoneal1y with a subletal dose (4x104 bacteria/animal) and sacrificed 24, 48 or 72 hours after infection. Our results demonstrated a significant decrease on the number of bone marrow hematopoietic progenitors in Listeria monocytogenes infected mice at 48 and 72 hours after infection when compared with compared with control. Moreover, extramedular hematopoiesis was also observed in the infected group at 48 and 72 hours after infection. However, when these animais were treated with TAHE (125, 250 and 500mgIK.g), the myelossupressive effects produced by infection were reverted, resulting in normallevels of CFU-GM. Regarding the production of colony-stimulating factor, we observed that serum from infected animaIs presented a higher stimulatory activity on the CFU-GM generation. Treatment of infected groups with T AHE significant1y increased the serum colony­stimulating activity, since in the CFU-GM number was induced in relation to the only infected groups. In contrast to the increased spleen weight found in infected animals, T AHE-treated mice presented normal spleen weights. Treatment with TAHE (125, 250 and 500 mglKg) also increased resistence of infected animaIs, as 15, 30 and 30 % ofsurvivors were obtained in these groups, respectively / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Resta_AndreiadosSantos_M.pdf: 837966 bytes, checksum: ca84712f5cd6dd4ba54f60e463697d96 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Neste trabalho foi investigado o efeito imunomodulador do extrato seco de Spirulina sp sobre o crescimento e diferenciação de precursores hematopoéticos de granulócitos-macrófagos (CFU-GM) na medula óssea e no baço de camundongos BALB/c infectados com Listeria monocytogenes. Alterações no peso do baço e na resistência dos animais à infecção também foram estudadas. Foram testadas quatro doses do extrato de Spirulina sp: 50, 150, 200 e 300 mg/kg/dia, administradas por via oral aos animais. Três protocolos de tratamento foram utilizados para avaliar os efeitos da alga sobre a resistência de camundongos infectados intraperitonealmente com uma dose letal Listeria monocytogenes (6x104 bactérias/animal). No primeiro protocolo, animais infectados foram pré-tratados por 7 dias com as diferentes doses do extrato. No segundo, doses de 150 e 200 mg/kg/dia foram administradas aos animais por 14 dias consecutivos, sendo que a suspensão de bactérias foi inoculada no 7° dia de tratamento. No terceiro protocolo, os animais foram submetidos a um pós-tratamento de 7 dias com essas mesmas doses de extrato. Para avaliação dos parâmetros hematopoéticos foi utilizado apenas o protocolo de pré-tratamento e os animais foram sacrificados 24, 48 e 72 h após inoculação intraperitoneal de uma dose subletal de Listeria monocytogenes (1x105 bactérias/animal). Animais infectados com uma dose subletal de Listeria monocytogenes apresentaram um decréscimo significativo no número de CFU-GM da medula óssea 48 e 72 h após a infecção. Esse efeito foi acompanhado por um aumento no número dessas células no baço assim como no peso deste órgão. Todas as doses de Spirulina utilizadas protegeram contra a mielossupressão provocada pela bactéria, porém um aumento estatisticamente significativo neste parâmetro foi obtido para as doses de 150 e 200 mg/kg/dia em relação ao controle e às outras doses. Estimulação da mielopoese também foi observada nos grupos de animais normais (não infectados) tratados por 7 dias com 150 e 200 mg/kg/dia de Spirulina em relação aos outros grupos. Além disso, o pré-tratamento dos animais infectados com todas as doses avaliadas inibiu o desenvolvimento da esplenomegalia e da hematopoese esplênica. Nenhuma alteração foi observada no baço dos animais apenas tratados. Empregando-se esse mesmo protocolo de pré-tratamento, as doses de 150 e 200 mg/kg/dia também aumentaram a resistência de camundongos letalmente infectados com Listeria monocytogenes, concordando com os resultados obtidos na avaliação dos parâmetros hematopoéticos. Quando o tratamento foi prolongado para 14 dias com essas mesmas doses de extrato e os animais infectados no 7o dia de tratamento, observou-se um aumento estatisticamente significativo de 35% e 30% na probabilidade de sobrevida dos animais infectados que receberam 150 e 200 mg/kg/dia da alga, respectivamente. No entanto, nenhuma alteração no tempo de sobrevida de animais infectados foi observada com o protocolo de pós-tratamento por 7 dias com 150 e 200 mg/kg/dia de extrato de Spirulina sp. Estes resultados apontam para um efeito imunoestimulante da alga quando utilizada profilaticamente e sugerem que o aumento na resistência do hospedeiro à infecção depende, em parte, do protocolo utilizado. Neste sentido, a administração do extrato seco de Spirulina sp previamente à infecção parece ser fundamental para aumentar a resistência imunológica do hospedeiro, provavelmente devido à estimulação da geração de precursores hematopoéticos de granulócitos e macrófagos, críticos para a defesa inicial do organismo contra a infecção bacteriana / Abstract: In this work, we investigated the effects of Spirulina sp extract on the growth and differentiation of bone marrow and spleen hematopoietic progenitors (CFU-GM) in normal and in Listeria monocytogenes-infected mice. Changes in spleen weight and resistance to a lethal dose of bacteria were also studied. To evaluate the hematopoietic activity, BALB/c mice were treated orally with 50, 150, 200 and 300 mg/kg doses of the extract for 7 consecutive days and, at the end of this period, they were infected intraperitoneally with a sublethal dose of the bacteria (1x103 bacteria/animal). As expected, a significant decrease in bone marrow CFU-GM numbers was observed in mice infected with L. monocytogenes at 48 and 72 h after infection. This effect was accompanied by the development of splenic hematopoiesis with splenomegaly. Pre-treatment of these animals with Spirulina sp significantly stimulated myelopoiesis, reaching normal values of bone marrow CFU-GM when 50 and 300 mg/kg of the algae were used. On the other hand, increased numbers of bone marrow CFU-GM over control values were observed when the extract was given to mice at 150 and 200 mg/kg previously to infection. Moreover, these doses also stimulated myelopoiesis in normal mice given the extract for 7 days. All of these doses of Spirulina sp completely inhibited the extramedullar hematopoiesis and the increase in spleen weight induced by the infection. This extract did not affect splenic hematopoiesis and spleen weight when administered to normal mice. Resistance to infection was studied in mice infected with a lethal dose of L. monocytogenes (6x104 bacteria/animal) and submitted to 3 protocols of treatment with Spirulina sp. These experiments show that only the doses of 150 and 200 mg/kg given for 7 days to mice previously to infection were effective to prolong survival of these animals until 12 days, compared with non-treated infected mice which died until 6 days. When 150 and 200 mg/kg of the extract were administered to mice for 14 consecutive days and the animals were infected at the 7th day of treatment, 30 and 35% of survival were observed, respectively. In contrast, post-treatment of infected mice with these doses did not affect survival, suggesting an important role for the pre-treatment with Spirulina sp in the prophylaxis of bacterial infections. Taken together, these results suggest that the stimulatory effect of Spirulina sp on myelopoiesis is critically important to improve resistance of L. monocytogenes-infected mice. Moreover, the present results support previous work in the literature suggesting the innate immune system as a major target of Spirulina-mediated immune activation / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Mary Luci de Souza Queiroz, Giselle Zenker Justo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T19:39:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_Adrianade_M.pdf: 2789353 bytes, checksum: 87cf638a789bb737a520a262c9ac8b40 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Neste trabalho, investigamos os efeitos imunomoduladores do composto MAPA nas atividades fagocitária, lítica e quimiotática de neutrófilos frente aos antígenos Candida albicans e Candida kefyr in vitro, bem como sobre o crescimento e diferenciação de células progenitoras hematopoiéticas da medula óssea para a série granulócito-macrófago (CFU-GM) de animais infectados com Listeria monocytogenes. A capacidade fagocitária apresentou-se aumentada com todas as concentrações de MAPA utilizadas (25, 50, 75 e 1000 j.lg/mL) frente à C. albicans. Por outro lado, em presença de C. kefyr houve um aumento com as três maiores concentrções (50, 75 e 1000 f.lg/mL). Quanto à capacidade lítica, houve um aumento nas três menores concentrações frente à C. albicans e com as três maiores concentrações frente à C. kefyr, indicando uma ação do composto na aderência dos fagócitos, bem como no processo de desgranulação de neutrófilos. A capacidade do neutrófilo de reduzir o corante nitroblue tetrazolium apresentou-se aumentada nas duas maiores concentrações testadas (50 e 75 f.lgfmL), sugerindo uma ação do composto MAPA na produção de óxido nítrico. A quimiotaxia foi utilizada para o estudo quantitativo da locomoção de leucócitos polimorfonucleares, quando incubados com as concentrações de 25, 50 e '75 j.lgfmL de MAPA. Esta atividade apresentou-se aumentada apenas quando as células polimorfonucleares foram incubadas com a concentração de 75 j.lgfmL. Para a realização dos experimentos in vivo os animais foram tratados por 7 dias, consecutivos nas doses de 0,5; 2,0; 5,0 e 7,5 mglKg de MAPA. Ao final do tratamento, os animais foram infectados com uma dose subletal de Listeria monocytogenes. Após a infecção ocorreu uma diminuição dos números de CFU-GM na medula óssea dos animais. Os animais previamente tratados com MAPA apresentaram um aumento no número de CFU-GM da medula óssea com as doses de 2,0 e 5,0 mg/Kg às 48 e 72 horas após a infecção, em relação ao controle e ao grupo infectado. Para avaliar a resistência destes animais à infecção pela L. monocytogenes realizamos uma curva de sobrevida, utilizando uma dose letal da bactéria (3 x 108 bactérias/animal). Trinta e quarenta por cento dos animais previamente tratados com as doses de 0,5 e 5,0 mgIKg de MAPA, respectivamente, sobreviveram à dose letal da L. monocytogenes, enquanto 100% dos animais do grupo controle infectado morreram em oito dias. No entanto, com 7,5 mg/Kg de MAPA todos os animais morreram em até oito dias, não havendo proteção contra a infecção. Diante dos resultados obtidos neste trabalho, podemos sugerir que o composto MAPA aumenta a resistência dos camundongos BALB/c infectados com a L. monocytogenes através do aumento dos precursores hematopoiéticos da medula óssea / Abstract: ln this work, we investigated the effeets of MAPA on the immune response. We have stlldied the neutrophils exposed to these eompound of six normal individuaIs. Phagoeytosis and killing of Candida albicans and Candida ke.fyr by neutrophils, neutrophil ehemotaxis and nitroblue tetrazolium reduetion were measured. The results obtained demonstrated - an inerease in the phagoeytie funetion of neutrophils in exposed to MAPA. On the other hand, lysis of C. albicans and C. kefyr by neutrophils was signifieantly inereased. We also observed a signifieant inerease of nitroblue tetrazolium reduetion and neutrophil ehemotaxis in these eells. e also investigated the effeets of magnesium ammonium phospholinoleatepalmitoleate anhidryde (MAPA), a roteie aggregated polymer isoleted from Aspergillus orizae, on the growth and differentiation of granuloeyte-maerophage progenitor eells (CFU-GM) in normal and Listeria monocytogenes infeeted miee. MAPA was administred subeutaneously (0.5-7.5 mg/Kg) for 7 days. ln the MAPA treated/infeeted groups L. monocytogenes was administred at the end of MAP A treatment. A signifieant reduetion in the numbers ofCFU-GM was observed at 48 h after the infection, followed by a slight restoration at 72 h. Treatment of, these animaIs previously to infection stimulated marrow myelopoiesis in a dosedependent manner. The 5.0 mg/Kg MAPA was the optimal biological aetive dose in infected mice and this dose shedule also stimulated myelopoiesis in normal mice. The 0.5 and 5. O mg/Kg doses given prior to in.fection with a lethal dose of 3 x 108 bacterialanimal led to a 30% and 40% survival, respectively. These results demonstrated that MAPA produces a significant increase in the resistanee of the animaIs infeeted with L. monocytogenes, and that this protection is due, at least in part to increased CFU-GM in the bone marrow ofinfeeted animals / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador : Antonio de Melo Serrano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-14T00:15:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Destro_MariaTeresa_M.pdf: 3400324 bytes, checksum: 0205581628211aa9aaa5b0e64639de79 (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: A presente pesquisa teve por objetivo verificar a eficiência de alguns meios para isolamento de Listeria a partir de alimentos, assim como avaliar a contaminação de alguns produtos alimentícios por este grupo de bactérias. Numa primeira fase, avaliamos a capacidade seletiva dos meios ágar McBride modificado ("MLA"), ágar Vogel-Johnson modificado ("MVJ") e ágar cloreto de lítio feniletanol moxalactam ("LPM") para amostras de leite e de carne bovina moída artificialmente contaminadas. Para as amostras de leite, os 3 meios mostraram-se semelhantes, mas para as amostras de carne moída os meios "LPM" e "MVJ" foram mais seletivos, permitindo o isolamento de colônias típicas de Listeria de modo mais eficiente, após incubação por 48 horas. Na segunda fase examinamos 140 amostras de alimentos colhidas no varejo em Campinas, SP. Bactérias do gênero Listeria estiveram presentes em 67 amostras (48%) sendo a maior incidência para carnes e derivados (95% de amostras positivas). Os leites e queijos apresentaram 12,5% de amostras positivas, sendo a totalidade dos leites pasteurizados, tipos B e C, negativa para o gênero. Os produtos cárneos examinados (carne bovina moída, salsicha e lingüiça, 20 amostras de cada produto) apresentaram 71,7% das amostras positivas para Listeria monocytogenes; 80,0% para L. innocua; 1,7% para L. seeligeri; 3,3% para L. welshimeri e 1,7% para L. murrayi. Já a partir dos produtos lácteos (leite cru tipo B e queijo minas frescal, 20 amostras de cada produto) foi possível observar a presença de L. monocytogenes em 5,0% das amostras, L. innocua em 20,0% e tanto L. seeligei quanto L. welshimeri em 2,5%. / Abstract: The purpose of this research was to evaluate some plating media and a methodology to recover Listeria spp from food, as well as to evaluate the problem of food contamination by this genus of bacteria. In the first step we evaluated the selectivity of 3 media: modified McBride Listeria agar (MLA), modified Vogel-Johnson agar (MVJ) and lithium chloride-phenylethanol-moxalactam (LPM). Pasteurized milk and raw minced meat artificially innoculated were used. All 3 media worked equally well for the milk samples but MVJ and LPM were the best for the meat samples. The best incubation time was 48 hours. The second step was the evaluation of 140 samples obtained from retail stores in Campinas, SP. Listeria spp was detected in 67 (48%) samples. From 60 meat products samples 95% showed Listeria spp as well as 12,5% of the milk and milk products. Listeria spp was not detected in all pasteurized milk samples. In meat and meat products (20 samples per product) Listeria monocytogenes could be islolated from 71,7%; Listeria innocua from 80,0%; L. welshimeri from 3,3% and L. seeligeri and L. murrayi from 1,7% . In raw milk and cheese samples (20 samples per product) Listeria monocytogenes was detected in 5,0%; L. innocua in 20,0% and L. seeligeri & L. welshimeri in 2,5%. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Listeria monocytogenes causes a serious foodborne illness (listeriosis) with a fatality rate of about 30% in susceptible individuals (1). Timely identification of foods and food processing environments carrying this deadly bacterium is crucial for implementing effective interventions but remains a practical challenge due to the complexity of test samples, low level of bacterial contamination, and the ubiquity and the genetic diversity of Listeria isolates. The purpose of this work was to identify and assess surface proteins of L. monocytogenes that can serve as diagnostic biomarkers for pathogen isolation and detection using antibody-based methods. Bioinformatics analysis of 130 putative surface proteins encoded by the genome of L. monocytogenes F2365 (serotype 4b) revealed four uncharacterized proteins with extensive amino acid sequences unique to L. monocytogenes. These proteins did not contain identifiable PrfA-controlled promoter elements. The four proteins were expressed at the transcriptional level in vitro, as demonstrated by RT-PCR, but only one of the four proteins, LMOf2365_0639, was detected on the cell surface by immunofluorescence microscopy (IFM) using rabbit polyclonal antibodies (PAbs) raised against corresponding recombinant proteins. Transcription start site mapping and promoter prediction analysis provided evidence that the LMOf2365_0639 gene was expressed under the control of a sigma B factor-dependent promoter, an alternative sigma factor involved in stress response. Non-gel based proteomics analysis of L. monocytogenes surface proteins identified 36 surface proteins in at least one of the three trials performed. IFM with PAbs raised against each of the five candidate surface proteins identified from the proteomics study revealed a strong fluorescence signal on the surface of live L. monocytogenes cells with LMOf2365_0148 specific PAbs, indicating a good level of expression of this protein. These results suggested the potential of the surface proteins LMOf2365_0639 and LMOf2365_0148 as diagnostic biomarkers for L. monocytogenes. Thirty-five and 24 monoclonal antibodies (MAbs) were developed against purified recombinant LMOf2365_0639 and LMOf2365_0148, respectively. Three MAbs against LMOf2365_0639 and five MAbs against LMOf2365_0148 were selected and evaluated for their potential in L. monocytogenes detection and isolation based on the observation that these MAbs recognized the highest number of the 53 L. monocytogenes isolates and the lowest number of the 10 other Listeria species isolates tested. None of these MAbs reacted with the four foodborne pathogens (Campylobacter jejuni, Samonella enterica serovar Typhimurium, Escherichia coli O157:H7 and Bacillus cereus) tested. All three MAbs to LMOf2365_0639 were specific for lineage I and II isolates of L. monocytogenes commonly found in clinical and food isolates respectively and recognized the N-terminal region of LMOf2365_0639. Anti-LMOf2365_0148 MAbs were reactive to lineage I and lineages III L. monocytogenes isolates commonly found in clinical and animal isolates respectively. Both LMOf2365_0639 and LMOf2365_0148 were expressed in standard enrichment culture conditions according to Health Canada’s MFHPB-30 and MFHPB-07 methods. In addition, MAbs against LMOf2365_0148 could specifically isolate live L. monocytogenes by immunomagnetic separation even in a mixture of L. monocytogenes and non-target L. innocua. The dissociation constants of the MAbs capable of capturing L. monocytogenes ranged from 2.58 x 10-8 M to 8.87 x 10-10 M. In conclusion, two novel surface proteins LMOf2365_0639 and LMOf2365_0148 were identified, were shown to be expressed in L. monocytogenes grown in standard selective enrichment cultures, and can be explored as surface biomarkers for the isolation and detection of L. monocytogenes with specific MAbs developed in this study.