Thesis (Ph. D.)--Auburn University. / Abstract. Includes bibliographical references.

Hohenheim, Univ., Diss., 2007.

Würzburg, Univ., Diss., 2008. / Zsfassung in engl. Sprache.

Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1970. / Typescript. Vita. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Würzburg, Univ., Diss., 2001.

Listeria monocytogenes is a rod-shaped Gram positive bacterium. It generally exist ubiquitously in nature, where it lives as a saprophyte. Occasionally it however enters the food chain, from where it can be ingested by humans and cause gastro-intestinal distress. In immunocompetent individuals L. monocytogenes is generally cleared within a couple of weeks, but in immunocompromised patients it can progress to listeriosis, a potentially life-threatening infection in the central nervous system. If the infected individual is pregnant, the bacteria can cross the placental barrier and infect the fetus, possibly leading to spontaneous abortion. The infectivity of L. monocytogenes requires a certain set of genes, and the majority of them is dependent on the transcriptional regulator PrfA. The expression and activity of PrfA is controlled at several levels, and has traditionally been viewed to be active at 37 °C (virulence conditions) where it bind as a homodimer to a “PrfA-box” and induces the expression of the downstream gene. One of these genes is ActA, which enables intracellular movement by recruiting an actin polymerizing protein complex. When studying the effects of a blue light receptor we surprisingly found an effect of ActA at non-virulent conditions, where it is required for the bacteria to properly react to light exposure. To further study the PrfA regulon we tested deletion mutants of several PrfA-regulated virulence genes in chicken embryo infection studies. Based on these studies we could conclude that the chicken embryo model is a viable complement to traditional murine models, especially when investigating non-traditional internalin pathogenicity pathways. We have also studied the effects of small molecule virulence inhibitors that, by acting on PrfA, can inhibit L. monocytogenes infectivity in cell cultures with concentrations in the low micro-molar range.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T13:58:12Z No. of bitstreams: 2 Tese Ana Paula da Costa.pdf: 11703201 bytes, checksum: 21beb28c4cce405340195e0c8ba78a09 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T13:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Ana Paula da Costa.pdf: 11703201 bytes, checksum: 21beb28c4cce405340195e0c8ba78a09 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / FACEPE / Listeria monocytogenes é um bacilo gram-positivo, intracelular facultativo, transmitido por alimentos, que pode causar doença, a listeriose, em indivíduos susceptíveis. Embora rara, a listeriose tem grande importância para a saúde pública pela sua alta letalidade. Este trabalho teve como objetivo, identificar marcadores moleculares para utilização no desenvolvimento de nova técnica de diagnóstico molecular da listeriose. Os estudos envolveram sorotipagem, tipagem molecular pela amplificação das sequências 23S, 16S-23S e RAPD, pesquisa de plasmídios e de genes de virulência (inlA, inlB, inlC, inlJ, hly, iap, plcA, actA) em 135 cepas de L. monocytogenes de casos humanos e alimentos isoladas no Brasil no período de 1975 a 2001; infecção experimental em camundongos com cepas portando ausência ou alterações em genes de virulência; e a caracterização de isolados de um caso de endocardite atendido numa unidade de emergência cardiológica em Recife, PE, em 2010. Nenhuma relação foi encontrada entre a origem das cepas, sorotipos, perfis genéticos, conteúdo plasmidial e distribuição dos genes de virulência. Os ensaios de infecção experimental em camundongos também não permitiram estabelecer uma relação entre a presença dos marcadores de virulência considerados no estudo e as respostas dos animais inoculados. Seis isolados de hemocultura de um caso de endocardite com identificação presuntiva de Listeria spp. foram classificados como L. monocytogenes sorotipo 4b pela amplificação por PCR dos genes 23S, lmo2243 e ORF2210 específicos do gênero Listeria, espécie L. monocytogenes e sorotipo b respectivamente. Todos os genes de virulência pesquisados foram detectados por PCR nas amostras e a análise do perfil de amplificação da sequência 16S-23S revelou que os seis isolados são uma mesma cepa. Embora esses estudos não tenham revelado nenhum marcador molecular de patogenicidade, a alta frequência de genes de virulência observada entre cepas dos sorotipos mais patogênicos (1/2a, 1/2b, 4b) evidencia o potencial patogênico nas cepas brasileiras de L. monocytogenes e a necessidade de incrementar a vigilância e diagnóstico dessa bactéria. Considerando a prevalência dos sorotipos 1/2a, 4b nas amostras clinicas e dos sorotipos 1/2a, 1/2b, 4b em alimentos, desenvolvemos e padronizamos um procedimento baseado em LAMP (loop-mediated isothermal amplification) para identificação desses sorotipos. A técnica é rápida e de fácil operacionalização, utiliza um bloco de aquecimento ou banho-maria e o produto da reação pode ser visualizado a olho nu mediante adição de reagentes fluorescentes. O procedimento padronizado mostrou-se sensível, capaz de detectar 100pg de DNA ou 104 UFC, e espécie - específica, capaz de diferenciar L. monocytogenes de espécies intimamente relacionadas geneticamente. Outros sorotipos intimamente relacionados (3a, 3b, 4e e 4d) foram amplificados sem detrimento da técnica porque são raramente encontrados em amostras humanas e animais. A técnica LAMP se apresenta como uma alternativa fácil e rápida para diagnóstico e tipagem de L. monocytogenes especialmente para os programas de vigilância e investigação epidemiológica.

Orientador: Arnaldo Yoshiteru Kuaye / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-22T23:06:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kabuki_DirceYorika_M.pdf: 13196927 bytes, checksum: cd5b73913adb45b689c065ec84b7f5e9 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Atualmente a L. monocytogenes é considerada um patógeno de importância em alimentos, pois vários surtos e casos de listeriose associados ao consumo de alimentos têm sido relatados, incluindo os produtos de frango. O aumento da produção brasileira de carnes de aves, a redução de preço no mercado interno e conseqüente aumento do consumo e a falta de métodos oficiais para a quantificação de L. monocytogenes em alimentos, principalmente os in natura, levaram ao desenvolvimento deste projeto numa tentativa de quantificá-la para que limites máximos de tolerância possam ser propostos. Amostras resfriadas de peito e de frango inteiro obtidas no comércio varejista, foram submetidas a quantificação de Listeria spp pelo método do Número Mais Provável (NMP) utilizando-se: a) caldo Fraser modificado (MdFB) contendo 20 mg de acriflavina/L a 35°C/48h; b) caldo de enriquecimento para Listeria (LEB) (USDA) a 30°C/48h e c) caldo LEB a 30°C/24h seguido do caldo Fraser modificado (MFB) (USDA) a 35°C/24-48h. No isolamento foram utilizados os ágares cloreto de lítio feniletanol moxalactam (LPM) e Oxford modificado (MOX) e na identificação as provas bioquímicas padrão ou o kit API-Listeria. Os resultados revelaram: i) a viabilidade do emprego do meio MdFB na técnica do NMP; ii) valores de NMP para Listeria sp e L. monocytogenes entre <0,3 a 93/g para peitos e entre <9 a 2,8x103/carcaça ou <0,005 a 1,943/g de frango; iii) predomínio de L. innocua, L. monocytogenes, L. welshimeri e L. seeligeri. Em estudo paralelo com as mesmas amostras, verificou-se ocorrência elevada de Listeria sp e L. monocytogenes, com índices de 96,7% e 90,0% respectivamente e pequena diferença entre carcaças e peitos de frango. O ágar LPM apresentou desempenho melhor que o MOX no isolamento de L. monocytogenes. Em outro estudo, empregando-se a técnica do NMP proposta, verificou-se a ineficiência de hipoclorito de sódio e de fosfato trissódico na redução de L. monocytogenes em coxas de frango artificialmente contaminadas; os níveis de redução obtidos foram ? 0,42 ciclos log, os quais não foram considerados estatisticamente significantes / Abstract: L. monocytogenes is currently considered to be an important food pathogen, since various outbreaks and cases of listeriosis have been related to the consumption of foods, including some chicken products. The increase in the production of fowl meats in Brazil, the reduction of the price on the internal market and consequent increase in consumption by the population and the lack of official methods for the quantification of L. monocytogenes in foods, principally in raw foods, are the factors which led to the development of this project, aimed at quantifying the problem and subsequently proposing maximum tolerance limits. Thus refrigerated samples of chicken breast and whole chickens, ali obtained on the retail market, were quantified for Listeria spp by the Most Probable Number (MPN) method, using a) modified Fraser broth (MdFB) containing 20 mg acriflavine/L at 35°C/48h; b) Listeria enrichment broth (LEB) (USDA) at 30°C/48h and c) LEB broth at 30°C/24h followed by modified Fraser broth (MFB) (USDA) at 35°C/24­48h. For the isolation procedure, lithium chloride phenylethanol moxalactam agar (LPM) and modified Oxford agar (MOX) were used, and the standard biochemical test or API­ Listeria kit used for identification. The results showed the following: i) the viability of using the medium MdFB in the MPN technique; ii) MPN values for Listeria spp and L. monocytogenes between <0.3 and 93/g for breasts and between <9 and 2.8x103/carcass or <0.005 to 1.943/g chicken and iii) predominance of L. innocuti, L. monocytogenes, L. welshimeri and L. seeligeri. In a parallel study with the same samples, an elevated occurrence of Listeria spp and L. monocytogenes was determined, with indices of 96.7% and 90.0% respectively, the difference between the carcasses and breasts being relatively small. LPM agar was shown to be a better isolation media for L. monocytogenes than MOX. In another study using the proposed MPN technique, the inefficiency of sodium hypochlorite and of trisodium phosphate in the reduction of L. monocytogenes in artificially contaminated chicken legs was shown, the reduction levels being ?0.42 log cycles, and not therefore statistically significant / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador : Mirtha Nelly Uboldi Eiroa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T20:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Porto_Ernani_D.pdf: 42841587 bytes, checksum: 506c0ae29d3ca2e0a7efe9082170f6db (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Estudou-se a incidência de Listeria monocvtoJ!enesem quatro tipos de hortaliças: alface (LQctuccasativa), repolho (flrassica oleracea cavitata), agrião (liastrium officinale) e salsa rE.etroselinumcrisvum), através do enriquecimento a ~C130 dias. As amostras foram adquiridas no município de Campinas-SP. Foram analisadas 50 amostras de 25 g de cada hortaliça, perfazendo 200 amostras. Foram encontradas oito amostras positivas para o microrganismo, co"espondendo a 3,2% do total examinado. Das hortaliças analisadas somente no repolho não houve isolamentos de L. onocvtoJ!enes. Todas as hortaliças positivas apresentaram 4% de incidência da bactéria. Os estudos se prolongaram durante 2 anos e a maioria dos isolamentos (62,5%) oco"eu no mês de janeiro, período que coincidiu com temperaturas mais elevadas e maior precipitação pluviométrica.. Também foi estimada a população natural de L. monocvtoJ!enes de amostras de alface adquiridas no mercado. Foram analisadas 50 amostras de 50 g. A estimativa da população foi feita através da técnica dos tubos múltiplos, incubados a ~C130 dias. Duas amostras foram positivas, apresentando uma população média estimada de 1,2 NMPlg de alface. Foram realizados ensaios de sanificação de alfaces artificialmente inoculadas com o microrganismo. As alfaces foram contaminadas com população conhecida de L. monocvtogenes, e sanificadas por 15 mino Os sanificantes testados foram ácido acético (0,3%, 0,5%,I,OOÁeJ1,5%), hipoclorito de sódio 100 mglL de cloro ativo pH 7,0 e dicloroisocianurato de sódio 100 mglL de cloro ativo. As reduções obtidas, em ciclos logarítmicos para o ácido acético foram: 0,8 ciclos para a solução 0,3%, 1,4 ciclos para 0,5%, 1,3 ciclos para I,OOÁeJ1,4 ciclos para a solução 1,5%. Para o hipoclorito de sódio solução 100 mglL de cloro livre foi obtida uma redução de 1,9 ciclos e com o dicloro-isocianurato de sódio 100 mglL de cloro livre a redução foi de 2,4 ciclos, sendo este o produto mais eficiente. Foi estudado o comportamento de L. monocvtogenes em alfaces minimamente processadas acondicionadas em atmosfera modificada, ATM, (900ÁJN], 5% CO] e 5% O]) durante a armazenagem a ~C e 15"C.As alfaces contaminadas com população conhecida de L. monocvtoJ!enesforam sanificadas com dicloro-isocianurato de sódio a 143 mglL de cloro livre e acondicionadas em porções de 100 g em embalagens de polipropileno e polietileno de baixa densidade. Em nenhuma das temperaturas houve inibição de L. monocvtogenes. A ~C a população de L. monocvtoJ!enes sofreu um pequeno aumento inicial e depois permaneceu estável até o 2]° dia de estocagem. Na estocagem a 15"C a população de L. monocvtoJ!enes aumentou 3 ciclos logarítmicos nos 7 dias de estocagem. Finalmente, foram feitos estudos para determinar se a cenoura possui substâncias inibidoras de L. monocvtoJ!enes. Foi utilizado o suco de cenoura em diversos ensaios para avaliar o efeito sobre o microrganismo, com resultados contraditórios. Metodologias difêrentes utilizadas para a contagem de um mesmo suco contaminado por L. monocvtoJ!enes mostraram resultados diferentes, sugerindo que este pode ser um fator de influência. Mais estudos são necessários para se obter uma conclusão definitiva sobre o assunto / Abstract: The incidence of Listeria monocvtoJ!enes in the following four vegetables was studied: lettuce (l:.actucca sativa), cabbage (!1rassica oleracea caTJitata),water cress (Nastrium oljicinale) and parsley fE..etrselinum crisTJUm),by enrichment at 4 °c/30 days. Samples were acquired in the city of Campinas, SP, Brazil. Fifty 25g samples of each vegetable were analyzed, giving a total of 200 samples. Eight positive samples were found, representing 3.2% of the total number examined Of the vegetables analyzed, only the cabbage showed no positive results for L. monocvtogenes. Ali the positive vegetables presented 4% incidence of the bacterium. The studies covered a 2 year period and the majority ofthe positive isolations (62.5%) occurred in January, period in which both temperatures and rainfall are at their highest. The natural population of L. monocvtoJ!enes in lettuce samples acquired on the mar/ret, was also determined Fifty 50g samples were analyzed. Counts was made using the multiple tube technique, incubating at ~ C/30 days. Two samples were positive, giving a mean population of 1.2 NMP/g of lettuce. Some sanification tests were also carried out in lettuce, using samples artificially contaminated with the microorganism. The lettuce heads were contaminated with a known population of L. monocvtogenes, and sanifying for 15 min.. The sanifying agents tested were acetic acid (0.3%, 0.5%, 1.0% and 1.5%), sodium hypochlorite pH 7.0 containing 100 mglL active chlorine and sodium dichloro-isocyanurate also containing 100 mglL active chlorine. After the prescribed contact time, the agent was immediately neutralized and a survival count made. For acetic acid, the reductions obtained were, in logarithmic cycles:0.8 cycles for the 0.3% solution, 1.4% for the 0.5% solution, 1.3% cyclesfor the 1.5% solution. For the sodium hypoclorite solution containing 100 mglL active chlorine, a reduction of 1.9 cycles was achieved and for the sodium dichloro-isocyanurate solution, also containing 100 mglL active chlorine, the reduction was to the order of 2.4 cycles, this being the most efficient agent tested. The behavior of L. monocvtoJ!enes in minimally processed lettuce, packaged in a modified atmosphere (9()OANJ1. 5% COl and 5% OJJ was also studied, during storage at ~ and 1SOC. Lettuce leaves contaminated with a know population of L. monocvtoJ!enes were sanitized with sodium dichloro-isocyanurate containing 143 mglL free chlorine and then packed in 100 g portions in po/ypropylene and low density polyethylene packages. The organism was not inhibited at either of the temperatures used. At ~ C the population of L. monocvtogenes suffered a slight increase initially and then remained stable up to the 21stday ofthe storage. At ISOC, the population ofL. monocytogenes increased by 3 cycles in the 7 days of storage. Finally some studies were carried out to see if carrots tissue contained any substances which inhibited L. monocvtogenes. Carrot juice was used in various trials to evaluate its effect on the microorganism, giving contradictory results. In some trials the bacterium proliferated, whilst in others, it was apparent/y inhibited. Different counting methodologies usedfor the same juice contamined by L. monocvtoJ!enes gave different results, suggesting that this could be a factor of influence. More studies are needed in order to come to a definitive conclusion on this point / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Arnaldo Yoshiteru Kuaye / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-01T15:02:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Naldini_MariaCarlaMendes_M.pdf: 16441728 bytes, checksum: 1ea7253fbbf4d54759952d950606c3c4 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo; Atualmente, muitos laticínios vêm utilizando o processo de acidificação direta, com ácido lático, substituindo o fermento lático, na elaboração do queijo Minas Frescal, para melhorar a textura e sabor e aumentar o rendimento. Entretanto, o emprego exclusivo do processo de acidificação direta pode proporcionar queijos mais susceptíveis a proliferação de microrganismos contaminantes, incluindo Usteria monocytogenes, reconhecido como um perigoso patógeno associado a doenças de origem alimentar e, particularmente, envolvendo queijos com características semelhantes ao tipo Minas Frescal. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência da utilização da acidificação direta no comportamento de L. monocytogenes artificialmente inoculada em comparação ao método convencional, com fermento lático na elaboração do queijo Minas Frescal durante armazenamento refrigerado a 5°C e 10°C, por 25 dias. Os queijos foram inoculados artificialmente com L. monocytogenes ('10 GRAUS' UFC/g). Foi utilizado o ágar Oxford Modificado (MOX) para a contagem de L. monocytogenes e o ágar de Man, Rogosa e Sharp para a contagem de bactérias láticas em queijos depois de 1, 6, 12, 18 e 25 dias de armazenamento. Os resultados das contagens de L. monocytogenes para os primeiros dias de monitoramento apresentaram valores em torno de '10 POT. 4'-'10 POT. 5' UFC/g. O queijo produzido pelo processo convencional apresentou contagens de L. monocytogenes praticamente inalteradas durante todo período de armazenamento, sugerindo uma ação inibitória ao crescimento do patógeno no produto. Para o queijo elaborado por acidificação direta, os resultados das contagens de L. monocytogenes para armazenamento a 5°C e 10°C após os 25 dias de monitoramento foram semelhantes, observando-se um aumento expressivo da ordem de 2-3 ciclos logarítimicos, mas com velocidade de crescimento maior para os queijos armazenados a 10°C. Os resultados sugerem que a mudança na tecnologia de fabricação do queijo Minas Frescal, embora pareça ser uma boa solução para a melhoria das características sensoriais, não é tão adequada do ponto de vista de segurança alimentar, necessitando novos estudos que aliem os benefícios estruturais e sensoriais aos microbiológicos. / Abstract: Currently, many cheese factories have been substituting the bacteria starter for lactic acid to improve the yield and texture of the finished products. However, the use of the direct acidification process can produce cheese products more susceptible to spoilage by contaminating microorganisms, including Listeria monoytogenes, recognized as a potentially dangerous food-borne pathogen. Since 1985, some cases of listeriosis involving cheese contamination and the recognition of the hazard caused by this microorganism has led to a tightening of hygiene control in cheese factories. Because this, the objective of this work was to evaluate the behaviour of L. monocytogenes ScoUA in Minas Frescal cheese manufactered by the traditional procedure with the addition of mesophilic starter as compared to the direct acidification with lactic acid at 5°C and 10°C during 25 days. The cheeses were artificially inoculated with L. monocytogenes culture '10 POT. 9' cfu/ml. Modified Oxford agar (MOX) was used for L. monocytogenes counts and de Man, Rogosa, Sharpe agar (M.R.S.) was used for mesophilic starter counts in the cheeses afier 1, 6, 12, 18, and 25 days of incubation. The initial counts of L. monocytogenes obtained for the finished cheeses artificially inoculated were about 104 - 105 cfu/g. Using the traditional method, with mesophilic starter, the counts in cheese samples along the storage remained almost unchanged, whereas, the direct acidified cheeses with lactic acid presented an increase in the counts up to '10 POT. 8'cfu/g, that represents 2-3 log cycles. The profiles of the counts of lactic bacteria, during the storage of cheeses, associated with those of L. monocytogenes show a strong negative influence of the competitive starter culture over L. monocytogenes survivor. This fact allow us to believe that the addition of starter culture is an efficient way to control L. nocytogenes growth in these products. Despite the improvement of sensorial (flavour, texture and color) characteristics of cheeses obtained by direct acidification with lactic acid, it would be suggested that this technological procedure would not be recommended from a sanitary viewpoint. New studies would be necessary allying sensorial benefits with the microbiological ones. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos