A técnica de laserterapia é um método não-invasivo que demonstra clinicamente ser eficaz na redução da sensibilidade à dor. O presente estudo visou examinar os efeitos da aplicação do LASER sobre a sensibilidade dolorosa induzida pela constrição crônica do nervo isquiático (CCI) de ratos. Os animais foram submetidos a ensaios comportamentais e a dez sessões de laserterapia. Observamos melhora para os testes comportamentais o que corrobora com os ensaios de imunoblotting no gânglio da raiz dorsal, onde observamos uma diminuição de Substância P no grupo de animais tratados com LASER. Com relação aos ensaios imunoenzimático de ELISA, observamos diminuição de citocinas pró-inflamatória e uma tendência ao aumento de citocina anti-inflamatória. Não observamos diferença estatística na análise dos receptores opióides MOR , DOR e KOR . Podemos concluir que o LASER é eficaz e age na modulação da dor neuropática. / The technique of laser therapy is a not invasive method that demonstrates clinically to be effective in reducing sensitivity to pain. This study aimed to examine the effects of application of LASER on pain sensitivity induced by chronic constriction of the sciatic nerve (CCI) in rats. The animals were subjected to behavioral tests and the ten sessions of laser therapy. We observed and improvement for behavioral tests which corroborates with immunoblotting assays in the dorsal root ganglion, where we observes a decrease of substance P in the group of animals treated with LASER. Regarding immunoenzymatic ELISA assay, we observed a decrease of pro-inflammatory cytokines and a possible increase in anti-inflammatory cytokine. No statistical difference in the analysis of opioid receptor MOR, DOR and KOR.

Funções vitais importantes são desempenhadas pelo sistema estomatognático e alterações no equilíbrio que ultrapassem a tolerância fisiológica do sujeito podem gerar um colapso, levando a um distúrbio funcional, conhecido como Desordem Temporomandibular (DTM). A principal característica e o principal motivo pela busca ao tratamento e o sintoma doloroso que afeta negativamente a qualidade de vida do sujeito. O Laser de Baixa Intensidade (LBI) consiste em uma modalidade terapêutica conservadora na redução da dor, porem protocolos eficazes e seus efeitos ainda são controversos na literatura. O objetivo deste estudo foi analisar o efeito do LBI na redução da intensidade e sensibilidade a dor entre as sessões de LBI e durante teste funcional especifico, e avaliar o comportamento eletromiográfico antes e após tratamento. Para tal, 30 mulheres sem sinais e sintomas de DTM foram selecionadas para compor o grupo controle e 59 mulheres diagnosticadas com DTM dolorosa, por meio do Research Diagnostic Criteria for Temporomandibular Disorders (RDC/TMD), passaram por processo de randomização baseado na severidade da DTM que foi obtida através do Índice Temporomandibular, foram designadas aos grupos laser ativo (n=30) e placebo (n=29). Todas as voluntarias passaram inicialmente por um protocolo de avaliação de eletromiografia (EMG), eletrovibratografia (EVG), avaliação de limiar de dor a pressão (LDP) e intensidade de dor (EVA) durante teste funcional especifico, alem da mensuração de abertura bucal. Para os grupos de tratamento, essas analises foram repetidas após o termino do tratamento e com 30 dias de proservação. O tratamento foi realizado com equipamento contendo uma ponta de laser ativo e uma placebo (GaAlAs 780nm) sob protocolos diferentes para ATM (60mW/50segundos 75J/cm2) e para Masseter e Temporal (60mW/20segundos 30J/cm2). Em 8 sessões (2 por semana). Os resultados foram submetidos a analise de variância, posteriormente foi empregado o teste de comparação múltipla de Tukey (nível de significância adotado 5%). Para as analises foi utilizado o procedimento General Linear Models (GLM) do programa computacional lSAS (SAS 9.1, SAS Institute, Cary. NC, USA). Os resultados obtidos mostraram que o LBI ativo e placebo foram capazes de gerar alterações apenas nas variáveis relacionadas diretamente a dor, como a intensidade de dor avaliada entre as sessões, na qual, ambos os grupos apresentaram melhora significante a partir da segunda sessão de tratamento. Alem disso, houve melhora da sensibilidade a dor e da intensidade durante o exercício funcional da mastigação após o tratamento para os dois grupos, porem o grupo laser apresentou maior efetividade na redução destas variáveis. Pode-se concluir que o tratamento com LBI e eficaz para melhora da dor e a diferença entre o tratamento laser ativo e placebo ocorreu apenas nas variáveis de dor mensuradas durante um exercício funcional. / Important vital functions are performed by the stomatognathic system and changes in balance that exceed the physiological tolerance of the subject can lead to a collapse, leading to a functional disorder known as Temporomandibular Disorder (TMD). The main characteristic and the main reason for the search for treatment is the painful symptom that negatively affects the quality of life of the subject. The Low-lever Laser Therapy (LLLT) consists of a conservative therapeutic modality in the reduction of pain, but effective protocols and their effects are still controversial in the literature. The aim of this study was to analyze the effect of LLLT in reducing the intensity and pain sensitivity between sessions of LLLT and during specific functional test, and evaluate the electromyographic behavior before and after treatment. To this end, 30 women with no signs and symptoms of TMD were selected to the control group and 59 women diagnosed with painful TMD, through the Research Diagnostic Criteria for Temporomandibular Disorders (RDC / TMD) underwent randomization process based on severity DTM was obtained by temporomandibular index were assigned to the active laser groups (n = 30) and placebo (n = 29). All volunteers initially underwent electromyography (EMG), electrovibratography (EVG), pressure pain threshold (LDP) and pain intensity (VAS) evaluation during specific functional tests, in addition to the measurement of mouth opening. For treatment groups, these analyzes were repeated after the end of treatment and 30 days of follow up. The treatment was performed with equipment containing an active laser tip and a placebo (GaAlAs - 780nm) under different protocols for ATM (60mW / 50 seconds - 75J / cm2) and for Masseter and Temporal (60mW / 20 seconds - 30J / cm2). In 8 sessions (2 per week). The results were submitted to analysis of variance was later used the multiple comparison test of Tukey (significance level - 5%). For the analysis, the General Linear Models (GLM) procedure of the SAS software (SAS 9.1, SAS Institute, Cary, NC, USA) was used. The results showed that the active LLLT and placebo were able to generate only changes in the variables directly related to pain, such as pain intensity measured between sessions, in which both groups showed significant improvement from the second treatment session. In addition, there was improvement in pain sensitivity and intensity during the functional mastication exercise after treatment for both groups, but the laser group showed greater effectiveness in reducing these variables. It can be concluded that treatment with LLLT is effective for improving pain and the difference between active laser treatment and placebo occurred only in pain variables measured for a functional exercise.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:18:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4679.pdf: 2464914 bytes, checksum: 8f9d532c21a42e4e96fa57b50de9721e (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / Financiadora de Estudos e Projetos / Muscle regeneration is a complex phenomenon, involving coordinated activation of several cellular responses. During this process, oxidative stress, and consequent tissue damage occur with a severity that may depend on the intensity and duration of the inflammatory response. Among the therapeutic approaches to attenuate inflammation and increase tissue repair, low-level laser therapy (LLLT) may be a safe and effective clinical procedure. The aim of this study was to evaluate the effects of LLLT on oxidative/nitrative stress and inflammatory mediators produced during a cryolesion of the tibialis anterior (TA) muscle in rats. Sixty Wistar rats were randomly divided into three groups (n=20): control (BC), injured TA muscle without LLLT (IC), injured TA muscle submitted to LLLT (IRI). The injured region was irradiated daily for 4 consecutive days, starting immediately after the lesion using an AlGaAs laser (continuous wave, 808nm, tip area of 0.00785 cm2, power 30 mW, application time 47 s, fluence 180 J/cm2; total energy 1.4J; irradiance 3.8 mW/cm2). The animals were sacrificed on the fourth day after injury. LLLT reduced oxidative and nitrative stress in injured muscle, decreased lipid peroxidation, nitrotyrosine formation and NO production, probably due to reduction in iNOS protein expression. Moreover, LLLT increased SOD gene expression, and decreased the inflammatory response as measured by gene expression of NF-kβ and COX-2 and by TNF-α and IL-1β concentration. These results suggest that LLLT could be an effective therapeutic approach to modulate oxidative and nitrative stress and to reduce inflammation in injured muscle and could therefore help muscle regeneration. / A regeneração muscular é uma adaptação que ocorre em resposta ao traumatismo e envolve ações integradas entre células, matriz e mensageiros químicos, visando restaurar o equilíbrio biológico e a integridade funcional e estrutural do tecido. Durante o período de reabilitação, existe uma crescente preocupação em modular estes processos a fim de prevenir complicações indesejáveis e favorecer a recuperação funcional do músculo lesado. A constatação terapêutica das aplicações do laser de baixa intensidade (LLLT- Low Level Laser Therapy) no tratamento clínico de afecções que acometem o tecido músculo esquelético é atualmente bastante conhecida, contudo as vias de sinalização acionadas pela LLLT permanecem incertas. O objetivo desta tese foi avaliar os efeitos da terapia laser de baixa intensidade sobre a resposta inflamatória e regenerativa/cicatricial após criolesão do músculo tibial anterior em ratos. Foi utilizado um laser AsGaAl (contínuo; λ =808 nm; P=30 mW; área do feixe = 0.00785 cm2; t=47 s; D=180 J/cm2; E=1.4 J; irradiância=3.8 mW/cm2) em um único ponto, durante 4 dias consecutivos. Técnicas de histoquímica foram usadas para averiguar a morfologia e a morfometria dos músculos lesados e submetidos ao tratamento com laserterapia. Além disso, foram realizadas análises de peroxidação lipídica (TBARS), formação de nitrotirosina (Dot blot), produção de NO tecidual (Reação de Griess), citocinas inflamatórias (ELISA), expressão protéica de iNOS e colágeno I (western blot) e expressão gênica de myoD, miogenina, VEGF, NF-κβ, TGF-β, VEGF, COX-2 e SOD (qRT-PCR). A LLLT, nos parâmetros utilizados, foi capaz de reduzir a resposta inflamatória e o estresse oxidativo/nitrativo, favorecer a regeneração muscular e prevenir a fibrose muscular em modelo de criolesão. Os resultados desta tese trouxeram significativa contribuição para o entendimento dos mecanismos de ação acionados pela LLLT durante o processo de regeneração muscular, otimizando assim, sua utilização na reabilitação de desordens músculo-esqueléticas.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:02:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3965.pdf: 3863042 bytes, checksum: f995d87531cc46a186a0c566c0be57ea (MD5) Previous issue date: 2011-12-02 / This study aimed to evaluate the effects of low intensity laser therapy (LLLT) (830nm, 120J/cm2, 100mW) and implantation of Biosilicate® scaffolds, associated or not, in histological aspects, biomechanical properties of the bone callus and immunoexpression of proteins, growth and transcription factors related to different stages of bone repair, at 15, 30 and 45 days after surgery of bone defects induced in the tibia.of rats. For this, three studies were performed in which a total of one hundred and twenty male Wistar rats (3 months ± 280 g) were submitted to bilateral tibial defects and randomly distributed in four experimental groups with 30 animals each. In the first study the effects of the implantation of Biosilicate® scaffolds in bone defects of rats were investigated in two groups: bone defect group (GC) and bone defect treated with Biosilicate® scaffold group (GB). The implantation of the scaffold was performed subsequent to surgery of bone defect. Histological analysis revealed that animals of GB showed newly formed bone better organized at 30 and 45 days after surgery. The immunohistochemical analysis demonstrated that the Biosilicate® scaffold promoted a higher expression of COX-2 on days 15 and 30 after surgery, immunostaining positive of RUNX-2 in all periods, increased expression of RANKL on day 15 and positive immunoexpression of BMP-9 on the 45th day. However, the Biosilicate® scaffold did not increase the mechanical properties of bone callus. Thus, the implantation of Biosilicate® scaffold was effective in stimulating the repair of tibial defects, however, was not able to improve their mechanical properties. In the second study, the spatialtemporal changes in the process of bone healing in defects treated with LLLT were evaluated in two groups: GC and bone defect treated with laser group (GL). The laser treatment started immediately following the surgery of bone defects and have been 8, 15 or 23 sessions with an interval of 48 hours between them. The histological and morphometric analysis revealed that the GL showed better tissue organization at 15 and 30 days after surgery, and biggest area of newly formed bone at day 15. The immunohistochemistry showed that the LLLT promoted higher expression of COX-2 at day 15, immunostaining of RUNX-2 positive in all periods, higher immunoexpression of BMP-9 on day 30 and higher immunoreactivity of RANKL at day 15. However, the LLLT did not increase the biomechanical properties of bone callus. Thus, the LLLT improved the process of bone healing, but was unable to improve its biomechanical properties. In the third study the effects of the association of LLLT with implants of Biosilicate® scaffolds in bone healing were investigated in three experimental groups: GC, GB and Biosilicate® scaffold irradiated with laser group (GBL). The implantation of the scaffold was performed following the surgery of bone defect. The laser treatment started immediately after surgery and were performed 8, 15 or 23 sessions with an interval of 48 hours between them. At 15 days after surgery, the histological analysis revealed granulation tissue and newly formed bone juxtaposed to the surface of scaffolds in GB and GBL. Thirty days after injury, the GB and GBL had better organized newly formed bone compared to the CG. At day 45 was possible to observe granulation tissue in the defects of the GBL. In the GB, the peak of immunoexpression of COX-2 occurred on the 15th day and in the GBL, on the 30th day. The GB and GBL showed positive immunoexpression of BMP-9 up to 45th day after surgery, while RANKL immunoexpression was higher in the GBL at day 30. However, 30 and 45 days after injury, the animals of GB and GBL showed statistically lower values of maximum load compared to the CG. Thus, the association of the scaffold Biosilicate® with laser irradiation has osteogenic activity during the bone repair, however, the scaffold Biosilicate® associated or not with the laser irradiation is not effective to improve mechanical properties of the bone callus. Finally, we concluded that LLLT (λ = 830 nm, 120J/cm2) and implantation of Biosilicate® scaffolds, associated or not, were effective to stimulate the bone consolidation by improving the development of newly formed bone and activating immunoexpression of proteins, growth and transcription factors related to different stages of bone healing in tibial defects in rats. However, these therapeutic modalities associated or not, were unable to improve mechanical properties of the bone callus. / Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da terapia laser de baixa intensidade (LLLT) (830nm, 120J/cm2, 100mW) e do implante de scaffolds de Biosilicato®, associados ou não, nos aspectos histológicos, propriedades biomecânicas do calo ósseo e na imunoexpressão de proteínas, fatores de crescimento e de transcrição relacionados a diferentes etapas do reparo ósseo, ao 15º, 30º e 45º dia após a cirurgia de defeitos ósseos induzidos em tíbias de ratos. Cento e vinte ratos machos da linhagem Wistar (3 meses de idade ± 280 gramas) foram submetidos a defeitos tibiais bilaterais e distribuídos aleatoriamente em 4 grupos experimentais com 30 animais cada. No primeiro estudo investigaram-se os efeitos do implante de scaffolds de Biosilicato® em defeitos ósseos de ratos, a partir de dois grupos experimentais: grupo defeito ósseo controle (GC) e grupo defeito ósseo tratado com scaffold de Biosilicato® (GB). O implante do scaffold foi realizado em seguida à cirurgia de defeito ósseo. A análise histológica revelou que os animais do GB apresentavam osso neoformado mais organizado ao 30º e 45º dia após a cirurgia. A imunoistoquímica demonstrou que o scaffold de Biosilicato® promoveu maior expressão de COX-2 nos dias 15 e 30 de após a cirurgia, imunoexpressão positiva de RUNX-2 em todos os períodos, maior expressão de RANKL no 15º dia e imunoexpressão positiva de BMP-9 no 45º dia. Porém, o scaffold de Biosilicato® não aumentou as propriedades mecânicas do calo ósseo. Assim, o implante de scaffold de Biosilicato® foi eficaz em estimular o reparo de defeitos tibiais, porém, não foi capaz de melhorar suas propriedades mecânicas. No segundo estudo, foram avaliadas as mudanças temporais-espaciais no processo de reparo ósseo em defeitos tratados com LLLT, a partir de dois grupos experimentais: GC e grupo defeito ósseo tratado com laser (GL). O tratamento com laser iniciou-se imediatamente após a cirurgia dos defeitos ósseos e realizaram-se 8, 15 ou 23 sessões, com um intervalo de 48h entre elas. As análises histológica e morfométrica revelaram que o GL apresentou melhor organização tecidual aos 15º e 30º dias após a cirurgia, e maior área de osso neoformado no 15º dia. A imunoistoquímica mostrou que a LLLT promoveu maior expressão de COX-2 no 15º dia, imunoexpressão positiva de RUNX-2 em todos os períodos avaliados, maior imunoexpressão de BMP-9 no 30º dia e maior imunorreatividade do RANKL no 15º dia. Porém, a LLLT não aumentou as propriedades biomecânicas do calo ósseo. Assim, a LLLT melhorou o processo de consolidação óssea, mas não foi capaz de melhorar suas propriedades biomecânicas. O terceiro estudo investigou os efeitos da associação da LLLT com implantes de scaffolds de Biosilicato® na consolidação óssea, a partir de três grupos experimentais: GC, GB e grupo scaffold de Biosilicato® irradiado com laser (GBL). O implante do scaffold foi realizado em seguida à cirurgia de defeito ósseo. O tratamento com laser iniciou-se imediatamente após a cirurgia e foram realizadas 8, 15 ou 23 sessões, com um intervalo de 48h entre elas. Ao 15º dia pós-lesão a análise histológica revelou tecido de granulação e osso neoformado justapostos à superfície dos scaffolds no GB e GBL. Trinta dias após a lesão, o GB e GBL apresentavam osso neoformado mais organizado em comparação ao GC. Ao 45º dia, foi possível observar tecido de granulação nos defeitos do GBL. No GB, o pico de imunoexpressão da COX-2 ocorreu no 15º dia e no GBL, no 30º dia. Os GB e GBL apresentaram imunoexpressão positiva da BMP-9 até o 45º dia após a cirurgia, enquanto que para o RANKL, a imunoexpressão foi maior no GBL no 30º dia. No entanto, 30 e 45 dias após a lesão, os animais dos GB e GBL apresentaram valores estatísticamente menores de carga máxima em comparação ao GC. Assim, a associação do scaffold de Biosilicato® com o laser exerce atividade osteogênica durante o reparo ósseo, no entanto, o scaffold de Biosilicato® associado ou não a irradiação laser não é eficaz em melhorar as propriedades mecânicas do calo ósseo. Finalmente, podemos concluir que a LLLT e o implante de scaffolds de Biosilicato®, associados ou não, foram eficazes em estimular a consolidação óssea, melhorando o desenvolvimento de osso neoformado e ativando a imunoexpressão de proteínas, fatores de crescimento e de transcrição relacionados a diferentes etapas do reparo ósseo em defeitos tibiais em ratos. No entanto, estas modalidades terapêuticas, associadas ou não, não foram capazes de melhorar as propriedades mecânicas do calo ósseo em ensaio de flexão na posição de tração.

Made available in DSpace on 2015-03-03T15:38:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AguidaCGH_TESE_1-57.pdf: 2629224 bytes, checksum: 19fff6c5e19163ae1d9d46fdf2e5f708 (MD5) Previous issue date: 2012-10-09 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The low level laser therapy (LLLT) has shown to be effective in promoting the proliferation of different cells in vitro, including keratinocytes, osteoblasts, endothelial cells and stem cells. It has been speculated that the biostimulatory effect of LLLT could cause undesirable enhancement of tumor growth in neoplastic diseases, since the malignant cells are more susceptible to proliferative stimuli. Within this context, this study evaluated the effect of LLLT on epidermoid carcinoma of the tongue cell line (SCC25) proliferation and invasion. Cultured cells were irradiated with an InGaAIP diode laser, 660nm, 30mW using two energy densities (0.5J/cm2 and 1.0J/cm2). Proliferative activity was assessed through trypan blue staining method and through cell cycle analysis using flow cytometry. The invasive potential was measured through cell invasion assay using matrigel. Cyclin D1, E-cadherin, -catenin and MMP-9 expressions were analyzed by immunofluorescence and flow cytometry and related to the investigated biological activities. Proliferation curve demonstrated that SCC25 irradiated with 1.0J/cm2 had the highest proliferative rate when compared to the control group and the group irradiated with 0.5J/cm2 (p<0.05). LLLT affected cell cycle distribution and energy density of 1.0 J/cm2 promoted a higher percentage of cells in S/G2/M phases, with statistically significant differences at 24h interval (p<0.05). LLLT, mainly with 1.0J/cm2, revealed significantly higher potential for invasion and influenced the expression of cyclin D1, E-cadherin, -catenin and MMP-9, promoting the malignant phenotype. In conclusion, our results indicate that LLLT has an important stimulatory effect on proliferation and invasion of SCC25 cells, likely due to altered expression of proteins associated with these processes / O aumento da prolifera??o celular ap?s utiliza??o do laser de baixa pot?ncia (LBP) tem sido observado em muitos tipos de c?lulas in vitro, incluindo ceratin?citos, fibroblastos, osteoblastos, c?lulas endotelias e c?lulas-tronco. Tem sido especulado que o crescimento de c?lulas malignas tamb?m pode ser estimulado pela irradia??o laser, uma vez que estas c?lulas s?o mais suscept?veis aos est?mulos proliferativos. Assim, em pacientes portadores de c?nceres de cabe?a e pesco?o, as c?lulas tumorais podem estar presentes no campo de irradia??o ou pr?ximas a ele, sendo a laserterapia n?o intencional um fator estimulante da progress?o tumoral. Neste contexto, este estudo avaliou o efeito do LBP sobre o potencial de prolifera??o e invas?o de uma linhagem celular derivada do carcinoma epiderm?ide de l?ngua (SCC25). As c?lulas cultivadas foram irradiadas com um laser diodo (InGaAlP) com 30mW, 660nm e doses de 0.5 e 1.0J/cm2. A atividade proliferativa foi investigada atrav?s da curva de prolifera??o utilizando o m?todo de colora??o por azul de tripan e an?lise do ciclo celular atrav?s da marca??o por iodeto de prop?dio em citometria de fluxo. O potencial invasivo das c?lulas SCC25 foi verificado atrav?s da realiza??o de um ensaio de invas?o celular utilizando o matrigel. A an?lise da express?o da ciclina D1, E-caderina, -catenina e MMP-9, atrav?s da imunofluoresc?ncia e citometria de fluxo, foi relacionada ?s altera??es nas atividades biol?gicas estudadas. A curva de prolifera??o revelou maior crescimento das c?lulas irradiadas com dose de 1.0 J/cm2 (p<0.05). O LBP influenciou a distribui??o do ciclo celular, com destaque para a dose de 1.0J/cm2, a qual favoreceu a maior porcentagem de c?lulas na fase S/G2/M com diferen?a estatisticamente significativa no intervalo de 24 horas (p<0,05). O LBP, principalmente com dose de 1.0J/cm2, promoveu maior invas?o das c?lulas estudadas e foi capaz de influenciar a express?o da ciclina D1, -catenina, E-caderina e MMP-9, favorecendo o fen?tipo maligno. Dessa forma, nossos resultados indicam que a laserterapia teve um importante efeito estimulat?rio nas atividades de prolifera??o e invas?o das c?lulas SCC25, provavelmente por influenciar a express?o de prote?nas que possuem papel importante nestes processos.

A sintomatologia dolorosa é um dos principais estímulos capaz de caracterizar ações nocivas e, portanto, é um importante mecanismo de defesa. No estudo da dor orofacial, as alterações musculoesqueléticas de cabeça, pescoço e face caracterizam um grupo de sintomatologia dolorosa, denominadas de Disfunções Temporomandibulares (DTMs). As DTMs possuem etiologia multifatorial, incluindo alterações estruturais, sensoriais e influências emocionais-motivacionais, atingindo cada vez mais indivíduos na sociedade atual. Para o tratamento desta patologia é necessário o conhecimento detalhado dos mecanismos moleculares e fisiológicos envolvidos, os quais têm sido objetivo de alguns pesquisadores nos últimos anos. Entretanto, ainda se faz necessário a continuidade deste estudo para caracterização minuciosa das DTMs, com novas possibilidades de intervenção e tratamento da sintomatologia dolorosa. Como principais fatores associados à DTM, a inflamação e as alterações estruturais e moleculares da articulação temporomandibular (ATM) desempenham importante papel nesta patologia. Ainda, sabe-se que a dor, em particular a dor inflamatória, promove a ativação de mecanismos locais e sistêmicos, os quais liberam mensageiros fundamentais para a modulação da resposta do organismo, como proteínas e citocinas inflamatórias gerando a inflamação propriamente dita. Segundo a literatura, durante o estabelecimento da resposta inflamatória, muitas proteínas, principalmente as denominadas, metaloproteinases da matriz extracelular (MMPs), são responsáveis pela reabsorção de colágeno, e de outras macromoléculas estão intimamente envolvidas neste processo. Além disso, as MMPs também participam da reorganização no sistema nervoso que ocorre juntamente com os processos inflamatórios persistentes. Desde meados da década de 90, tem sido utilizado com considerável sucesso a laserterapia de baixa intensidade para o tratamento das DTMs na clínica odontológica. Dentro desta perspectiva, estudos demonstraram que este método de tratamento possui atividade antiinflamatória e colaboram no reparo tecidual. Estudo recente demonstrou que o desenvolvimento da inflamação bilateral das ATMs promoveu alteração das MMPs no gânglio trigeminal, bem como desencadeou um processo de alodinia mecânica e hiperalgesia orofacial. Desta forma, o presente projeto teve como objetivo, verificar se o uso da laserterapia de baixa intensidade (LLLT) altera a expressão das MMPs no gânglio trigeminal, nas diferentes fases de desenvolvimento da inflamação intraarticular, (1, 3, 5, 7 e 10 dias) bem como na alodinia mecânica e da hiperalgesia orofacial em ratos. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que a LLLT em ratos inflamação persistente das ATMs, induzida por administração de Adjuvante Completo de Freund, reduziu a alodinia mecânica, avaliada pelo teste de von Frey, bem como a hiperalgesia orofacial no teste da formalina. Adicionalmente, observou-se redução do aumento da MMP-9 e da MMP-2, nos ratos tratados com LLLT. / Painful symptoms is one of the main stimuli that characterizing threatening situation and represent an important defense mechanism. In the study of orofacial pain, musculoskeletal abnormalities of the head, neck and face featuring a group of painful symptoms, which are known as Temporomandibular Disorders (TMD). The TMDs have a multifactorial etiology, including structural changes, sensory and emotional-motivational influences. For the treatment of this pathology is necessary detailed knowledge of the physiological and molecular mechanisms involved, which have been the goal of several researchers in the last few years. However, it is still necessary to continue this study for detailed characterization of TMDs, with new possibilities for intervention and treatment of painful symptom. It is noteworthy that inflammation, as well as molecular and structural changes of the temporomandibular joint (TMJ) play an important role in TMD. Also, it is known that pain, particularly inflammatory pain, promotes the activation of local and systemic mechanisms which release essential mediators, such as proteins and inflammatory cytokines generating inflammation itself. Furthermore, during the establishment of the inflammatory response, many proteins, in particular, the extracelular matrix metalloproteinases (MMPs) are responsible for the resorption of collagen and other macromolecules. Moreover, MMPs also participate in the reorganization that occurs in the nervous system during persistent inflammatory processes. Since the 90s, has been used with considerable success to low intensity laser therapy for the TMD treatment in clinical dentistry. In addtion, studies have shown that this therapy has antiinflammatory activity and collaborate in tissue repair. A recent study has demonstrated that the development of bilateral inflammation of TMJs promote alteration of MMPs expression in the trigeminal ganglion, and triggered a process of orofacial mechanical allodynia and hyperalgesia. Thus, this study aimed to determine whether the use of low intensity laser therapy (LLLT) alters the expression and activity of MMPs in the trigeminal ganglion, at different stages of development of intraarticular inflammation (1,3, 5, 7 and 10 days), as well as mechanical allodynia and hyperalgesia orofacial in rats. So, the results showed that LLLT, reduced mechanical allodynia (as measured by the von Frey test), and orofacial hyperalgesia (formalin test) in rats submmitted to persistent inflammation of TMJs induced by administration of Freund\'s Complete Adjuvant (CFA). Additionally, whereas CFA administration induced an increase of MMP-9 and MMP-2 expression in the trigeminal ganglion, LLLT reduce these effects.

A laserterapia tem sido muito utilizada como tratamento alternativo em pacientes com dores crônicas relacionadas às disfunções temporomandibulares. Isso se deve aos efeitos: analgésico, antiinflamatório, miorrelaxante, de redução da fadiga durante as contrações tetânicas, aumento da força de mordida e diminuição da dor orofacial. Embora sejam observados resultados clínicos, ainda não é bem compreendido o seu efeito em nível celular. Assim, este estudo tem como objetivo analisar os efeitos das diferentes densidades (doses) de irradiação do laser de baixa intensidade (LLLI), em nível celular, sobre o músculo masseter de ratos Wistar. Os animais foram alocados aleatoriamente em 6 grupos (n=10), receberam 10 irradiações do laser (GaAlAs,780nm, 5mW e spot 0,04cm&sup2;) sobre o músculo masseter esquerdo variando a densidade de energia (I. 0; II. 0,5; III. 1,0; IV. 2,5; V. 5,0 e VI. 20 J/cm&sup2;). Após as 10 irradiações os músculos masseteres foram obtidos dos animais sob anestesia para análises: 1. Histoenzimológicas para atividade da nicotinamida adenina dinucleotídeo diaforase(NADH), succinato desidrogenase (SDH) e adenosina trifosfatase (ATPase), 2. Microscopia de luz (HE), 3. Microscopia eletrônica de transmissão e 4. Imunohistoquímica para fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e o receptor 2 para VEGF (VEGFR-2). A atividade do NADH nos grupos IV, V e VI (30±1,26; 33,47±2,15; 31,67±1,77 - fibras intermediárias) apresentou um aumento significativo (p>0,05) no metabolismo oxidativo em relação aos demais grupos. Na atividade do SDH, o aumento foi discreto, com aumento significativo (p>0,05), apenas no grupo V (32,2±1,61 fibras intermediárias), com o padrão de aumento metabólico muito parecido nas reações de NADH e SDH. A atividade da ATPase não revelou diferenças entre os grupos tanto em meio ácido como no alcalino. A microscopia de luz revelou fibras musculares arredondadas e núcleos periféricos achatados, os quais tornaram mais arredondados com as densidades maiores de energia. Ultraestruturalmente as irradiações com as maiores densidades de energia revelaram mitocôndrias de tamanhos e formas variadas e cisternas do retículo sarcoplasmático dilatadas entre as miofibrilas. As análises qualitativas mostraram um padrão de aumento a expressão do VEGF e VEGFR-2 proporcionais à densidade de energia do laser usada. Conclui-se que o laser com densidades maiores foi capaz de aumentar o metabolismo oxidativo, sem alterar a capacidade contrátil, aumentar o volume do núcleo, modificar a ultraestrutura das fibras musculares e as expressões do VEGF e VEGFR-2. / The laser therapy has been widely used as an alternative treatment in patients with chronic pain related to temporomandibular disorders. This is due to the effects: analgesic, anti inflammatory, muscle relaxant, reducing fatigue during tetanic contractions, increased bite strength and decrease in orofacial pain. Although clinical results are observed, is not well understood its effect on the cellular level. This study aims to analyze the effects of different densities (doses) irradiation of low level laser therapy (LLLI) on cellular level, on the masseter muscle of rats. The animals were randomly assigned to 6 groups (n=10), received 10 laser irradiation (GaAlAs, 780nm, 5mW spot and 0.04 cm&sup2;) on the left masseter muscle by varying the energy density (I. 0; II. 0.5; III. 1.0; IV. 2.5; V. 5.0 and VI. 20 J/cm&sup2;). After 10 irradiations the masseter muscles were obtained from animals under anesthesia for analysis: 1. Histoenzimologic for nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), succinate dehydrogenase (SDH) and adenosine triphosphatase (ATPase), 2. Light microscopy (HE), 3. Transmission electron microscopy and 4. Immunohistochemistry for vascular endothelial growth factor (VEGF) and receptor 2 for VEGF (VEGFR-2). The activity of NADH in groups IV, V and VI (30±1,26; 33,47±2,15; 31,67±1,77 - intermediate fiber) increased significantly (p> 0.05) in oxidative metabolism in relation to other groups. The activity of SDH showed a slight increase, only the group V (32,2±1,61 intermediate fiber) increased significantly (p> 0.05), but the pattern of metabolic increase was very similar in both reactions. The ATPase activity showed no differences between groups nor in acid or alkaline. The qualitative analysis showed a pattern of increased expression of VEGF and VEGFR-2 directly proportional to the energy density of laser. Light microscopy showed rounded muscle fibers and peripheral flattened nuclei, which become more rounded with the highest energy densities. Ultrastructurally the irradiation with higher energy densities showed mitochondria of different sizes and shapes and dilated cisterns of sarcoplasmic reticulum between the myofibrils. It is concluded that higher densities of laser was able to increase the oxidative metabolism without altering the contractile capacity, increasing nuclei volume, modify ultrastructure of muscle fibers and the expressions of VEGF and VEGFR-2.

A técnica de laserterapia é um método não-invasivo que demonstra clinicamente ser eficaz na redução da sensibilidade à dor. O presente estudo visou examinar os efeitos da aplicação do LASER sobre a sensibilidade dolorosa induzida pela constrição crônica do nervo isquiático (CCI) de ratos. Os animais foram submetidos a ensaios comportamentais e a dez sessões de laserterapia. Observamos melhora para os testes comportamentais o que corrobora com os ensaios de imunoblotting no gânglio da raiz dorsal, onde observamos uma diminuição de Substância P no grupo de animais tratados com LASER. Com relação aos ensaios imunoenzimático de ELISA, observamos diminuição de citocinas pró-inflamatória e uma tendência ao aumento de citocina anti-inflamatória. Não observamos diferença estatística na análise dos receptores opióides MOR , DOR e KOR . Podemos concluir que o LASER é eficaz e age na modulação da dor neuropática. / The technique of laser therapy is a not invasive method that demonstrates clinically to be effective in reducing sensitivity to pain. This study aimed to examine the effects of application of LASER on pain sensitivity induced by chronic constriction of the sciatic nerve (CCI) in rats. The animals were subjected to behavioral tests and the ten sessions of laser therapy. We observed and improvement for behavioral tests which corroborates with immunoblotting assays in the dorsal root ganglion, where we observes a decrease of substance P in the group of animals treated with LASER. Regarding immunoenzymatic ELISA assay, we observed a decrease of pro-inflammatory cytokines and a possible increase in anti-inflammatory cytokine. No statistical difference in the analysis of opioid receptor MOR, DOR and KOR.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-01-12T13:26:08Z No. of bitstreams: 1 thaisabranchesbuenosabinobertges.pdf: 1644405 bytes, checksum: 3b8373f3de0b6d396b5af331c1897b4a (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-01-25T17:14:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thaisabranchesbuenosabinobertges.pdf: 1644405 bytes, checksum: 3b8373f3de0b6d396b5af331c1897b4a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T17:14:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thaisabranchesbuenosabinobertges.pdf: 1644405 bytes, checksum: 3b8373f3de0b6d396b5af331c1897b4a (MD5) Previous issue date: 2015-09-14 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A cicatrização é um evento complexo que tem por objetivo restaurar a integridade anatômica, histológica e funcional de um tecido que sofreu lesão por diferentes etiologias. O potencial de modulação do sistema imunológico e das reações inflamatórias locais, por técnicas não invasivas, é alvo de diversos trabalhos e apesar de tal efeito modulador já ser comprovado clinicamente e corroborado por estudos histomorfológicos, os mecanismos celular e molecular de ação local e sistêmica das principais terapias adjuvantes disponíveis, a laserterapia de baixa intensidade e o ultrassom terapêutico, ainda não estão totalmente esclarecidas. O objetivo do presente estudo foi comparar os efeitos da terapia a laser de baixa intensidade e do ultrassom terapêutico, isolados e associados no processo de reparo tecidual, de feridas cutâneas cirúrgicas em ratos Wistar, com pesquisa da produção in situ de TGF-β1, TGF-β2 e IL-17 por imuno-histoquímica, além de avaliar, por histomorfometria, a deposição de matriz colagenosa na área em cicatrização por estudo retrospectivo em material emblocado em parafina (n = 24), cujas amostras foram divididas em: um grupo controle (GI), um submetido apenas à laserterapia (GII), um submetido apenas ao ultrassom (GIII) e um submetido às duas terapias associadas (GIV). Os dados foram expressos em média e desvio padrão, sendo considerado p < 0,05 para indicar resultados estatisticamente significantes. A expressão de TGF-β1 foi significativa quando as amostras de GIV foram comparadas com GII e GIII. Em relação a IL-17, as amostras de GI e de GII apresentaram maior porcentagem de células coradas, e a diferença foi significativa entre GII e GIII, e entre GII e GIV. / Wound healing is a complex event that aims to restore anatomical, histological and functional integrity of a tissue injury suffered by different etiologies. The potential modulation of the immune system and local inflammatory reactions by noninvasive techniques is the subject of several studies and although such modulating effect already being clinically proven and confirmed by histopathologic studies, the cellular and molecular mechanisms of local and systemic actions of main adjuvant therapies available, the low level laser therapy and ultrasonic energy, are still unclear. The aim of this study was to compare the effects of laser therapy of low intensity and the therapeutic ultrasound, isolated and associates in the tissue repair process in surgical wounds in Wistar rats, with research in situ production of TGF-β1, TGF-β2 and IL-17 by immunohistochemistry, and to evaluate by histomorphometry, the deposition of collagenous matrix in the area in healing by retrospective study in emblocado material paraffin (n = 24), the samples were divided into: a control group (GI) one subject only to laser therapy (GII), a submitted only to the ultrasound (GIII) and submitted to the two associated therapies (GIV). Data were expressed as mean and standard deviation, being considered p < 0.05 to indicate a statistically significant results. The TGF-β1 expression was significant when samples of GIV were compared with GII and GIII. With regard to IL-17, samples of GI and GII had a higher percentage of stained cells, and the difference was significant between GII and GIII, and between GII and GIV.

Laser application in the field of biological and medical sciences has significantly grown, thereby strengthening the field of Biophotonics. Research conducted in Biophotonics focuses on the concept of using light especially in the visible and near infrared regions of the electromagnetic radiation for the evaluation of living systems. In this thesis new discoveries are presented about low level laser therapy, optical trapping, transmission spectroscopy, luminescence spectroscopy and structured illumination microscopy (SIM), displaying the impact each technique has on HIV infected cells. The results showed that the irradiation of HIV-1 infected TZM-bl cells with low power red laser reduces HIV-1 infection. The outcomes of this study further proved that when irradiation is used in conjunction with efavirenz, an antiretroviral drug, HIV-1 infection could be reduced to undetectable levels in TZM-bl cells. Through the coupling of transmission spectroscopy with optical trapping, and separately, use of luminescence spectroscopy, label free diagnosis of HIV in infected cell samples was achieved. This finding affirms that HIV-1 infection can be detected in a label free manner when using laser based techniques. Furthermore, the photoluminescence spectrometer system was employed to generate a decay curve, which was necessary so as to have some understanding on lifetime of the luminescent signal in infected TZM-bl cells. Finally, in order to confirm that indeed TZM-bl cells were infected, an established super-resolution microscopy system SIM was used to detect HIV-1 infection in TZM-bl cells. Indeed in the infected cells viral molecules p24 and gp41 were detected through SIM, while they were not detected in uninfected cells. In future studies, super resolution microscopy would be coupled to an optical trapping system in order to confirm that each trapped cells is whether infected or uninfected so as to improve HIV diagnosis. / College of Science, Engineering and Technology / Ph. D. (Science, Engineering and Technology)