The present study aimed to examine the effects of root colonization in tomato, Solanum lycopersicum L. cv. Moneymaker, by the arbuscular mycorrhizal (AM) fungus, Glomus intraradices Shenck and Smith, on alleviating salt stress. I postulated that AM symbiosis increases tomato plant performance to salt stress. Two greenhouse experiments were done according to a randomized factorial experimental design. The results showed a significantly higher level of AM root colonization that also occurred earlier in salt than non-salt treated plants. There were also positive interactions between root colonization levels and the alleviation of salt stress; these contributions resulted initially on higher root fresh mass (FM), later on shoot FM, and DM, and higher phosphorus and unchanged potassium concentrations in roots. The effects observed in salt-treated plants were significant when root colonization levels were significantly different than those observed in non-salt treated plants. This suggests a relationship between the level of root colonization and the alleviation of salt stress in plants. The attempt to use molecular techniques to detect early root colonization was quite successful in detecting the presence of G. intraradices in AM plants. However, it was not possible to detect the presence of the AM fungus as early as by classical root staining. This was observed presumably because sampling methods were different. In general, the results support the hypothesis that AM root colonization contributes to some extent to salt resistance of tomato plants.

The present study aimed to examine the effects of root colonization in tomato, Solanum lycopersicum L. cv. Moneymaker, by the arbuscular mycorrhizal (AM) fungus, Glomus intraradices Shenck and Smith, on alleviating salt stress. I postulated that AM symbiosis increases tomato plant performance to salt stress. Two greenhouse experiments were done according to a randomized factorial experimental design. The results showed a significantly higher level of AM root colonization that also occurred earlier in salt than non-salt treated plants. There were also positive interactions between root colonization levels and the alleviation of salt stress; these contributions resulted initially on higher root fresh mass (FM), later on shoot FM, and DM, and higher phosphorus and unchanged potassium concentrations in roots. The effects observed in salt-treated plants were significant when root colonization levels were significantly different than those observed in non-salt treated plants. This suggests a relationship between the level of root colonization and the alleviation of salt stress in plants. The attempt to use molecular techniques to detect early root colonization was quite successful in detecting the presence of G. intraradices in AM plants. However, it was not possible to detect the presence of the AM fungus as early as by classical root staining. This was observed presumably because sampling methods were different. In general, the results support the hypothesis that AM root colonization contributes to some extent to salt resistance of tomato plants.

Submitted by LEYSIMAR RIBEIRO PITZR GUIMARÃES null (leysimarpitzr@yahoo.com.br) on 2016-02-22T23:20:46Z No. of bitstreams: 1 INDUÇÃO DE RESISTÊNCIA A Tomato severe rugose virus E Tomato chlorosis virus EM TOMATEIRO DETERMINADO.pdf: 1461974 bytes, checksum: b14361aa399e745bf4f86148a2d83cde (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-23T16:32:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 guimares_lrp_dr_bot.pdf: 1461974 bytes, checksum: b14361aa399e745bf4f86148a2d83cde (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-23T16:32:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 guimares_lrp_dr_bot.pdf: 1461974 bytes, checksum: b14361aa399e745bf4f86148a2d83cde (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Uma das principais causas da perda de produção do tomateiro ocorre devido à infecção precoce das plantas por vírus dos quais podemos destacar as espécies Tomato severe rugose virus (ToSRV) e Tomato chlorosis virus (ToCV). O controle de vírus é muito difícil, e diversas táticas podem ser utilizadas pelo produtor, dos quais podemos citar o uso de produtos químicos que causam efeitos fisiológicos secundários. Nesta linha o presente trabalho avaliou o efeito da aplicação de Piraclostrobina+Metiran (Cabrio Top®) na produção e qualidade de frutos de tomate em plantas infectadas por ToSRV e ToCV, em diferentes fases fenológicas do ciclo da cultura. O ToSRV também foi quantificado por qPCR nestas plantas. Dois experimentos foram realizados paralelamente, onde um recebeu um pré-tratamento pela aplicação de Piraclostrobina+Metiram (P+M) (3 g. l -1) (BASF) ® + Boscalida (0,3 g. l -1) (BASF) ® na bandeja após a semeadura e no outro as mudas de tomateiro não receberam nenhum produto. Os tratamentos foram constituídos da inoculação do vírus por Bemisia tabaci biótipo B aos 15, 30, 45, 60, 75 dias após o transplantio (DAT) com aplicação ou não de Piraclostrobina+Metiram (P + M) (4.0 g. l -1). O ToSRV foi detectado por RCA-PCR e qPCR e o ToCV por NESTED RT-PCR , além das caraterísticas de produção e qualidade de frutos terem sido avaliadas. Os resultados obtidos demonstraram que plantas infectadas após os 45 DAT são menos afetadas pela infecção de ToSRV e ToCV e a aplicação de P + M ao longo do ciclo da cultura trouxe benefícios ao tomateiro uma vez que características de produção e qualidade dos frutos foram menos afetadas. A replicação viral do ToSRV foi negativamente influenciada pela aplicação do P + M sugerindo um possível envolvimento de mecanismos de resistência da planta ao vírus induzidos pelo produto. / The early infection of plants by viruses such as the species of Tomato severe rugose virus (ToSRV) and Tomato chlorosis virus (ToCV) is one of the main causes of tomato yield loss. The virus control is very difficult and different approaches can be used by the growers against the viruses. The use of chemicals that cause secondary physiological effects is one example. Based on this information the present study evaluated the effect of applying Pyraclostrobin + Metiran (Cabrio Top®) on production and fruit quality of tomato plants infected by ToSRV and ToCV in different phenological phases of the crop cycle. The ToSRV was also quantified by qPCR in these plants. Two experiments were carried out in parallel, where one received a pretreatment by applying Pyraclostrobin + metiram (P + M) (3 g. L -1) (BASF) ® + Boscalida (0.3 g. L -1) (BASF ) ® in the tray after sowing and the other the tomato seedlings did not receive any product. The treatments consisted of virus inoculation by Bemisia tabaci biotype B at 15, 30, 45, 60, 75 days after transplanting (DAT) with application or not of Pyraclostrobin + Metiram (P + M) (4.0 g. L -1). The ToSRV was detected by RCA-PCR and qPCR and ToCV by NESTED RT-PCR. In addition fruit production and quality characteristics were also evaluated. The results indicated that infected plants after 45 DAT are less affected by the infection of ToSRV and ToCV and application of P + M during the crop cycle brought benefits to the tomato, because production and fruit quality characteristics were less affected. Viral replication in ToSRV was negatively influenced by the application of P + M suggesting a possible involvement of plant resistance mechanisms to the virus induced by the product.

The present study aimed to examine the effects of root colonization in tomato, Solanum lycopersicum L. cv. Moneymaker, by the arbuscular mycorrhizal (AM) fungus, Glomus intraradices Shenck and Smith, on alleviating salt stress. I postulated that AM symbiosis increases tomato plant performance to salt stress. Two greenhouse experiments were done according to a randomized factorial experimental design. The results showed a significantly higher level of AM root colonization that also occurred earlier in salt than non-salt treated plants. There were also positive interactions between root colonization levels and the alleviation of salt stress; these contributions resulted initially on higher root fresh mass (FM), later on shoot FM, and DM, and higher phosphorus and unchanged potassium concentrations in roots. The effects observed in salt-treated plants were significant when root colonization levels were significantly different than those observed in non-salt treated plants. This suggests a relationship between the level of root colonization and the alleviation of salt stress in plants. The attempt to use molecular techniques to detect early root colonization was quite successful in detecting the presence of G. intraradices in AM plants. However, it was not possible to detect the presence of the AM fungus as early as by classical root staining. This was observed presumably because sampling methods were different. In general, the results support the hypothesis that AM root colonization contributes to some extent to salt resistance of tomato plants.

Submitted by Jorge Cativo (jorge.cativo@inpa.gov.br) on 2018-08-23T14:38:12Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Matheus Miranda Caniato.pdf: 2877850 bytes, checksum: 9f5a34aab328acaeb1c5681aefacab65 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-23T14:38:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Matheus Miranda Caniato.pdf: 2877850 bytes, checksum: 9f5a34aab328acaeb1c5681aefacab65 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-01-30 / The use of rhizobacteria to increase crop productivity by promoting growth and management of the target spot through the induction of systemic resistance to plant diseases are shown as tool capable of allowing the expansion of tomato North region. Thus, the objectives of this work were to evaluate the influence of biochar in the population of cultivable soil bacteria, besides the root colonization capacity of bacterial isolates, growth promotion, phosphate solubilization, indole acetic acid production and induction of resistance to Corynespora almost. The influence of the isolates origin on the mentioned variables was also evaluated. As well as the identification of the bacterial isolates. The influence of the bio-carbon on the population of cultivable soil bacteria was carried out using the colony-forming unit counting methodology. Verification of root colonization was performed using techniques for visualizing turbidity zones in tubes with agar-water (0.8%), optical microscopy and root plating. Growth promotion and induction of resistance were evaluated in greenhouse and the experimental design adopted for both experiments was completely randomized and inoculation of the bacteria was performed by microbiolization. Identification was performed by sequencing the 16S rRNA gene. The results indicate that doses up to 34 t ha-1 positively influence the population of cultivable soil bacteria in the 0-10 cm layer. The three methods used to evaluate root colonization were efficient and complement each other in the interpretation of the results. The isolates ISO4T2, ISO22T3, ISO53T1, ISO17T3 and ISO113T1 promoted an increment in the confirmation test and present potential to be evaluated in the field in the future. Isolates 7T1, 114T1 and 52T2 induced partial resistance against C. cassiicola and present potential to be evaluated under field conditions. The origin of the isolates has influence on the ability to colonize the root system of tomato plants and solubilize phosphate, but does not affect the other variables. The partial sequencing of the 16S rRNA gene allowed the identification of 23 isolates at the genus and group level, but not in species. / A inoculação de rizobactérias visando o aumento da produtividade das culturas, por meio da promoção de crescimento e o manejo da mancha alvo por meio da indução de resistência sistêmica a doenças em plantas, mostram-se como ferramentas capazes de permitirem a expansão do cultivo de tomate na Região Norte. Assim, os objetivos desse trabalho foram avaliar a influência do biocarvão sobre a população de bactérias cultiváveis do solo, além da capacidade de colonização radicular dos isolados bacterianos, promoção de crescimento, solubilização de fosfato, produção de ácido indól acético e indução de resistência a Corynespora casiicola. A influência da origem dos isolados sobre as variáveis mencionadas também foi avaliada. Assim como foi realizada a identificação dos isolados bacterianos. A influência do biocarvão sobre a população de bactérias cultiváveis do solo foi realizada por meio da metodologia de contagem de unidade formadora de colônias. A verificação da colonização radicular foi realizada por meio das técnicas de visualização de zonas de turbidez em tubos com ágar-água (0,8%), microscópia de luz e plaqueamento de raízes. A promoção de crescimento e a indução de resistência foram avaliadas em casa de vegetação e o delineamento experimental adotado para ambos os experimentos foi o inteiramente casualizado e a inoculação das bactérias foi realizada por microbiolização. A identificação foi realizada por meio do sequenciamento do gene 16S rRNA. Os resultados indicaram que doses até 34 t ha-1 influenciaram de forma positiva a população de bactérias cultiváveis do solo na camada de 0-10 cm. Os três métodos utilizados para avaliação da colonização radicular se mostraram eficientes e se complementaram na interpretação dos resultados. Os isolados ISO4T2, ISO22T3, ISO53T1, ISO17T3 e ISO113T1 promoveram incremento no teste de confirmação e apresentaram potencial para serem avaliados futuramente em campo. Os isolados, 7T1, 114T1 e 52T2 induziram resistência parcial a C. cassiicola e apresentaram potencial para serem avaliados em condição de campo. A origem dos isolados influenciou a capacidade de colonizar o sistema radicular de plântulas de tomateiro e de solubilizar fosfato. O sequenciamento parcial do gene 16S rRNA, permitiu identificar 23 isolados em nível de gênero e grupo, mas não em espécie.

Submitted by Inácio de Oliveira Lima Neto (inacio.neto@inpa.gov.br) on 2018-08-23T18:02:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final PDF.pdf: 14440240 bytes, checksum: 2af4bf3f84a50787393d47d1dd9daac4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-23T18:02:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Final PDF.pdf: 14440240 bytes, checksum: 2af4bf3f84a50787393d47d1dd9daac4 (MD5) Previous issue date: 2018-07-31 / The bacterial wilt, caused by Ralstonia solanacearum, is one of the major diseases that affect Tomato cultivation in tropical climates, limiting production. The present work had as objective to evaluate the potential of solanaceous species as rootstock in commercial tomato, on agronomic characteristics, fruit quality and control of bacterial wilt. The experiment was conducted in a greenhouse, in a randomized complete block design, with four blocks, and six treatments, being the rootstocks: Cubiu (Solanum sessiliflorum); two cultivars of Jiló (Solanum aethiopicum), long pale green and large hill; Jurubebão (Solanum lycocarpum) and Jurubeba Juna (Solanum stramonifolium), grafted with the cultivar Santa Cruz Kada, susceptible to the disease. The glue index, plant height and number of leaves at 15 days after grafting, stem diameter, graft stem diameter and graft point diameter at 30, 60 , 90 and 120 days after transplanting. The fruits were collected regularly for the evaluation of the total number of fruits, number of marketable fruits, number of scrap fruits, average mass of marketable fruits and scrap, vertical diameter and horizontal diameter, yield of marketable fruits, . Fruit quality was measured by the analysis of total soluble solids, pulp pH, titratable acidity and soluble solids ratio and titratable acidity. The incidence of the disease was evaluated weekly after the first wilting plant was investigated. Morphological and histological observations of the healing callus of the evaluated treatments were performed. All evaluated rootstocks presented glue index ≥ 93.33%, indicating that there was no initial incompatibility between the combinations evaluated. The number of commercial fruits differed significantly in the rootstocks, which were long, light green and covered, being the treatment with lower total number of fruits and number of commercial fruits among the evaluated treatments. Cubiu presented the lowest values of commercial fruit production and productivity in relation to treatments, except for the jurubeba juna in which it did not differ. There was no incidence of bacterial wilt in the long-green jiló and jurubeba juna rootstocks, which conferred disease resistance on the grafted plants. The histological sections showed incompatibility characteristics of the tomato evaluated with the cubiu, jurubebão and jurubeba juna rootstocks. The rootstocks, long jiló light green and jurubeba juna presented high index of adhesion, resistance to bacterial wilt, and productivity statistically equal to the control in the conditions of the present work, so that they have great potential for use as rootstocks in the crop of the tomato. Key-words: Solanaceae, Ralstonia solanacearum, Solanum lycopersicum, Resistance. / A murcha-bacteriana, causada por Ralstonia solanacearum, é uma das principais doenças que acometem o cultivo do Tomateiro em climas tropicais, limitando a produção. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a potencialidade de espécies de solanáceas como porta-enxerto em tomate comercial, sobre características agronômicas, qualidade dos frutos e no controle da murcha bacteriana. O experimento foi conduzido em casa de vegetação, em delineamento experimental em blocos ao acaso, com quatro blocos, e seis tratamentos sendo eles os porta-enxertos: Cubiu (Solanum sessiliflorum); duas cultivares de Jiló (Solanum aethiopicum), a comprido verde claro e a morro grande; Jurubebão (Solanum lycocarpum) e Jurubeba Juna (Solanum stramonifolium), enxertados com o tomateiro cultivar Santa Cruz Kada, susceptível à doença. Foram avaliados o índice de pegamento, a altura da planta e o número de folhas aos 15 dias após a enxertia, e o diâmetro do caule do porta-enxerto, o diâmetro do caule do enxerto e o diâmetro do ponto de enxertia aos 30, 60, 90 e 120 dias após o transplantio. Os frutos foram colhidos regularmente para a avaliação do número total de frutos, número de frutos comerciáveis, número de frutos refugo, massa média dos frutos comerciáveis e refugo, diâmetro vertical e diâmetro horizontal, produção de frutos comerciáveis, produção de frutos refugo, e produtividade. A qualidade dos frutos foi mensurada pela análise de sólidos solúveis totais, pH da polpa, acidez titulável e relação entre sólidos solúveis e acidez titulável. A incidência da doença foi avaliada semanalmente após a averiguação da primeira planta murcha. Observações morfológicas e histológicas do calo cicatricial dos tratamentos avaliados foram realizadas. Todos os porta-enxertos avaliados apresentaram índice de pegamento ≥ 93,33%, indicando não haver incompatibilidade inicial entre as combinações avaliadas. O número de frutos comerciais diferiu significativamente nos porta-enxertos jiló comprido verde claro e cubiu, sendo este o tratamento com menor número total de frutos e número de frutos comerciais dentre os tratamentos avaliados. O cubiu apresentou os menores valores de produção de frutos comerciais e produtividade em relação aos tratamentos, com exceção da jurubeba juna em que não diferiu. Não houve incidência da murcha-bacteriana nos porta-enxertos jiló comprido verde claro e jurubeba juna, que conferiram resistência a doença nas plantas neles enxertadas. Os cortes histológicos evidenciaram características de incompatibilidade do tomateiro avaliado com os portaenxertos cubiu, jurubebão e jurubeba juna. Os porta-enxertos jiló comprido verde claro e jurubeba juna apresentaram alto índice de pegamento, resistência à murcha-bacteriana, e produtividade estatisticamente igual à testemunha nas condições do presente trabalho, de forma que possuem grande potencial para o uso como porta-enxertos na cultura do tomate. Palavras-chave: Solanaceae, Ralstonia solanacearum, Solanum lycopersicum, Resistência.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2018-08-22T19:15:30Z No. of bitstreams: 1 2013 - Evandro Silva Pereira Costa.pdf: 2748177 bytes, checksum: 3632d387d4cb90bea88d42726fae79ca (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-22T19:15:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013 - Evandro Silva Pereira Costa.pdf: 2748177 bytes, checksum: 3632d387d4cb90bea88d42726fae79ca (MD5) Previous issue date: 2013-12-18 / CAPES / The present work had the objective to characterize 59 accessions of tomato of the cherry group regarding its agronomic characteristics and resistance to the late blight and to select those more adapted to the organic agriculture. As standards were used: Carolina, Perinha ?gua Branca, Pending Yashi, Joanna and the hybrids Super Sweet, Sweet Million and Mascot F1. The experiments were conducted under field conditions in the Horticulture Sector of the Federal Rural University of Rio de Janeiro (UFRRJ) from June 2010 to November 2013 during which eight trials were carried out. In the different trials, productivity, number of total fruits, disease progression, morphological characteristics (coloration, shape, number of locules), physical (longitudinal and equatorial diameter), and physicochemical characteristics of fruits (total soluble solids - TSS , titratable total acidity - TTA, pH, TSS / TTA ratio). It was also evaluated the accumulation of dry mass of the stem, leaves and fruits, content and content of nitrogen (N), potassium (K) and phosphorus (P) in the respective organs. It was observed a great genetic variability between the accessions as to the physical and physical-chemical morphological attributes. Promising accesses were selected for use in breeding programs and with great productive potential and potential for cultivation in organic systems. Among these, we highlight the ENAS 1040, ENAS 1037, ENAS 1031 and ENAS 1026 accessions for cultivation in the spring / summer period and the accesses ENAS 1228, ENAS 1214, ENAS 1227 and ENAS 1220 by the highest total soluble solids (?Brix). The accessions ENAS 1121, EAS 1013, ENAS 1143 and ENAS 1029 were distinguished by the production of fruits with differentiated formats and the accesses ENAS 1007, ENAS 1008, ENAS 1037, ENAS 1033, ENAS 1017, ENAS 1036, ENAS 1062 and ENAS 1029 by coloring of the fruits. The accessions ENAS 1227 and 1026 stood out by the partial resistance to the late blight, equivalent to the standards 'Carolina' and 'Perinha ?gua Branca'. The accessions ENAS 1227, ENAS 1216, ENAS 1153 and ENAS 1060 were the ones that stood out the most regarding the resistance to the late blight and productivity. / O presente trabalho teve como objetivo caracterizar 59 acessos de tomateiro do grupo cereja quanto ?s suas caracter?sticas agron?micas e resist?ncia ? requeima e selecionar aqueles mais adaptados ? agricultura org?nica. Como padr?es foram utilizadas: Carolina, Perinha ?gua Branca, Pendente Yashi, Joanna e os h?bridos Super Sweet, Sweet Million e Mascot F1. Os experimentos foram conduzidos em condi??es de campo, no Setor de Horticultura da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ) no per?odo de junho de 2010 a novembro de 2013 durante o qual realizaram-se oito ensaios. Nos diferentes ensaios, avaliaram-se produtividade, n?mero de frutos totais, progresso da requeima, caracter?sticas morfol?gicas (colora??o, formato, n?mero de l?culos), f?sicas (di?metro longitudinal e equatorial), e f?sico-qu?mica dos frutos (s?lidos sol?veis totais - SST, acidez total titulav?l - ATT, pH, rela??o SST/ATT). Avaliou-se, ainda, ac?mulo de massa seca do caule, folhas e frutos, teor e conte?do de nitrog?nio (N), pot?ssio (K) e f?sforo (P) nos respectivos ?rg?os. Observou-se grande variabilidade gen?tica entre os acessos quanto aos atributos morfol?gicos f?sicos e f?sico-qu?micos. Selecionaram-se acessos promissores para uso em programas de melhoramento e com grande potencial produtivo e com potencial para cultivo em sistemas org?nicos. Dentre estes, destacam-se os acessos ENAS 1040, ENAS 1037, ENAS 1031 e ENAS 1026 para cultivo no per?odo de primavera/ver?o e os acessos ENAS 1228, ENAS 1214, ENAS 1227 e ENAS 1220 pelos maiores teores de s?lidos sol?veis totais (?Brix). Os acessos ENAS 1121, EANAS 1013, ENAS 1143 e ENAS 1029 destacaram-se pela produ??o de frutos com formatos diferenciados e os acessos ENAS 1007, ENAS 1008, ENAS 1037, ENAS 1033, ENAS 1017, ENAS 1036, ENAS 1062 e ENAS 1029 pela colora??o dos frutos. Os acessos ENAS 1227 e 1026 destacaram-se pela resist?ncia parcial ? requeima, equivalente ? dos padr?es ?Carolina? e ?Perinha ?gua Branca?. Os acessos ENAS 1227, ENAS 1216, ENAS 1153 e ENAS 1060 foram os que mais se destacaram quanto a resist?ncia ? requeima e produtividade.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-31T16:43:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1571624 bytes, checksum: 532bd28b48be76bfcc011401faf8fee6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-31T16:43:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1571624 bytes, checksum: 532bd28b48be76bfcc011401faf8fee6 (MD5) Previous issue date: 2017-07-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O cultivo do tomateiro possui relevante importância sócio-econômica na agricultura brasileira. Mesmo diante deste cenário favorável, a tomaticultura é considerada uma atividade de elevado risco econômico e de grande complexidade agronômica. Dentre os principais problemas, destaca-se a requeima, causada pelo oomiceto Phytophthora infestans (Mont.) de Bary. O controle da doença é altamente dependente do uso de agrotóxicos, pois a maioria dos cultivares de tomateiro não são resistentes. Na tentativa de reverter esse quadro, a principal alternativa é a transferência de genes de resistência presentes em acessos de tomateiro conservados em Bancos de Germoplasma. Assim, após oito anos de pesquisas foi selecionado o acesso BGH-2127 (Solanum lycopersicum), como fontes de resistência a requeima, dentre os 870 acessos de tomateiro do Banco de Germoplama de Hortaliças da Universidade Federal de Viçosa (BGH-UFV). Pelo fato da resistência ser quantitativa, torna-se difícil a avaliação e seleção fenotípica de genótipos superiores, feita apenas no campo ou em associação com marcadores moleculares genéticos tipo QTL. Neste contexto, a metodologia da análise proteômica torna-se uma alternativa viável, pois pode fornecer importantes informações e ferramentas para maior entendimento das rotas metabólicas da interação planta-patógeno e assim auxiliar no desenvolvimento de futuras estratégias para o desenvolvimento de cultivares de tomateiro resistentes. Com o auxílio de ferramentas proteômica, os objetivos deste estudo foram: analisar possíveis diferenças entre os proteomas constitutivos de genótipos de tomateiro contrastantes quanto a resistência à requeima; e identificar proteínas frente a infecção do patógeno que possam explicar possíveis mecanismos moleculares de resistência do tomateiro a esta doença. Foram avaliados o acesso BGH-2127 e o cultivar Santa Clara, resistente e suscetível à requeima, respectivamente. Para avaliação do proteoma constitutivo, as proteínas foram extraídas de amostras das folhas dos genótipos sem que tivesse ocorrido a inoculação, apenas comparando a constituição proteica do BGH-2127 e do Santa Clara. Na avaliação à resposta ao patógeno, as plantas foram inoculadas com uma mistura de esporângios de P. infestans, na concentração de 1x10 3 esporângios mL -1 , coletados em regiões da Zona da Mata Mineira, e as proteínas foram extraídas de folhas de cada genótipo inoculado e não inoculado (controle) coletadas nos tempos 0, 2 e 48 horas. Na análise proteômica foi utilizada a técnica da eletroforese bidimensional (2-DE), com a primeira dimensão (focalização isoelétrica) realizada em tiras IPG de 24 cm, pH 3-10, e a segunda dimensão em SDS-PAGE, em gel 12,5%T. Foram obtidos três géis por tratamento, correspondendo a três repetições biológicas. Em seguida, os géis foram revelados por coloração com azul de coomassie coloidal. Posteriormente as imagens dos géis foram digitalizadas usando o equipamento Image Scanner III e analisadas no software ImageMaster 2D Platinum 7.5. Spots com variação de sobreposição acima de 1,5 e ANOVA p<0,05 foram considerados diferencialmente abundantes. Os spots das proteínas diferencialmente abundantes foram identificados em espectrômetro de massas do tipo MALDI-TOF/TOF Ultraflex III. As listas de massas obtidas foram confrontadas contra os bancos de dados de proteínas obtidos do UNIPROT, com auxílio do software MASCOT e os resultados obtidos, validados pelo aplicativo SCAFFOLD com pelo menos 90% de probabilidade. As proteínas identificadas foram categorizadas funcionalmente usando o software Mapman. Uma vez listadas as proteínas diferencialmente abundantes para os genótipos BGH-2127 e Santa Clara foi realizada a construção de uma rede de interação proteína-proteína utilizando o software STRING. Ensaios de PCR em Tempo Real (RT-PCR) foram realizados para confirmar os níveis de abundância de algumas proteínas identificadas. O RNA total foi extraído de amostras de folhas e o cDNA obtido foi quantificado pelo equipamento SpectraMax M5 microplate/cuvette reader. A amplificação dos fragmentos alvo foi realizada utilizando o equipamento StepOneTM Real-Time PCR System e para a quantificação da expressão gênica foi utilizado o software REST. Na avaliação do proteoma constitutivo, 19 proteínas foram identificadas, e estão relacionadas com metabolismo e energia, fotossíntese, estresse e defesa e à transcrição. Aproximadamente 90% destas proteínas foram mais abundantes no cultivar Santa Clara. As proteínas endoquitinase ácida de 26 kDa e ribonuclease T2 foram mais abundantes no BGH-2127. Atividade enzimática confirmou maior abundância de quitinase no acesso BGH-2127 em relação à Santa Clara. Os padrões de expressão avaliados por PCR em tempo real diferiram dos resultados da análise proteômica. Na avaliação da resposta ao patógeno, 56 proteínas diferencialmente abundantes foram identificadas, sendo 39 referentes ao genótipo resistente e 17 ao suscetível. Estas proteínas foram categorizadas em grupos de funções biológicas de energia e metabolismo, fotossíntese, estresse e defesa, transcrição, outras proteínas e não caracterizadas. Para o acesso BGH-2127, proteínas do estresse oxidativo (2-cis peroxirredoxina BAS1 e 2-cis peroxirredoxina) e relacionadas à patogênese da família PR-5 (taumatina) tiveram os níveis de abundancia relativa aumentados nos tempos 0 e 48 horas após a inoculação, respectivamente, e foram consideradas importantes para o mecanismo de defesa deste genótipo. Os padrões de expressão avaliados por PCR em tempo real diferiram dos resultados da análise proteômica. Redes de interações proteína-proteína forneceram importantes informações sobre atividades celulares envolvidas na resistência do BGH-2127 à requeima. Diferenças na abundância das proteínas endoquitinase ácida de 26 kDa e ribonuclease T2 entre os proteomas constitutivos dos genótipos avaliados podem contribuir para o mecanismo de resistência do BGH-2127 à requeima. Proteínas relacionadas ao estresse oxidativo (PR-9) e família taumatina (PR-5) possuem papel importante no mecanismo de defesa do acesso BGH- 2127 resistente a requeima do tomateiro. / Growing tomatoes has significant economic and social importance in brazilian agriculture. Nevertheless, the tomato production is considered an activity of high economic risk and major agronomic complexity. Among the main problems with regard to pests and diseases, there is the late blight, caused by the oomycete Phytophthora infestans (Mont.) de Bary. Disease control is highly dependent on the use of pesticides and there is no resistant cultivars. The main strategy to reverse that one situation is the introgression of resistance genes present in tomato accessions stored in germplasm banks. So, after eight years of research, BGH-2127 access (Solanum lycopersicum) was selected as a source of resistance to late blight, among the 870 tomato accessions of Vegetable Germplasm Bank of the Federal University of Viçosa (BGH-UFV). Due to the resistance to be quantitative it becomes difficult to practice selection of superior genotypes, made only in the field or associated with genetic molecular markers. In this context, the methodology of proteomics becomes viable alternative to provide valuable information and tools to better understanding the different ways of plant-pathogen relationship, thus this methodology can help future proposals genetic strategies to develop resistance cultivars of tomatoes. With the help of proteomic tools, the objectives of this study were: to analyze differences between the constitutive proteomes of tomato genotypes contrasting in resistance to late blight; and identify proteins against infection of the pathogen that may explain possible molecular mechanisms of resistance of tomato to this disease. The BGH-2127 and Santa Clara cultivar, resistant and susceptible to late blight respectively, were evaluated. For the evaluation of the constitutive proteome, proteins were extracted from leaf samples of the genotypes without inoculation, only comparing the protein constitution of BGH-2127 and Santa Clara. In evaluating the response to the pathogen, the plants were inoculated with a mixture of sporangia of P. infestans sporangia at a concentration of 1 x 10 3 sporangia mL −1 from different regions of Zona da Mata. Proteins were extracted from leaves of each genotype inoculated and non-inoculated (control) collected at time 0, 2 and 48 hours. In the proteomic analysis, the two-dimensional electrophoresis technique (2-DE) was used, with the first dimension (isoelectric focusing) performed using a 24-cm strip containing an immobilized pH gradient (IPG) ranging from 3 to 10 and the second dimension was performed on SDS-PAGE 12.5%T. Three gels were obtained by treatment, corresponding to three biological replicates. Then the gels were stained with colloidal coomassie blue. Posteriorly the gels were scanned with the aid of Image Scanner III and analyzed using ImageMaster 2D Platinum 7.0 software. The expression values were considered significant according to the analysis of variance (ANOVA) at p<0.05. Proteins in which the abundance ranged at least 1.5 times were considered to be differentially abundant. Protein identification was performed using the MALDI- TOF/TOF Ultraflex III type mass spectrometer. The standard list of proteins was obtained UNIPROT, through the use of the MASCOT application. The result obtained by MASCOT was validated by the SCAFFOLD application, with a minimum of 90% probability. Identified proteins were functionally categorized using Mapman program. Once the differentially abundant proteins for BGH-2127 and Santa Clara genotypes were listed, the construction of a protein-protein interaction network was carried out using the STRING software. Real-time PCR assays (RT-PCR) were performed to confirm the levels of abundance of some identified proteins. Total RNA was extracted from leaf samples and the cDNA obtained was quantified by the SpectraMax M5 microplate/cuvette reader. The PCR reaction was performed using StepOneTM Real- Time PCR System. Quantification of gene expression was performed using REST software. In evaluation of the constitutive proteome, nineteen proteins were identified, which were then related to metabolism and energy, photosynthesis, transcription, stress and defenses. Approximately 90% of these proteins were more abundant in Santa Clara, a susceptible cultivar. Acidic 26 kDa endochitinase and ribonuclease T2 proteins were more abundant in BGH-2127 access. The enzymatic activity confirmed a greater abundance of chitinase in the BGH-2127 access as compared to the cultivar Santa Clara. Gene expression analyses by real time PCR demonstrated that the mRNA levels were not correlated with the respective protein levels. Abundance of the acidic 26 kDa endochitinase and ribonuclease T2 proteins in the constitutive proteomes of BGH-2127 may be associated with the answer to the resistance of this access. In evaluating the response to the pathogen, fifty-six differentially abundant proteins were identified, with thirty-nine referring to the resistant genotype and seventeen to the susceptible genotype. These proteins were categorized into functional groups of energy and metabolism, photosynthesis, stress and defense, transcription, other proteins and not characterized. For access BGH-2127, oxidative stress proteins (2-cis peroxiedoxin BAS1 and 2-cis peroxiredoxin) and thaumatin-like protein had levels of relative abundance increased at times 0 and 48 hours after respectively, and were considered important for the defense mechanism of this genotype. The expression standards evaluated by RT-PCR differed from the results of the proteomic analysis. Protein-protein interaction networks provided important information on cellular activities involved in the resistance of BGH-2127 late blight. Abundance of the acidic 26 kDa endochitinase and ribonuclease T2 proteins in the constitutive proteomes of BGH-2127 may be associated with the answer to the resistance of this access. Proteins related to oxidative stress (PR-9) and thaumatin-like family (PR-5) play an important role in the BGH-2127 access defense mechanism resistant to tomato late blight.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_8433_Rodolfo Ferreira de Mendonca.pdf: 1124384 bytes, checksum: ab37968507959f59b13bdb6b4a472d5b (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / O tomateiro é uma cultura de grande importância econômica e social para o Brasil, que pode ser afetada por muitos problemas fitossanitários, sendo a pinta preta uma das principais doenças. O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização de diferentes práticas culturais associadas ao uso de fungicida no manejo da pinta preta do tomateiro em condições de campo. Foram conduzidos dois experimentos em blocos casualizados, com parcelas sub-subdivididas na área experimental do Centro de Ciências Agrárias e Engenharias da Universidade Federal do Espírito Santo, em Alegre ES. No primeiro experimento, as parcelas foram constituídas de três sistemas de tutoramento, as subparcelas, de três intervalos entre as aplicações de fungicidas, e as sub-subparcelas, por três sistemas de remoção de folhas, com três repetições. No segundo experimento, as parcelas foram constituídas de três espaçamentos entre plantas, as subparcelas, de três intervalos entre as aplicações de fungicidas, e as sub-subparcelas, por três alturas de poda, com três repetições. Foram realizadas avaliações semanais da severidade da pinta preta, empregando-se escala diagramática própria para cálculo dos valores da Área Abaixo da Curva de Progresso da Doença (AACPD) para cada tratamento. Foram calculadas também a duração da área foliar sadia (HAD) e da absorção da área foliar sadia (HAA) e avaliada a produtividade do tomateiro em função dos tratamentos utilizados. A viabilidade econômica de cada tratamento foi calculada pela subtração entre receita e custo de cada parcela nos dois experimentos. Utilizou-se o programa computacional R para as análises estatísticas. Para o primeiro experimento, a eficácia da aplicação de fungicida ficou comprovada quando verificam-se os maiores valores de AACPD em parcelas sem aplicação. O tutoramento vertical proporcionou maior produtividade independente da remoção de inóculo e do intervalo de aplicação de fungicida. O efeito da remoção de folhas doentes reduziu o progresso da pinta preta e aumentou a produtividade do tomateiro, sendo que a remoção de folhas com valores &#8805; 16% de severidade foi o sistema mais efetivo, permitindo reduzir o número de aplicações de fungicida sem comprometer a eficácia de controle. O efeito da altura de poda influenciou no progresso da pinta preta do tomateiro. Observou-se maiores produtividades com espaçamentos de 45 e 75 cm entre plantas que foram podadas na altura do 7º e 10º cachos. No espaçamento de 30 cm, o lucro foi maior quando foi feita a poda no 3º cacho. Conclui-se portanto que plantas conduzidas no tutoramento vertical, com aplicação quinzenal de fungicida e remoção de inóculo com severidade &#8805; 16% no primeiro experimento e plantas conduzidas no espaçamento de 45 cm entre plantas com aplicação semanal de fungicida e poda na altura do 10º cacho no segundo experimento foram mais efetivas em reduzir o progresso da doença e aumentar HAD, HAA, produtividade e lucro. Palavras-chave: Solanum lycopersicum, Alternaria solani, controle cultural, controle químico, perdas.

Tomato serves as an important model organism for Solanaceae in both molecular and agronomic research. With whole genome sequencing in progress, there is a need to study functional genetics through mutant lines that exceed the practical limitations imposed by the popular research cultivar, Micro-Tom. This project utilized Agrobacterium transformation and the transposon tagging construct, Ac-DsATag-Bar_gosGFP, to produce activation tagged and knockout mutants in the processing tomato variety, M82. The construct contained hygromycin resistance (hyg), green fluorescent protein (GFP), and maize transposase (TPase) on the stable Ac element, along with a 35S enhancer tetramer and glufosinate herbicide resistance (BAR) on the mobile Ds element. An in vitro propagation strategy was used to produce a population of 25 T0 plants from a single transformed plant regenerated in tissue culture. A T1 population of 10,568 selfed and M82 backcross progeny was produced from the functional T0 line. This population was screened by spraying with 0.05% Liberty® herbicide, followed by a 100 mg/L hygromycin leaf painting procedure to select for Ds only (herbicide tolerant and hygromycin sensitive) individuals. The T-DNA genotype of Ds only plants was confirmed through multiplex PCR and the location of insertions within the genome was determined through TAIL-PCR. Resulting product sequences were blasted against the pre-publication tomato genome browser to determine insertion sites. A population of 309 independent transposants dispersed to all twelve chromosomes from the original insertion site on chromosome five has been developed. The transposon tagged lines are currently being immortalized in seed stocks. / Master of Science