Para auxiliar no controle da tuberculose são necessários novos métodos de detecção de Mycobacterium tuberculosis que sejam rápidos, específicos e de aplicabilidade em laboratórios de saúde pública, principalmente em países em desenvolvimento. Vários métodos moleculares de detecção e identificação de micobactérias em amostras clínicas têm sido desenvolvidos. Com o objetivo de padronizar e aplicar essas metodologias em laboratório foi desenvolvido um protocolo baseado na amplificação de DNA por reação em cadeia da polimerase (PCR) e na detecção colorimétrica em microplacas. Uma região interna do elemento de inserção IS6110, específico do complexo M. tuberculosis, foi selecionada como alvo para amplificação por PCR com primers biotinilados. Uma sonda complementar a uma região interna do fragmento foi fixada em microplacas onde, posteriormente, foi hibridizado o produto amplificado. A detecção através de hibridização foi feita utilizando um conjugado estreptavidina peroxidase. A eficácia da técnica foi testada em amostras clínicas pulmonares de pacientes com suspeita de infecção e sem tratamento prévio para tuberculose. O padrão ouro no diagnóstico de infecção por M. tuberculosis foi a associação da baciloscopia com a cultura a partir da amostra clínica dos pacientes selecionados. Foram testadas 303 amostras de escarro induzido de 303 pacientes com suspeita de TB pulmonar, dos quais 69 apresentaram resultado positivo e 234 negativo para TB. A sensibilidade e especificidade obtidas foram 88% e 98% e os Valores Preditivos Positivo (VPP) e Negativo (VPN) foram 92% e 97%, respectivamente. Os resultados obtidos demonstraram que a técnica desenvolvida no presente estudo pode ser uma importante ferramenta no diagnóstico de tuberculose e poderia ser utilizada como um teste complementar no diagnóstico da doença. / New methods to detect Mycobacterium tuberculosis rapidly, accurately and that are feasible to apply in laboratories of developing countries are necessaries. Several methods for direct detection and identification of mycobacteria in clinical samples have been developed. With the aim to standardize the application of such methods in laboratory, we developed a molecular method for DNA extraction and PCR detection using a microwell plate hybridization assay. An internal region of the repetitive element, specific of M. tuberculosis complex, called IS6110 was selected as a target for amplification using specific biotinylated primers. The detection of amplified fragments was performed using microwell plates. An aminated DNA fragment complementary to an internal region of the amplified fragment was used as a probe. The biotinylated amplified products were added to the plate and identified with the use of streptavidin conjugated to horseradish peroxidase. The efficacy of the method was tested to detect pulmonary tuberculosis in patients suspected of TB infection with no previous treatment. As gold standard, the bacteriological criteria was used. Three hundred and three induced sputum samples from 303 pulmonary TB suspects were evaluated, of which 69 showed positive result and 224 negative for TB. The sensitivity and specificity obtained were 88% and 98% and Positive and Negative Predictive Values were 92% and 98%, respectively. The obtained results demonstrated that the PCR detection using a microwell plate hybridization assay may be an important tool for the diagnosis of tuberculosis and suggest that it could be used as a complementary diagnostic method.

Para auxiliar no controle da tuberculose são necessários novos métodos de detecção de Mycobacterium tuberculosis que sejam rápidos, específicos e de aplicabilidade em laboratórios de saúde pública, principalmente em países em desenvolvimento. Vários métodos moleculares de detecção e identificação de micobactérias em amostras clínicas têm sido desenvolvidos. Com o objetivo de padronizar e aplicar essas metodologias em laboratório foi desenvolvido um protocolo baseado na amplificação de DNA por reação em cadeia da polimerase (PCR) e na detecção colorimétrica em microplacas. Uma região interna do elemento de inserção IS6110, específico do complexo M. tuberculosis, foi selecionada como alvo para amplificação por PCR com primers biotinilados. Uma sonda complementar a uma região interna do fragmento foi fixada em microplacas onde, posteriormente, foi hibridizado o produto amplificado. A detecção através de hibridização foi feita utilizando um conjugado estreptavidina peroxidase. A eficácia da técnica foi testada em amostras clínicas pulmonares de pacientes com suspeita de infecção e sem tratamento prévio para tuberculose. O padrão ouro no diagnóstico de infecção por M. tuberculosis foi a associação da baciloscopia com a cultura a partir da amostra clínica dos pacientes selecionados. Foram testadas 303 amostras de escarro induzido de 303 pacientes com suspeita de TB pulmonar, dos quais 69 apresentaram resultado positivo e 234 negativo para TB. A sensibilidade e especificidade obtidas foram 88% e 98% e os Valores Preditivos Positivo (VPP) e Negativo (VPN) foram 92% e 97%, respectivamente. Os resultados obtidos demonstraram que a técnica desenvolvida no presente estudo pode ser uma importante ferramenta no diagnóstico de tuberculose e poderia ser utilizada como um teste complementar no diagnóstico da doença. / New methods to detect Mycobacterium tuberculosis rapidly, accurately and that are feasible to apply in laboratories of developing countries are necessaries. Several methods for direct detection and identification of mycobacteria in clinical samples have been developed. With the aim to standardize the application of such methods in laboratory, we developed a molecular method for DNA extraction and PCR detection using a microwell plate hybridization assay. An internal region of the repetitive element, specific of M. tuberculosis complex, called IS6110 was selected as a target for amplification using specific biotinylated primers. The detection of amplified fragments was performed using microwell plates. An aminated DNA fragment complementary to an internal region of the amplified fragment was used as a probe. The biotinylated amplified products were added to the plate and identified with the use of streptavidin conjugated to horseradish peroxidase. The efficacy of the method was tested to detect pulmonary tuberculosis in patients suspected of TB infection with no previous treatment. As gold standard, the bacteriological criteria was used. Three hundred and three induced sputum samples from 303 pulmonary TB suspects were evaluated, of which 69 showed positive result and 224 negative for TB. The sensitivity and specificity obtained were 88% and 98% and Positive and Negative Predictive Values were 92% and 98%, respectively. The obtained results demonstrated that the PCR detection using a microwell plate hybridization assay may be an important tool for the diagnosis of tuberculosis and suggest that it could be used as a complementary diagnostic method.

Para auxiliar no controle da tuberculose são necessários novos métodos de detecção de Mycobacterium tuberculosis que sejam rápidos, específicos e de aplicabilidade em laboratórios de saúde pública, principalmente em países em desenvolvimento. Vários métodos moleculares de detecção e identificação de micobactérias em amostras clínicas têm sido desenvolvidos. Com o objetivo de padronizar e aplicar essas metodologias em laboratório foi desenvolvido um protocolo baseado na amplificação de DNA por reação em cadeia da polimerase (PCR) e na detecção colorimétrica em microplacas. Uma região interna do elemento de inserção IS6110, específico do complexo M. tuberculosis, foi selecionada como alvo para amplificação por PCR com primers biotinilados. Uma sonda complementar a uma região interna do fragmento foi fixada em microplacas onde, posteriormente, foi hibridizado o produto amplificado. A detecção através de hibridização foi feita utilizando um conjugado estreptavidina peroxidase. A eficácia da técnica foi testada em amostras clínicas pulmonares de pacientes com suspeita de infecção e sem tratamento prévio para tuberculose. O padrão ouro no diagnóstico de infecção por M. tuberculosis foi a associação da baciloscopia com a cultura a partir da amostra clínica dos pacientes selecionados. Foram testadas 303 amostras de escarro induzido de 303 pacientes com suspeita de TB pulmonar, dos quais 69 apresentaram resultado positivo e 234 negativo para TB. A sensibilidade e especificidade obtidas foram 88% e 98% e os Valores Preditivos Positivo (VPP) e Negativo (VPN) foram 92% e 97%, respectivamente. Os resultados obtidos demonstraram que a técnica desenvolvida no presente estudo pode ser uma importante ferramenta no diagnóstico de tuberculose e poderia ser utilizada como um teste complementar no diagnóstico da doença. / New methods to detect Mycobacterium tuberculosis rapidly, accurately and that are feasible to apply in laboratories of developing countries are necessaries. Several methods for direct detection and identification of mycobacteria in clinical samples have been developed. With the aim to standardize the application of such methods in laboratory, we developed a molecular method for DNA extraction and PCR detection using a microwell plate hybridization assay. An internal region of the repetitive element, specific of M. tuberculosis complex, called IS6110 was selected as a target for amplification using specific biotinylated primers. The detection of amplified fragments was performed using microwell plates. An aminated DNA fragment complementary to an internal region of the amplified fragment was used as a probe. The biotinylated amplified products were added to the plate and identified with the use of streptavidin conjugated to horseradish peroxidase. The efficacy of the method was tested to detect pulmonary tuberculosis in patients suspected of TB infection with no previous treatment. As gold standard, the bacteriological criteria was used. Three hundred and three induced sputum samples from 303 pulmonary TB suspects were evaluated, of which 69 showed positive result and 224 negative for TB. The sensitivity and specificity obtained were 88% and 98% and Positive and Negative Predictive Values were 92% and 98%, respectively. The obtained results demonstrated that the PCR detection using a microwell plate hybridization assay may be an important tool for the diagnosis of tuberculosis and suggest that it could be used as a complementary diagnostic method.

Foram submetidas a prova do \"California Mastitis Test\"(CMT), 468 vacas leiteiras pertencentes a seis propiedades rurais produtoras de leite tipo B, localizadas na região do Município de Barretos, SP. Das 56 (12,0 por cento ) fêmeas reagentes a esta prova, 48 (1O,3 por cento ) foram confirmadas através do isolamento e identificação do agente etiológico. A elevada concordância (85,71 por cento ) verificada entre, a prova do CMT e o exame bacteriológico, confirma a eficiência desta prova na detecção de transtôrnos da glândula mamária não perceptíveis clínicamente, uma vez que nenhuma das fêmeas analisadas apresentou sinais da enfermidade. A contagem leucocitária e a pesquisa do teor de cloretos efetuadas nas 56 fêmeas reagentes a prova do CMT, apresentaram concordâncias de 87,5 por cento e 50,0 por cento , respectivamente, em relação ao exame bacteriológico. O Staphylococcus aureus foi o agente etiológico mais frequente (52,08 por cento ) nos casos de mastite bovina. O estudo comparativo entre a contagem padrão em placas e a prova da redução do azul de metileno, efetuado nas 56 amostras reagentes a prova do CMT, revelou que 30 (53,57 por cento ) amostras apresentaram tempo de redução não condizente com o número de microrganismos determinado, isto é, tempo de redução menor que 3 l/2 horas e contagem total de microrganismos inferior a 500.000 microrg/ml. Observou-se, ainda, que destas 30 amostras, 26 (86,67 por cento ) apreesentaram contagens leucocitárias superiores a 2.500.000 leucócitos/ml., sugerindo deste modo, uma provável interferência dos leucócitos quando em número elevado, na prova da redução do azul de metileno. O estudo comparativo entre a contagem padrão em placas e a prova da redução do azul de metileno, efetuado nas 30 amostras negativas a prova do CMT, revelou que 27 (90,0 por cento ) amostras apresentaram o tempo de redução condizente com o número de microrganismos determinado, o que confirma a importância de sua utilização na rotina do Serviço de Inspeção. A provãvel interferência dos leucócitos não compromete a eficiência desta prova, pois as variações observadas ocorrem no sentido de abreviar o tempo de redução, sendo muito pequena a probabilidade de aceitação de um produto com o número de microrganismos superior ao permitido pelo Ministério da Agricultura. Dentre as provas utilizadas pelo Serviço de Inspeção na detecção da mastite bovina a nível de Estabelecimentos Industriais a prova de Whiteside foi a que apresentou maior sensibilidade e especificidade, capaz de revelar a presença de leite anormal em rebanhos cuja prevalência desta doença foi igual ou superior a 7,0 por cento das fêmeas ou 1,4 por cento dos quartos analisados. A pesquisa do teor de cloretos apresentou menor sensibilidade e especificidade, incapaz de revelar a presença de leite anormal em todos os rebanhos analisados. Entretanto, este fato não invalida a utilidade de sua aplicação, pois esta prova pode ser de fundamental importância na detecção de fraudes no leite. A prevalência da mastite bovina em até 20,0 por cento das fêmeas leiteiras ou em ate 5,0 por cento dos quartos examinados, não foi suficiente para colocar os quesitos analisados nas amostras de leite, fora dos padrões normais. Acredita-se que estes padrões devam ser objeto de estudos posteriores. / Four-hundred and sixty-eigth milk cows, belonging to six type B milk producing dayry farms, located in the region of Barretos, SP, Brazil were submitted to \"California Mastitis Test\", of the fifty-six (12,0 per cent ) cows positive to the mentioned test, forty eigth (10,31) had the diagnosis confirmed throght isolation and identification of the etiologic agent. High agreement (85,7 per cent ) was obtained between CMT and bacteriologic examination, which confirms the efficiency of CMT in the detection of diseases of the mammary glands, not perceptible by clinical examination, as none the animals examined presented signs of disease. Leucocyte count and determination of chloride level performed on the fifty-six reactors presented agreement of 87,5 per cent and 50,0 per cent , respectively, with bacteriological examination. Staphylococcus aureus was the most frequently isolated bacterium (52,08 per cent of cases). Comparison between total plate count and reductase test, performed on thirty samples negative to CMT, showed that twenty-seven samples (90,0 per cent ) presented a reduction time compatible with the number of microorganisms present, confirming the importance of reductase test regarding inspection. The theoretical interference of leucocytes was not important in practice, as variations observed were abreviation of reduction time, rendering the propability of accepting a product with a number of microorganisms over legal limits very small. Considering tests used by the Inspection Service for detection of bovine mastitis, the Whiteside test presented highest sensivity and specificity, as it was capable of reveling abnormal milk when prevalence was 7,0 per cent and over, considering animals and 1,1 per cent considering quarters. Chloride level presented lower sensitivity and specificity as it was unable to detect abnormal milk in all dairy farms. However it is very important in the detection of frauds. Prevalence of mastitis of up to 20,0 per cent of animals or of 5,0 per cent of quarters was not sufficient to bring the total milk produced below standards.

Helicobacter spp é uma bactéria espiralada gram negativa que pode fazer parte da microbiota gástrica de cães e gatos domésticos, e sua associação com as gastropatias ainda é amplamente discutida na Medicina Veterinária. O objetivo do estudo foi avaliar a frequência de ocorrência da helicobacteriose gástrica em cães e gatos necropsiados no HOVET-USP e comparar quatro métodos de diagnóstico para a identificação do agente. Fragmentos da mucosa gástrica foram destinados ao TRU, citologia, histopatologia por hematoxilina e eosina (HE) com coloração de Warthin Starry (WS) e imuno-histoquímica (IHQ). Para a análise comparativa, de concordância e de desempenho dos testes, entre os métodos de diagnóstico com o padrão ouro (HE), foram utilizados o teorema de Bayes, o índice Kappa e o índice Youden respectivamente. Nos cães a frequência de ocorrência da helicobacteriose gástrica ficou em 57%, com associação entre a infecção e a faixa etária dos animais. Nos gatos esta frequência de ocorrência foi de 87% pelo método padrão ouro (HE) de diagnóstico escolhido sem associação entre infecção, raça, gênero e idade dos animais. A imunohistoquímica obteve maiores índices de Youden e Kappa nos cães. Nos gatos, a coloração específica a base de prata, Warthin Starry, obteve maior índice Youden e Kappa do que os outros diagnósticos. A determinação da frequência de ocorrência do Helicobacter spp varia conforme o método de diagnóstico adotado. A escolha do método depende dos recursos financeiros disponíveis, das amostras que se pretende estudar, do tempo necessário, da praticidade do método e da sua performance. / Helicobacter spp are gram negative spiral bacterium that can be part of the gastric microbiota of domestic dogs and cats, and its association with gastropathies is still widely discussed in Veterinary Medicine. The aim of the study was to evaluate the frequency of occurrence of gastric helicobacteriose in dogs and cats necropsied at HOVET - USP and compare four diagnostic methods for the identification of the agent. Fragments of gastric mucosa were sent to the rapid urease test (RUT), cytology, histopathology by hematoxylin and eosin (HE) staining with Warthin Starry (WS) and immunohistochemistry (IHC). For comparative analysis, and concordance and performance between diagnostic methods with the gold standard (HE) were used respectively the Bayes\' theorem, the Kappa index and Youden index. In dogs the frequency of occurrence of gastric helicobacteriose stood at 57 %, with an association between infection and the age of the animals. In cats this frequency of occurrence was 87 % for the gold standard method (HE) and no association between infection, race, gender and age of the animals was found. Immunohistochemistry showed higher Youden index and Kappa in dogs. In cats, the specific staining based on silver, Warthin Starry, demonstrated the highest Youden and Kappa indexes among the other diagnostic methods. The determination of the frequency of occurrence of Helicobacter spp varies according to the diagnostic method adopted. The choice of method depends on the financial resources available, the samples under study, the time required, the practicality of the method and its performance.

Helicobacter spp é uma bactéria espiralada gram negativa que pode fazer parte da microbiota gástrica de cães e gatos domésticos, e sua associação com as gastropatias ainda é amplamente discutida na Medicina Veterinária. O objetivo do estudo foi avaliar a frequência de ocorrência da helicobacteriose gástrica em cães e gatos necropsiados no HOVET-USP e comparar quatro métodos de diagnóstico para a identificação do agente. Fragmentos da mucosa gástrica foram destinados ao TRU, citologia, histopatologia por hematoxilina e eosina (HE) com coloração de Warthin Starry (WS) e imuno-histoquímica (IHQ). Para a análise comparativa, de concordância e de desempenho dos testes, entre os métodos de diagnóstico com o padrão ouro (HE), foram utilizados o teorema de Bayes, o índice Kappa e o índice Youden respectivamente. Nos cães a frequência de ocorrência da helicobacteriose gástrica ficou em 57%, com associação entre a infecção e a faixa etária dos animais. Nos gatos esta frequência de ocorrência foi de 87% pelo método padrão ouro (HE) de diagnóstico escolhido sem associação entre infecção, raça, gênero e idade dos animais. A imunohistoquímica obteve maiores índices de Youden e Kappa nos cães. Nos gatos, a coloração específica a base de prata, Warthin Starry, obteve maior índice Youden e Kappa do que os outros diagnósticos. A determinação da frequência de ocorrência do Helicobacter spp varia conforme o método de diagnóstico adotado. A escolha do método depende dos recursos financeiros disponíveis, das amostras que se pretende estudar, do tempo necessário, da praticidade do método e da sua performance. / Helicobacter spp are gram negative spiral bacterium that can be part of the gastric microbiota of domestic dogs and cats, and its association with gastropathies is still widely discussed in Veterinary Medicine. The aim of the study was to evaluate the frequency of occurrence of gastric helicobacteriose in dogs and cats necropsied at HOVET - USP and compare four diagnostic methods for the identification of the agent. Fragments of gastric mucosa were sent to the rapid urease test (RUT), cytology, histopathology by hematoxylin and eosin (HE) staining with Warthin Starry (WS) and immunohistochemistry (IHC). For comparative analysis, and concordance and performance between diagnostic methods with the gold standard (HE) were used respectively the Bayes\' theorem, the Kappa index and Youden index. In dogs the frequency of occurrence of gastric helicobacteriose stood at 57 %, with an association between infection and the age of the animals. In cats this frequency of occurrence was 87 % for the gold standard method (HE) and no association between infection, race, gender and age of the animals was found. Immunohistochemistry showed higher Youden index and Kappa in dogs. In cats, the specific staining based on silver, Warthin Starry, demonstrated the highest Youden and Kappa indexes among the other diagnostic methods. The determination of the frequency of occurrence of Helicobacter spp varies according to the diagnostic method adopted. The choice of method depends on the financial resources available, the samples under study, the time required, the practicality of the method and its performance.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-12T14:39:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TAIANE ACUNHA ESCOBAR.pdf: 973361 bytes, checksum: 098a27b7377e80f12957e7c2e3378ef3 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-12T14:39:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TAIANE ACUNHA ESCOBAR.pdf: 973361 bytes, checksum: 098a27b7377e80f12957e7c2e3378ef3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-12T14:39:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TAIANE ACUNHA ESCOBAR.pdf: 973361 bytes, checksum: 098a27b7377e80f12957e7c2e3378ef3 (MD5) Previous issue date: 2015-04-16 / A Leishmaniose é uma doença parasitária infeciosa, causada por protozoários do gênero Leishmania e transmitida pelo vetor flebótomo. Caracterizada como Doença Tropical Negligenciada, acomete diversas espécies de mamíferos, sendo o cão, atualmente, o principal reservatório em área urbanas. Os equinos também podem ser infectados, especialmente quando estão em contato com reservatórios ou vetores. No município de Uruguaiana – RS há um expressivo número de equinos utilizados na tração de cargas e como meio de transporte, com constante movimentação dentro do perímetro urbano. Esses animais vivem em condições precárias, submetidos a trabalhos excessivos e má nutrição. Frente a estes fatores somados à atual situação epidemiológica da leishmaniose visceral canina no município, o presente estudo foi realizado com o objetivo de identificar a presença de Leishmania sp em equinos urbanos do município de Uruguaiana-RS. Para a condução do experimento foram utilizadas amostras sanguíneas de 192 equinos testadas em três técnicas: sorológica (ELISA), imunocromatográfica (TR-DPP) e molecular (PCR). Na técnica de ELISA foi utilizado soro, testado com o Kit Ensaio Imunoenzimático para Diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina – Bio-Manguinhos e para o teste imunocromatográfico Teste Rápido Dual Path Platform utilizaram-se amostras de sangue total. As reações de PCR, após extração de DNA de sangue periférico dos animais, foram realizadas com quatro pares de iniciadores distintos. Todas as amostras testadas apresentaram-se não reagentes nos ensaios imunológicos. Entretanto, com o emprego da técnica PCR, mais sensível, houveram amostras positivas. Dos quatro pares de iniciadores testados, 75 amostras foram positivas, 52 com pelo menos um dos pares. Contudo, ao analisarmos individualmente os iniciadores, 58,6% foram positivos para LITSV/L5.8SR, 44% para LITSV/LISTSR, 28% para RV1/RV2, e 4% LITSR/L5.8S. Os resultados apresentados no experimento indicam a possibilidade de existência de Leishmania em equinos na região de Uruguaiana, embora os testes sorológicos não tenham apresentado reatividade para Leishmania. A técnica molecular possibilitou a detecção do gênero Leishmania nas amostras de sangue periférico dos equinos. Este foi o primeiro relato da infecção na espécie equina na região do extremo oeste do estado do Rio Grande do Sul. Contudo, se faz importante a realização de sequenciamento do fragmento para que se possa confirmar a identidade genética de Leishmania sp. / Leishmaniasis is an parasitic infectious disease caused by protozoa genus Leishmania and transmitted by the sandfly vector. Characterized as Neglected Tropical Disease, affects several species of mammals, and the dog are main reservoir in urban areas. The horses can also be infected especially when they are in contact with reservoirs or vectors. In Uruguaiana’s city, there is a significant number of horses used in the tensile loads and means of transport, with constant movement within the city, living in precarious work’s conditions, subjected to excessive and poor nutrition. In view of these factors added to the current epidemiological situation of LVC in the city, the present study aim to identify the presence of Leishmania in urban horses the municipality of Uruguaiana-RS. For the experiment, blood samples from 192 horses were used for holding three techniques: serological (ELISA), immunochromatographic (TR-DPP) and molecular (PCR). For conducting ELISA’s Test serum was used and tested with Bio-Manguinhos kit and for TR-Dual Path Platform Rapid Test whole blood samples were employed. In the PCR technique, DNA was extracted from peripheral blood of animals and amplifications were performed with primers RV1 / RV2, LITSR / LITSV, LITSR / L5.8S / LITSV / L5.8SR.. All tested samples showed negative results in immunoassays. However, employing sensitive techniques such as PCR, positive samples were detected. Considering the four primer pairs tested, 75 animals were positive, 52 with at least one of the pairs. However, when analyzing the individual primers, 58.6% were positive for LITSV/L5.8SR, 44% to LITSV/LISTSR, 28% for RV1/RV2, and 4% LITSR/L5.8S.In The results presented in the experiment indicate the possibility of Leishmania in horses in the region of Uruguaiana city, although serological tests have not submitted reactivity to Leishmania. Molecular technich shows results to consider the Leishmania’s presence in horse’s peripheral blood samples. This was the first report of infection in equine species in westernmost region of the Rio Grande do Sul state. However, it is important to conduct sequencing of the fragment so that we can confirm the genetic identity of Leishmania sp.

Tese de mestrado integrado. Engenharia Electrotécnica e de Computadores. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2012

O presente trabalho avaliou corações com pericardite e pulmões correspondentes através da análise anatomopatológica, bacteriológica, histopatológica e da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) a fim de identificar os agentes envolvidos no processo e correlacioná-los com as lesões macroscópicas presentes. O estudo foi realizado em quatro frigoríficos do estado do Rio Grande do Sul com o apoio do Serviço de Inspeção Federal (SIF) durante o período de fevereiro a outubro de 2010. Foram coletadas 120 amostras de corações com pericardite e pulmões correspondentes e avaliadas 3.487 carcaças na linha de inspeção em 20 lotes diferentes, totalizando 8 coletas. Os materiais foram examinados nos laboratórios de Microbiologia, Biologia Molecular e Patologia Veterinária da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Entre as pericardites, 86,7% foram classificadas como fibrinosas (104/120), 6,7% serosas (8/120), 2,5% (3/120) sero-fibrinosas e 4,2% (5/120) amostras não puderam ser classificadas. Foram diagnosticadas lesões de endocardite em somente 2,5% (3/120) dos corações. Quanto aos pulmões analisados, as alterações macroscópicas mais encontradas foram 66,6% (80/120) aderências de pleura direita e/ou esquerda, 19,1% (23/120) hepatizações dos lobos apicais direito e 5,83% (7/120) do esquerdo, 23,33% (28/120) do lobo cardíaco direito e 23,33% (28/120) do esquerdo. Pela análise histopatológica do coração, a lesão mais frequente foi presença de tecido de granulação denso fibroso e em algumas amostras tecidos de granulação frouxo, com proliferação de vasos em ambos os casos. Havia presença de fibrina e células inflamatórias mononucleares em alguns casos. Na análise dos pulmões correspondentes, 70% (84/120) das amostras de pulmões apresentavam algum tipo de lesão aparente. As lesões mais comuns foram pleurite crônica, hiperplasia das células do tecido linfóide associado aos brônquios (BALT), presença de macrófagos alveolares e broncopneumonia purulenta. Não foram observadas lesões microscópicas em 23,3% (28/120) dos pulmões e 6,6% (8/120) não foram coletados para análise devido a cronicidade da lesão. A análise da carcaça mostrou pleurite parietal em 12,5% (15/120) e algum tipo de envolvimento articular em 1,6 % (2/120) dos animais, não sendo objetivo avaliar o tipo de lesão e sim uma possível correlação com Haemophilus parasuis. Das análises bacteriológicas dos corações, obteve-se um maior número de isolados de Pasteurella multocida 16% (20/120), seguido de Streptococcus spp. 17,3% (6 /120) e 5% (6/120) Haemophilus parasuis. A maior parte dos isolados foi obtida das pericardites fibrinosas. Com relação aos pulmões correspondentes, foram isolados 17,5% (22/120) Pasteurella multocida, 51.57% (8/120) Streptococcus spp., e 0,8% (1/120) Haemophilus parasuis. Entre os isolados de P. multocida foi realizada a tipificação capsular das cepas identificadas no pulmão e coração através da PCR e todas pertenciam ao tipo A. Na técnica da PCR no coração pode-se observar um grande número de M. hyopneumoniae 34,8% (39/112), seguido de A. pleuropneumoniae 23,2% (26/112), H. parasuis 6,2% (7/112), P. multocida tipo A 3,5% (4 /112) e M. hyorhinis 2,6% (3/112). A mesma técnica aplicada aos pulmões correspondentes, revelou M. hyopneumoniae 81,2% (91 /112), H. parasuis 36,6 % (41 /112), A. pleuropneumoniae 33,9% (38/112), P. multocida tipo A 30,3% (34/112), M. hyorhinis 9.8% (11/112). / The present work assessed hearts with pericarditis and the corresponding lungs through visual analysis of gross lesions, bacteriology, histopathology and polymerase chain reaction (PCR) to identify agents involved in the processes and to correlate them with the lesions. The study was carried out in four slaughterhouses from the state of Rio Grande do Sul, Brazil, with the help of the Service of Federal Inspection (SIF) during the period of February to October, 2010. Samples of 120 hearts with pericarditis and corresponding lungs were collected and examined, and 3.487 carcasses were assessed in the slaughter line in 20 different batches, in a total of 8 sample collections. Materials were examined in the laboratories of Microbiology, Molecular Biology and Pathology of the Faculdade de Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Brazil. Among the samples with pericarditis, 104 were classified as fibrinous (86.7%), 8 serous (6.7%), 3 sero-fibrinous (2.5%) and 5 remained unclassified (4.2%). Lesions of endocarditis were present in 3 hearts (2.5%). Regarding lungs, the commonest gross changes were 80 pleural adhesions (66.6%) and 23 consolidations of the right apical lobes of the lung (19.1%) and 7 (5,83%) of the left; 28 (23,33%) from right cardiac lobe and 28 (23,33%) of left. Using histopathological analysis of the heart, the most frequent lesions were the presence of dense fibrous granulomatous tissue and, in some samples, loose granulation tissue, with of vessels proliferation in both cases. It was also found fibrin and inflammatory mononuclear cells in some cases. In the analysis of the corresponding lungs, 84 (70%) of the samples showed some type of apparent lesion. Te most prevalent lesions were chronic pleuritis, hyperplasia of lymphoid tissue cells associated to bronchia (BALT), presence of lung macrophages and purulent bronchopneumonia. Twenty eight lungs (23.3%) did not show any microscopic lesion and 8 (6.6%) were not collected because of the chronicity of the lesion. The analysis of the carcass showed parietal pleurisy in 15 (12.5 %) and joint involvement in 2 (1.6 %), but the present study did not intend to assess such lesions but a possible correlation with Haemophilus parasuis infection. Regarding bacteriological examination of the heart, Pasteurella multocida was the biggest isolation rate 16% (20/120), followed by Streptococcus spp 17.3% (6 /120) and 5% (6/120) Haemophilus parasuis. Most isolates were obtained from fibrinous pericarditis. Regarding the corresponding lungs, Pasteurella multocida was isolated in 17.5% (22/120) materials, Streptococcus spp in 51.57% (8/120), and Haemophilus parasuis in 0.8% (1/120). Pasteurella multocida capsular typing was carried out from strains identified through PCR from heart and lungs, all belonged to the serotype A. By PCR from samples from pericarditis a large number of M. hyopneumoniae was detected: 34. 8% (39/112), followed by APP 23.2% (26/112), H. parasuis 6.2% (7/112), P. multocida type A 3.5% (4 /112) and M. hyorhinis 2.6% (3/112). The same technique applied to the corresponding lungs, showed M. hyopneumoniae in 81.2% (91 /112), H. parasuis in 36.6 % (41 /112), APP in 33.9% (38/112), P. multocida type A in 30.3% (34/112) and M. hyorhinis in 9.8% (11/112).

O presente trabalho avaliou corações com pericardite e pulmões correspondentes através da análise anatomopatológica, bacteriológica, histopatológica e da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) a fim de identificar os agentes envolvidos no processo e correlacioná-los com as lesões macroscópicas presentes. O estudo foi realizado em quatro frigoríficos do estado do Rio Grande do Sul com o apoio do Serviço de Inspeção Federal (SIF) durante o período de fevereiro a outubro de 2010. Foram coletadas 120 amostras de corações com pericardite e pulmões correspondentes e avaliadas 3.487 carcaças na linha de inspeção em 20 lotes diferentes, totalizando 8 coletas. Os materiais foram examinados nos laboratórios de Microbiologia, Biologia Molecular e Patologia Veterinária da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Entre as pericardites, 86,7% foram classificadas como fibrinosas (104/120), 6,7% serosas (8/120), 2,5% (3/120) sero-fibrinosas e 4,2% (5/120) amostras não puderam ser classificadas. Foram diagnosticadas lesões de endocardite em somente 2,5% (3/120) dos corações. Quanto aos pulmões analisados, as alterações macroscópicas mais encontradas foram 66,6% (80/120) aderências de pleura direita e/ou esquerda, 19,1% (23/120) hepatizações dos lobos apicais direito e 5,83% (7/120) do esquerdo, 23,33% (28/120) do lobo cardíaco direito e 23,33% (28/120) do esquerdo. Pela análise histopatológica do coração, a lesão mais frequente foi presença de tecido de granulação denso fibroso e em algumas amostras tecidos de granulação frouxo, com proliferação de vasos em ambos os casos. Havia presença de fibrina e células inflamatórias mononucleares em alguns casos. Na análise dos pulmões correspondentes, 70% (84/120) das amostras de pulmões apresentavam algum tipo de lesão aparente. As lesões mais comuns foram pleurite crônica, hiperplasia das células do tecido linfóide associado aos brônquios (BALT), presença de macrófagos alveolares e broncopneumonia purulenta. Não foram observadas lesões microscópicas em 23,3% (28/120) dos pulmões e 6,6% (8/120) não foram coletados para análise devido a cronicidade da lesão. A análise da carcaça mostrou pleurite parietal em 12,5% (15/120) e algum tipo de envolvimento articular em 1,6 % (2/120) dos animais, não sendo objetivo avaliar o tipo de lesão e sim uma possível correlação com Haemophilus parasuis. Das análises bacteriológicas dos corações, obteve-se um maior número de isolados de Pasteurella multocida 16% (20/120), seguido de Streptococcus spp. 17,3% (6 /120) e 5% (6/120) Haemophilus parasuis. A maior parte dos isolados foi obtida das pericardites fibrinosas. Com relação aos pulmões correspondentes, foram isolados 17,5% (22/120) Pasteurella multocida, 51.57% (8/120) Streptococcus spp., e 0,8% (1/120) Haemophilus parasuis. Entre os isolados de P. multocida foi realizada a tipificação capsular das cepas identificadas no pulmão e coração através da PCR e todas pertenciam ao tipo A. Na técnica da PCR no coração pode-se observar um grande número de M. hyopneumoniae 34,8% (39/112), seguido de A. pleuropneumoniae 23,2% (26/112), H. parasuis 6,2% (7/112), P. multocida tipo A 3,5% (4 /112) e M. hyorhinis 2,6% (3/112). A mesma técnica aplicada aos pulmões correspondentes, revelou M. hyopneumoniae 81,2% (91 /112), H. parasuis 36,6 % (41 /112), A. pleuropneumoniae 33,9% (38/112), P. multocida tipo A 30,3% (34/112), M. hyorhinis 9.8% (11/112). / The present work assessed hearts with pericarditis and the corresponding lungs through visual analysis of gross lesions, bacteriology, histopathology and polymerase chain reaction (PCR) to identify agents involved in the processes and to correlate them with the lesions. The study was carried out in four slaughterhouses from the state of Rio Grande do Sul, Brazil, with the help of the Service of Federal Inspection (SIF) during the period of February to October, 2010. Samples of 120 hearts with pericarditis and corresponding lungs were collected and examined, and 3.487 carcasses were assessed in the slaughter line in 20 different batches, in a total of 8 sample collections. Materials were examined in the laboratories of Microbiology, Molecular Biology and Pathology of the Faculdade de Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Brazil. Among the samples with pericarditis, 104 were classified as fibrinous (86.7%), 8 serous (6.7%), 3 sero-fibrinous (2.5%) and 5 remained unclassified (4.2%). Lesions of endocarditis were present in 3 hearts (2.5%). Regarding lungs, the commonest gross changes were 80 pleural adhesions (66.6%) and 23 consolidations of the right apical lobes of the lung (19.1%) and 7 (5,83%) of the left; 28 (23,33%) from right cardiac lobe and 28 (23,33%) of left. Using histopathological analysis of the heart, the most frequent lesions were the presence of dense fibrous granulomatous tissue and, in some samples, loose granulation tissue, with of vessels proliferation in both cases. It was also found fibrin and inflammatory mononuclear cells in some cases. In the analysis of the corresponding lungs, 84 (70%) of the samples showed some type of apparent lesion. Te most prevalent lesions were chronic pleuritis, hyperplasia of lymphoid tissue cells associated to bronchia (BALT), presence of lung macrophages and purulent bronchopneumonia. Twenty eight lungs (23.3%) did not show any microscopic lesion and 8 (6.6%) were not collected because of the chronicity of the lesion. The analysis of the carcass showed parietal pleurisy in 15 (12.5 %) and joint involvement in 2 (1.6 %), but the present study did not intend to assess such lesions but a possible correlation with Haemophilus parasuis infection. Regarding bacteriological examination of the heart, Pasteurella multocida was the biggest isolation rate 16% (20/120), followed by Streptococcus spp 17.3% (6 /120) and 5% (6/120) Haemophilus parasuis. Most isolates were obtained from fibrinous pericarditis. Regarding the corresponding lungs, Pasteurella multocida was isolated in 17.5% (22/120) materials, Streptococcus spp in 51.57% (8/120), and Haemophilus parasuis in 0.8% (1/120). Pasteurella multocida capsular typing was carried out from strains identified through PCR from heart and lungs, all belonged to the serotype A. By PCR from samples from pericarditis a large number of M. hyopneumoniae was detected: 34. 8% (39/112), followed by APP 23.2% (26/112), H. parasuis 6.2% (7/112), P. multocida type A 3.5% (4 /112) and M. hyorhinis 2.6% (3/112). The same technique applied to the corresponding lungs, showed M. hyopneumoniae in 81.2% (91 /112), H. parasuis in 36.6 % (41 /112), APP in 33.9% (38/112), P. multocida type A in 30.3% (34/112) and M. hyorhinis in 9.8% (11/112).