A esquistossomose mansoni é uma das principais doenças parasitárias no mundo e é conhecida por ser endêmica em aproximadamente 54 países nos continentes americano e africano. No Brasil o número de pessoas infectadas é estimado em 7 milhões. Em suas diversas formas clínicas, a esquistossomose mansoni assemelha-se a muitas outras doenças; portanto, essa inespecificidade e a variação nos sintomas dificultam o seu diagnóstico apenas pelo exame clínico do paciente. A doença é diagnosticada por métodos parasitológicos de fezes. A técnica de Kato/Katz é o procedimento internacionalmente recomendado pela Organização Mundial da Saúde (OMS) para o diagnóstico do Schistosoma mansoni, porque associa baixo custo à facilidade de execução. Atualmente, estão disponíveis Kits comerciais, a fim de minimizar as dificuldades de operacionalização e melhorar a sensibilidade do diagnóstico parasitológico, principalmente em áreas de baixa endemicidade. Este estudo avaliou comparativamente a efetividade de quatro técnicas parasitológicas de fezes em diagnosticar casos de esquistossomose mansoni. As amostras fecais foram examinadas pelas técnicas Kato/Katz, Sedimentação espontânea e pelos Kits Midi Parasep® e Paratest®. Foi coletada 1 amostra de cada indivíduo e para cada amostra foram preparadas 2 lâminas das quatro metodologias. Um total de 442 exames coproparasitológicos foram realizados em migrantes de áreas endêmicas para a esquistossomose, de três municípios sob jurisdição da Superintendência Regional de Saúde de Alfenas (SRS). A taxa de positividade da esquistossomose mansoni detectada pela técnica Kato/Katz foi de 1,8%. Pela técnica de Sedimentação espontânea e pelo Kit Paratest® foi detectada uma positividade de 0,45%. Pelo Kit Midi Parasep® a positividade foi de 0,23%. A menor efetividade da técnica de sedimentação espontânea e dos Kits Midi Parasep® e Paratest® pode ser comprovada pelo baixo grau de concordância diagnóstica com o exame referência (técnica Kato/Katz). As técnicas Kato/Katz e sedimentação espontânea apresentam os menores custos para realizar o exame de fezes, cerca de R$ 0,82/exame e R$ 0,48/exame, respectivamente. Entretanto, são as que apresentam o maior grau de exposição do analista à amostra biológica. Os Kits Midi Parasep® e Paratest® apresentam o menor grau de exposição à amostra fecal, mas são relativamente mais caros para realização do exame de fezes, cerca de R$ 3,10/exame e R$ 1,65/exame, respectivamente. Com relação as parasitoses intestinais, pelo “Padrão Ouro”, foram encontrados 97 (21,9%) indivíduos parasitados. As taxas de positividade das parasitoses intestinais detectadas pelas técnicas Kato/Katz, sedimentação espontânea, Midi Parasep® e Paratest®, foram respectivamente, 5,2%, 19,5%, 17,6% e 18,3%. Os resultados mostraram que a técnica de Kato/Katz apresentou melhor desempenho dos quatro testes no diagnóstico da esquistossomose mansoni. Assim, a vigilância epidemiológica através do exame censitário de todos os migrantes pela técnica Kato/Katz, deve ser implementada com o propósito de impedir o estabelecimento da transmissão da esquistossomose. / Schistosomiasis mansoni is a major parasitic disease in the world and is known to be endemic in about 54 countries in the American and African continents. In Brazil the number of infected is estimated at 7 million. In different clinical forms, schistosomiasis mansoni resembles many other diseases. So this lack of specificity and symptoms variety hinder its diagnosis only by clinical examination. The disease is diagnosed using stool examinations. The Kato/Katz technique is the procedure recommended by the World Health Organization (WHO) for the diagnosis of Schistosoma mansoni, because it associates low cost and easy execution. Currently, there are commercial Kits available, in order to minimize the operational difficulties and improve the sensitivity of parasitological diagnosis, especially in areas of low endemicity. This study comparatively evaluated the effectivity of four stool parasitological techniques in diagnosing cases of schistosomiasis. Stool samples were examined by the Kato/katz and spontaneous sedimentation techniques, Midi Parasep® and Paratest® kits. One sample was collected from each individual and for each sample were prepared two slides of the four methods. A total of 442 coproparasitological exams were accomplished with migrants from endemic areas for schistosomiasis, of three cities under Health Superintendence Office of Alfenas (HSO) jurisdiction. The positivity rate of Kato/Katz technique for schistosomiasis was 1,8%. The positivity rate schistosomiasis by the spontaneous sedimentation technique and Paratest® was of 0,45%. By Midi Parasep® Kit the positivity rate was of 0,23%. The lower effectivity of spontaneous sedimentation and Midi Parasep® and Paratest® can be demonstrated by low agreement diagnostic with the reference examination (Kato/Katz). Kato/Katz and spontaneous sedimentation techniques showed low cost for the exam stool, about R$ 0,82 per exam and R$ 0,48 per exam, respectively. However, are those with greatest degree of exposure of the expert to biological samples. Midi Parasep® and Paratest® Kits showed the lowest degree of exposure to fecal sample, but are relatively more expensive for perform the fecal exam, about R$ 3,10 per exam and R$ 1,65 per exam, respectively. Regarding intestinal parasites, by the "gold standard" were found 97 (21,9%) individuals parasitized. The positivity rates of intestinal parasitosis detected by the Kato/Katz, spontaneous sedimentation, Midi Parasep® and Paratest®, were respectively, 5,2%, 19,5%, 17,6% e 18,3%. The results showed that the Kato/Katz technique presented best of performance diagnosising of schistosomiasis mansoni. Thus, epidemiological surveillance should implement the Kato/Katz technique in order to prevent the establishment of transmission of schistosomiasis. / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Infection with the helminth parasite Schistosoma mansoni leads to chronic inflammation and Th2 mediated fibrosis, which result in severe pathology characterised by hepatosplenomegaly. Dendritic cells (DCs) are adept initiators of CD4+ T cell responses, but their fundamental importance in this regard in Th2 settings remains to be demonstrated. Indeed, the role of DCs at different stages of infection with S. mansoni is also yet to be determined. In addition, the importance of the interaction of DCs with tissue factors in the tissue microenvironment on the development of Th2 response to S. mansoni antigens is an area of active research and debate. This thesis is comprises of four studies. The first study tackles the involvement and importance of DCs in the induction and development of Th2 responses against S. mansoni using CD11c–diphtheria toxin receptor mice to deplete CD11c+ cells during the priming stage of the CD4+ Th2 response against S. mansoni. Diphtheria toxin treatment significantly depleted CD11c+ DCs from all tissues tested, with 70-80% efficacy. Even this incomplete depletion resulted in dramatically impaired CD4+ T cell production of Th2 cytokines, altering the balance of the immune response and causing a shift towards IFN-γ production. In contrast, basophil depletion using Mar-1 antibody had no measurable effect on Th2 induction in this system. These data underline the vital role that CD11c+ antigen presenting cells can play in orchestrating Th2 development against helminth infection in vivo, a response that is ordinarily balanced so as to prevent the potentially damaging production of inflammatory cytokines. The second study addresses whether the exposure of DCs to the cercarial stage of the parasite is critical for either parasite survival or the subsequent development of the Th2 immune response against later stages of infection. It was found that CD11c depletion prior to infection resulted in increased parasite survival, but did not impair the development of CD4+ T cell Th2 response later in infection. The third study asked whether DCs continue to be necessary for the maintenance of the chronic immune response during infection with S. mansoni. In contrast, depletion of CD11c+ cells during the initiation (4 to 6 weeks) or maintenance (6 to 8 weeks or 12 to 14 weeks) of Th2 response to eggs, resulted in severely impaired Th2 cytokine production. Interestingly, depletion during the later stages of infection led to dramatic weight loss and mortality, coincident with impaired CD4+ T cell responses. These data suggest that CD11c+ antigen presenting cells, in addition to being important in the early priming phase, also play a vital role in the maintenance and homeostasis of chronic CD4+ T cell responses in a Th2 infection setting, the disruption of which can have lethal consequences. The final study in this thesis aimed to establish whether the tissue factor thymic stromal lymphopoietin (TSLP) is able to enhance or modulate the Th2 responses initiated by DCs stimulated with SEA. Contrary to previous studies, it was found that BMDCs do not become phenotypically activated by TSLP, in particular, they do not up-regulate the costimulatory molecule OX40L, nor does TSLP suppress the production of IL-12p40 or IL-12p70 in response to LPS or CpG. Further, exposure to TSLP had no impact on DC cytokine production or survival. Irrespective of this unaltered profile in vitro, TSLP exposed DCs transferred in vivo induced the production of significantly more Th1 and Th2 cytokines from polyclonally restimulated splenocytes than DCs exposed to medium alone. In addition to this, TSLP altered the kinetic of the immune response induced by DCs stimulated with the soluble egg antigen (SEA) of S. mansoni. This was characterised by the antigen specific production of T cell cytokines starting more rapidly than with non-TSLP treated control DCs. The alteration in the kinetics of the immune response was not restricted to Th2 antigens and was also seen to some extent in Propionibacterium acnes stimulated DCs. This suggests a possible role for TSLP in either inducing faster DC migration or greater production of T cell chemoattractants and thus, enhancing the rate of DC interaction with T cells.

Schistosoma mansoni is a member of a genus of platyhelminths whose members cause the disease schistosomiasis. Particularly prevalent in sub-Saharan Africa, it is thought to be directly responsible for approximately 5500 deaths per year, as well as contributing significantly to morbidity, being responsible for 3.3 million lost disability-adjusted life years. Schistosomes are dioecious and male and female worms find one another and pair in the blood vessels of the host's liver. This sets in motion a unique feature of schistosome biology, the pairing-dependent sexual maturation of the female worms. Over the course of the next three weeks, the females fully develop their reproductive organs, especially ovaries and vitellarian tissue, to allow for the production of large quantities of eggs, which not only play a crucial role in the transmission of the parasites but are also responsible for much of the pathology associated with schistosomiasis. This thesis aims to explore the changes in gene expression which take place following pairing and result in the sexual maturation of females. To do so, RNA-Seq data was produced from male and female worms from mixed sex as well as single sex infections at 18, 21, 28, 35, 38 and 49 days post infection and analysed to understand when and how gene expression changes in paired worms. Then gene expression was examined in worms that had been removed from their partner to examine the process of regression, where female worms lose much of their reproductive tissue. The last experiments describe examine gene expression in the testes and ovaries of schistosomes, to reveal differences between the gonads of worms from mixed and single sex infections and understand in more detail how these worms may regulate the growth of their reproductive organs, contributing to our knowledge of schistosome biology.

A esquistossomose é incidente em países tropicais e subtropicais e o uso de moluscicidas é adequado para prevenir a infecção de pessoas. O objetivo deste estudo foi buscar compostos em Piper ativos em Biomphalaria glabrata e avaliar a atividade esquistossomicida e toxicidade do composto mais ativo. O fracionamento biomonitorado de Piper diospyrifolium resultou no isolamento da flavocavaína A e ácido 4-hidroxi-3-[3,7,11-trimetildodeca-2,6,10-trienil]benzoico. A busca de compostos também foi realizada em amidas e chalconas e dos oito compostos avaliados, quatro foram ativos, sendo a piplartina mais ativa. A piplartina não foi letal a miracídios e cercárias de Schistosoma mansoni e foi tóxica em Daphnia similis e Danio rerio, contudo ainda foi menos tóxica que a niclosamida. Neste estudo, os compostos moluscicidas foram obtidos pelo fracionamento biomonitorado de P. diospyrifolium e pela avaliação da atividade de amidas e chalconas. Ambas as metodologias foram adequadas e a análise de componente principal mostrou ser uma ferramenta viável para a busca de compostos. / Schistosomiasis is a parasitic disease and the use of molluscicides has been considered an appropriate method to prevent human infection. The aim of this study was to search for compounds in Piper active in B. glabrata and evaluate schistosomicidal activity and toxicity of the most active compound. The P. diospyrifolium bioguided fractionation resulted in flavokavain A and 4-hydroxy-3-[3,7,trimetildodeca-11-2,6,10-trienil]benzoic acid isolation. The search for active compounds was carried out in amides and chalcones. Eight compounds were evaluated, four were active and piplartine was the most active. There was no mortality of miracidia and cercariae exposed to piplartine. It was classified as toxic to D. similis and D. rerio; nevertheless was less toxic than niclosamide. In this study, molluscicidal compounds were obtained from bioguided fractionation of P.diospyrifolium and by evaluating the activity of amides and chalcones. Both methods were suitable to obtain active compounds and principal component analysis also proved to be a viable tool for obtain compounds.

Thesis (M. S. in Chemistry)--Vanderbilt University, Dec. 2009. / Title from title screen. Includes bibliographical references.

A G protein-coupled receptor with structural characteristics of a biogenic amine GPCR was cloned from Schistosoma mansoni (SmGPCR). SmGPCR was codon-optimized and double-tagged with FLAG and His epitopes at the N- and C-terminal ends, respectively. Immunofluorescence experiments targeting these epitopes revealed that the expression of codon-optimized SmGPCR was highly increased compared to wild-type in mammalian cells. These studies also demonstrated that SmGPCR has a typical GPCR topology, the N-terminus being extracellular and C-terminus intracellular. Functional assays revealed that codon-optimized SmGPCR was responsive only to histamine, which caused a dose-dependent increase in intracellular Ca2+ (EC50 = 0.54 +/- 0.05 muM), but not cAMP, consistent with a Gq pathway of signal transduction. In vitro behavioral studies showed that treatment of S. mansoni cercaria with exogenous histamine caused a dose-dependent increase in the motility of the parasite.

Tübingen, Univ., Diss., 2003.

Thesis (Ph.D.) - University of Queensland, 2005. / Includes bibliography.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-08-12T17:32:30Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Luciana Santos Cardoso.pdf: 5958883 bytes, checksum: 032370973ff19d5545228b830334d728 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-12T17:32:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Luciana Santos Cardoso.pdf: 5958883 bytes, checksum: 032370973ff19d5545228b830334d728 (MD5) / A prevalência das doenças alérgicas vem aumentando nas últimas três décadas, representando um grande problema de saúde pública. A infecção pelo Schistosoma mansoni tem sido associada com a proteção contra alergias. Os mecanismos envolvidos nesta associação incluem a produção de células e citocinas regulatórias. Objetivo: Avaliar a resposta imune induzida pelos antígenos do S. mansoni Sm22.6, PIII e Sm29 in vitro em células de indivíduos asmáticos e em modelo experimental de asma induzida por OVA. Métodos: Células mononucleares de sangue periférico (CMSP) de indivíduos asmáticos não infectados foram estimuladas in vitro com Sm22.6, PIII e Sm29 para caracterizar o perfil de citocinas induzido por estes antígenos. A frequência de células produtoras de IL-10 e a habilidade destes antígenos em modularem a resposta do tipo Th2 alérgeno-específica foram também avaliadas. As citocinas foram mensuradas em sobrenadantes pela técnica de ELISA e os fenótipos das células produtoras de IL-10 foram determinados usando citometria de fluxo. Para o estudo experimental, foi utilizado o modelo de asma induzido por ovalbumina (OVA). Os camundongos receberam três doses dos diferentes antígenos do S. mansoni. A histopatologia e a atividade da peroxidase eosinofílica do pulmão foram avaliadas, assim como a celularidade no lavado brônquio-alveolar (BAL) e os níveis séricos de IgE e de citocinas no BAL. Adicionalmente, foi avaliada a frequência de células TCD4+ expressando Foxp3+ e IL-10+ em culturas estimuladas com OVA. Resultados: Foi observado uma alta produção de IL-10 por células de indivíduos asmáticos não infectados em resposta aos antígenos Sm22.6, PIII e Sm29 (451 ± 350 pg/mL, 364 ± 289 pg/mL e 712 ± 368 pg/mL, respectivamente), comparados às culturas não estimuladas. Não houve diferença significativa nos níveis de IFN-g, IL-5 e IL-13 após estímulo com os diferentes antígenos. As células CD4+CD25+ e CD14+ foram as principais fontes de IL-10 nas culturas estimuladas com os antígenos do S. mansoni. Além disso, a adição destes antígenos às culturas estimuladas com Der p1 levou a um aumento significativo nos níveis de IL-10 (p<0,0001 para todos os antígenos) e redução nos níveis de IL-5 (p<0,05 para culturas estimuladas com Der p1 e Sm22.6 ou Sm29, comparadas com Der p1 apenas). No modelo murino de asma a imunização com Sm22.6, PIII e Sm29 levou a uma redução no número de células totais e eosinófilos no BAL e nos níveis de IgE específica para OVA, comparados aos camundongos não imunizados. Adicionalmente, os níveis de IL-4 e IL-5 no BAL dos camundongos imunizados com PIII e Sm22.6 foram diminuídos, enquanto que os níveis de IL-10 foram maiores em camundongos imunizados com Sm22.6. A frequência de células TCD4+Foxp3+ foi maior no grupo de camundongos que receberam Sm22.6, Sm29 e PIII, sendo a freqüência de células TCD4+IL-10+ elevada apenas em camundongos imunizados com Sm22.6. Conclusão: Os antígenos do S. mansoni Sm22.6, PIII e Sm29 possuem a habilidade para modular os mediadores inflamatórios alérgicos in vitro por CMSP de indivíduos asmáticos e em modelo murino de asma. Estes antígenos podem representar futuras estratégias para prevenir doenças alérgicas.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-07-12T19:23:22Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Joanemile Figueiredo.pdf: 10179633 bytes, checksum: 58c4b5620c6ef7bea0cc319ebb0cccb3 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-12T19:23:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Joanemile Figueiredo.pdf: 10179633 bytes, checksum: 58c4b5620c6ef7bea0cc319ebb0cccb3 (MD5) / esquistossomose é uma doença de grande impacto na saúde pública dos países em desenvolvimento. As principais ações de controle da transmissão da doença são através da educação, melhorias no saneamento e campanhas de tratamento em massa. O desenvolvimento de vacina representa uma importante estratégia para o controle da mesma, entretanto, ainda não foi desenvolvida vacina que confira proteção adequada contra a infecção humana. Por outro lado, há evidências que infecções crônicas parasitárias, especialmente pelo S. mansoni, protegem contra as alergias. Com o objetivo de esclarecer o papel da IgE e IgG4 na indução de resistência/susceptibilidade à infecção pelo Schistosoma mansoni e no risco de desenvolvimento de asma foi avaliado, em uma grande casuística, indivíduos de área endêmica em esquistossomose do interior da Bahia. Foi observado que a razão entre IgE/IgG4 para antígeno solúvel de verme adulto do S. mansoni (SWAP) foi maior nos indivíduos não infectados ou com baixas cargas, quando comparado aos indivíduos altamente infectados. A carga parasitária de S. mansoni foi positivamente correlacionada com os níveis de IgE total, de IgG4 específico para SWAP e para o antígeno solúvel do ovo do S. mansoni (SEA). Os valores dos anticorpos e a razão entre eles, não interferiram, entretanto, no risco de reinfecção seis meses após o tratamento da parasitose. Adicionalmente, os indivíduos não infectados pelo S. mansoni, apresentaram níveis mais elevados de IgE específico e da razão IgE/IgG4 para antígeno 1 do Dermatophagoides pteronyssinus (Der p1), quando comparado aos infectados, enquanto que não foi observado diferença significativa nos níveis de IgG4 específico entre os dois grupos. Essas diferenças, no entanto, não foram observadas quando as análises foram ajustados para idade, gênero e grau de exposição à água contaminada. Estes resultados ressaltam o papel fundamental da IgG4 específica para antígenos do S. mansoni e da relação IgE/IgG4 na resistência/susceptibilidade à infecção por este helminto. Por outro lado, é possível que a infecção pelo S. mansoni proteja contra o desenvolvimento da asma, modulando negativamente a produção de anticorpos que participam da resposta inflamatória alérgica. O melhor entendimento do papel da resposta imune humoral na resistência à infecção pelo S. mansoni e no controle da asma pode auxiliar no desenvolvimento de novas estratégias de controle destas doenças. / Salvador