CAPES, CNPq, Fundação Araucária / Artemisia annua L. é uma planta herbácea, anual, originária da China e aclimatada ao Brasil, que produz artemisinina, uma lactona sesquiterpênica utilizada no tratamento da malária. A espécie é a única fonte economicamente viável dessa molécula. Também, é uma espécie altamente aromática e produz grande quantidade de óleo essencial, rico em terpenos. Este trabalho tem como objetivo determinar a influência de moléculas eliciadoras e de níveis de adubação NPK na produção de biomassa, artemisinina e composição do óleo essencial na variedade Artemis de A. annua, produzida em campo na cidade de Pato Branco-PR. Um experimento com adubação foi conduzido em campo durante os anos de 2008 e 2009, onde plantas de A. annua foram submetidas a níveis crescentes de adubação química NPK em um solo de média fertilidade. A partir da dose padrão de adubação (N: 160 kg ha-1; P2O5: 175 Kg ha-1; K2O: 90 Kg ha-1) foram definidos os tratamentos meia dose, uma dose e duas doses, além do tratamento controle, nas formulações Uréia, Super Fosfato Simples e Cloreto de Potássio. Outro experimento com eliciação foi conduzido, onde plantas de A. annua foram submetidas a eliciação com acibenzolar-S-metílico e dois produtos a base de proteína harpina, por meio de três pulverizações semanais, desde o início do período de indução floral até uma semana antes da colheita. Em ambos os experimentos, o material foi seco e separado, a quantificação de artemisinina foi realizada por cromatografia em camada delegada com detecção por densitometria. O perfil químico do óleo foi determinado por cromatografia a gás. No experimento com adubação as massas secas de caule, parte aérea e relação folha caule tiveram ajuste para equação linear, com os melhores resultados para o tratamento duas vezes a dose: 10,43 t ha-1, 14,21 t ha-1, respectivamente para massas secas de caule e parte aérea, e maior relação folha/caule (0,4) para tratamento testemunha. A variável massa seca de folhas obteve ajuste para equação de segundo grau, com máxima eficiência técnica em 1,57 doses e rendimento estimado de 3,87 t ha-1. A influência das doses de adubação NPK sobre teor de artemisinina (média 5,98 kg t-1) e produtividade de artemisinina (média 19,45 kg ha-1) não apresentou ajustes significativos para reta. Foram identificados 28 componentes no perfil químico óleo essencial que compreendem 94,96% do óleo essencial. As substâncias majoritárias foram cânfora (44,75%), 1,8 cineol (7,90%), γ-muuroleno (6,75%), trans-β-farneseno (6,51%) e mirceno (5,74%). Sete componentes do óleo essencial apresentaram variação em função dos níveis de adubação NPK: p-cimeno, canfeno, trans-β-terpineol, α-pineno, viridifloreno, acetato de mirtenila e β-pineno. O conteúdo relativo desses componentes variou de 0,53 a 2,23%, representando aproximadamente 8% do perfil do óleo essencial. A classe predominante foi monoterpenos (72%). No experimento com eliciação, os eliciadores acibenzolar-S-metílico e proteína harpina não resultaram em alterações significativas nas biomassas de folhas, caule, parte aérea e na relação folha/caule de A. annua; como também não apresentaram diferenças nos teores e rendimento de artemisinina e óleo essencial, No perfil químico foram identificados 31 componentes, que compreendem 91,5% do óleo essencial. Os tratamentos com os eliciadores acibenzilar-S-metílico e harpina não resultaram em diferenças significativas para nenhuma das substâncias identificadas e quantificadas. Os componentes majoritários foram cânfora (43,38%), 1,8 cineol (9,28%), mirceno (7,69%) γ-muuroleno (5,00%), canfeno (4,54%) e trans-β-farneseno (3,98%). Os monoterpenos foram a classe predominante no óleo essencial (79,8%). / Artemisia annua L. is an herbaceous annual plant, originally from China and acclimatized to Brazil, which produces artemisinin, a sesquiterpene lactone used in the treatment of malaria. The species is the only economically viable source of this molecule. Also, it is a highly aromatical species and it produces great amount of essential oil, rich in terpenes. This work has as objective to determine the influence of elicitor molecules and levels of NPK fertilizer in the biomass production, artemisinina and composition of the essential oil in the variety of Artemis A. annua, produced in the field in the town of Pato Branco. An experiment with fertilization was conducted in the field during the years of 2008 and 2009, where plants of A. annua were submitted to increasing levels of NPK chemical fertilizer in a ground of average fertility. From the standard dose of fertilizer (N: 160 kg ha-1; P2O5: 175 kg ha-1; K2O: 90 kg ha-1) it was defined the half dose treatments, one dose and two doses, beyond the control treatment, in the formulations Urea, Super Simple Phosphate and Potassium Chloride. Another experiment with eliciation was lead, where plants of A. annua were submitted to the elciation with acibenzolar-S-methylic and two products harpin-protein based, by means of three weekly sprayings, since the beginning of the floral induction period up to one week before the harvest. In both experiments, the material was dried and separated, the quantification of artemisinin was carried through by thin layer chromatography with detection by densitometry. The chemical profile of the oil was determined by gas chromatography. In the fertilization experiment the dry masses of stalk, aerial part and the relation stalk-leaf had an adjustment for a linear equation, with the best results for the treatment two times the dose: 10,43 t ha-1, 14.21 t ha-1, respectively for dry masses of stalk and aerial part, and greater relation stalk-leaf (0,4) for test treatment. The variable leaf dry mass got an adjustment for second degree equation, with maximum efficiency technique in 1,57 doses and estimated yeld of 3,87 t ha-1. The influence of NPK fertilizer doses on the artemisinin content (average 5,98 kg t-1) and the artemisinin productivity (average 19,45 kg ha-1) did not present significant adjustments for straight line. Twenty-eight components were identified in the essential oil chemical profile that comprise 94.96%. The majoritarian substances were camphor (44.75%), 1,8 cineole (7.90%), γ-muurolene (6.75%), trans-β-farnesene (6.51%), mircene (5.74%). Seven components of the essential oil showed variation in function of NPK fertilizer levels: p-cymene, camphene, trans-β-terpineol, α-pinene, viridifloreno, acetate of mirtenila and β-pinene, the relative content of these components varied from 0,53 to 2.23% representing about 8% of the essential oil profile. The predominant class was of monoterpenes (72%). In the experiment with eliciation, the elicitors acibenzolar-S-methylic and harpin protein did not result in significant alterations in the leaf, stalk, aerial part biomasses and in the relation stalk-leaf of A. annua; as well as they did not show differences in the artemisinin and essential oil contents and yeld. In the chemical profile 31 components were identified, which comprise 91.5% of the essential oil. The treatments with the elicitors acibenzilar-S-methylic and harpin did not result in significant differences for any of the identified and quantified substances. The majoritarian components were camphor (43.38%), 1,8 cineole (9.28%), mircene (7.69%) γ-muurolene (5.00%), camphene (4.54%) trans-β-farnesene (3.98%). Monoterpenes were the predominant class in the essential oil (79.8%).

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Departamento de Medicina Tropical, 2015. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2016-03-30T16:21:09Z No. of bitstreams: 1 2015_MariangelaSouzadeOliveira_Parcial.pdf: 154636 bytes, checksum: 2de4164ec3f2f6e7899cf1f8a79d757b (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-04-01T15:09:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_MariangelaSouzadeOliveira_Parcial.pdf: 154636 bytes, checksum: 2de4164ec3f2f6e7899cf1f8a79d757b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-01T15:09:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_MariangelaSouzadeOliveira_Parcial.pdf: 154636 bytes, checksum: 2de4164ec3f2f6e7899cf1f8a79d757b (MD5) / Introdução: O tratamento precoce e eficiente com drogas antimaláricas é a medida mais importante para o controle da malária e para prevenção das formas graves da doença. A cloroquina e a primaquina são os medicamentos de escolha para o tratamento da infecção pelo P. vivax e o sulfato de quinina é a opção para gestantes com malária no primeiro trimestre da gravidez e em crianças menores de seis meses pelo P. falciparum. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência dessas sobre a capacidade fagocitária, expressão de Corpúsculo lipidico(CL) e produção de NO e H2O2 pelos monócitos humanos de indivíduos saudáveis para eritrócitos infectados (EI) com P. falciparum. Metodologia: Teste de fagocitose e quantificação de CL pelos receptores para opsoninas (rOps) e pelos receptores para padrões moleculares de patógeno (rPMP). A produção do NO foi avaliada nos sobrenadantes das culturas dos monócitos pela reação de Griess e a produção de H2O2 foi determinada pela oxidação do vermelho de fenol na presença de peroxidase. Resultados: A cloroquina deprimiu o IF dos monócitos pelos rOps, em todas as situações analisadas (p<0,05), tanto pelo tratamento dos monócitos e dos EI (9,4 para 7,8), quanto dos monócitos (9,4 para 6,3) ou EI (9,4 para 6,3) isoladamente. Para a primaquina, apenas o tratamento dos monócitos e dos EI deprimiu significantemente o IF (9,4 para 3,4, p=0,03) pelos rOps. Resultado semelhante foi observado quando testado pelos rPMP. Para o sulfato de quinina, houve aumento no número de parasitos ingeridos pelos rPMP (1 para 5,6, p=0,01), entretanto, esse aumento foi contrabalanceado pela diminuição na proporção de monócitos fagocitando (9,9 para 5,4, p=0,06), o que resultou na diminuição no IF (9,9 para 5,1, p=0,08), quando os monócitos e os eritrócitos foram tratados. Quando analisamos a influência das drogas sobre a expressão dos CL houve a diminuição quando os monócitos foram estimulados com EI pelo rPMP (p< 0,01), devido à menor proporção de monócitos expressando CL. NO estimulo pelos rOps não houve mudança significativa na expressão dos CL. Quando os monócitos foram incubados com os EI pelo P. falciparum, houve aumento da produção de H2O2 (p=0,009). O estímulo com os EI não modificou a produção do NO pelos monócitos, e nenhuma droga alterou essa produção (p>0,05). Conclusão: as drogas podem ter um efeito imunomodulador sobre as funções dos monócitos que se somam aos seus efeitos antiparasitários no tratamento da malária por esses fármacos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: Early and effective treatment with antimalarial drugs is the most important measure for malaria control and prevention of severe forms of the disease. Chloroquine and primaquine are the drugs of choice for the treatment of infection with P. vivax and quinine sulfate is the option for pregnant women with malaria in the first trimester of pregnancy and in children under six months by P. falciparum children. The aim of this study was to evaluate the influence of these on the phagocytic capacity, lipid bodies expression (LB) and production of NO and H2O2 by human monocytes of healthy individuals to infected erythrocytes (IE) with P. falciparum. Methodology: phagocytosis test and quantification of LB by receivers to opsonins (rOps) and the receptors for molecular patterns of pathogen (rPAMP). The production of NO was measured in the supernatants of the cultures of monocytes by Griess reaction and the production of H2O2 was determined by the phenol red rust in the presence of peroxidase. Results: Chloroquine depressed by the FI monocytes rOps, in all cases analyzed (p <0.05) for both the treatment of monocytes and IE (9.4 to 7.8), and monocytes (9.4 to 6.3) or IE (9.4 to 6.3) alone. For primaquine, only the monocytes and treatment of IE significantly depressed IF (9.4 to 3.4, p = 0.03) by the rOps. A similar result was observed when tested by rPAMP. For quinine sulfate, an increase in the number of parasites ingested by rPAMP (1 to 5.6, p = 0.01), however, this increase was counterbalanced by a decrease in the proportion of monocytes phagocytosing (9.9 to 5.4 , p = 0.06), which resulted in a decrease in the IF (9.9 to 5.1, p = 0.08) when the monocytes were treated and red blood cells. When we analyze the influence of drugs on the expression of LB was decreased when the monocytes were stimulated by IE rPAMP (p <0.01) due to the lower proportion of monocytes expressing LB. NO stimulus by rOps there was no significant change in the expression of LB. When monocytes were incubated with IE by P. falciparum, there was increased production of H2O2 (p = 0.009). The stimulus to the IE did not modify NO production by monocytes, and no drug has changed this production (p> 0.05). Conclusion: the drugs may have an immunomodulatory effect on the functions of monocytes that add to their antiparasitic effects in the treatment of malaria by these drugs.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Medicina Tropical, 2011. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-10-05T15:26:53Z No. of bitstreams: 1 2011_HendaAlinedaRosaeVasconcelos.pdf: 1304515 bytes, checksum: 3f6d70cefce2d2002f2bd3259c15a92f (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-10-14T12:08:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_HendaAlinedaRosaeVasconcelos.pdf: 1304515 bytes, checksum: 3f6d70cefce2d2002f2bd3259c15a92f (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-14T12:08:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_HendaAlinedaRosaeVasconcelos.pdf: 1304515 bytes, checksum: 3f6d70cefce2d2002f2bd3259c15a92f (MD5) / A malária é uma doença que acomete o homem desde a pré-história, com o quadro clínico extremamente complexo e pleotrófico que varia desde formas assintomáticas até diferentes manifestações clínicas da malária grave, como a anemia e malária cerebral. As formas graves são decorrentes, provavelmente, da hiperativação do sistema imunitário, com liberação aumentada de radicais de oxigênio e nitrogênio. Diferentes aproximações têm sido tentadas para modular a hiperatividade do sistema imunitário, incluindo o uso de drogas com ação sobre o sistema imunitário, como a talidomida. A talidomida é um composto imunomodulador que age diminuindo a produção de fator de necrose tumoral. Tem sido sugerido que a associação da talidomida com drogas antiparasitárias poderia diminuir as altas taxas de mortalidade da malária, pois foi demonstrado que o uso da talidomida em camundongos CBA e BALB/c infectados com o Plasmodium berghei Anka apresentaram maior produção de óxido nítrico e peróxido de hidrogênio paralelamente ao aumento a sobrevida. O alvo deste trabalho foi verificar a influência da talidomida sobre a parasitemia e sobre a produção dos radicais livres, óxido nítrico e peróxido de hidrogênio, em modelos animais susceptíveis ou não à malária cerebral. Camundongos BALB/c, C57BL/6 e CBA foram infectados com 106 eritrócitos parasitados com P. berghei ANKA e tratados ou não com talidomida 150mg/Kg/dia, por via oral, a partir do segundo ao oitavo dia de infecção. Outros dois grupos não infectados foram tratados da mesma forma com talidomida e cloreto de sódio 0,9%, respectivamente. No oitavo dia do tratamento foi mensurada a produção do óxido nítrico através da reação de Griess, e a produção do peróxido de hidrogênio pela oxidação do vermelho de fenol na presença de peroxidase. Houve diferença na resposta de produção de óxido nítrico e peróxido de hidrogênio à infecção e ao tratamento com a talidomida nos três modelos experimentais estudados. Houve diferença de resposta também entre as duas linhagens susceptíveis à malária cerebral. Enquanto os camundongos C57BL/6 diminuíram a produção tanto do NO como do H2O2 após a infecção e o tratamento, os camundongos CBA apresentaram resposta antagônica, aumentando a produção destes radicais, enquanto que, os camundongos BALB/c tiveram uma produção mais estável de NO e H2O2. Os camundongos C57BL/6 quando infectados pelo P. berghei ANKA apresentaram os maiores níveis basais de óxido nítrico, em relação aos outros dois modelos, enquanto a menor produção foi pelos camundongos CBA. Os camundongos BALB/c mostraram uma produção basal de óxido nítrico e de peróxido de hidrogênio intermediária entre os outros dois modelos. Não houve diferença entre os três modelos animais na parasitemia feita no oitavo dia da infecção. Nossos dados sugerem que, independentemente dos camundongos CBA e C57BL/6 produzirem quantidade maior ou menor de radicais de nitrogênio e oxigênio, a resposta desequilibrada de produção destas moléculas, e não necessariamente a quantidade, esteja envolvida na evolução para forma cerebral. Não houve modificação da parasitemia em nenhum dos três modelos animais, sugerindo igualmente que outros fatores são necessários para a defesa antiparasitária, além destes dois mecanismos microbicidas. Os nossos dados contribuem para a melhor compreensão de que ocorrem respostas diferentes, tanto à infecção como ao tratamento com a talidomida, em modelos murinos infectados pelo Plasmodium berghei ANKA, dependentes da base genética do indivíduo. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Malaria is a disease that affects human beings since ancient times, it has an extremely complex and pleotropic clinical picture, ranging from asymptomatic to severe clinical manifestations, such as anemia and cerebral malaria. Severe forms are probably caused by hyperactivation of the immune system with increased releasing of oxygen and nitrogen radicals. Different approaches have been tried to modulate the hyperactivity of the immune system, including the use of drugs that act on the immune system, such as thalidomide. Thalidomide is an immunomodulatory compound that acts by decreasing the production of tumor necrosis factor. It has been suggested that the association of thalidomide with antiparasitic drugs could reduce the high mortality rates of malaria, it was shown that the use of thalidomide in mice CBA and BALB / c infected with Plasmodium berghei Anka produced more nitric oxide and hydrogen peroxide to increase survival. The aim of this study was to assess the influence of thalidomide on the parasitemia and the production of free radicals, nitric oxide and hydrogen peroxide in susceptible or non-susceptible murine models to cerebral malaria. BALB/c, C57BL/6 and CBA mice were or were not inoculated with 106 P. berghei ANKA infected-erythrocytes and treated or not with 150mg/Kg/dia thalidomide, per os, from the second to eighth day of infection. Two other non-infected groups were treated similarly with thalidomide and sodium chloride 0.9%, respectively. On the eighth day of treatment, nitric oxide production was measured by Griess reaction, and hydrogen peroxide production was assessed by the oxidation of phenol red in presence of peroxidase. Different nitric oxide and hydrogen peroxide production to infection and treatment with thalidomide among the three experimental models were observed. NO and H2O2 production were also different between the two strains susceptible to cerebral malaria. While C57BL/6 mice decreased the production of NO and H2O2 both to infection and treatment, CBA mice increased these value, whereas the BALB/c mice showed more homogeneous production of NO and H2O2. The P. berghei ANKA infected-C57BL/6 mice showed the highest basal levels production of nitric oxide. While the P. berghei ANKA infected-CBA mice had the lowest. The P. berghei ANKA infected-BALB/c mice showed an intermediate basal production of nitric oxide and hydrogen peroxide related to the two other murine models. There was no difference in parasitemia on the eighth day of infection among the three animal models. Our data suggest that regardless the level of production of nitric oxide and hydrogen peroxide production, CBA and C57BL/6 mice show cerebral involvement, suggesting that the unbalanced production of these molecules, and not necessarily the amount of it, are involved in the evolution of cerebral disease. There was no change in parasitemia in anyone of the three animal models. These facts also suggest that other factors are required for parasite defense, besides these two microbicidal mechanisms. Our data contribute to a better understaning of that the different responses that occur both to infection and treatment with thalidomide in Plasmodium berghei Anka mice infection depends on the background genetic of each individual.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2015. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-03-03T17:43:05Z No. of bitstreams: 1 2015_ShirleyClaudinoPereiraCouto.pdf: 2005336 bytes, checksum: 109e6489df275decec29166652ec4123 (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2017-03-31T16:30:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_ShirleyClaudinoPereiraCouto.pdf: 2005336 bytes, checksum: 109e6489df275decec29166652ec4123 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-31T16:30:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_ShirleyClaudinoPereiraCouto.pdf: 2005336 bytes, checksum: 109e6489df275decec29166652ec4123 (MD5) / A malária continua sendo um importante problema de saúde pública mundial acometendo milhões de pessoas principalmente nas regiões tropicais, e resulta em aproximadamente em 600 mil mortes por ano. As drogas antimaláricas influenciam indiretamente as respostas do sistema imunitário pela capacidade de diminuir a carga parasitária, diminuindo a quantidade de antígenos capazes de ativar o sistema imunitário. Entretanto, ainda está pouco esclarecida a ação das drogas antiplasmodiais sobre os mecanismos de defesa contra o plasmódio. A fagocitose encontra-se entre os principais mecanismos de eliminação do parasito, principalmente pela produção de radicais de oxigênio e nitrogênio pelos monócitos. A biogênese dos corpos lipídicos encontra-se aumentada na malária e pode estar envolvida na defesa e na fisiopatogenia da malária grave. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência do efeito imunomodulador do artemeter, lumefantrina e mefloquina na malária, pela avaliação da influência dessas drogas na fagocitose das formas eritrocitárias do plasmódio, na produção de óxido nítrico e peróxido de hidrogênio e na biogênese de corpos lipídicos. A influência do artemeter, da lumefantrina ou da mefloquina sobre a fagocitose por monócitos de indivíduos normais foia valiada in vitro utilizando 106 eritrócitos parasitados pelo Plasmodium falciparum, pelos receptores para padrões moleculares de patógenos (rPMP) e pelos receptores para opsoninas (rOps). Os monócitos e/ou os eritrócitos foram tratados previamente com as drogas por 60 min. O índice fagocitário foi determinado pela média de eritrócitos parasitados ingeridos por monócito multiplicado pela proporção de monócitos envolvidos na fagocitose. A produção de óxido nítrico foi avaliada pela reação de Griess e a produção de peróxido de hidrogênio foi avaliada pela oxidação do vermelho fenol na presença de peroxidase, sendo os monócitos estimulados pelos eritrócitos parasitados. Os corpúsculos lipídicos foram avaliados pela coloração com Oil Red O. As drogas foram utilizadas in vitro considerando os picos séricos observados quando do tratamento in vivo, sendo 360 ng/mL para o artemeter, 4,9g/mL para a lumefantrina e 687ng/mL para a mefloquina. Quando foi feito o tratamento dos monócitos e dos eritrócitos com o artemeter, observamos diminuição no IF quando avaliado pelos rOps (7,6x 5,2) (p= 0,02). A diminuição da fagocitose foi semelhante quando quantificada para hemozoína (p=0,036). Para a lumefantrina, houve diminuição do IF de 8,4 para 4,6 (p=0,02), quando apenas os monócitos foram tratados e a fagocitose avaliada pelos rPMP. Também houve diminuição do IF para esquizontes pelos rPMP, quando apenas os monócitos foram tratados (p=0,006). Quando os monócitos foram estimulados com os eritrócitos parasitados pelos rPMP, as três drogas diminuíram a expressão de corpúsculos lipídicos (p<0,05). Entretanto, quando os monócitos foram estimulados com os eritrócitos infectados sensibilizados, pelos receptores para opsoninas, houve aumento da expressão dos corpúsculos lipídicos pelo tratamento com a lumefantrina e a mefloquina (p<0,05). O estímulo dos monócitos com os eritrócitos parasitados aumentou a produção de peróxido de hidrogênio (p=0,009). E a mefloquina diminuiu a produção basal de H2O2 pelos monócitos (p<0,05). A diminuição da expressão de corpúsculos lipídicos nos monócitos estimulados com eritrócitos parasitados pelo P. falciparum pelos rPMP e seu aumento pelos rOps indica que a expressão dos corpúsculos lipídicos foi dependente da via pelo qual o monócito foi estimulado pelo eritrócito parasitado. A lumefantrina deprimiu a fagocitose dos eritrócitos parasitados pelos rPMP, enquanto a depressão da fagocitose ocasionada pelo artemeter foi dependente da ingestão do parasito pelos receptores para complemento. Nossos dados mostraram que o artemeter, a lumefantrina e a mefloquina modulam as respostas dos monócitos aos eritrócitos parasitados pelo P. falciparum em aspectos fundamentais relacionados com a defesa inata, nas interações iniciais do parasito com as células de defesa do hospedeiro. Mostrando, portanto, que a ação desses fármacos não depende exclusivamente de sua atividade antiparasitária, mas que o resultado final da ação desses medicamentos depende também da modulação de diversos mecanismos de defesa inato contra o parasito. / Malaria remains a worldwide public health issue, affecting millions of people, especially those living in tropical regions. Statistics confirm the magnitude of this disease, with, approximately, 600 thousand deaths each year. Antimalarial drugs indirectly influence immune response through its capacity to reduce parasite load, reducing the quantity of antigens that are capable of activating immune system. However, the role played by antiplasmodial drugs on defense against Plasmodium is still not well established. Phagocytosis remains one of the main mechanisms of eliminating parasites, especially through production of radical oxygen and nitrogen molecules by monocytes. The lipid body biogenesis is also enhanced in malaria e may be involved in defense and pathophysiology of severe disease. Therefore, the objective of the current study was to evaluate the immunomodulatory effect of arthemeter, lumefantrine and mefloquine drugs in malaria, based on the role of these drugs on phagocytosis of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes, on the production of nitric oxide and hydrogen peroxide and on the biogenesis of lipid bodies. The influence of arthemeter, lumefantrine and mefloquine on phagocytosis by monocytes in healthy individuals was evaluated in vitro using 106 Plasmodium falciparum-infected erythrocytes, through pathogen-associated molecular pattern receptors (PAMPr) or opsonin receptors. Monocytes and/or erythrocytes were previously treated with the drugs for 60 minutes. The phagocitic index was determined by the product of the mean number of parasitized erythrocytes ingested by monocyte and the proportion of monocytes involved in phagocytosis. The production of nitric oxide was evaluated through the Griess reaction, while de hydrogen peroxide production through the red phenol oxidation in presence of peroxidase. Lipid body formation was evaluated by oil red O staining. The drug concentrations used in vitro were obtained by the higher serum levels observed in vivo after ingestion of the drugs, which was 360 ng/mL for arthemeter 4,9 μg/mL for lumefantrine and 687ng/mL for mefloquine. When monocytes and erythrocytes were treated with arthemeter, it was observed a decrease in the phagocitic index when analyzed through opsonin receptors (7,5x5,2) (p=0,02). The reduction in phagocytosis was similar when quantified by hemozoine ingestion (p=0,02). Regarding the lumefantrine treatment, a reduction from 8,4 to 4,6 was observed in the phagocytic index when only monocytes were treated and phagocytosis was assessed through pathogen-associated molecular pattern receptors. An additional reduction was also observed in phagocytic index for esquizonts, through PAMPr when only monocytes were treated (p=0,006). When monocytes were stimulated with parasitized erythrocytes by PAMPr, all three drugs diminished the lipid body formation. However, when monocytes were stimulated with sensitized infected erythrocytes by the opsonin receptors, an increase in lipid body formation was observed when lumefantrine or mefloquine treatment were done (p>0,05). When monocytes were stimulated with Plasmodium falciparum-infected erythrocytes there was an increase in hydrogen peroxide production (p=0,009), whereas mefloquine treatment reduced the basal production of H2O2 by monocytes (p<0,05). Reduction observed in lipid body production after monocyte stimulation with Plasmodium falciparum-infected erythrocytes by PAMPr and its increase when monocyte stimulation occurred by opsonin receptors show that lipid body formation depended on the intracellular pathway by which monocytes were stimulated. Lumefantrine reduced phagocytosis of infected erithrocytes through PAMPr, while reduction caused by arthemeter was observed when phagocytosis occurred by complement receptors. Our dada show that arthemeter, lumefantrine and mefloquine modulate monocyte functions in defense against P. falciparum. Therefore, we conclude that beside the antiparasitic action of these drugs they also modulate the innate defense against parasite.

Orientador: Marina Politi Okoshi / Coorientador: Marcus Vinícius Guimarães de Lacerda / Coorientador: Katashi Okoshi / Banca: Roberto Jorge da Silva Franco / Banca: José Francisco Kerr Saraiva / Banca: Eros Antonio de Almeida / Banca: Alexandre Rodrigues / Resumo: Introdução: O envolvimento do sistema cardiovascular em pacientes com malária por Plasmodium vivax tem sido pouco estudado. Neste trabalho, avaliamos as estruturas cardíacas, a função ventricular e marcadores sistêmicos de lesão cardiovascular em pacientes com a forma não-grave da malária por P. vivax, em Manaus, estado do Amazonas, Brasil. Métodos: Foram avaliados, prospectivamente, 26 pacientes adultos com malária por P. vivax em tratamento ambulatorial, no período de janeiro de 2012 a março de 2013. Os resultados foram comparados com grupo controle de 25 indivíduos saudáveis, pareados por gênero e idade. Avaliação clínica, exames laboratoriais e ecocardiografia transtorácica foram realizados na primeira avaliação após o diagnóstico de malária (dia zero, D0) e sete dias após (D7) início do tratamento. Resultados: Os Casos apresentaram maiores valores do diâmetro sistólico do ventrículo esquerdo (VE; 28,8±2,82 vs 30,9±4,03 mm; p=0,037) e do volume diastólico do VE (82,4±12,3 vs 93,8±25,9 ml; p=0,05) e menor fração de ejeção do VE (método de Teicholz: 73,2±6,59 vs 68,4±4,87; p=0,004) que os Controles. A fração de variação da área do ventrículo direito (VD) foi menor (54,7±5,11 vs 50,5±6,71 %; p=0,014) e o índice de performance miocárdica do VD (0,21±0,71 vs 0,33±0,19; p=0,007), a área diastólica do VD (13,0±3,19 vs 15,3±2,96 cm2; p=0,009 ), a área de sistólica do VD (6,41±1,27 vs 7,45±1,46 cm2; p=0,009) e a resistência vascular pulmonar (1,13±0,25 vs 1,32±0,26 unidades Woods; p=0,012) foram maiores nos Casos que nos Controles. A fração de variação da área do VD foi também menor e a resistência vascular pulmonar maior nos Casos no D0 que no D7. No D0, os Casos apresentaram maior concentração sérica de bilirrubina indireta, da molécula de adesão celular vascular solúvel tipo 1, do fragmento N-terminal do pró-peptídeo natriurético cerebral e da troponina T, e menor ... / Abstract: Purpose: Malaria is an endemic disease in the Amazon Region. In Brazil it has been largely attributed to Plasmodium vivax infection since the 1990's. Cardiovascular system involvement in patients with P. vivax malaria has been poorly addressed. The aim of this study was to evaluate cardiac structures and function and serum markers of cardiovascular injury in patients with the nonsevere form of P. vivax malaria in Manaus, Amazonas state, Brazil. Methods: In an observational study, we prospectively evaluated 26 patients with P. vivax malaria in an outpatient referral hospital from January 2012 to March 2013 and compared results with a control group of 25 gender- and age-matched healthy individuals. Patients underwent clinical evaluation, laboratory tests, and transthoracic echocardiography at first evaluation after malaria diagnosis (day zero, D0) and seven days after starting malaria treatment (day seven, D7). Results: Echocardiography showed higher left ventricular (LV) systolic diameter (28.8±2.82 vs 30.9±4.03 mm; p=0.037) and LV diastolic volume (82.4±12.3 vs 93.8±25.9 ml; p=0.05), and lower LV ejection fraction (Teicholz method: 73.2±6.59 vs 68.4±4.87; p=0.004) values in patients than controls. Right ventricle (RV) fractional area change (54.7±5.11 vs 50.5±6.71%; p=0.014) was lower, and RV myocardial performance index (0.21±0.71 vs 0.33±0.19; p=0.007), RV diastolic area (13.0±3.19 vs 15.3±2.96 cm2; p=0.009) and systolic area (6.41±1.27 vs 7.45±1.46 cm2; p=0.009), and pulmonary vascular resistance (1.13±0.25 vs 1.32±0.26 Woods unit; p=0.012) were higher in patients than controls. RV fractional area change was lower and pulmonary vascular resistance higher in patients in D0 than D7. In D0, patients presented higher serum levels of indirect bilirubin, soluble vascular cell adhesion molecule-1 (sVCAM-1), Nterminal prohormone brain natriuretic peptide, and troponin T, and lower levels of nitric oxide than D7 and controls / Doutor

Orientador: Paulo Eduardo de Abreu Machado / Resumo: Com o objetivo de contribuir para o esclarecimento de alguns pontos ainda obscuros nas relações existentes entre o metabolismo da via das pentoses e a ação de drogas em doentes com malária causada pelo Plasmodium falciparum , foi proposta a padronização do método para pesquisa da atividade da via das pentoses, menos lesivo para os eritrócitos, menos dispendioso e que fosse tão eficiente quanto o do BREWER et alii. Estudou-se "in vitro", com o método padronizado, a ação da clindamicina em hemácias humanas normais. Procedeu-se, ainda, a inquérito com a finalidade de avaliar a prevalência da eficiência de G6PD em habitantes de área endêmica de malária... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available. / Mestre

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-22. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:46Z : No. of bitstreams: 1 000842400.pdf: 1898096 bytes, checksum: 4596e4503c7566a0d2cc0451cdaa4524 (MD5) / A malária é uma doença parasitária, sendo causada por parasitas do gênero Plasmodium. Cerca de 400 espécies de Anopheles foram descritas, das quais 60 implicadas na transmissão da malária em diferentes partes do globo. O primeiro caso de malária autóctone no Brasil data do século XVI e surge como uma consequência natural da colonização europeia. A partir do início da exploração da borracha na Região Amazônica, a malária torna-se um grande problema de saúde pública, uma vez que muitos imigrantes provenientes do Nordeste foram dizimados por esta doença. Ao longo dos rios Acre e Purus, as populações ribeirinhas fazem uso de muitas espécies vegetais, nativas e exóticas, para tratar a malária e seus sintomas, conhecendo os modos de uso e os ambientes de ocorrência dessas espécies. Neste trabalho estudou-se o manejo das plantas silvestres e cultivadas para o tratamento da malária e de seus males associados por comunidades ribeirinhas dos municípios de Pauini e Xapuri, nos Estados do Amazonas e Acre, respectivamente. Durante o ano de 2013 foram entrevistadas 86 pessoas de nove comunidades rurais de Pauini e Xapuri, reconhecidas pelo uso de plantas medicinais. Foram indicadas 86 plantas para o tratamento da malária e para os sintomas associados reconhecidos pelos seringueiros e ribeirinhos. Foram indicadas 25 espécies para o tratamento da malária, sendo duas plantas não possuem nenhuma referência na literatura com esta indicação de uso. Também foram indicadas plantas para o tratamento do fígado, dores de cabeça; dores no corpo, inflamações no estômago e para o tratamento de anemias. Foram descritas cinco formas de preparo das partes utilizadas. 45% das plantas indicadas têm... / Malaria is a parasitic disease caused by organisms in the genus Plasmodium. Approximately 400 species of Anopheles have been described, of which 60 are implicated in the transmission of malaria in different parts of the globe. The first autochthonous case of malaria in Brazil dates to the 16th Century and arose as a natural consequence of European colonization. Beginning at the outset of Pará rubber exploration in the Amazon region, malaria became a serious public health problem, considering that many immigrants coming from Northeastern Brazil were decimated by this disease. Along the Acre and Purus rivers, ribeirinho (riverside) populations make use of numerous plant species, both native and exotic, to treat malaria and its symptoms; these populations are familiar with the plants' modes of use and habitats. The present study examined the management of wild and cultivated plants used to treat malaria and associated ailments by ribeirinho communities in the municipalities of Pauini and Xapuri in Amazonas and Acre states, respectively. During the year 2013 the present study interviewed 86 persons in nine rural communities in Pauini and Xapuri that were known for their use of medicinal plants. A total of 86 plant species were indicated by seringueiros and ribeirinhos for the treatment of malaria and for associated symptoms, while 25 species were indicated for the treatment of malaria, of which two had no previous indication of use for that purpose. Other species were indicated for the treatment of liver ailments (closely associated with malaria), headaches, body pains, inflammation of the stomach, and anemia. Collaborators described five distinct modes of preparation of the plant parts used: for 45% the leaves were used, for 30% te bark, for 10% the root, for 8% the entire plant, and for smaller percentages the bulb ...

Orientador: Lin Chau Ming / Coorientador: Moacir Haverroth / Banca: Filipe Pereira Giardii Bonfim / Banca: Ari de Freitas Hidalgo / Banca: Vanilde Citadini Zanete / Banca: Sandra Maria Pereira da Silva / Resumo: A malária é uma doença parasitária, sendo causada por parasitas do gênero Plasmodium. Cerca de 400 espécies de Anopheles foram descritas, das quais 60 implicadas na transmissão da malária em diferentes partes do globo. O primeiro caso de malária autóctone no Brasil data do século XVI e surge como uma consequência natural da colonização europeia. A partir do início da exploração da borracha na Região Amazônica, a malária torna-se um grande problema de saúde pública, uma vez que muitos imigrantes provenientes do Nordeste foram dizimados por esta doença. Ao longo dos rios Acre e Purus, as populações ribeirinhas fazem uso de muitas espécies vegetais, nativas e exóticas, para tratar a malária e seus sintomas, conhecendo os modos de uso e os ambientes de ocorrência dessas espécies. Neste trabalho estudou-se o manejo das plantas silvestres e cultivadas para o tratamento da malária e de seus males associados por comunidades ribeirinhas dos municípios de Pauini e Xapuri, nos Estados do Amazonas e Acre, respectivamente. Durante o ano de 2013 foram entrevistadas 86 pessoas de nove comunidades rurais de Pauini e Xapuri, reconhecidas pelo uso de plantas medicinais. Foram indicadas 86 plantas para o tratamento da malária e para os sintomas associados reconhecidos pelos seringueiros e ribeirinhos. Foram indicadas 25 espécies para o tratamento da malária, sendo duas plantas não possuem nenhuma referência na literatura com esta indicação de uso. Também foram indicadas plantas para o tratamento do fígado, dores de cabeça; dores no corpo, inflamações no estômago e para o tratamento de anemias. Foram descritas cinco formas de preparo das partes utilizadas. 45% das plantas indicadas têm... / Abstract: Malaria is a parasitic disease caused by organisms in the genus Plasmodium. Approximately 400 species of Anopheles have been described, of which 60 are implicated in the transmission of malaria in different parts of the globe. The first autochthonous case of malaria in Brazil dates to the 16th Century and arose as a natural consequence of European colonization. Beginning at the outset of Pará rubber exploration in the Amazon region, malaria became a serious public health problem, considering that many immigrants coming from Northeastern Brazil were decimated by this disease. Along the Acre and Purus rivers, ribeirinho (riverside) populations make use of numerous plant species, both native and exotic, to treat malaria and its symptoms; these populations are familiar with the plants' modes of use and habitats. The present study examined the management of wild and cultivated plants used to treat malaria and associated ailments by ribeirinho communities in the municipalities of Pauini and Xapuri in Amazonas and Acre states, respectively. During the year 2013 the present study interviewed 86 persons in nine rural communities in Pauini and Xapuri that were known for their use of medicinal plants. A total of 86 plant species were indicated by seringueiros and ribeirinhos for the treatment of malaria and for associated symptoms, while 25 species were indicated for the treatment of malaria, of which two had no previous indication of use for that purpose. Other species were indicated for the treatment of liver ailments (closely associated with malaria), headaches, body pains, inflammation of the stomach, and anemia. Collaborators described five distinct modes of preparation of the plant parts used: for 45% the leaves were used, for 30% te bark, for 10% the root, for 8% the entire plant, and for smaller percentages the bulb ... / Doutor

Orientador: Fernando Broetto / Banca: Glyn Mara Figueira / Banca: Filipe Pereira Giardini Bonfin / Resumo: A espécie Artemisia annua, Asteraceae, nativa da China, tem a artemisinina como seu principal componente ativo, é considerado um potente antimalárico. Com o aumento do valor dos princípios ativos naturais, estudos relacionados à pós-colheita e armazenamento de material vegetal tornam-se importantes para melhor conservação de suas propriedades fitoterápicas. O presente estudo teve como objetivo definir as melhores condições de armazenamento para preservar a qualidade da droga vegetal. Folhas de A. annua secas foram armazenadas por seis meses em sacos de polietileno envolto por papel Kraft e acondicionadas em quatro tratamentos: em condição ambiente e refrigerada a 4º±2C, em embalagem normal e em embalagem sob vácuo. No tempo zero e nos períodos de 30, 90, 120 e 180 dias foram realizados as análises microbiológicas e avaliação do teor de artemisinina. Os resultados dos ensaios microbiológicos não demonstraram contaminação significante, assim como o teor de umidade do material armazenado, que permanecem entre 5% a 10%, mantendo-se dentro do parâmetro aceitável. O tratamento sem vácuo ambiente (SVA) foi o que melhor manteve estabilidade de armazenamento durante os 180 dias, no entanto, foi o sem vácuo refrigerado (SVR) que apresentou maior eficiência para a conservação do teor de artemisinina / Abstract: Artemisia annua is an Asteracea native to China, its principal active component, artemisinin, is considered a potent antimalarial drug. With the increased interest in natural active principles, studies related to post-harvest and storage of vegetable material become important for better conservation of its phytotherapic properties. Therefore, the present study had as objective define best storage conditions to preserve and keep the quality of phytotherapic Leaves of A. annua dried were stored for six months in polyethylene bags wrapped in Kraft paper and packed in four treatments: at ambient condition, at ambient condition with vacuum packing in refrigerated conditions at 4° ± 2C normal and vacuum packing. At time zero, and the periods of 30, 90, 120 and 180 days were performed microbiological analyzes and evaluation of the level of artemisinin. The results of microbiological tests showed no significant contamination, as well as the moisture content of stored (biological) material, which remain between 5% and 10%, keeping within acceptable parameters. The vacuum environment without treatment (SVA) was the best storage stability maintained during 180 days, however, no vacuum was refrigerated (SVR) showed that greater efficiency to conserve the content of artemisinin, compared to the others / Mestre

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniel Cardoso Simpson.pdf: 1614019 bytes, checksum: 97affc7d9fbf89b128a926dd2754b01b (MD5) Previous issue date: 2013-08-14 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Aspidosperma nitidum Benth belonging to the Apocynaceae, popularly known as carapanaúba or peroba, widely used in the Amazon region, especially in the relief of symptoms of malaria, having as striking feature of the gener the great presence of indol alkaloids. Despite the widespread use of herbal folk medicine, problems as identification and standardization of the species are quite common. In this context, the present study aimed at the development and validation of an analytical method using high performance liquid chromatography, in order to determine the chromatographic profile of the ethanol extract of the stem bark of Aspidosperma nitidum. The ethanol extract was obtained by maceration and dried extract by freeze. A qualitative evaluation of chemically ethanol extract species showed the presence of alkaloids. The methodology was developed in a liquid chromatograph with high efficiency photodiode array detector, using reverse phase separation system. The validation procedure was carried out by the method of internal standardization, using the 1.8-dihidroxiantraquinona as standard. The calibration curves showed linearity (r ²> 0.99) in a wide range of concentration of the extract and standard, 62.5 to 2000 μg / mL and 15 to 500 μg / mL respectively. The test presented repeatability and reproducibility above 95%, since the coefficient of variation obtained from both assays are below 5%. The method showed good accuracy, which was shown by average recovery of 106% with a coefficient of variation of 2,2%. For all that, the chromatographic method developed and validated proved simple, linear, reproducible and accurate, It can be used therefore for determining the chromatographic profile of the ethanol extract of the stem bark Aspidosperma nitidum. / Aspidosperma nitidum Benth pertencente à Apocynaceae, conhecida popularmente como carapanaúba ou peroba, amplamente utilizada na região Amazônica, principalmente no alívio dos sintomas da malária, tendo como característica marcante do gênero a presença maciça de alcaloides indólicos. Apesar do uso em grande escala de plantas medicinais na medicina popular, problemas como identificação e padronização das espécies são bastante comuns. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento e a validação do método analítico utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência, com o objetivo de determinar o perfil cromatográfico do extrato etanólico das cascas do caule de Aspidosperma nitidum. O extrato etanólico foi obtido por maceração, e o extrato seco por liofilização. A avaliação da constituição química qualitativa do extrato etanólico de espécie demonstrou a presença de alcaloides. O método analítico foi desenvolvido em um cromatógrafo a líquido de alta eficiência com detector por arranjo de fotodiodos, utilizando sistema de separação em fase reversa. A validação do método analítico foi realizada por método de padronização interna, utilizando a 1,8-dihidroxiantraquinona como padrão, com as curvas de calibração apresentando linearidade (r² > 0,99) em uma ampla faixa de concentração do extrato e do padrão, de 62,5 a 2000 μg/mL e de 15 a 500 μg/mL respectivamente. Na validação observou-se repetibilidade e reprodutibilidade acima de 95%, já que os valores de coeficiente de variação obtidos de ambos os testes estão abaixo de 5%. O método apresentou boa exatidão, a qual foi demonstrada pela recuperação média de 106% com o coeficiente de variação de 2,2%. Por tudo isso, o método cromatográfico desenvolvido e validado se mostrou simples, linear, preciso, reprodutível e exato, podendo ser utilizado, portanto, para a determinação do perfil cromatográfico do extrato etanólico das cascas do caule Aspidosperma nitidum.