Orientadora : Profª Drª Enilze M. S. F. Ribeiro / Co-orientadores : Profª Drª Luciane R. Cavalli, Prof. Dr. Iglenir J. Cavalli / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 28/03/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Genética / Resumo: Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de moléculas de RNA não codificadoras que apresentam um papel na tumorigênese mamária, regulando genes envolvidos no ciclo celular, proliferação celular, invasão e metástase. Os diferentes subtipos de câncer de mama apresentam diferentes padrões de expressão de miRNAs, dessa forma essas moléculas podem ser potenciais marcadores terapêuticos para subtipos agressivos, como os tumores mamários triplo negativos (TN). Os tumores TN são clinicamente agressivos e possuem baixa ou nenhuma expressão dos receptores de estrogênio (ER), progesterona (PR) e HER2, dessa forma não respondem efetivamente a terapias alvos disponíveis atualmente. No presente trabalho, foi analisado o padrão de expressão de miRNAs de 83 tumores TN e 12 não-TN, juntamente com dados de alterações de números de cópias de DNA por array-CGH obtidos das mesmas amostras, a fim de identificar os miRNAs mais relevantes e seus respectivos genes alvos que podem estar envolvidos na patogênese dos tumores de mama TN. 117 miRNAs foram encontrados com expressão diferencial em tumores TN, quando comparados com os não-TN. A análise combinada de miRNA/aCGH resultou em 17 miRNAs que apresentaram dados concordantes de expressão de miRNA e alterações de números de cópias (ganho/perda de aCGH com alta/baixa expressão de miRNA, respectivamente). Análises de sistemas biológicos downstream de alvos conhecidos e possíveis alvos dos miRNAs selecionados indicaram as vias de sinalização do TGF-beta, PI3K-Akt e HER2, assim como vias envolvidas na adesão celular e outros processos relacionados ao câncer. Estes resultados sugerem que os 17 miRNAs e seus respetivos genes alvos podem ser futuramente estudados como marcadores moleculares específicos para tumores TN, sugerindo a necessidade de estudos de análise funcional e biológica que comprovem suas participações na tumorigênese mamária de tumores do tipo TN. / Abstract: MicroRNAs (miRNAs) are a class of non-coding endogenous RNA molecules that play a role in breast tumorigenesis regulating genes involved in cell cycle, proliferation, invasion and metastasis. Different subtypes of breast cancer presents different expression of miRNAs, and they can be potential therapeutic markers for aggressive subtypes as triple negative breast cancers (TNBC). TNBC are clinically aggressive tumors that lack the expression of ER, PR and HER2 receptors, therefore they do not respond effectively to the available target therapies. In the present study, we investigated miRNA expression pattern of 83 TNBC and 12 non-TNBC tumors and integrated the data with DNA copy number alterations data by array-CGH from the same samples, to obtain the most relevant miRNAs and their respective target genes that may be involved in the pathogenesis of TNBC. 117 miRNAs were found as differentially expressed in TNBC, when compared to non-TNBC. The combined analysis (miRNA/aCGH) resulted in 17 miRNAs that presented miRNA concomitant genomic gains and losses by aCGH and miRNA increase or decrease expression, respectively. KEGG pathway enrichment analysis of the selected 17 miRNAs revealed that their main pathways involved in TGF-beta signaling pathway, PI3K-Akt and HER2 signaling pathways as well as the ones involved in adherence junction and other cancer related processes. Our results suggest that the 17 miRNAs and their target genes may be studied as specific molecular markers for TNBC, suggesting the need for functional and biological analysis that proves their roles in TN tumorigenesis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-04Bitstream added on 2014-06-13T20:10:27Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_ghfp_me_botfm.pdf: 202757 bytes, checksum: a228e2c941a14ad9806caa5f27608410 (MD5) / Empresa Privada / Fundação Pio Xii - Barretos / A mastectomia radical modificada ainda se constitui em um dos principais procedimentos cirúrgicos em mastologia. A principal complicação relacionada a cirurgia constitui o seroma axilar. O bisturi Harmônico, apesar de pouco difundido, foi descrito como um mecanismo para diminuir a formação do seroma axilar, associado a diminuição do tempo de utilização do dreno. Estudo prospectivo randomizado utilizando-se o bisturi harmônico ou o elétrico de pacientes submetidas a mastectomia radical no Hospital de Câncer de Barretos, no ano de 2008, sendo que a randomização ocorreu em função do índice de massa corpórea. As variáveis relacionadas às pacientes, às cirurgias e suas principais complicações pós operatórias (seroma, necrose de retalhos, hematomas e infecção) foram tabuladas e submetidas a análise estatística. Das 95 pacientes submetidas a mastectomia, em 49 foi utilizado o bisturi harmônico. A comparação entre os bisturis na realização da mastectomia radical mostrou diferença estatística na ocorrência da necrose de retalhos das cirurgias. Outras complicações (seroma, hematoma e infecção) não tiveram significância estatística. A utilização do bisturi harmônico em mastectomias radicais proporciona menor risco de necrose de retalhos. O tipo do bisturi utilizado não influencia na formação de seroma. O índice de massa corpórea, volume de drenagem ao sétimo dia pós-operatório e redução percentual da drenagem do 2° ao 7° dia pós-operatório são fatores independentes na formação de seroma. A utilização do bisturi harmônico proporciona diminuição significativa da necrose de retalho em relação ao bisturi elétrico. / This randomized prospective study has the purpose of comparing the post-operative complication rates on the electric scalpel and the harmonic scalpel. The study was accomplished in the Hospital de Câncer de Barretos from January to November, 2008. The breast cancer patients with radical mastectomy proposal were randomized into two groups according to their body mass index (bmi): electric scalpel (46) and harmonic scalpel (49). The variables related to the patients, to the surgeries and its their post-operative main complications (seroma, flap necrosis, haematomas and infections), were tabulated and submitted to statistical analysis. The comparison between the scalpels on the radical mastectomy has show statistic difference on the occurrence of the flap necrosis on the surgeries. Other complications (seroma, haematoma and infection) have not had statistic significance). The usage of the harmonic scalpel in radical mastectomies provides smaller risk of flap necrosis in comparison with the electric scalpel.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-08Bitstream added on 2014-06-13T20:11:41Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_i_me_botfmvz.pdf: 2485349 bytes, checksum: 9f7b65993559ddc63dfaadcfbe69be1d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neoplasia é um processo anormal que compromete a proliferação e diferenciação celular de início localizado, podendo disseminar pelo organismo do hospedeiro levando a sua morte. As características desse processo devem ser investigadas para se estabelecer um protocolo terapêutico, para isso, uma importante ferramenta é o Teste do Cometa que detecta a lesão do DNA. Quanto ao protocolo terapêutico a Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma nova modalidade utilizada para o tratamento de neoplasia. Consiste na indução da citotoxicidade, através da interação da luz de comprimento de onda adequado, de um fotossensibilizador e do oxigênio molecular presente nas células. Com o objetivo de quantificar a lesão no DNA das neoplasias mamárias pelo Teste do Cometa; avaliar a resposta desse tumor à Terapia Fotodinâmica como tratamento único e adjuvante a cirurgia utilizamos 20 ratas Sprague-Dawley divididas em quatro grupos durante 12 semanas: os grupos G1 a G4 receberam dose única de DMBA 50 mg/kg por gavagem para indução do tumor de mama. Quando da manifestação da neoplasia aplicou-se nos animais de todos os grupos citados o TNM clínico, exame citológico e Teste do Cometa. O G1 foi acompanhado clinicamente, o G2 submetido à TFD, o G3 à cirurgia associada a TFD, G4 à cirurgia. Os animais do grupo 2 foram submetidos a uma única sessão da TFD, após 8 semanas, tiveram o estadiamento clínico e lesão no DNA menores quando comparado ao grupo controle. Os animais do grupo 3 não apresentaram recidivas até o final de 12 semanas quando foram comparados com os animais do grupo 4 o qual apresentou 60% de taxa de recidiva após 11 semanas, embora os animais do grupo 3 tenham apresentado menor lesão no DNA. A TFD pode ser usada no modelo experimental de tumor de mama como terapia única e adjuvante a cirurgia para redução da evolução do tumor e evitar recidivas respectivamente. / Neoplasm is a process that results from an the abnormal proliferation and cell differentiation initially localized, but can metastize leading to death. The characteristics of this process should be investigated to establish a therapeutic protocol Comet assay is an important tool that detects the DNA damage. Photodynamic Therapy (PDT) is a therapeutic modality that can be used to treat cancer, where the cytotoxic effect is induced by the interaction of light at adequate wavelength, a photosensitizer and molecular oxygen present in cells. Aiming to quantify the DNA damage by Comet assay in mammary tumor assess the tumor response after Photodynamic Therapy as a single treatment or adjunvant modality to surgery, 20 Sprague-Dawley rats were used. The animals were divided into four groups all animals received a single dose of DMBA, 50 mg / kg by gavage to induce the mammary tumors the TNM clinical, cytological and Comet assay classifications were performed. The animals of were clinically monitored, the animals were treated by PDT, the animals were treated with surgery and PDT, and the animals of only surgery. The animals in group 2 were subjected to a single session of PDT, and after 8 weeks, clinical staging and DNA damage were less when compared to the control group. The animals in group 3 showed no tumor recidive until the end of the 12 th week. The animals of group 4 showed 60% rate of tumor recurrence after 11 weeks. The animals in group 3 showed less DNA damage when compared to group 4. PDT can be used in an experimental model of mammary tumor as single and as adjuvant therapy to reduce the development of tumors and to prevent recurrences, respectively.

Orientador : Prof. Dr. Ricardo Lehtonen R. de Souza / Co-orientadoras : Profª Drª Enilze M. S. Ribeiro e Profª Drª Valéria Maria Sperandio Roxo / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 24/03/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Genética / Resumo: O câncer de mama é o segundo tipo de neoplasia mais frequente no mundo e o mais incidente entre as mulheres. Mais de 90% das mortes relatadas por câncer de mama, não são causadas pelo tumor primário e sim por suas metástases mamárias. Tais células migratórias são as manifestações mais agressivas do processo do câncer. Embora muitos estudos estejam sendo realizados, não há marcadores moleculares disponíveis para predizer o estadiamento dos cânceres de mama. A proteína Ciclina D1 têm sido amplamente estudada ao longo das últimas décadas, por seus diversos papéis nos processos fisiológicos de células normais e cancerosas. Suas funções, que incluem o controle do ciclo celular e a coregulação da transcrição gênica de sequências específicas, tem se mostrado associadas à tumorigênese. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a importância do gene CCND1 como potencial marcador de progressão tumoral em carcinomas mamários. Foram utilizadas 41 amostras parafinizadas de carcinomas mamários do subtipo ductal invasor. Estas amostras foram subdivididas em tumores metastáticos e não-metastáticos de acordo com a informação sobre a presença de metástases em linfonodos axilares regionais. Foram realizadas análises de expressão gênica (mRNA), através da PCR quantitativa em tempo real, e proteica, por imunohistoquímica. Não foram identificadas diferenças nos níveis de mRNA de CCND1 e da proteína Ciclina D1 entre os tumores mamários metastáticos e não-metastáticos, sugerindo que, nesta amostra, a expressão gênica de CCND1, ao nível de mRNA e proteína, não influenciou significativamente no processo metastático. Na literatura, a Ciclina D1 apresenta valor diagnóstico e prognóstico bem definido em linfomas, onde é um critério diagnóstico no Linfoma de Células do Manto. Para a maioria dos cânceres sólidos, porém, ainda é controverso, com alguns autores diferenciando o significado biológico da amplificação gênica e da superexpressão da proteína, desde que estas não são interdependentes. Devido a estas controvérsias, mais estudos devem ser realizados, na tentativa de esclarecer o valor diagnóstico e prognóstico da Ciclina D1, bem como os vários mecanismos que desencadeiam sua superexpressão em tumores. PALAVRAS-CHAVE: Câncer de mama. Expressão gênica. CCND1. Metástases. Progressão tumoral. / Abstract: Breast cancer is the second most common cancer worldwide and the most frequent among women. Over 90% of reported deaths from breast cancer are not caused by the primary tumor, but by their mammary metastases. These migratory cells are the most aggressive manifestations of the cancer process. Although many studies are being conducted, there are no molecular markers available to predict the staging of breast cancers. The Cyclin D1 protein has been extensively studied over the past decades by its many roles in the physiological processes of normal and cancer cells. Its functions, ranging from cell cycle control to the specific sequences of gene transcription co-regulation, have been associated with tumorigenesis. Therefore, the aim of this study was to evaluate the importance of CCND1 gene as a potential marker of tumor progression in breast carcinomas. Forty-one paraffin embedded samples of invasive ductal breast carcinomas subtype were used. These samples were subdivided into metastatic and non-metastatic tumors according to the information about the presence of regional metastases in the axillary lymph nodes. Gene expression analyses (mRNA) were performed by quantitative real-time PCR, and protein expression by immunohistochemistry. No differences were observed in mRNA levels of CCND1 and Cyclin D1 protein between metastatic and non-metastatic breast tumors, suggesting that, in this sample, the gene expression of CCND1 no significantly influenced the metastatic process. In literature, the diagnostic and prognostic value of Cyclin D1 is well defined in lymphomas, which is a diagnostic criterion in Mantle Cell Lymphoma. For most cancers, however, it is still controversial, with some authors distinguishing between the biological significance of gene amplification and protein overexpression, since these are not interdependent. Because of these controversies, further studies should be conducted in an attempt to clarify the value of Cyclin D1 as a marker in breast cancer, as well as the various mechanisms which trigger its overexpression in tumors. KEYWORDS: Breast cancer. Gene expression. CCND1. Metastases. Tumor progression.

Orientadora : Profª Drª Giseli Klassen / Co-orientadora : Profª Drª Edneia A. S. R. Cavalieri / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia. Defesa: Curitiba, 02/12/2014 / Inclui referências / Área de concentração / Resumo: O câncer de mama é o tipo de câncer mais frequente entre as mulheres em todo o mundo. A enzima MMP-2 é uma metaloprotease capaz de degradar o colágeno tipo IV, um dos principais constituintes da matriz extracelular (MEC). Sua função é amplamente descrita por atuar no mecanismo de metástases em diversos tipos de câncer. Estudos recentes demonstraram que a linhagem tumoral de mama MCF7 possui o gene MMP2 regulado por metilação do DNA. Além disso, alguns estudos têm demonstrado que a fibronectina, uma importante proteína constituinte da MEC, é capaz de promover a expressão de MMP-2 em linhagens tumorais de mama. Resultados recentes do nosso grupo mostraram que a linhagem tumoral MCF7 quando tratada com fibronectina por 5 horas sofre 30% de desmetilação da região promotora do gene MMP2. Entretanto, observou-se também que tal processo foi transitório, porque houve a remetilação parcial do promotor quando o estímulo foi retirado. Ainda, a fibronectina induziu o aumento de uma marca de histona no promotor de MMP2 que sinaliza para a ativação da transcrição gênica. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi dar continuidade a esse estudo, avaliando a regulação epigenética do gene MMP2 em linhagens tumorais de mama após o cultivo com fibronectina em diferentes tempos. Para isso, células da linhagem MCF7 submetidas ao tratamento com fibronectina por 8, 12 e 24 horas, e da linhagem MDA-MB-436 por 24 horas, tiveram seus níveis de expressão de MMP2, metilação do DNA e modificações de histonas do promotor do gene avaliados. Na linhagem MCF7, o tratamento por 8, 12 e 24 horas foi capaz de promover o aumento da expressão de MMP2 em 7, 25 e 9 vezes, respectivamente, comparado com o controle, assim como a redução da metilação do promotor de 90% (controle) para 70%, 40% e 52%, respectivamente. O tratamento por 24h também promoveu o aumento da marca de ativação gênica H3K4me3. Ainda, após 12h de cultivo com fibronectina, a linhagem MCF7 aumentou sua capacidade migratória. A fim de verificar se o efeito observado não era exclusivo da linhagem MCF7, foi incluída no estudo a linhagem MDA-MB-436 que foi submetida ao tratamento por 24h, e apresentou aumento na expressão gênica de MMP2 (4 vezes) e redução da metilação do promotor (de 90% para 22%). Por fim, as células tratadas foram mantidas em cultivo sem a fibronectina para avaliar a estabilidade das modificações. Essas células, chamadas de recultivo, apresentaram uma redução na expressão gênica e aumento na metilação do promotor quando comparadas com as células logo após os tratamentos, confirmando o efeito transitório da fibronectina nos eventos epigenéticos, que já tinha sido observado após 5 horas de tratamento. Esses dados corroboram e complementam os mecanismos observados pelo nosso grupo de pesquisa e contribuem para a compreensão dos mecanismos epigenéticos que regulam a expressão de um importante gene associado às metástases tumorais. Palavras-chave: Câncer de mama, MMP-2, epigenética, metilação do DNA. / Abstract: Breast cancer is the most common cancer worldwide among women. The MMP- 2 enzyme is a metalloprotease capable of degrading type IV collagen, a major constituent of the extracellular matrix (ECM). Its function is widely described by acting in the mechanism of metastasis in various cancers. Recent data has shown that the MCF7 breast tumor cell line has the MMP2 gene regulated by DNA methylation. In addition, some studies have shown that fibronectin, an important constituent of the extracellular matrix, is capable of promoting MMP-2 expression in breast tumor cell lines. Recent results from our group showed that fibronectin was able to induce MMP2 expression by a 30% decrease in its promoter methylation in MCF7 tumor cell line. However, it was also noted that this process was transient, because a partial promoter remethylation was observed when the stimulus was removed. Moreover, a histone marker for an open chromatin conformation was significantly increased. Therefore, the aim of this work was to continue evaluating the epigenetic regulation of the MMP2 gene after cultivation of breast tumor cell lines with fibronectin at different times. To this reason, MCF7 cells subjected to treatment with fibronectin for 8, 12 and 24 hours and MDA-MB-436 cells subjected to treatment for 24 hours, were evaluated by the levels of MMP2 expression, gene promoter DNA methylation and histone modifications. In the MCF7 cell line, treatments for 8, 12 and 24 hours were able to promote 7, 9 and 25-fold increase in MMP2 expression, respectively, compared with the mock. In addition, promoter methylation was reduced from 90% (control) to 70%, 40% and 52%, respectively. Treatment for 24h also promoted an increase of the histone open chromatin conformation marker H3K4me3. Moreover, the migratory capacity of MCF7 cells treated for 12h was increased. In order to confirm the fibronectin effect, the MDA-MB-436 cell line was subjected to 24h fibronectin treatment, which showed an increase in MMP2 gene expression (4-fold) and a reduction of promoter methylation (from 90% to 22%). Finally, the treated cells were kept in culture without fibronectin to evaluate the modifications stability. These cells (recultivation) showed a gene expression reduction and promoter methylation increased when compared to the cells after treatments, confirming the fibronectin transient effect observed after the 5h treatment. These data support and complement the mechanisms observed by our research group and contribute to understand the epigenetic mechanisms that regulate the expression of an important gene associated with tumor metastasis. Keywords: Breast cancer, MMP-2, epigenetics, DNA methylation.

Orientador: Célia Regina Nogueira / Banca: Cláudia Aparecida Rainho / Banca: Márcia Guimarães da Silva / Banca: Maria Aparecida Azevedo Koike Folgueira / Banca: Claudio Kemp / Resumo: Sabe-se que o E2 e o status hormonal da paciente são importantes para a proliferação e o tratamento do câncer de mama, quanto ao T3, apesar dos estudos epidemiológicos serem ainda contraditórios em relação a sua influência no câncer de mama, estudos laboratoriais demonstram sua capacidade de induzir a sua proliferação e induzir genes que são induzidos por estrógeno. Portanto a hipótese formulada foi que os hormônios tireoidianos modulam a expressão dos mesmos genes que o estrógeno em carcinoma de mama. Para materializar a hipótese o objetivo foi comparar a expressão dos genes TGFA, TGFB1 e PGR, resultantes da ação do estrógeno, e dos genes TNFRSF9, BMP6 e THRA, resultantes da ação do hormônio tireoidiano, combinados ou não com a ação do Tamoxifem, em carcinoma de mama colocado em cultura primária. Foram selecionadas 12 pacientes do sexo feminino, menopausadas, com Carcinoma de Mama estádio grau 1 e 2 , do Hospital do Câncer de São Paulo, verificou-se a existência de disfunção tireoidiana concomitante, através das dosagens laboratoriais de T3L, T4L, TSH, TPO-AB, assim como o status hormonal em relação aos níveis estrogênicos. Fragmentos tumorais obtidos cirurgicamente foram colocados em cultura primária. Essas células foram tratadas com E2 (10-7M), T3 (10-8M), E2 (10-7M) + TAM (10-6M), T3 (10-8M) + TAM (10-6M), TAM (10-6M), com posterior extração de RNA total. Foi utilizada a metodologia de PCR em Tempo Real para verificar a ação do T3 e do E2 em genes normalmente induzidos pelo E2 (PGR, TGFA e TGFB1), verificada a expressão de genes que aumentam (TNFRSF9 e THRA) e diminuem (BMP6) pela ação do T3 em seu receptor (TR) e a presença de mutações no TR. Não foram encontradas mutações envolvendo o receptor de hormônio... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: It is known that E2 and the patient's hormonal status is important for the proliferation and the treatment of the breast cancer. Despite the contradictory epidemic studies of T3 and its influence in the breast cancer, laboratory studies demonstrate its capacity to induce not only its proliferation but also genes that are induced by estrogen. Therefore the hypothesis was that the thyroid hormones modulate the expression of the same genes as the estrogen in breast carcinoma. The objective was to compare the expression of the genes TGFA, TGFB1 and PGR, resultant of the estrogen action and genes TNFRSF9, BMP6 and THRA, resultant of the thyroid hormone action, combined or not with the Tamoxifen action in breast carcinoma in primary culture. 12 menopausal patients with breast carcinoma stages 1 and 2, of São Paulo Cancer Hospital were selected. The existence of concomitant thyroid dysfunction was verified through laboratory dosages of T3L, T4L, TSH, TPOAB, as well as the hormonal status in relation to the estrogen levels. Tumor fragments surgically obtained were put in primary culture. Those cells were treated with E2 (10-7M), T3 (10-8M), E2 (10-7M) + …, with subsequent extraction of total RNA. The methodology of PCR was used in Real Time to verify the action of T3 and E2 in genes usually induced by E2 (PGR, TGFA and TGFB1), verified the expression of genes which increase (TNFRSF9 and THRA) and decrease (BMP6) by the action of T3 in its receptor (TR) and the presence of mutations in TR. Mutations involving the thyroid hormone receptor were not found. Related to the genic expressions, in the ER positive patients, the treatment with T3 increased the expression of TGFA, THRA, TNFRSF9 and PGR genes significantly and reduced the expression of TGFB1 and BMP6. When... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Cláudia Aparecida Rainho / Banca: Fábio Tebaldi Silveira Nogueira / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Spencer Luiz Marques Payão / Banca: Patrícia Pintor dos Reis / Resumo: Atualmente, o silenciamento de genes supressores de tumor por mecanismos epigenéticos é reconhecido como uma característica importante das células tumorais. Estudos recentes mostraram que as alterações da metilação do DNA não estão restritas a genes discretos, mas podem afetar ilhas CpG consecutivas em algumas regiões genômicas, levando à hipótese de que mecanismos epigenéticos coordenados poderiam silenciar simultaneamente a expressão de vários genes. A perda da expressão da isoforma A do gene RASSF1, localizado em 3p21.3 (uma região cromossômica frequentemente deletada no câncer), constitui um dos principais exemplos de genes que são inativados tanto por mecanismos genéticos quanto epigenéticos no câncer, incluindo os carcinomas mamários. Este estudo teve como finalidade investigar a ocorrência de alterações epigenéticas em um agrupamento gênico em 3p21.3 contendo vários genes candidatos a supressores tumorais. Foram selecionados 10 genes contíguos (SEMA3B, HYAL3, HYAL1, HYAL2 TUSC2, RASSF1, ZMYND10, NPRL2, TMEM115 e CACNA2D2) e um painel de 17 linhagens celulares derivadas de carcinomas mamários (BT-20, BT-474, BT-483, BT-549, Hs578T, MCF7, MDA-MB-134 IV, MDA-MB-231, MDA-MB-361, MDA-MB-415, MDA-MB-436, MDAMB- 453, MDA-MB-468, SK-BR-3, T-47D, ZR-75-1 e ZR-75-30), uma linhagem epitelial derivada de doença fibrocística benigna da mama (MCF10A) e duas linhagens derivadas de epitélio mamário normal (184A1 e 184B5). Inicialmente, os níveis de expressão foram quantificados por qRT-PCR (quantitative real time Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction) após o tratamento das linhagens com as drogas 5-aza-2'-desoxicitidina (5AzadC), um agente desmetilante, e tricostatina A (TSA), um inibidor das desacetilases de histonas em ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Currently, the silencing of tumor suppressor genes by epigenetic mechanisms is recognized as an important feature of tumor cells. Recent studies have showed that aberrant DNA methylation patterns are not restricted to discrete genes, but also could affect consecutive CpG islands in some genomic regions, which suggested that epigenetically coordinated mechanisms could lead to the simultaneous silencing of cancer-related genes. The loss of expression of the isoform A of the RASSF1 gene, mapped at 3p21.3 (a chromosomal region frequently deleted in cancer), is listed among those genes inactivated by both, genetic and epigenetic mechanisms in human cancer, including breast carcinomas. The purpose of this study was to investigate the occurrence of epigenetic alterations in a gene cluster at 3p21.3 which contains several candidates to tumor suppressor genes. It was selected 10 contiguous genes (SEMA3B, HYAL3, HYAL1, HYAL2 TUSC2, RASSF1, ZMYND10A, NPRL2, TMEM115 and CACNA2D2) and a panel of 17 breast cancer cell lines (BT-20, BT-474, BT- 483, BT-549, Hs578T, MCF7, MDA-MB-134 IV, MDA-MB-231, MDA-MB-361, MDA-MB-415, MDA-MB-436, MDA-MB-453, MDA-MB-468, SK-BR-3, T-47D, ZR-75-1 and ZR-75-30), one cell line derived from benign fibrocystic disease of the breast (MCF10A) and two cell lines derived from normal mammary epithelium (184A1 and 184B5). Initially, the expression levels were quantified by qRT-PCR (quantitative real time Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction) after the treatments of the cell lines with the 5-aza-2'-deoxycytidine (5Azadc), a DNA demethylating agent and trichostatin A (TSA) a histone deacetylase inhibitor, relative to the untreated controls. The results obtained showed that RASSF1 transcripts were detected in all cell lines; however, the expression of RASSF1A isoform was detected only in the Hs578T and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: José Ricardo P. Rodrigues / Resumo: O aumento progressivo nas últimas décadas na incidência do câncer de mama é um fato que assola a humanidade, entretanto, as taxas de mortalidade tendem ao decréscimo em virtude da detecção precoce através de métodos de rastreio não invasivos, e do conhecimento cada vez maior do comportamento biológico do tumor. A maior adesão aos meios de rastreamento existentes hoje, deve-se não apenas ao medo que o câncer provoca nas mulheres, mas também ao fato dos exames utilizados para este rastreio não serem invasivos. Infelizmente, ainda não existem métodos capazes de dar indícios do comportamento biológico do tumor de forma instantânea, sem que haja a necessidade de submeter as pacientes portadoras de tumores malignos da mama a procedimentos cirúrgicos. Desde o início da última década do século XX, tem-se estudado a angiogênese do tumor através da ultra-sonografia, utilizando-se dos recursos de Color Doppler e Power Doppler. Neste trabalho, realizado no Hospital Santa Marcelina de Itaquaquecetuba, em conjunto com a Disciplina de Mastologia da Faculdade de Medicina de Botucatu - UNESP, foram estudadas trinta e cinco pacientes com tumores malignos da mama, onde os parâmetros hemodinâmicos (Índice de Resistência, Índice de Pulsatibilidade e a Velocidade Máxima no Pico Sistólico) através do Color Doppler... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although a progressive increase in the incidence of breast cancer is a fact that plagues mankind, mortality rates tend to decrease given precocious detection using non-invasive tracking methods and an ever-growing knowledge of tumoral biological behaviour. The current large adhesion to tracking methods is explained not only by the fear cancer raises in women but also to the use of non-invasive exams. Unfortunately, there are no methods capable of giving instantaneous indication of tumoral biological behaviour without submitting patients with malignant tumors to surgical procedure. Since the early nineties and now at the dawn of the 21st Century, the angiogenesis of the tumor is being studied with the help of Color Doppler and Power Doppler ultrasonography. In this research - carried out at Santa Marcelina Hospital in Itaquaquecetuba in cooperation with the Department of Mastology of the Botucatu Medical School, São Paulo State University, thirty five patientes with mammary malignat tumors were... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Alexandre Duharte / Banca: Filipe Vieira Rocha / Resumo: O câncer, manifestação originada pelo crescimento descontrolado de células, afeta milhões de indivíduos e é uma das principais causas de morte em todo mundo. Tendo em vista que os fármacos atualmente disponíveis para o tratamento apresentam eficácia limitada (como a cisplatina) comumente atrelada à alta toxicidade, a busca por novos compostos capazes de combater células cancerígenas é uma necessidade premente. Com isso, cresce o interesse de se investigar novas substâncias que não sejam tóxicas, mas sim seletivas. Os compostos de paládio(II) têm sido estudados como uma alternativa aos fármacos disponíveis, mostrando-se promissores por sua menor toxicidade e capacidade de estimular a resposta imune antitumoral. Os macrófagos são as primeiras células a serem ativadas para participar de uma resposta imunológica propriamente dita e são células capazes de secretar mais de cem produtos biologicamente ativos, entre esses, espécies reativas de nitrogênio e citocinas atuantes na resposta imunológica e na formação tecidual. Neste trabalho foram testados sete compostos de paládio(II) quanto ao potencial imunológico e antitumoral, sendo eles: [Pd(dmba)(μ-Cl)]2 (1), [Pd(dmba)(μ-N3)]2•H2O (2), [Pd(dmba)(μ-NCO)]2 (3), [Pd(dmba)Cl(isn)] (4), [Pd(dmba)(N3)(isn)] (5), [Pd(dmba)(NCO)(isn)] (6) {DMBA= N,Ndimetilbenzilamina; ISN= isonicotinamida; Cl= cloro; N3= azida; e NCO= cianato}; e [Pd(Cdmba)( NCS)(dppp)] (7) {DMBA = N,N-dimetilbenzilamina; NCS = tiocianato e DPPP = difenilfosfinapropano}. Os compostos foram testados quanto pelo teste colorimétrico de MTT, brometo de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difenil-tetrazólio. Os compostos que apresentaram melhores resultados (3,4 e 7, em comparação com a cisplatina), foram submetidos ao teste do MTT a fim de traçar seu perfil citotóxico e citostático frente a linhagem celular LM3 (carcinoma mamário murino), além de quantificar citocinas e analisar a apoptose por Citometria ... / Abstract: The cancer manifestation caused by uncontrolled growth of cells, affects millions of individuals and is a major cause of death worldwide. Considering that the drugs currently available for the treatment of limited efficacy (such as cisplatin) commonly linked to high toxicity, the search for new compounds capable of fighting cancer cells is urgently needed. With this growing interest in investigating new substances that are not toxic, but selective. Compounds of palladium(II) have been studied as an alternative to available drugs showing be promising for its low toxicity and ability to stimulate antitumor immune response. Macrophages are the first cells to be activated to participate in an immune response itself and cells are able to secrete more than hundred biologically active products, among these, reactive nitrogen species and active cytokines in the immune response and tissue formation. In this work seven compounds of palladium(II) were tested for potential antitumor and immune being: [Pd(dmba) (μ-Cl)]2 (1), [Pd(dma)(μ-N3)]2•H2O (2), [Pd (dmba)(μ-NCO)]2 (3), [Pd(dmba)Cl(isn)] (4), [Pd(dmba)(N3)(isn)] (5), [Pd(dmba)(NCO)(isn)] (6) {DMBA = N, Ndimethylbenzylamine; ISN = -isonicotinamide; Cl = chloro; N3 = azide; and NCO = cyanate}; and [Pd(C-dmba)(NCS)(dppp)] (7) = {DMBA = N,N‟ - dimethylbenzylamine; NCS= thiocyanate and DPPP = difenilfosfinapropano}. The compounds were tested by colorimetric assay of MTT, 3 [4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyl-tetrazolium. Compounds that showed better results (3.4 and 7, compared with cisplatin) were subjected to the MTT assay in order to trace their cytostatic and cytotoxic profile against LM3 cell line (murine mammary carcinoma), and analysis of apoptosis Flow Cytometry results involving cytotoxicity on these two cell types showed that each compound acts differently. Featured, against LM3 lineage compound 3 showed efficacy at a concentration of 25 mg / mL, as compound 4 showed the best ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-29Bitstream added on 2014-06-13T20:39:41Z : No. of bitstreams: 1 buitragosanchez_f_me_botfm.pdf: 280716 bytes, checksum: a974f556f8eb7fd716a4968b04ed954a (MD5) / Fundação de Ensino e Pesquisa em Ciências da Saúde (FEPECS) / A super-expressão do HER-2 tem sido associada a maior agressividade biológica do tumor e a resistência a alguns tipos de tratamento. O objetivo deste trabalho é avaliar o valor prognóstico da super-expressão do HER-2, nas pacientes portadoras de câncer de mama. Estudo coorte que analisou 90 pacientes com diagnóstico de carcinoma ductal infi ltrante de mama atendidas no Hospital Regional de Sobradinho no período de 1 de Janeiro de 2005 até o 31 de dezembro de 2010. A investigação da super-expressão do HER-2 foi realizada por técnica de Imunohistoquimica. As pacientes foram divididas em dois grupos: Grupo A presença de super-expressão do HER-2 (HER-2 positivo) e grupo B ausência de super-expressão (HER-2 negativo). Ambos os grupos foram comparados às características clinicas, patológicas, eventos adversos, sobrevida global e sobrevida livre de doença. A prevalência da presença do HER-2 na amostra foi de 15,55%. A meia de idade no momento do diagnóstico, o tamanho do tumor, o estado menstrual, o estádio clinico e estado linfonodal não foram fatores signifi cativos de prevalência para a presença do HER-2 positivo. O receptor de estrogênio (p=0,0356), receptor de progesterona (p=0,0059) e mostraram associação signifi cativa com o HER-2. A análise multivariada mostrou que a prevalência do HER-2, em pacientes com câncer é 2,92 vezes maior naqueles com receptor de estrogênio negativo (p= 0,0007) e 8,84 vezes maior naqueles com receptor de progesterona positivo (p< 0,0001). A sobrevida livre de doença e sobrevida global é igual em pacientes com HER-2 positivo. A sobrevida livre de doença para pacientes com axila com mais de 4 linfonodos comprometidos é menor (p=0,0009) assim como a sobrevida global (p<0,0001). O tamanho tumoral também é fator adverso mostrando que tumores maiores de... / The overexpression of HER-2 has been associated with increased aggressiveness of the tumor and resistance to some types of treatment. The objective of this study is to evaluate the prognostic value of overexpression of HER-2 in patients with breast cancer. A cohort study that analyzed 90 patients diagnosed with infi ltrating ductal carcinoma breast treated at the Regional Hospital Sobradinho the period 1 January 2005 until December 31, 2010. The investigation of the presence of overexpression of HER-2 was performed by immunohistochemical techniques. The patients were divided into two groups: Group A who had the overexpression of HER-2 and the B group who had no overexpression and compared the clinical, pathological, adverse events, overall survival and disease-free survival. The prevalence of the presence of HER-2 in the sample was 15.55%. The age at diagnosis, tumor size, menopausal status, clinical stage and lymph node status were not signifi cant factors prevalence for the presence of HER-2. The estrogen receptor (p = 0.0356), progesterone receptor (p = 0.0059) and showed signifi cant association with HER-2. Multivariate analysis showed that the prevalence of HER-2 in cancer patients is 2.92 times higher in those with estrogen receptor negative (p = 0.0007) and 8.84 times higher in those with progesterone receptor positive (p < 0.0001). The disease-free survival and overall survival is equal in patients with HER-2 positive. The disease-free survival for patients with more than 4 axillary lymph nodes is lower (p = 0.0009) and overall survival (p <0.0001). The tumor size is also an adverse factor showing that tumors larger than 2 cm have a lower disease-free survival (p = 0.0103) and shorter overall survival (p = 0.0103). The presence of over-expression of... (Complete abstract click electronic access below)