Thesis (Ph.D. in Molecular Biology) -- University of Colorado Denver, 2008. / Typescript. Includes bibliographical references (leaves 134-149). Free to UCD affiliates. Online version available via ProQuest Digital Dissertations;

Thesis (Ph.D. in Immunology) -- University of Colorado Denver, 2007. / Typescript. Non-Latin script record Includes bibliographical references (181-196). Free to UCD affiliates. Online version available via ProQuest Digital Dissertations;

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:56:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-30T17:50:23Z No. of bitstreams: 1 cp111463.pdf: 4432662 bytes, checksum: a585b229b3b920b2ee4fda25aa3206c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-30T17:52:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cp111463.pdf: 4432662 bytes, checksum: a585b229b3b920b2ee4fda25aa3206c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-30T17:52:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cp111463.pdf: 4432662 bytes, checksum: a585b229b3b920b2ee4fda25aa3206c7 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo verificar as modificações causadas na proliferação celular e na expressão gênica da glândula mamária de ratas com 21, 35, 50 e 100 dias que foram expostas à 2,3,7,8 tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD) durante a gestação (tratamento pré-natal) ou durante a lactação (tratamento pré-pubertal). MÉTODOS: Para o tratamento pré-natal, ratas Sprague-Dawley prenhas receberam no 15º dia após a concepção dose única de 3,0µg de TCDD/kg através de gavagem. Para o tratamento pré-pubertal, ratas lactantes receberam no 14º e 17º dias pós-parto 6,67ng ou 20,0ng de TCDD/g. Animais controles receberam volume equivalente de óleo de gergelim. Ao atingiram 21, 35, 50 e 100 dias de idade, as filhotes fêmeas das ratas que receberam TCDD foram sacrificadas e tiveram as glândulas mamárias extraídas para estudo do índice de proliferação celular e expressão gênica. Para o cálculo de índice de proliferação celular, dez ratas por grupo receberam uma injeção intraperitoneal de 200 mg/kg de 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrdU) e através de imunohistoquímica foram identificadas as células que estavam proliferando em cada estrutura da glândula mamária. Outras dez ratas por grupo tiveram o RNA da glândula mamária extraído, e este foi utilizado para o estudo de expressão gênica através de microarrays. Para determinar os genes diferencialmente expressos utilizou-se o teste-t bayesiano empírico moderado. Genes diferencialmente expressos (p<0,01) foram então categorizados de acordo com a função biológica ou via canônica de ação. Ainda, genes que se destacaram foram validados através de RT-PCR em tempo real. RESULTADOS: O tratamento pré-pubertal alterou a proliferação celular nas glândulas mamárias das ratas com 35, 50 e 100 dias, principalmente nos botões terminais (TEBs). A análise da expressão gênica demonstrou que o número máximo de genes diferencialmente expressos foi observado nos animais com 100 dias que receberam TCDD durante a gestação. No tratamento pré-pubertal, observou-se que a alta dose causou mais alterações do que a dose baixa. Cyp1b1 foi o gene que mais sofreu aumento de expressão em diferentes idades. A categorização dos genes desregulados de acordo com a função biológica mostrou que TCDD tem uma ampla ação, principalmente após o tratamento pré-pubertal com maior dose. As classes de genes mais afetadas foram proto-oncogenes, genes supressores de tumor e genes relacionados com o metabolismo de lipídeos. A via de sinalização mais atingida foi a via de sinalização do receptor de aril-hidrocarbono (AhR). Também se observou alterações na expressão de genes participantes da via de metabolização do estradiol, aumentando a produção de metabólitos prejudiciais ao DNA. CONCLUSÕES: O tratamento com TCDD resultou em mudanças na proliferação celular e na expressão gênica da glândula mamária das ratas. As mudanças gênicas observadas indicam que a célula mamária é submetida a estímulos genotóxicos ao mesmo tempo em que genes de reparo de DNA e supressores do crescimento tumoral ficam ativados no intuito de manter a estabilidade genômica. / PURPOSE: This work studied the modifications in cell proliferation and gene expression in the rat mammary gland of animals 21, 35, 50 and 100 days old that were exposed to 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) during pregnancy (prenatal treatment) or during lactation (prepubertal treatment). METHODS: For the prenatal treatment, pregnant Sprague-Dawley rats received on the 15th day post-conception, single dose of 3.0µg TCDD/kg through gavage. For the prepubertal treatment, lactate dams received on the 14th and 17th days post-delivery either 6.67ng or 20.0ng TCDD/g. Control group received equivalent volume of sesame oil. When the female offspring reached 21, 35, 50 and 100 days of age, they were sacrificed and their mammary gland extracted for cell proliferation and gene expression analyses. To calculate the cell proliferation index, ten rats per group received an intraperitoneal injection of 200 mg/kg of 5-Bromo-2'- deoxyuridine (BrdU) and through immunohystochemistry the cells in proliferation were identified in each mammary gland structure. Other ten rats per group had the RNA extracted from the mammary gland and used for gene expression analysis through microarrays. To determine the differentially expressed genes empirical Bayes moderated one sample t-test was performed. Differentially expressed genes (p<0.01) were categorized accordingly with biological function and canonical pathways. In addition, important genes were validated through real time RT-PCR. RESULTS: The prepubertal treatment modified the cell proliferation of 35, 50 and 100 days-old rat mammary gland, mainly in the terminal end buds (TEBs). The gene expression analysis showed that the maximum number of differentially expressed genes was reached in 100 days-old rats that received TCDD during pregnancy. The prepubertal treatment induced more changes with higher dose of TCDD. Cyp1b1 was the gene the most up-regulated genes at different ages. The categorization of the dysregulated genes according with their biological function showed that TCDD has a wide action, especially after the prepubertal treatment with high dose. The groups of genes more affected by TCDD were the proto-oncogenes, tumor suppressor genes and genes related to the metabolism of lipids. The most affected canonical pathway was the aryl hydrocarbon receptor signaling pathway. In addition, genes related to estradiol metabolism were modulated increasing the production of metabolites that damage the DNA. CONCLUSIONS: The TCDD treatment induced changes in the cell proliferation and gene expression of the rat mammary gland. The genomic changes observed indicate that the mammary cell is submitted to genotoxic stimuli and DNA repair genes as tumor suppressor genes are activated to keep the genomic stability. / CAPES: BEX 2829/05-3

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-19Bitstream added on 2014-06-13T20:50:08Z : No. of bitstreams: 1 schweigert_a_me_araca.pdf: 714062 bytes, checksum: 9d2cbde1f9ebd958c778197ccd0452e5 (MD5) / As neoplasias mamárias em gatas representam o terceiro tipo neoplásico mais frequente nesta espécie. A maioria destas neoplasias são malignas, e exibem alto potencial metastático. Devido a isto, e a escassez de trabalhos referentes ao prognóstico de gatas com câncer de mama, foram avaliados em 32 amostras de neoplasia mamária de gatas, a expressão imuno- histoquímica de alguns marcadores de prognóstico. As amostras foram segregadas em grupos seguindo os parâmetros de classificação da organização mundial de saúde em carcinomas tubulopapilares, cribriformes e sólidos e de acordo com o método de Nottighan modificado em graus I, II e III. Os cortes histológicos foram submetidos a processamento imuno-histoquímico para avaliação da expressão da metaloproteinase 9 (MMP-9), do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), da proteína de proliferação celular Ki- 67 e de linfócitos TCD3+, CD79+ e macrófagos, afim de se avaliar os diferentes padrões de classificação. Os resultados da marcação imuno- histoquímica foram avaliados com auxílio de um sistema de análise de imagem computadorizada para determinar a porcentagem da área imunomarcada. Em relação à classificação morfológica observou-se diferença significativa entre a densidade de linfócitos TCD3+ entre os grupos. Durante a análise nas amostras segregadas de acordo com a gradação histológica verificou-se diferença significativa entre a imunomarcação da MMP-9, entre a intensidade de infiltração de células TCD3+ e uma tendência de variação na proteína Ki-67. Observamos também correlação positiva entre os níveis de expressão da MMP-9 e da Ki-67, da MMP-9 e células TCD3, e da proteína Ki-67 com as células TCD3. Desta forma concluímos que classificação histológica dos carcinomas de mama em gatas não é um bom parâmetro para determinação do prognóstico da doença... / The mammary tumors in cats represent the third most common tumor type in the species. Most of these are malignant neoplasms exhibit a high metastatic potential. Because of this and the lack of studies regarding the prognosis for cats with breast cancer were evaluated 32 samples of breast cancer in cats. These samples were grouped according to morphological and histological classification, and the sections were submitted to immunohistochemical processing to evaluate the expression of metalloproteinase 9 (MMP-9), the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein of cell proliferation Ki-67 and CD3 + T lymphocytes, and CD79 + macrophages in order to evaluate differences in the different grading standards. The results of immunohistochemical marking were evaluated by using a system of computerized image analysis to assess the percentage of area immunomarked. Regarding the morphological classification showed a significant difference between the amount of T lymphocytes CD3 + between the groups. During analysis the samples segregated according to histologic grading there was significant difference between the immunostaining of MMP-9, between the intensity of infiltration of T cells CD3 + and a tendency of variation in the Ki-67 protein. We also observed a positive correlation between the expression levels of MMP-9 and Ki-67, MMP-9 and TCD3 cells, and Ki-67 protein in cells T CD3+. Thus we conclude that histologic classification of breast carcinomas in cats is not a good parameter for determining the prognosis of the disease when evaluated together with the levels of immunohistochemical expression of MMP- 9, VEGF and Ki67. The best best parameters for determining the prognosis was observed when the histological grade was considered . The higher was the proliferative index determined by the positivity of Ki-67 protein from neoplastic cells, the greater... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-23Bitstream added on 2014-06-13T19:29:09Z : No. of bitstreams: 1 gouveia_gm_me_araca.pdf: 550439 bytes, checksum: 076629ee6a296748de89f110784f058d (MD5) / Os tumores mamários são as mais freqüentes neoplasias em cadelas, representando cerca de 50% dos tumores diagnosticadas nesta espécie e tem maior incidência em fêmeas de meia idade a idosas. Têm sido utilizadas como modelo de estudo para neoplasias mamárias de mulher devido às várias características comuns como as similaridades histológicas e imuno- histoquímicas. Na última década, estudos baseados nos perfis moleculares das neoplasias mamárias, tornaram possível a identificação de algumas células neoplásicas com características de células tronco – as células tronco tumorais (CTT). Uma das moléculas putativas para marcação das CTTs é o CD44. A telomerase, que vem sendo relatada como marcador tumoral, é potencialmente expressa também em CTTs. Estudos recentes estabeleceram um elo crucial entre a transição epitelial-mesenquimal (EMT) e a aquisição de propriedades moleculares e funcionais de células-tronco. Por este motivo analisamos a expressão das proteínas CD44, Citoqueratinas AE1/AE3 e Vimentina, e da enzima telomerase, em tumores mamários de cadelas a fim de investigar o potencial de marcação de CTTs e sua relação com a EMT. Para tal foram utilizados métodos de imuno-histoquímica em tecidos parafinizados tanto in vivo quanto in vitro, fazendo-se uso de técnicas como Tissue MicroArrays (TMA), citoinclusão de tecidos tumorais e cultivos celulares. A expressão da telomerase nas células de tumores mamários cultivadas foi analizada por PCR em tempo real. Nas amostras de tecido parafinizado in vivo, a imunomarcação da citoqueratina demonstrou diferença significativa entre tumores benignos e malignos (p˂0,05), mostrando-se mais intensa em tumores malignos. Já a vimentina apresentou maior intensidade de marcação em tumores benignos, porém não apresentando diferença significativa (p˂0,05)... / Mammary tumors are the most frequent cancers in dogs, representing about 50% of tumors, and have a higher incidence in females of middle aged and elderly. These tumors have been used as a model for breast cancer in women due to several common characteristics such as histological and immunohistochemical similarities. In the last decade, studies based on molecular profiles of breast cancer, made possible the identification of some neoplastic cells with characteristics of stem cells – cancer stem cells (CSC). One of the putative molecules of CSCs is CD44. Telomerase, which has been reported as a tumor marker, is potentially also expressed in CSCs. Recent studies have established a crucial link between the epithelial- mesenchymal transition (EMT) and the acquisition of molecular and functional properties of stem cells. For that reason we analyzed the expression of proteins CD44, Cytokeratins AE1/AE3 and Vimentin, and the telomerase enzyme, in dogs mammary tumors, to investigate the potencial for CSC markers, and its relation with the EMT using immunohistochemistry in paraffin embedded tissues in both in vivo and in vitro, making use of techniques such as Tissue MicroArrays (TMA), cell blocks from tumors and cell cultures. Besides that, we analyzed the telomerase expression in mammary tumor cultivated cells by quantitative real time PCR. Immunostaining of cytokeratin had no significant difference between benign and malignant tumors (p ˂ 0,05), being more intense in malignant tumors. However vimentina showed higher staining intensity in benign tumors, but with no significant difference (p ˂ 0,05). The expression of CD44 was higher in malignant tumors that have greater proliferative and metastatic potencial, however its relation with EMT was not detected in the analyzed tumors. Telomerase expression was positive in the neoplastic cultivated cells, however without significant difference... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:50:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:58:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 10889.pdf: 8795852 bytes, checksum: 4a1b61f9cb45fc0e97b6051523a7b01d (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:36:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:59:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:27:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:05:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:55:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:05:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 12869.pdf: 4811202 bytes, checksum: 0173b38520efa5ad7a157158292d063c (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP