Thesis (M.T.P. 1979) from the Department of Architecture, University of Adelaide.

En esta investigación se han estudiado las toxinas del veneno de la anémona de mar Anthothoe chilensis (Lesson, 1830), a partir de los tentáculos y cuerpos de animales vivos recolectados entre 8 y 10 metros de profundidad en las Isla Cabinza-San Lorenzo. Se utilizaron tres fracciones precipitadas con sulfato de amonio y tres fracciones precipitadas con acetona para realizar ensayos in vitro y un ensayo in vivo. Se observó que las proteínas contenidas en el veneno de A. chilensis tienen un peso molecular entre 14 y 94 kDa. Se evidenció la presencia de carbohidratos en todas las fracciones evaluadas y mediante tinción PAS de geles PAGE-SDS se detectó la presencia de glicoproteínas. Todas las fracciones mostraron tener actividad hemolítica, fosfolipásica y proteolítica. La fracción Ach1at tuvo la actividad hemolítica más alta, la fracción acetónica Ach3at tuvo la mayor actividad fosfolipásica. Cuando las fracciones se probaron sobre el desarrollo embrionario de huevos de erizo de mar, éstas mostraron efectos en la morfología tales como blástulas lisadas, exogastrulación, prismas y larvas pluteus anormales. Entre los efectos citológicos se observaron gástrulas con menos configuraciones mitóticas, núcleos heteropicnóticos, cariorresis y núcleos gigantes. Las fracciones ensayadas mostraron producir hipersensibilidad tipo I en ratones albinos, sin llegar a desencadenar shock anafiláctico. / --- In this investigation toxins of the venom of the sea anemone Anthothoe chilensis (Lesson, 1830) have been studied, from the tentacles and bodies of alive animals collected between 8 and 10 meters of depth in the Island Cabinza-San Lorenzo. Three precipitated fractions with ammonium sulfate and three precipitated fractions with acetone were used to make assays in vitro and one assay in vivo. It was observed that the proteins contained in the venom of A. chilensis have a molecular weight between 14 and 94 kDa. The presence of carbohydrates was evidenced in all the evaluated fractions and by stain PAS of gels SDS-PAGE the glycoproteins presence were detected. All the fractions showed to have hemolytic, phospholipase and proteolytic activities. The acetonic fraction I had the higher hemolytic activity, the acetonic fraction III had the greater phospholipasic activity. When the fractions were assayed on the sea urchin eggs embryonic development, they showed to have morphologic effects like lisated blastules, early exogastrulation, and abnormal prisms and pluteus larvae. Cytological effects like gastrulaes with less mitotic configurations, heteropycnotic nuclei, karyorrhexis and giant nuclei were observed. The evaluated fractions showed to produce hypersensitivity type I in mice, without getting to trigger anaphylactic shock.

El potencial antibacteriano de las algas se debe a su capacidad para sintetizar una gran variedad de compuestos químicos, entre los que podemos citar compuestos nitrogenados y disterpenos en algas verdes, terpenos halogenados en las algas rojas y metabolitos mixtos de origen tenperomático en las algas pardas. La obtención de las sustancias bioactivas de las algas se realizó con el protocolo de extracción según Vlachos et al., 1996; y, para determinar su potencial antibacteriano, se utilizó la técnica de difusión en agar. Los resultados obtenidos en el presente estudio permiten caracterizar a Grateloupia doryphora, Ahnfeltiopsis durvillaei, Prionitis decipiens (Rhodophyta), Petalonia fascia ( Phaeophyta) y Bryopsis plumosa (Chlorophyta) como macroalgas marinas peruanas productoras de sustancias bioactivas con potencial antibacteriano y se confirma además que este propiedad esta distribuida entre los tres grupos de macroalgas. Solamente las bacterias grampositivas reportaron susceptibilidad a los extractos algales ensayados. La cepa Staphylococcus aureus ATCC 6633 y las cepas clínicas S. aureus ATCC 25923 y Enterococcus faecalis ATTCC 29212 fueron sensibles. B. plumosa (Chlorophyta) presenta el mayor potencial antibacteriano contra ambas cepas de S. aureus, y P. Fascia (Phaeophyta) produce metabolitos secundarios con el mayor espectro antibacteriano. / --- Antibacterial potential of algae is due to their ability to synthesize great variety of chemical compounds, between these we can mention nitrogenated and diterpens compounds in green algae, halogenated terpens in red algae an complex metabolites originated of aromatic-terpens in brown algae. To obtain bioactive substances of seaweeds employed Vlachos’ s protocol (1996); and to determine their antibacterial potential used diffusion agar technique. Results obtained in this study permit to characterize Grateloupia doryphora, Ahnfeltiopsis durvillaei, Prionitis decipiens (Rhodophyta), Petalonia fascia (Phaeophyta) and Bryopsis plumose (Chlorophyta) es preuvian seawweds producer of bioactive substances with antibacterial potential and confirm that this activity between all macroalgal groups. Only Gram positive bacteria reported susceptibility un algal extracts assay, Staphylococcus aereus ATCC 6633 and clinic strains S. aereus ATCC 25923 and Enterococcus faecalis ATCC 29212 showed sensibility.

En el presente trabajo se determino la variabilidad hidrográfica y la dinámica física en la Bahía de Samanco (BS) mediante mediciones de campo, para ello se utilizó el procesamiento y análisis de datos hidrográficos y de corrientes marinas(CsMs) superficiales y subsuperficiales que permita estudiar la variabilidad estacional e interanual de la hidrografía y dinámica física de largo período. Se realizaron distribuciones superficiales así como series temporales de los campos de velocidad, temperatura (T) y salinidad (S). Las campañas de mediciones hidrográficas se dieron entre los años 2003 y 2008 en diferentes meses, estudiándose el comportamiento estacional de la hidrografía y la dinámica en la BS mientras que los datos de viento se tomaron durante los meses de febrero del 2004 y setiembre del 2005. En la utilización de los datos de viento se utilizaron estaciones meteorológicas de alta precisión (SUTRON), siendo dichos datos tomados en intervalos de tiempo de una hora en el día de cada mes durante un año; así estos datos fueron procesados obteniéndose como producto series temporales de viento. Para el análisis de los datos hidrográficos se utilizo la formulación de la UNESCO-TEOS2010 (Thermodynamic Equation of seaWater 2010), que desarrolla la función de Gibbs para la obtención de variables hidrográficas que son globalmente aceptadas por la comunidad oceanográfica. Los resultados se presentan en distribuciones superficiales y series temporales de las CsMs, T y S. La distribución de la salinidad en la BS presento pequeñas variaciones tanto en la capa superficial (0 m) como en la capa de fondo (20 m), mientras que en la temperatura se registraron mayores variaciones entre superficie y fondo; registrándose temperaturas superficiales intensas en Verano y mínimas en Otoño. La circulación de las CsMs presentaron generalmente sentido horario y anti horario, registrándose como promedio superficial (0 m) valores intensos en Invierno y bajos en Otoño. Así también se desarrollaron métodos de estadística en los datos como la correlación (T vs S) encontrándose altos valores generalmente en todas las estaciones, siendo el más alto en Primavera. Palabras clave: circulación, variabilidad hidrográfica y corrientes marinas / --- In this study the hydrographic variability and the physical dynamics in the Bay of Samanco (BS) by field measurements, for which the processing and analysis of hydrographic data and surface and subsurface ocean currents that allow studying the seasonal variability was used is determined and year of hydrography and physical dynamics of long period. Surface distributions and time series of velocity fields, temperature and salinity were made. Hydrographic measurements campaigns took place between 2003 and 2008 in different months, studying the seasonal behavior of hydrography and dynamics in the BS while wind data taken during the months of February 2004 and September 2005. In using wind data precision weather stations (Sütron) they were used, the data being taken at time intervals of one hour on the day of each month for a year; and these data were processed product obtained as time series of wind. For the analysis of hydrographic data formulating UNESCO-TEOS2010 (Thermodynamic Equation of Seawater 2010), which develops the Gibbs function for obtaining hydrographic variables that are globally accepted by the oceanographic community was used. The results are presented in time series and surface distributions of the CSMS, T and S .The salinity distribution in the BS I present small variations in both the surface layer (0m) and bottom layer (20m), while in greater temperature variations between surface and bottom were recorded; intense recorded surface temperatures in summer and minimum in autumn. The circulation of the CsMS had generally clockwise and counterclockwise, registering average as surface (0m) intense in winter and autumn low values. And statistical methods were also developed in the correlation data (T vs. S) was found generally higher values in all seasons, being highest in spring. Keywords: circulation, sea currents and hydrographic variability

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En los últimos treinta años se ha visto un aumento a nivel global del fenómeno de Floración de algas nocivas (FAN), más conocido como marea roja. Esto implica, entre otras cosas, problemas de salud pública y una gran pérdida económica para los productores de moluscos bivalvos. Es por esto que se ha generado un gran interés para entender el por qué de estos fenómenos naturales y si existe la posibilidad de crear métodos que permitan: predecir, mitigar o controlar estas floraciones una vez que se producen. Por esta razón, es importante investigar acerca de los factores involucrados en el fenómeno, entre los cuales se encuentran las bacterias que normalmente crecen asociadas a las microalgas causantes de las FAN. En Chile las FAN se producen fundamentalmente por el crecimiento explosivo de los dinoflagelados Alexandrium catenella y Dynophysis acuta, productores de toxinas paralizante y diarreica respectivamente. En el laboratorio de Toxinas Marinas de la Universidad de Chile se mantiene en cultivo una cepa de Alexandrium catenella denominada ACCO1 la cual fue aislada el año 1994 en la XI región de Aysén. A partir de estos cultivos, en el año 2002 se aislaron, caracterizaron e identificaron tres bacterias asociadas a esta microalga, correspondientes a: Citophaga sp. AMA-01, Pseudoalteromonas sp. cepa AMA- 02, y Ruegeria atlántica cepa AMA- 03. Ruegeria atlántica cepa AMA-03 es una bacteria que crece en forma saprofita asociada a A. catenella cepa ACC01, pero al crecerla separada de la microalga en un medio de cultivo enriquecido con nutrientes orgánicos, libera al medio un producto, el cual es capaz de producir la lisis de A. catenella en cultivo. Cuando la misma bacteria, libre de materia orgánica (lavadas) es devuelta al cultivo de origen, esta recupera su carácter simbionte ya que no se observa muerte, ni lisis celular de las microalgas. El efecto lítico de este factor liberado al medio, es menor cuando se pone en contacto con Heterocapsa sp. y A. catenella cepa ACC02, sugiriendo algún grado de especificidad de este fenómeno . Al aislar, purificar parcialmente y caracterizar este producto, logramos concluir que se trata de un compuesto de características parcialmente hidrofóbicas, de un tamaño menor de 1 KDa con capacidad de inmovilizar y producir la muerte de las microalgas, las que luego son degradadas probablemente por las enzimas liberadas al medio por las bacterias asociadas al cultivo del dinoflagelado

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Las Floraciones de Algas Nocivas (FAN) en el mar, son fenómenos de gran impacto económico, productivo, sanitario y social. El dinoflagelado tóxico Alexandrium catenella cepa ACC01, fue aislado desde la XIa Región de Aysen, Chile (45º 32´ S, 73º 34´O), un área que fue afectada previamente por Floraciones de Algas Nocivas del tipo paralizante y diarreico. Este dinoflagelado ha sido cultivado y mantenido en el Laboratorio de Toxinas Marinas de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile. A partir de estos cultivos, en el año 2002, se aisló la bacteria marina Pseudoalteromonas sp. cepa AMA-02. Esta bacteria, que normalmente crece en forma saprófita asociada a Alexandrium catenella, al crecerla separada de ella, en un medio de cultivo con nutrientes orgánicos, es capaz de liberar al medio de cultivo sustancias líticas para la microalga de la cual fue aislada. Sin embargo, la actividad lítica no se observa cuando la bacteria, libre de nutrientes orgánicos, es reinsertada en el cultivo de A. catenella ACC01. El efecto lítico observado, es aparentemente específico para las cepas ACC01 y ACC02 de A. catenella, pero no para la microalga no tóxica Heterocapsa sp. cepa SGM01. Las sustancias líticas liberadas al medio de cultivo son capaces de inmovilizar inicialmente al dinoflagelado y promover, posteriormente la lisis celular a través de enzimas hidrolíticas liberadas al medio por la bacteria Pseudoalteromonas sp. cepa AMA-02, normalmente asociadas a la microalga. La caracterización preliminar y purificación de el o los factores liberados al medio de cultivo, responsables de la actividad lítica, demostró que corresponde a un compuesto de características hidrofóbicas, de un peso molecular menor a 1 KDa

El potencial antibacteriano de las algas se debe a su capacidad para sintetizar una gran variedad de compuestos químicos, entre los que podemos citar compuestos nitrogenados y disterpenos en algas verdes, terpenos halogenados en las algas rojas y metabolitos mixtos de origen tenperomático en las algas pardas. La obtención de las sustancias bioactivas de las algas se realizó con el protocolo de extracción según Vlachos et al., 1996; y, para determinar su potencial antibacteriano, se utilizó la técnica de difusión en agar. Los resultados obtenidos en el presente estudio permiten caracterizar a Grateloupia doryphora, Ahnfeltiopsis durvillaei, Prionitis decipiens (Rhodophyta), Petalonia fascia ( Phaeophyta) y Bryopsis plumosa (Chlorophyta) como macroalgas marinas peruanas productoras de sustancias bioactivas con potencial antibacteriano y se confirma además que este propiedad esta distribuida entre los tres grupos de macroalgas. Solamente las bacterias grampositivas reportaron susceptibilidad a los extractos algales ensayados. La cepa Staphylococcus aureus ATCC 6633 y las cepas clínicas S. aureus ATCC 25923 y Enterococcus faecalis ATTCC 29212 fueron sensibles. B. plumosa (Chlorophyta) presenta el mayor potencial antibacteriano contra ambas cepas de S. aureus, y P. Fascia (Phaeophyta) produce metabolitos secundarios con el mayor espectro antibacteriano. / Antibacterial potential of algae is due to their ability to synthesize great variety of chemical compounds, between these we can mention nitrogenated and diterpens compounds in green algae, halogenated terpens in red algae an complex metabolites originated of aromatic-terpens in brown algae. To obtain bioactive substances of seaweeds employed Vlachos’ s protocol (1996); and to determine their antibacterial potential used diffusion agar technique. Results obtained in this study permit to characterize Grateloupia doryphora, Ahnfeltiopsis durvillaei, Prionitis decipiens (Rhodophyta), Petalonia fascia (Phaeophyta) and Bryopsis plumose (Chlorophyta) es preuvian seawweds producer of bioactive substances with antibacterial potential and confirm that this activity between all macroalgal groups. Only Gram positive bacteria reported susceptibility un algal extracts assay, Staphylococcus aereus ATCC 6633 and clinic strains S. aereus ATCC 25923 and Enterococcus faecalis ATCC 29212 showed sensibility.

En esta investigación se han estudiado las toxinas del veneno de la anémona de mar Anthothoe chilensis (Lesson, 1830), a partir de los tentáculos y cuerpos de animales vivos recolectados entre 8 y 10 metros de profundidad en las Isla Cabinza-San Lorenzo. Se utilizaron tres fracciones precipitadas con sulfato de amonio y tres fracciones precipitadas con acetona para realizar ensayos in vitro y un ensayo in vivo. Se observó que las proteínas contenidas en el veneno de A. chilensis tienen un peso molecular entre 14 y 94 kDa. Se evidenció la presencia de carbohidratos en todas las fracciones evaluadas y mediante tinción PAS de geles PAGE-SDS se detectó la presencia de glicoproteínas. Todas las fracciones mostraron tener actividad hemolítica, fosfolipásica y proteolítica. La fracción Ach1at tuvo la actividad hemolítica más alta, la fracción acetónica Ach3at tuvo la mayor actividad fosfolipásica. Cuando las fracciones se probaron sobre el desarrollo embrionario de huevos de erizo de mar, éstas mostraron efectos en la morfología tales como blástulas lisadas, exogastrulación, prismas y larvas pluteus anormales. Entre los efectos citológicos se observaron gástrulas con menos configuraciones mitóticas, núcleos heteropicnóticos, cariorresis y núcleos gigantes. Las fracciones ensayadas mostraron producir hipersensibilidad tipo I en ratones albinos, sin llegar a desencadenar shock anafiláctico. / In this investigation toxins of the venom of the sea anemone Anthothoe chilensis (Lesson, 1830) have been studied, from the tentacles and bodies of alive animals collected between 8 and 10 meters of depth in the Island Cabinza-San Lorenzo. Three precipitated fractions with ammonium sulfate and three precipitated fractions with acetone were used to make assays in vitro and one assay in vivo. It was observed that the proteins contained in the venom of A. chilensis have a molecular weight between 14 and 94 kDa. The presence of carbohydrates was evidenced in all the evaluated fractions and by stain PAS of gels SDS-PAGE the glycoproteins presence were detected. All the fractions showed to have hemolytic, phospholipase and proteolytic activities. The acetonic fraction I had the higher hemolytic activity, the acetonic fraction III had the greater phospholipasic activity. When the fractions were assayed on the sea urchin eggs embryonic development, they showed to have morphologic effects like lisated blastules, early exogastrulation, and abnormal prisms and pluteus larvae. Cytological effects like gastrulaes with less mitotic configurations, heteropycnotic nuclei, karyorrhexis and giant nuclei were observed. The evaluated fractions showed to produce hypersensitivity type I in mice, without getting to trigger anaphylactic shock.

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Estudia bioquímicamente el veneno de Phymactis papillosa var. rubra-viridis, una de las 8 variedades de esta especie. Las anémonas son colectadas en la bahía de Ancón y luego trasladadas al laboratorio, donde el veneno es obtenido mediante shock hipotónico, colocando 7 ejemplares en un beaker con 30 ml de agua destilada, durante 60 minutos. Luego, el material es filtrado en papel Whatman y centrifugado a 12000 rpm por 30 minutos. El sobrenadante es liofilizado. El análisis electroforético del veneno soluble de Phymactis papillosa var. rubra-viridis muestra la presencia de 5 bandas proteicas con pesos moleculares entre 5 y 25.1 kDa. El veneno soluble es fraccionado por cromatografía de filtración en una columna de Sephadex G-50, obteniéndose cuatro picos de proteína (I, II, III y IV). Tanto en el veneno soluble como en las fracciones colectadas se mide actividad proteolítica, hialuronidasa, fosfolipasa, fosfatasa ácida y fosfatasa alcalina; así como, actividad hemolítica y neurotóxica. Se evidencia actividad proteolítica sobre caseína, en el veneno soluble y en los picos I y III. No se detecta actividad de hialuronidasa, fosfolipasa, fosfatasa ácida y fosfatasa alcalina. La actividad hemolítica, ensayada sobre eritrocitos humanos, se encuentra en el veneno soluble y en el pico II. Finalmente, tanto el veneno soluble como el pico III muestran ser neurotóxicos al ser inyectados intraperitonealmente en ratones albinos. Se concluye que el veneno soluble de P. papillosa var. rubra-viridis tiene actividad proteolítica, hemolítica y neurotóxica. / Tesis