Atualmente a terapia e as práticas de manejo da mastite estão baseadas na administração de agentes antimicrobianos com ampla atividade contra os microrganismos mais comuns desta doença. Os fármacos são administrados diretamente no canal da teta e/ou por sistêmica. Os tratamentos com antimicrobianos são realizados durante o período seco como terapia preventiva, ou durante o período de lactação como terapia curativa. O leite produzido por animais tratados pode conter resíduos do medicamento. A presença de resíduos de antimicrobianos no leite constitui um risco para a saúde pública devido ao fenômeno de múltipla resistência, bem como uma causa de perdas econômicas, considerando a fabricação de queijo e iogurte, entre outros derivados lácteos. A proposta deste estudo foi avaliar alguns fatores que contribuem para a ocorrência de resíduos em vacas tratadas além do período recomendado para descarte. Os fatores avaliados foram: fisiológico, como a produção leiteira; clínico, como a mastite e farmacológico como a via de administração e o fármaco utilizado. Foi usado um teste comercial para a detecção de resíduos (Delvotest®) por inibição microbiológica. Entre os fatores estudados, foi demonstrada a influência da produção leiteira, ou seja, animais com produção leiteira maior do que 20L/dia apresentaram menor ocorrência de resíduo (39,5%), quando comparado com aqueles com produção menor do que 20L/dia (70,7%) e a diferença foi significante (P < 0,0001). Entre os fatores clínicos foi determinado que a presença e intensidade do processo inflamatório contribuem para a ocorrência de resíduos. Deste modo, entre os quartos com mastite clínica tratados o nível de resíduo foi 47,7%, os quartos com mastite subclínica tratados apresentaram 34,9% e os controles 9,5% (quartos sem mastite tratados) e a diferença entre os três grupos foi significante (P = 0,0381, P = 0,0008, P = 0,0209). Ao se comparar a ocorrência de resíduos no leite de quartos tratados durante a lactação (41,9%) com os resíduos nos quartos que receberam a terapia de vaca seca (23,2%) foi observado um maior nível entre os grupos tratados durante a lactação e a diferença foi significante (P < 0,0001). Em relação aos fatores farmacológicos, a via de aplicação bem como o grupo farmacológico do antimicrobiano utilizado no tratamento foram demonstradas diferenças estatísticas tanto para os diversos antimicrobianos, quanto para as vias de administração. Um maior nível de resíduo foi observado entre os grupos farmacológicos em quartos tratados por via intramamária com aminoglicosídeos (gentamicina) (66,7%). E o maior nível de resíduo foi observado quando ambas as vias foram utilizadas simultaneamente, tanto para aminoglicosídeos (93,7%), quanto para betalactâmicos (100%). O conhecimento de que o pKa dos antimicrobianos irá determinar diferentes níveis de distribuição nos órgãos e tecidos sustenta a hipótese que a via de administração pode influenciar a presença de resíduos de antimicrobianos no leite. Conseqüentemente, o uso simultâneo das duas vias de administração, uma prática comum, contribuiu também para um alto risco da ocorrência de resíduos de antimicrobianos. Deve-se ressaltar que a redução da presença de resíduos no leite não depende apenas de normas e regulamentos, mas envolve uma orientação aos produtores e aos veterinários para controlar e/ou prevenir os fatores de risco. Assim, os resultados deste estudo irão contribuir para esclarecer alguns aspectos importantes para um melhor entendimento da ocorrência de resíduo no leite além do período recomendado para descarte. / Current mastitis therapy and management practices are base on the administration of antimicrobial agents with high activity against most common mastitis bacterial pathogens. Drugs are administrated directly into the teat canal and/or systemically. Antibiotic treatments are performed during the dry period as preventive therapy, or during the lactating periods as therapeutic cure. Milk produced from treated animals may contain drug residues. The presence of antibiotic residues in milk constitutes a public health risk due to the multi-resistance phenomenon, as well as, a source of economical losses, considering the industries of cheese and yogurts, among others dairy products. The purpose of this study was evaluated some factors that contribute to the occurrence of residues in treated cows beyond the recommended discarded period. The evaluated factors were: physiological, as milk production, clinical, as mastitis and pharmacological, as routes and antimicrobials. It was used a commercial test for residues detection (Delvotest®) by microbiological inhibition. Among the clinical factors it was demonstrated the influence of the milk production, so animals with milk production higher than 20 L/day showed lower occurrence of residues (39.5%), compared to the ones with less than 20 L/day (70.7%) the difference was significant (P<0.0001). Among the clinical factors it was determinated that the presence of inflammatory process and the intensity of it, contributes to the presence of residues. Therefore, among the clinical mastitis treated quartes the level of residues was 47.7%, while the subclinical treated quartes showed 34.9% and, the control ones 9.5% (i.e. treated quartes without mastitis) and the difference among the three groups was significant (P=0.0381, P=0.0008, P=0.0209).Comparing the residues in milk from treated quartes during lactation (41.9%) with the quartes that received the dry cow therapy (23.2%) it was observed a higher level of residues among the groups treated during the lactation and the difference was significant (P<0.0001). Among the pharmacological factors, the routes as well the pharmacological group of the antimicrobials used in the treatment showed statistical differences either among the antimicrobials as well as the administration routes. A high level of residues was observed among pharmacological groups in quartes treated by intramammarian route with aminoglicosides (gentamicin) (66.7%). And, the highest level of residues was observed when both route where used simultaneously, either with aminoglicosides (93.7%) as well as with betalactamics (100%). The knowledge that different pKa among the antimicrobials will determine the level of distribution in different organs and tissues, support the hypothesis that the administration route could influence the presence of residues of antibiotics in milk. Consequently, the simultaneous use of both administration routes, a very usual practice, could also contributes to a higher risk of antimicrobial residue occurrence. To reduce this possibility, it is not only a matter of Regulatory Affairs, but also involves the dairy farmers and veterinarians\' proper orientation about how to avoid and to control the risk factors, therefore, the results of this study will contribute to clarify some important aspects to a better understanding of the occurrence of residues in milk beyond the recommend discard period.

Orientador: José Carlos de Figueiredo Pantoja / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar novas estratégias de identificação e tratamento de mastite subclínica causada por Streptococcus agalactiae. Dois estudos foram conduzidos para alcançar os objetivos propostos: 1) um ensaio clínico randomizado, para avaliar a eficácia do tratamento de S. agalactiae com cloxacilina intramamária (CLOXIMM), cefquinoma intramamária (CEFIMM) e cefquinoma intramuscular (CEFIM); e avaliar a não-inferioridade da CLOXIMM em relação a CEFIMM. E, 2) um estudo de acurácia diagnóstica, para estimar a acurácia do Somaticell, California Mastitis Test (CMT) e do exame microbiológico do leite composto (leite dos quatro quartos) na detecção de quartos e animais infectados com S. agalactiae. Os resultados indicaram que quartos tratados com CEFIM apresentaram menor taxa de cura bacteriológica (55%) do que aqueles tratados com CLOXIMM (86%) ou CEFIMM (98%). A diferença na proporção de cura bacteriológica entre CEFIMM e CLOXIMM foi de 0,121 (intervalo de confiança de 95%: 0,056 - 0,184). A CLOXIMM foi considerada não inferior a CEFIMM quando margens de não inferioridade de 0,20 e 0,25 foram utilizadas. Contudo, a determinação da não inferioridade foi inconclusiva para margens de 0,10 e 0,15. A cultura do leite composto apresentou acurácia diagnóstica satisfatória (95,7%) quando comparada a cultura individual por quarto. Para identificação dos quartos infectados com S. agalactiae, o ponto de corte considerado mais adequado foi de 205.000 células/mL para o teste So... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of the present study was to assess new strategies to identify and treat Streptococcus agalactiae subclinical mastitis. Two studies were conducted to achieve the proposed objectives: 1) a randomized clinical trial, to assess the efficacy of intramammary cloxacillin (CLOXIMM), intramammary cefquinome (CEFIMM), and intramuscular cefquinome (CEFIM), to treat S. agalactiae intramammary infections (IMI); and assess whether CLOXIMM was non-inferior to CEFIMM to treat S. agalactiae IMI. And, 2) a diagnostic accuracy study, to estimate the accuracy of the Somaticell, California Mastitis Test (CMT), and the composite milk microbiological examination of milk to detect S. agalactiae IMI. Results indicated that the bacteriological cure rate was lower for quarters treated with CEFIM (55%), as compared with CLOXIMM (86%) or CEFIMM (98%). The bacteriological cure difference between CEFIMM and CLOXIMM was 0.121 (95% confidence interval: 0.056 - 0.184). The CLOXIMM was considered non-inferior to CEFIMM when the non-inferiority margins of 0.20 and 0.25 were considered. Nevertheless, determination of non-inferiority was inconclusive for margins of 0.10 and 0.15. Microbiological examination of composite milk was of high accuracy (95.7%), as compared with microbiological examination of quarter milk samples. The thresholds of 205,000 cells/mL for the Somaticell and of score 1 for the CMT can be considered the most appropriate for diagnosing S. agalactiae IMI. The higher sensitivity an... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Carlos de Figueiredo Pantoja / Resumo: O objetivo desse estudo foi identificar fatores de risco para casos repetidos de mastite clínica (MC). Duas fazendas foram visitadas mensalmente durante 10 meses. Amostras de leite foram colhidas de todos os casos incidentes de MC. Vacas foram observadas prospectivamente e um caso foi definido quando uma vaca sofreu o segundo caso de MC na mesma lactação. Para cada caso, três controles pareados por dias em lactação foram selecionados aleatoriamente a partir do coorte de vacas que não tiveram MC. Em cada visita, uma série de características do úbere e tetas foram avaliadas durante a ordenha. O tempo mediano até a ocorrência do primeiro caso de MC foi de 84 dias e o intervalo entre o primeiro e segundo casos foi de 39 dias. Distância da teta ao solo, hiperqueratose da extremidade da teta e produção de leite foram associadas individualmente à ocorrência de um caso repetido de MC, mas não permaneceram no modelo multivariável final. Vacas avaliadas como "muito fácil de ordenhar" foram 3,7 vezes mais propensas a sofrerem um caso repetido de MC do que vacas avaliadas como "difícil de ordenhar". Vacas cujos úberes eram posicionados abaixo do jarrete, e de paridade >2, foram 3,6 e 2,5 vezes mais propensas a sofrerem um caso repetido de MC do que aquelas cujo úbere foi posicionado acima do jarrete e vacas de paridade 1, respectivamente. Resultados deste estudo destacam a importância das características das tetas e do úbere como fatores de risco para casos repetidos de CM. / Abstract: The objective of this study was to identify risk factors for the occurrence of repeated cases of clinical mastitis (CM). Two farms were visited monthly during 10 months. Milk samples were collected from all cases of CM. Cows were observed prospectively and a case was defined when a cow experienced the second case of CM within the same lactation. For each repeated case, three controls matched by days in milk (DIM) were randomly selected from the cohort of cows who did not experience CM. On each visit day, a series of udder and teat characteristics were recorded during milking. The median time to occurrence of the first case of CM was 84 DIM and the median interval between the first and second cases was 39 days. Teat to ground distance, teat-end hyperkeratosis, and milk production were individually associated with the occurrence of a repeated case of CM but did not remain in the final multivariable model. The odds of a repeated case of CM were 3.7 times greater for cows who were “very easy to milk”, as compared to cows who were “difficult to milk”. Cows who had their udders below the hock, and those of parity > 2 were 3.6 and 2.5 times more likely to experience a repeated case of CM, as compared to cows whose udder was positioned above the hock, and cows of parity 1, respectively. Findings of this study highlight the importance of teat and udder characteristics as risk factors for repeated cases of CM. / Mestre

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-06T12:32:01Z No. of bitstreams: 1 julianadelimabrandaoguimaraes.pdf: 664529 bytes, checksum: 956bb9224b1f44ba15331a41c9b58539 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-09-06T13:44:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 julianadelimabrandaoguimaraes.pdf: 664529 bytes, checksum: 956bb9224b1f44ba15331a41c9b58539 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-06T13:44:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 julianadelimabrandaoguimaraes.pdf: 664529 bytes, checksum: 956bb9224b1f44ba15331a41c9b58539 (MD5) Previous issue date: 2013-08-02 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Os objetivos desta pesquisa foram simular, analisar e quantificar o impacto econômico da presença da mastite em um rebanho de raça Holandesa localizada na Zona da Mata do Estado de Minas Gerais em três situações distintas. Na primeira situação ( I) foram considerados dados ideais de saúde da glândula mámaria, na segunda situação (II) foram considerados dados reais de saúde da glândula mamária e na terceira situação (III) dados reais foram considerados após tratamento dos casos subclínicos e descarte dos casos crônicos de mastite. A pesquisa foi realizada por meio de simulação utilizando a ferramenta “Mastitis calculation tool at farm level” (Huijps et al., 2008), desenvolvida para os rebanhos bovinos leiteiros da Holanda e estima o custo da mastite em um período retrospectivo de doze meses. Na situação I, o número de casos clínicos por ano e a contagem de células somáticas considerados ideais impactaram positivamente nos resultados de impacto econômico total anual da mastite .Na situação II, houve um acréscimo de 30% no impacto econômico total anual da mastite em relação a situação I , tendo, como mais representativa, as perdas devido à mastite subclínica em resposta a alta contagem de células somáticas do tanque e individuais dos animais. Na situação III, após o tratamento dos casos subclínicos e descarte de animais com mastite crônica, a representatividade das perdas devido à mastite subclínica diminuiu, porém, o impacto econômico total anual da mastite aumentou em relação a situação II, principalmente, devido ao acréscimo do impacto econômico do gasto com medicamentos e descarte de animais. Os resultados de impacto econômico da mastite aliado às análises de CCS e o conhecimento da dinâmica das infecções subclínicas permitiu enxergar os fatores que influenciam nas perdas devido à presença da mastite no rebanho. / The objectives were to simulate, analyze and quantify the economic impact of the presence of mastitis in a herd of Holstein located in the Zona da Mata of Minas Gerais in three different situations. In the first situation (I) were considered ideal data health of the mammary gland, in the second situation (II) were considered real data mammary gland health status and third (III) actual data were considered after treatment of subclinical cases and disposal of chronic cases of mastitis. The survey was conducted by means of simulation using the tool "Mastitis calculation tool at farm level" (Huijps et al., 2008), developed for the dairy herds in the Netherlands and estimates the cost of mastitis in a retrospective period of twelve months. In situation I, the number of clinical cases per year and somatic cell count considered ideal positively impacted the results of the annual total economic impact of mastitis. Situation In II, there was a 30% increase in annual total economic impact of mastitis in relation to I situation, and as more representative, losses due to subclinical mastitis in response to high somatic cell count of the tank and individual animal. In situation III, after treatment of subclinical cases and disposal of animals with chronic mastitis, the representativeness of the losses due to subclinical mastitis decreased, however, the annual total economic impact of mastitis increased over the situation II, mainly due to the increase of economic impact of drug spending and disposal of animals. The results of the economic impact of mastitis coupled with analysis of CCS and knowledge of the dynamics of subclinical allowed see the factors that influence the losses due to the presence of mastitis in the herd.

A presença de resíduos de antimicrobianos no leite representa um problema de saúde pública, podendo causar reações alérgicas e a seleção de bactérias resistentes aos antimicrobianos. É também um problema econômico interferindo nas culturas lácteas utilizadas na fabricação de derivados. A mastite é a causa mais freqüente para o tratamento de bovinos leiteiros com antimicrobianos. Foram objetivos deste trabalho estudar a influência do processo inflamatório no tempo de eliminação de diferentes antimicrobianos, administrados por via sistêmica ou intramamária em vacas em lactação e avaliar a presença de resíduos detectáveis em tanques resfriadores de propriedades leiteiras, correlacionando com os níveis de mastite nos rebanhos. Foi utilizado teste microbiológico comercial (Delvotest) para a avaliação da corrência de resíduos de antimicrobianos em 60 amostras de leite de tanques resfriadores de propriedades leiteiras e individualmente de 135 vacas em lactação com e sem processo inflamatório na glândula mamária. Foi verificada correlação entre a ocorrência de resíduo de antimicrobiano no tanque resfriador e o aumento da freqüência de mastite clínica (r= 1,0; teste de Spearman).O aumento do período de carência, no leite de glândulas com processo inflamatório, foi observado tanto nos animais tratados por via sistêmica quanto naqueles tratados por via intramamária, ultrapassando o período estipulado pelo fabricante do medicamento. Tal fato foi observado em relação a todos os grupos tratados com diferentes antimicrobianos (betalactâmicos, aminoglicosídeos, tetraciclinas e sulfa) variando de 11 a 60 % das amostras analisadas. Após 72 horas da aplicação de medicamento por via sitêmica, houve diferença significante (p < 0,05, Fisher) entre as amostras de animais com mastite e as de animais com ausência de processo inflamatório, indicando uma maior persistência de resíduo nas amostras de animais com mastite. Na avaliação da influência de inibidores naturais observou-se que 33% das amostras de quartos com mastite clínica e 18% das amostras de quartos com mastite subclínica apresentaram resultados positivos, sendo que na ausência de processo inflamatório todas as amostras apresentaram resultados negativos. A diferença de positividade foi estatisticamente significante, quando foram comparadas as amostras de quartos mamários com mastite clínica com as amostras de quartos mamários com ausência de processo inflamatório (p < 0,05, Fisher). Em síntese concluiu-se que houve uma correlação entre o nível de ocorrência de mastite clínica e a presença de resíduo no leite dos tanques resfriadores de propriedades leiteiras e que glândulas mamárias com processo inflamatório apresentaram maior período de eliminação de resíduos de antimicrobiano pelo leite, em relação às glândulas sem processo inflamatório, muitas vezes ultrapassando o período estipulado pelos fabricantes de medicamentos. Observou-se também que as amostras de leite de animais não tratados, analisadas sem aquecimento prévio, apresentaram positividade demonstrando a influência dos inibidores naturais, produzidos em decorrência do processo inflamatório, nos resultados dos testes microbiológicos, indicando a necessidade de aquecimento das amostras antes da realização dos testes microbiológicos para a detecção de resíduos, para evitar a ocorrência de resultados falso positivos. Como conclusão geral, a análise dos resultados obtidos no presente estudo demonstrou que a mastite interferiu na ocorrência de antimicrobianos no leite. / The presence of antimicrobial residues im milk is a public health concern, because they may cause allergic reactions and may lead to the development of resistance to antimicrobial agents by bacterial strains. It is also an economic problem because it interferes with starter cultures used in dairy products. Mastitis, the inflammatory process of the mammary gla nd, is the main reason to treat dairy cows with antimicrobial agents. The purpose of this study was to verify the influence of mastitis on the withdrawal period of several intramammary and parenteral antimicrobial agents used in lactating cows, as well as to evaluate the presence of detectable antimicrobial residues in bulk tank milk, in relation to the mastitis rates among the studied dairy farms. A total of 60 bulk tank samples of dairy farms and 135 individual samples of healthy and mastitic dairy cows were screened to verify the occurrence of antimicrobial residues with a microbiologic test (Delvotest®). A correlation was detected between antimicrobial residues in bulk tank and high clinical mastitis rates (r= 1.0; Spearman\'s test). A higher withdrawal period, exceeding that determined by the manufacturer, was observed in the milk of mammary glands presenting inflammatory processes, both in animals treated by the parenteral route, and those treated by the intramammary route. This observation ranged from 11 to 60% of the analyzed samples and was verified in all groups treated with different antimicrobial agents (betalactam, aminoglycosides, tetracycline and sulfas). Statistically significant difference was detected (p<0.05, Fisher\'s test) at seventy two hours after the parenteral treatment in samples from animals presenting inflammatory processes, in relation to samples from animals that did not present mastitis. That is, there was a higher withdrawal period in the samples from animals presenting mastitis. In the evaluation of the influence of inflammatory reaction natural inhibitors on Delvotest®, it was verified that 33% of the samples from clinical mastitis quarters and 18% from subclinical mastitis quarters were positive, and that quarter samples without inflammatory processes were negative. These differences were statistically significant (p<0.05, Fisher\'s test). Among the main onclusions, it should be pointed out that there was a correlation between high clinical mastitis rates in the dairy herd and antimicrobial residues in bulk tank milk. Another important result was that mammary glands presenting inflammatory processes exhibited higher withdrawal periods when compared with mammary glands that did not present inflammatory processes, and that sometimes this withdrawal period exceeded the period recommended by the manufacturer. It was also observed that milk samples from untreated animals, when tested without preliminary heating at 80ºC, were positive, due to the occurrence of natural inhibitors produced by the inflammatory process, showing their interference on microbiologic tests. Therefore, it was demonstrated that previous heating is helpful to avoid false positive results when microbiologic tests are used to detect antimicrobial agents residues in milk samples. As an overall conclusion, it was well demonstrated that mastitis interferes in antimicrobial residues in milk.

Os processos inflamatórios na glândula mamária são especialmente freqüentes e importantes em bovinos leiteiros, sendo responsáveis por grandes prejuízos à pecuária leiteira. A mastite infecciosa é a mais importante doença sob o ponto de vista econômico e de saúde pública. A contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL) de leite proveniente diretamente de uma glândula mamária permitiria avaliar o comportamento de cada um dos agentes etiológicos da mastite infecciosa. A comparação desta informação com a contagem de células somáticas (CCS/mL) na amostra de leite permitiria uma avaliação mais acurada do processo infeccioso e inflamatório na glândula mamária. O presente trabalho teve como objetivos: avaliar o \"status\" microbiológico de amostras de leite de vacas em lactação que apresentaram mastite e comparar a quantidade de UFC/mL de colônias dos diferentes microrganismos com as respectivas CCS/mL, levando em consideração a diferenciação de células polimorfonucleares (PMN/mL) e mononucleares (MN/mL) nas amostras. Quinhentas e seis amostras de 15 propriedades de exploração leiteira do Estado de São Paulo, Brasil, foram submetidas aos testes de Tamis e California Mastitis Test (CMT), e realizados os exames microbiológicos, contagem de UFC/mL e CCS/mL. Destas, 112 não apresentaram crescimento de microrganismos, e das amostras com crescimento foram isolados: 94 Corynebacterium spp., 104 Staphylococcus spp., 73 Streptococcus spp., 36 Prototheca zopfii, 08 Candida spp., 02 Nocardia spp. e 77 associações entre os microrganismos. Houve correlação entre o número de UFC/mL com a CCS/mL, assim como entre PMN/mL e entre MN/mL. Concluiu-se que existe um aumento da CCS/mL, PMN/mL e MN/mL no leite quando há um aumento das contagens de UFC/mL. As quantidades de UFC/mL no leite com isolamento de Streptococcus spp. foram maiores estatisticamente (P < 0,05) que as quantidades de UFC/mL com isolamento de Corynebacterium spp. e Staphylococcus spp. Concluiu-se também que, em havendo necessidade de tratamento de mastite clínica e subclínica no rebanho devido às altas contagens de UFC/mL, deve-se tratar inicialmente os quartos nos quais foram isolados Streptococcus spp. e deixar para uma segunda etapa ou para o processo de secagem o tratamento das mastites associadas à Staphylococcus coagulase-positivo, Staphylococcus coagulase-negativo e Corynebacterium spp. nessa mesma ordem. / Mastitis is a complex pathologic condition which may have different etiology and consequences. Mastitis usually starts with the penetration of microorganisms through the teat canal towards mammary parenchyma and secretory cells, and an inflammatory response occurs due to the products of the microbial growth. The aim of this work was to evaluate the microbial status of milk samples collected from lactating cows with mastitis and comparing the colonies forming units (CFU)/mL and the somatic cell counts (SCC)/mL, taking into consideration the differentiation of polymorphonuclear (PMN/mL) and mononuclear (MN/mL) cells. From primiparous and pluriparous dairy cows, 506 milk samples were collected from 15 dairy farms located in the State of São Paulo, Southeastern Brazil. Samples were submitted to strip cup test and California Mastitis Test (CMT) and evaluated for CFU and SCC procedures. For microbial examinations, 112 (22.13%) samples were found negative and from the other 394, the following microorganisms were isolated: 94 (18.58%) Corynebacterium spp., 104 (20.55%) Staphylococcus spp., 73 (14.42%) Streptococcus spp., 36 (7.11%) Prototheca zopfii, 8 (1.60%) Candida spp., 2 (0.39%) Nocardia spp., and 77 (15.21%) associations among distinct microorganisms. Significant correlations were found between the CFU/mL and SCC/mL, and also with the PMN and MN cell countings. With the increased CFU/mL countings, it was observed the increase in SCC, PMN, and MN countings. The CFU/mL counts in samples with Streptococcus spp were statistically higher (P < 0.05) than the ones positive for Staphylococcus spp. and Corynebacterium spp. In case of treatments of mastitis, target must be primarily oriented to treat the mammarial glands showing clinical or subclinical mastitis with Streptococcus spp. showing high CFU/mL, and at the second stage, in case of treatment or drying the cows, therapy must be directed against coagulase-positive Staphylococcus, coagulase-negative Staphylococcus and Corynebacterium spp.

Setenta e sete vacas distribuídas em três propriedades foram divididas em três grupos: G1 (sem suplementação vitamínica), G2 (suplementação com 1000 UI de vitamina E durante 30 dias antes do parto previsto e 30 dias após o parto), G3 (suplementação com 1000 UI de vitamina E de 30 a 15 dias antes do parto previsto e 3000 UI de 15 dias antes do parto a 30 dias após o parto). Todas as propriedades continham os três grupos, sendo que as vacas foram sorteadas para cada grupo de acordo com a ordem de parição e a data prevista para o parto, para que ficassem homogeneamente distribuídas. Na interrupção da lactação que antecedeu o experimento, os quartos mamários foram tratados com antibióticos específicos para o tratamento de vacas secas. Os animais foram alimentados com silagem de milho e concentrado, permanecendo confinados com acesso a piquetes de descanso. Foram efetuados os exames: tamis, CMT e microbiológico do leite de cada quarto mamário, logo após a fase colostral e uma vez por mês durante a lactação, para o diagnóstico de mastite. Foram colhidas amostras de soro de 20% dos animais e dos alimentos fornecidos para a análise de selênio. Os resultados obtidos mostraram que a ocorrência de mastite clínica foi maior (p<0,05) no grupo não suplementado do que nos grupos suplementados. Não foram verificadas diferenças estatísticas entre os três grupos quanto à ocorrência de mastite subclínica. Os principais microrganismos isolados foram Staphylococcus sp, Streptococcus sp, Corynebacterium sp. A ocorrência de infecções intramamárias foi maior (p<0,05) no grupo G3 do que nos grupos G2 e G1 e maior (p<0,05) no grupo G2 do que no grupo G1. Em relação à ocorrência de mastite nas fazendas, foi verificado maior (p<0,05) ocorrência da forma clínica no grupo G1 do que nos demais grupos apenas em uma delas e quanto às infecções intramamárias, o grupo G3 apresentou maior (p<0,05) ocorrência que o grupo G1 em todas as fazendas. Os resultados das análises sorológicas de selênio mostraram que as concentrações do elemento nos animais estavam adequadas. / Seventy seven dairy cows, kept in three herds were randomly allocated in three homogeneous groups: Group 1, control group (without vitamin E supplementation), Group 2 (supplementation of 1,000 UI of vitamin E during 60 days, thirty days prior and 30 days post-parturition) and Group 3 (supplementation of 1,000 UI of vitamin E from the thirtieth day to the fifteenth day before parturition, and, then, a supplementation of 3,000 UI from the fourteenth day before parturition until the thirtieth day after it). All the cows in the groups received a long-action intramammary antibiotic at the drying off. Animals were fed with corn silage and concentrate-mixture, and they were confined in a free stall system with grass paddock. Examinations were performed at the drying off, in the first week of lactation and once a month during lactation. Strip cup, CMT and the microbiological exams were used. Twenty percent of the animals of each group were randomly assigned for selenium analysis. The obtained results showed that clinical mastitis occurrence in Group 1 was significantly higher than in Groups 2 and 3. In relation to subclinical mastitis cases, no significant differences were detected among the groups. Microorganisms that were most frequently isolated were: Staphylococcus sp, Streptococcus sp, Corynebacterium sp. Results obtained for mammary gland infections showed a higher level of infections in supplemented groups compared to the control group. The occurrence of clinical mastitis in Group 1 was significantly higher than in Groups 2 and 3 only in one of the dairy herds. The occurrence of the intramammary infections was significantly higher in Group 3 than in Group 1 in all herds. The results obtained from selenium analysis demonstrated to be range of recommended levels.

O Brasil é o quinto maior produtor de leite do mundo, entretanto sua produtividade é considerada baixa. Um dos motivos desta baixa produtividade é a alta incidência da mastite no rebanho. A mastite é a reação inflamatória da glândula mamária, causada principalmente pela invasão e ação de espécies de micro-organismos patogênicos. O principal tratamento consiste no uso de antibióticos de aplicação intramamária. Entretanto, o uso constante de antibióticos apresenta problemas graves como o surgimento de cepas de bactérias resistentes e a presença de resíduos destes medicamentos no leite. Para reduzir esses problemas, formas alternativas de prevenção e tratamento da mastite têm sido estudadas, como o uso de preparações contendo espécies probióticas. Pesquisas recentes têm demonstrado o potencial de algumas destas espécies no tratamento e prevenção da mastite bovina tendo em vista sua atividade inibitória sobre os patógenos responsáveis por esta infecção. Desta forma, a proposta deste estudo foi desenvolver e avaliar a estabilidade de uma preparação probiótica na forma de emulsão de aplicação intramamária contendo 108 UFC/mL de um \"pool\" constituído de cinco cepas de Lactobacillus (L. acidophilus ATCC 4356, L. casei ATCC 7469, L. fermentum ATCC 9338, L. plantarum ATCC 8014 e L. paracasei Nestlé ST11). Para tanto, 12 formulações de emulsão base foram desenvolvidas e avaliadas em ensaios preliminares de estabilidade (centrifugação e estresse térmico), sendo a formulação contendo monestearato de glicerila, lanolina anidra, óleo mineral, Tween 80® e Spam 80® selecionada para formulação da preparação probiótica. Adicionalmente, selecionou-se como agente conservante sorbato de potássio visando aumentar a vida útil da preparação probiótica. A preparação, assim desenvolvida, foi submetida ao teste de estabilidade físico-químico por 90 dias a 50°C ± 2°C. Observou-se que o aspecto da preparação se manteve estável, mas com redução nos parâmetros pH, densidade e aumento na viscosidade. A manutenção da viabilidade dos Lactobacillus na preparação foi estudada em um ensaio de 120 dias, sendo avaliada a influência dos fatores: temperatura de estocagem, adição de sacarose e sorbato de potássio. Observou-se influência significativa da temperatura demonstrando a importância da refrigeração na manutenção na viabilidade dos Lactobacillus. Verificou-se também que, sob refrigeração, a adição de sacarose promoveu redução de 0,5 ciclo logarítmico em relação a população inicial de células viáveis. Observou-se redução do pH da preparação probiótica avaliada nestas condições. Estes resultados permitem concluir que a refrigeração da preparação é indispensável para a manutenção da viabilidade das bactérias probióticas. A adição de 2% de sacarose à preparação, mantida sob refrigeração, se mostrou eficiente na manutenção da população de células viáveis ao final de 120 dias de ensaio, contendo 108 UFC/g, característica desejável para um produto probiótico. / Brazil is the world\'s fifth largest milk producer, though its productivity has been considered low. One of the reasons for this low productivity is the high incidence of mastitis in the herd. Mastitis is the inflammation of the mammary gland, mainly caused by the invasion and action of pathogenic microorganisms. The treatment is accomplished through the use of intramammary application of antibiotics. However, the constant use of antibiotics has serious problems such as the emergence of resistant strains of bacteria and the presence of residues of these drugs in milk. To reduce these problems, alternative means of prevention and treatment of mastitis has been studied as the use of preparations containing probiotic species. Recent studies have demonstrated the potential of some of these species in the treatment and prevention of bovine mastitis due to their inhibitory activity on pathogen species responsible for the infection. Thus, the purpose of this study was to develop and evaluate the stability of probiotic preparation in the form of intramammary application emulsion containing 108 CFU/mL of five Lactobacillus strains (L. acidophilus ATCC 4356, L. casei ATCC 7469 L. fermentum ATCC 9338, ATCC 8014, L. plantarum and L. paracasei ST11 Nestle). Therefore, 12 basic emulsion formulations were developed and evaluated in preliminary tests for stability (thermal stress and centrifugation), and only one was selected. Additionally, potassium sorbate was selected as preservative in order to increase the shelf life of the preparation. The developed preparation was subjected to study the physicochemical stability for 90 days at 50 ° C ± 2 ° C. The results showed that the aspect of the preparation remained stable, but decreasing in pH and density and increasing in viscosity. The maintenance of the viability of the lactobacillus in the preparation was studied in a 120-day test, and flowing factors were considered: storage temperature, sucrose addition and the potassium sorbate addition. It was observed that there was significant differences in the temperature factor demonstrating the importance of cooling in maintaining the viability of Lactobacillus. It was also observed that sucrose decreased by 0,5 log cycle compared to initial population of viable cells in the refrigerated preparation. Regarding the pH, it was noted a decrease in the different formulations evaluated. These results show that the cooling of the preparation is indispensable for maintaining the viability of probiotic bacteria. The addition of 2% sucrose to the preparation proved efficient with a slower decrease in viability maintaining the population of viable cells at the end of the 120 days of the assay.

A mastite é o processo inflamatório da glândula mamária que constitui uma doença comum no setor pecuário leiteiro, evidenciado principalmente durante o período de lactação de vacas leiteiras e, cujos principais agentes etiológicos são o Staphylococcus aureus, Streptococcus sp. e espécies de coliformes. Os protocolos de combate à mastite preconizam o uso de antibióticos, o que pode trazer riscos à saúde dos animais e humana. Dependendo do agente patogênico, esta estratégia é considerada frequentemente ineficiente e de alto custo, o que leva pesquisadores a buscarem alternativas à antibioticoterapia, testando princípios ativos homeopáticos, fitoterápicos e micro-organismos probióticos, que apresentam potencial como alternativa promissora para a terapia quimioterápica. As formulações contendo bactérias probióticas podem representar uma alternativa de baixo custo para o combate à mastite, com a vantagem de não estimular a resistência entre os patógenos. Desta forma, este estudo baseou-se na avaliação in vitro do potencial antimicrobiano de cepas de Lactobacillus frente a agentes patógenos causadores de mastite, bem como na avaliação in vivo da inocuidade de formulações contendo probióticos em vacas em lactação. Para tanto, 6 cepas de Lactobacillus, na forma isolada e na forma de pool foram avaliadas quanto à capacidade inibitória sobre Streptococcus agalactiae (cepas 1 e 2) por diferentes técnicas de difusão em ágar e co-cultura em meio líquido. A inibição pela técnica de co-cultura foi avaliada mediante determinação de células viáveis das cepas patogênicas por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR). De acordo com os resultados observados no estudo de inibição in vitro, foram preparadas formulações probióticas utilizando dois veículos diferentes, sendo uma emulsão (Formulação A) e outra utilizando um veículo de um medicamento comercial (Formulação B) adicionadas de células de Lactobacillus na forma isolada e na forma de pool. Estas formulações foram avaliadas quanto à inocuidade em 17 vacas separadas em grupos sob regime de 1 ordenha/dia (A e B1) e 2 ordenhas/dia (B2), mediante a aplicação das formulações A e B contendo 109 ou 106 células/dose. Ao longo do cada tratamento, foram avaliados parâmetros fisiológicos como temperatura do úbere, presença de hiperemia, inchaço e manifestação de dor, contagem de células somáticas (CCS), California Mastitis Test (CMT), bem como condutividade elétrica e aspecto do leite e avaliação microbiológica. O estudo de inibição em co-cultura mostrou que as cepas de Lactobacillus avaliadas inibiram o crescimento das cepas patogênicas, em níveis superiores a 75% após 72 horas de ensaio. Após 24 horas, os maiores níveis de inibição sobre S. agalactiae cepa 1 foram exercidos pelas cepas L. acidophilus ATCC 4356, L. fermentum ATCC 9338, com índices de inibição de 99,79% e 99,91%, respectivamente. Nas mesmas condições a inibição de S. agalactiae cepa 2 por L. acidophilus ATCC 4356 e L. delbrueckii UFV H2B20 foi de 86,7% e 79,5%, respectivamente. Estes resultados indicam o potencial de inibição das cepas de Lactobacillus estudadas sobre S. agalactiae causadora de mastite. Estudos de inocuidade demonstraram que as formulações probióticas (A e B) induziram reação inflamatória no úbere dos animais, confirmado pelo aumento significativo da condutividade elétrica do leite (CEL), CCS (p < 0,05), bem como do escore de CMT. As formulações testadas no presente estudo não se mostraram adequadas ao emprego terapêutico na cura da mastite, uma vez que no teste de inocuidade provocaram processos inflamatórios nas glândulas mamárias dos animais testados. / Bovine mastitis is a common disease in dairy farms, usually observed during lactation period in dairy cattle, whose main etiological agents are Staphylococcus aureus, Streptococcus sp. and coliform species. Current protocols of mastitis therapy include the use of antibiotics, which may represent serious risks for both animal and human health. Depending on the pathogen specie, this strategy is often considered ineffective and highly expensive, what stimulates scientists to search for alternative treatments, including homeopathic or phytotherapic drugs or probiotic microorganisms, which may be a good alternative to chemotherapeutic drugs. Formulations containing probiotic bacteria may represent a low-cost alternative for mastitis treatment. The present study aimed to assess in vitro ability of Lactobacillus strains to inhibit mastitis pathogens growth, as well as in vivo assessment of the safety of formulations containing probiotics in cows with predisposition or affected by mastitis. Thus, six Lactobacillus strains were evaluated on their inhibitory ability over Streptococcus agalactiae (strains 1 and 2) by techniques of agar diffusion and co-culture in liquid medium. The effectiveness of the co-culture was evaluated by enumerating viable pathogen cells through quantitative polymerase chain reaction (qPCR). According to the results of in vitro study, two formulations were prepared based on a probiotic emulsion (formula A) and a commercial matrix (formula B) containing Lactobacillus cells (isolated or pool). Safety tests for the formulations were performed in 17 cows, which were separated into two groups under 1 milking/day (A and B1) and another group submitted to 2 milkings/day (B2), through the application of preparation A or preparation B containing 109 or 106 cells/dose. In each treatment, every cow was assessed on physiological parameters including temperature, presence of hyperemia, swelling and pain, somatic cell count (SCC), electrical conductivity and aspect of milk (color and clots/lumps formation) and microbiological evaluation. The results of the inhibition studies in co-culture showed that all Lactobacillus strains inhibited the growth of pathogenic strains, in at least 75% after 72 h of test. The highest levels of inhibition of S. agalactiae strain 1 were performed by strains L. acidophilus ATCC 4356 and L. fermentum ATCC 9338, at level of 99.79% and 96.70% after 24h, respectively. For the same period, the inhibition of S. agalactiae strain 2 by L. acidophilus ATCC 4356 and L delbrueckii UFV H2B20 was 86.7 % and 79.5%, respectively. These results showed the potential of Lactobacillus strains studied concerning to the inhibition of mastitis caused by Streptococcus agalactiae. Safety studies showed that both formulations evaluated induced inflammatory response in the udder of the animals, what was confirmed by significant raise on electric conductivity and SCC (p < 0,05) and CMT scores on milk. All formulations were considered inappropriate to be used in mastitis therapeutics, once they failed at safety tests, inducing mastitis on tested animals.

Orientador: Luiz Francisco Zafalon / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Resumo: Este estudo teve como objetivos: investigar os micro-organismos causais da mastite subclínica em ovelhas de aptidão para produção de carne, definir pontos de corte de dois métodos de diagnóstico indiretos, comparar as taxas de cura do tratamento da mastite subclínica após infusão intramamária de princípio ativo antimicrobiano no momento da secagem em duas diferentes formulações, convencional e nanoparticulada, verificar as taxas de cura espontânea, avaliar a capacidade de prevenção da ocorrência de novas infecções mamárias e verificar a presença de resíduos antimicrobianos no leite de ovelhas submetidas ao tratamento à secagem, na lactação consecutiva. O estudo foi realizado em um rebanho localizado em uma propriedade no município de São Carlos, São Paulo. Analisou-se um total de 393 mamas de ovelhas de aptidão para produção de carne, 250 das quais pertencentes a 130 ovelhas da raça Santa Inês e outras 143 mamas de 77 ovelhas da raça Morada Nova. Amostras de leite foram coletadas e submetidas ao exame de California Mastitis Test (CMT), à contagem de células somáticas (CCS) e ao exame microbiológico antes da secagem e após o parto subsequente. As glândulas mamárias com mastite subclínica foram distribuídas nos seguintes grupos: G1 (Controle; glândulas mamárias que não receberam tratamento antimicrobiano); G2 (glândulas mamárias em que foi administrado 100 mg de cloxacilina benzatina/ 10 mL em estrutura convencional) e G3 (glândulas mamárias em que foi administrado 50 mg de cloxacilina benzatina/ 86 mL em estrutura nanoencapsulada). Para avaliação dos tratamentos quanto à capacidade de prevenir novas infecções, foram utilizadas as mamas saudáveis dos animais dos grupos experimentais G1, G2 e G3, e foi acrescido o grupo G4 (glândulas mamárias saudáveis em que foi administrado 100 mg de cloxacilina benzatina/ 172 mL em estrutura nanoencapsulada) ... / Abstract: This study had as objectives: investigate the microorganisms that cause subclinical mastitis in meat producing sheep, define cut-off values of two methods of indirect diagnosis, compare cure rates of treatment of subclinical mastitis after intramammary infusion of antimicrobial active principle at the time of drying off in two different formulations, conventional and nanoparticle, check the rates of spontaneous cure, evaluate the capability of prevention of new infections and check the presence of antimicrobial residues in milk of sheep subjected to treatment during drying off, on consecutive lactation. The study was done in a flock located on a property in São Carlos city, São Paulo. We analyzed a total of 393 mammary glands of meat producing sheep, 250 of which belong to 130 Santa Inês breed sheep and other 143 mammary glands of 77 Morada Nova breed sheep. Milk samples were collected and submitted to California Mastitis Test (CMT), the somatic cell count (SCC) and microbiological exam before drying off and after subsequent parturition. The mammary glands with subclinical mastitis were as follows: G1 (Control, mammary glands that not received antibiotic treatment), G2 (mammary glands which was administered 100 mg of benzathine cloxacillin/ 10 mL in conventional structure) and G3 (mammary glands which was administered 50 mg benzathine cloxacillin/ 86 mL in nanocoated structure). For evaluation of treatments about their capability to prevent new infections, we used the mammary glands of healthy animals of experimentals groups groups G1, G2 and G3, and G4 was added group (healthy mammary glands, which was administered 100 mg of benzathine cloxacillin/ 172 mL in nanocoated structure). The occurrences of animals positive for infectious mastitis in Santa Ines breed sheep was 33.1% and 35.6% in Morada Nova breed sheep. Coagulase-negative Staphylococci were the predominant etiologic agents ... / Mestre