Orientador: Hélio Langoni / Banca: Elizabeth F. de Oliveira Costa / Banca: Nilson Roberti Benites / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Resumo: A proposta do presente estudo foi determinar se o Corynebacferium bovis possui a capacidade de se multiplicar em temperatura de refrigeração e se este microrganismo possui os genes aprX e lipA, capazes Je produzir enzimas termoestáveis que degradam proteínas e gorduras do leite armazenado por longos períodos de tempo. Para isto o agente foi submetido a ncubação em temperatura de refrigeração que variou entre 0,7 e 4°C, por 10 :lIas consecutivos, com a aferição dos valores de absorbância (A) em espectrofotômetro a cada 24 horas, correspondendo aos momentos MO à M9. Para a verificação da presença dos genes foi realizada a técnica da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Os resultados obtidos revelaram que o C. bovis é capaz de se multiplicar em temperatura de refrigeração após 120 horas de ncubação onde houve diferença estatisticamente significante com p>0,05 entre os períodos M5(A = 0,264) e M6(A = 0,297) podendo ser considerado então como psicrotrófico. Por outro lado, não possui os genes aprX e lipA, não oroduzindo as enzimas codificadas por estes genes, o que não significa que o C. bovis não possua genes para a produção de outras enzimas degradantes, não pesquisadas no presente estudo. Isto sugere que novos estudos do genoma deste microrganismo são necessários, para se elucidar o verdadeiro papel deste agente na alteração da qualidade do leite e de seus subprodutos. / Abstract: The purpose of the present study was to determine if Corynebacferium bovis has the capacity to multiply in low temperature and if this microorganism possesses the genes aprX and lipA, capable to produce term stable enzymes that degrade proteins and fats of the milk stored by long Deriods of time. At the first part of this study was accomplished with the agent's ncubation by 10 consecutive days in temperature of cooling that varied Jetween 0,7 and 4°C, and daily reading of absorbance (A) in spectrophotometer, corresponding from moments MO to M9. The gene presence was accomplished with polimerase chain reaction (PCR). The results -evealed that C. bovis is capable to multiply at low temperature after 120 hours of incubation as observed between the moments M5(A = 0,264) and M6(A = 0,297)where p>0,05 confirming that this microorganism could be considered as psychotropic. In the other hand the studied microorganism doesn't possess the lipA and aprX genes, therefore it is not capable to produce the enzymes codified by these genes, what doesn't mean that C. bovis doesn't possess genes for the production of other degrading enzymes, don't researched in the present study. This suggests that new studies of the genome of this microorganism are necessary, to elucidate this agent's true paper in the alteration of the quality of the milk and of their products. / Doutor

Submitted by Julia Pompeu De Mendonça (jupmendonca@uol.com.br) on 2018-06-27T16:36:24Z No. of bitstreams: 1 Julia Pompeu de Mendonça -dissertacao mestrado.pdf: 1485942 bytes, checksum: a159c840459c590dd92743f055a83018 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Lucia Martins Frederico null (mlucia@fca.unesp.br) on 2018-06-28T11:34:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 mendonca_jp_me_botfca.pdf: 1386980 bytes, checksum: 5e9e162d5cfb8e17716dd9eed92ef3f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-28T11:34:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mendonca_jp_me_botfca.pdf: 1386980 bytes, checksum: 5e9e162d5cfb8e17716dd9eed92ef3f8 (MD5) Previous issue date: 2018-06-15 / A mão de obra dos ordenhadores é um fator determinante da qualidade do leite. No entanto, sistemas de capacitação técnica que sejam validados cientificamente ainda não estão disponíveis. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver e validar um sistema de treinamento de procedimentos de ordenha que possa ser aplicado a ordenhadores com diferentes níveis de escolaridade. Trinta e quatro ordenhadores de 15 propriedades participantes, preferencialmente do projeto CATI-Leite, da Coordenadoria de Assistência Técnica Integral do Estado de São Paulo, foram incluídos no estudo. Foi aplicado um treinamento presencial de duas horas de duração, composto por uma palestra e uma dinâmica de grupo. Foram distribuídas apostilas didáticas desenvolvidas para melhorar o aprendizado. Os conhecimentos teórico e prático dos ordenhadores foram comparados em dois momentos, antes e depois do treinamento, por meio de avaliações realizadas nas propriedades. Um questionário foi desenvolvido para avaliação do conhecimento teórico dos ordenhadores e o conhecimento prático foi avaliado por meio de um sistema de escore de habilidade de ordenha baseado na observação do trabalho dos participantes. Modelos de medidas repetidas e de regressão logística foram utilizados para comparar a média dos escores teórico e prático e estimar as chances de realização de procedimentos de ordenha de forma correta antes e depois do treinamento, respectivamente. Houve aumento significante (P < 0,001) da média de ambos os escores teórico (aumento de 55,1%, de 616,76 ± 34,38 para 956,85 ± 34,88 pontos) e de habilidade de ordenha (aumento de 20,5%, de 14,27 ± 0,38 para 17,19 ± 0,38 pontos) após a participação no treinamento. A percentagem de animais que receberam um tempo de contato de pré-dipping adequado, ou um tempo de estímulo adequado, aumentou de 85,78 para 98,52% (N=204) e de 58,33 para 63,73% (N=204) após o treinamento, respectivamente. A função do ordenhador (funcionário ou proprietário) e a escolaridade foram associadas ao aprendizado teórico (escore teórico) e prático (habilidade de ordenha). Os resultados dessa pesquisa apontam que a metodologia foi eficiente na qualificação teórica e prática dos ordenhadores. O entendimento dos conceitos técnicos resultou em melhoria dos procedimentos de ordenha que podem beneficiar não somente o conforto e a saúde dos animais e das pessoas envolvidas, mas também a qualidade do leite produzido. O método proposto poderá ser utilizado para fins de difusão de conhecimento. / The work of milkers is a determining factor for milk quality. Nonetheless, training systems that have been scientifically validated are not still available. The objective of this work was to develop and validate a training system for milking procedures that can be applied to milkers with different levels of education. Thirty-four milkers were included in the study. A two-hour training consisting of a lecture and a group dynamics exercise was conducted. Milkers´s theoretical and practical knowledge were compared between two time points, before and after training, by means of evaluations performed on the farms. A questionnaire was developed to evaluate the theoretical knowledge and the practical knowledge was evaluated by means of a milking ability score system based on the observation or their work. Repeated measures and logistic regression models were used to compare the mean of the theoretical and practical scores, and to estimate the chances of performing a correct milking procedure, before and after training, respectively. There was a significant increase in both theoretical (increase of 55.1%) and milking ability (increase of 20.5%) scores after training. Employee status (employee or owner) and level of education were associated with the theoretical and practical learning. Results of this research indicate that the methodology was efficient to qualify milkers on both theoretical and practical aspects. Understanding the technical concepts resulted in improved milking procedures. The proposed method can be used by dairy professionals to disseminate knowledge.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-06-09T12:59:25Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1598930 bytes, checksum: a71394c458a243aa0d62d135e71d642d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-09T12:59:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1598930 bytes, checksum: a71394c458a243aa0d62d135e71d642d (MD5) Previous issue date: 2017-05-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A mastite bovina ocasiona a inflamação da glândula mamária, podendo ser contagiosa ou ambiental. Antimicrobianos não convencionais, como o eugenol, pode ser uma alternativa para o controle desta enfermidade. Porém a elevada hidrofobicidade e volatilização do eugenol, dificultam sua utilização em sistemas aquosos. Visando minimizar estes aspectos negativos, foram obtidos nanocarreadores à base de Albumina Sérica Bovina (BSA) veiculando eugenol (E) em diferentes pH (3,5, 5,0 e 7,0) e avaliado sua ação antimicrobiana pela Concentração Mínima Inibitória (CMI), Concentração Mínima Bactericida (CMB), teste de difusão em ágar; viabilidade celular por citometria de fluxo (CMF), Microscopia eletrônica de varredura (MEV) e teste de imersão para remoção de células aderidas em cupons. A caracterização físico-química dos nanocarreadores foi realizada por tamanho, potencial zeta, estabilidade cinética e docking molecular. As amostras BSA-E apresentaram pela técnica de microdiluição, CMB iguais paraS. aureus e E. coli: de 0,27 μL· mL^-1 para BSA-E em pH 3,5 e 0,55 μL· mL^-1 em pH 5,0 e 7,0. Em contrapartida, as amostras com eugenol livre (E) apresentaram CMB com concentrações mais elevadas: 1,10 μL· mL^-1 em pH 3,5 e 2,20 μL· mL^-1 em pH 5,0 e 7,0. A partir da análise por CMF, foi verificado que as amostras com BSA-E independentemente do pH e da estrutura da parede celular, foram capazes de inativar mais de 99% das células de isolados bacterianos em menor tempo de imersão (5 min). Estes dados corroboram com as análises de MEV, que demostraram acentuada modificação na estrutura da membrana celular após imersão com BSA-E por 30 min. A partir do teste de imersão por 30 min, de cupons de aço inoxidável e borracha utilizada em teteiras de ordenhadeiras mecânicas com células aderidas de E. coli e S. aureus, foi possível verificar que somente as formulações BSA-E, independentemente do pH, atenderam às recomendações da Organização Mundial de Saúde (OMS) de até 50 UFC·cm^-2 de mesófilos aeróbios, para a superfície de aço-inoxidável, embora constatado, uma redução de 99,99% de células aderidas na superfície da borracha. As amostras BSA e BSA-E, em pH 3,5, apresentaram diâmetro hidrodinâmico de 10,66 ± 0,13 nm e 11, 03 ± 0,015 nm, respectivamente, superior ao pH 5,0 (7,39 ± 0,18 nm e 7,95 ± 0,014 nm) e pH 7,0 (8,12 ± 0,29 nm e 8,17 ± 0,13 nm). Em pH 3,5 o potencial zeta para BSA e BSA-E foram respectivamente de + 8,8 ± 0,14 mV e + 8,91 ± 0,15 mV. Para o pH 5,0 e 7,0 foram de -3,95 ± 0,09 mV e - 4,12 ± 0,12 Mv e -12,57 ± 0,18 mV e -12,39 ± 0,13 mV, para BSA e BSA-E, respectivamente. Os valores de diâmetro hidrodinâmico, potencial zeta e pH, mantiveram-se estáveis durante 15 dias. A técnica por docking molecular, foi capaz de predizer que a ligação eugenol com a BSA foi termodinamicamente favorável, e que eugenol está localizado no interior de um bolsão formado pela interação entre os três domínios (I, II e III) da BSA, sendo este bolsão composto principalmente de aminoácidos hidrofóbicos e básicos, que favoreceram a interação do ligante com a proteína. Neste contexto o eugenol nanocarreado por BSA demonstra ser uma alternativa viável para o controle e ou prevenção da mastite bovina ocasionada por E. coli e ou S. aureus. / Bovine mastitis causes inflammation of the mammary gland, and may be contagious or environmental. Unconventional antimicrobial agents, such as eugenol, may be an alternative for the control of this disease. However, the high hydrophobicity and volatilization of eugenol make it difficult to use in aqueous systems. In order to minimize these negative aspects, Bovine Sodium Albumin (BSA) nanocarriers were obtained by carrying eugenol (E) at different pH (3.5, 5.0 and 7.0) and evaluated its antimicrobial action by the Minimal Inhibitory Concentration), Minimum Bactericidal Concentration (CMB), agar diffusion test; Cell viability by flow cytometry (CMF), Scanning Electron Microscopy (SEM) and immersion test to remove adhered cells in coupons. The physico-chemical characterization of the nanocarreadores was performed by size, zeta potential, kinetic stability and molecular docking. The BSA-E samples showed the same microbial dilution for S. aureus and E. coli: 0.27 μL · mL^-1 for BSA-E at pH 3.5 and 0.55 μL · mL^-1 PH 5.0 and 7.0. In contrast, formulations with free eugenol (E) showed higher concentrations of CMB: 1.10 μL · mL ^-1 at pH 3.5 and 2.20 μL · mL^-1 at pH 5.0 and 7.0. From the CMF analysis, it was verified that BSA-E samples, regardless of pH and cell wall structure, were able to inactivate more than 99% of the cells of bacterial isolates in a shorter immersion time (5 min). The results corroborate the SEM analyzes, which demonstrated a marked change in the cell membrane structure after immersion with BSA-E for 30 min. From the 30 min immersion test of stainless steel coupons and rubber used in mechanical milking teats with adhered E. coli and S. aureus cells, it was possible to verify that only the BSA-E formulations, regardless of pH, Met the recommendations of the World Health Organization (WHO) of up to 50 CFU · cm -2 of aerobic mesophiles, for the stainless-steel surface, although found, a 99.99% reduction of adhered cells on the rubber surface. The BSA and BSA-E samples, at pH 3.5, had a hydrodynamic diameter of 10.66 ± 0.13 nm and 11.03 ± 0.015 nm, respectively, higher than pH 5.0 (7.39 ± 0.18 Nm and 7.95 ± 0.014 nm) and pH 7.0 (8.12 ± 0.29 nm and 8.17 ± 0.13 nm). At pH 3.5 the zeta potential for BSA and BSA-E were respectively 8.8 ± 0.14 Mv and + 8.91 ± 0.15 Mv respectively. For pH 5.0 and 7.0 were -3.95 ± 0.09 Mv and - 4.12 ± 0.12 Mv and -12.57 ± 0.18 Mv and -12.39 ± 0.13 Mv, for BSA and BSA- E, respectively. The values of hydrodynamic diameter, zeta potential and pH remained stable for 15 days. The molecular docking technique was able to predict that the eugenol binding with BSA was thermodynamically favorable, and that eugenol is located inside a pocket formed by the interaction between the three BSA domains (I, II and III), this being A pocket composed mainly of hydrophobic and basic amino acids that favored the interaction of the ligand with the protein. In this context, BSA nanoparenolated eugenol is a viable alternative for the control and / or prevention of bovine mastitis caused by E. coli and / or S. aureus.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-07-26T16:56:56Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 184759 bytes, checksum: ee62b459ffd119e180fc6ae57a7488cd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-26T16:56:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 184759 bytes, checksum: ee62b459ffd119e180fc6ae57a7488cd (MD5) Previous issue date: 2001-12-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neste estudo foi testada a eficácia de uma formulação a base de própolis verde, especialmente sua fração etanólica, no tratamento da mastite clínica e subclínica. Foram utilizados 25 e 17 quartos mamários para a forma clínica e subclínica, respectivamente. Estes foram divididos em um grupo tratado com a formulação e outro que recebeu apenas o veículo, sendo avaliada a cura microbiológica e o nú mero de células somáticas no leite. Foram tratados com a formulação de própolis 15 quartos mamários de animais que apresentavam mastite clínica, obtendo-se a cura de 11 quartos. Já os animais que receberam apenas o veículo, o número de cura foi de três dentre dez quartos tratados. Comparando-se estes dois valores, constatou-se que houve diferença significativa entre estes tratamentos (p < 0,05), sugerindo que a formulação exerceu atividade antimicrobiana nos casos estudados. Observou-se sensibilidade dos microrganismos Staphylococcus aureus, Streptococcus uberis, Staphylococcus sp coagulase negativo, Streptococcus agalactiae, Escherichia. coli, levedura e enterobacteria não classificada. O veículo (DMSO) pode ter exercido algum efeito positivo ou negativo sobre o mecanismo de ação da própolis na mastite clínica. Nos casos de mastite subclínica tratados com esta formulação a base de própolis, verificou-se dois quartos mamários 11curados e oito não curados. No grupo de animais que receberam o veículo não foi constatada a cura de nenhum quarto mamário. Portanto, na mastite subclínica não houve diferença significativa entre os dois tratamentos (p > 0,05), ressaltando que o baixo número de amostras pode ter influenciado o resultado. O Staphylococcus aureus não demonstrou sensibilidade à formulação com própolis na mastite subclínica. Com relação ao número médio de células somáticas no leite dos animais com mastite clínica tratados com própolis, observou-se uma redução significativa destas células após o tratamento. Já nos casos de mastite subclínica ocorreu um aumento significativo das células somáticas após a primeira aplicação da formulação seguida por uma diminuição significativa no decorrer da terapia. Esses resultados do número de células somáticas sugerem que esta formulação teve ação antiinflamatória nas duas formas de mastite. / In this study, a formula based on green propolis, especially its ethanolic fraction, has been tested for clinic and subclinic mastitis treatment. 25 and 17 mammary quarters were used for clinic and subclinical treatments, respectively. These were separated in one group, treated with the formulation and another which only received the vehicle, under evaluation of the microbiological cure and the number of somatic cells in the milk. Animals with clinic mastitis in 15 mammary quarters were treated with the propolis formula, achieving cure in 11 quarters. Among the animals that received the vehicle only, cure was the obtained in three of ten treated quarters. Comparison revealed a significant difference between these treatments (p < 0.05), indicating that the formulation had exerted an antimicrobial activity in the studied cases. Sensitivity of the microorganisms Staphylococcus aureus, Streptococcus uberis, Staphylococcus sp negative coagulase, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, yeast and unclassified enterobacteria was observed. The vehicle (DMSO) may have had a positive or negative effect on the mechanism action of propolis in clinic mastitis. In the cases of subclinical mastitis treated with this propolis-based formulation, four mammary quarters were cured, while eight remained uncured. Among the animal group which had received the vehicle, cure was not observed in any of the mammary quarters. However, there was no significant difference between the two treatments (p > 0.05) for subclinical mastitis, but we point out, that the low sample number may have influenced this result. 13Staphylococcus aureus was not sensitive to the propolis formula in subclinical mastitis. After the treatment, a significant reduction in the average number of somatic cells in the milk of those animals with clinic mastitis that had been treated with propolis was stated. On the other hand, there was a significant increase of somatic cells for the cases of subclinical mastitis after the first formulation application, followed by a significant decrease during the therapy continuation. These results of somatic cell numbers indicate that this formulation had anti-inflammatory action in both mastitis forms.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Agroecossistemas, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-04-29T21:04:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 332915.pdf: 1436504 bytes, checksum: ce5d68643cbe29fdc4422e8d0fe077b3 (MD5) Previous issue date: 2014 / A mastite é a doença mais frequente e importante dos rebanhos leiteiros, afetando a qualidade e a produção do leite, podendo ainda acarretar na presença de resíduos de antibióticos no alimento. Por estas razões a descoberta de novos agentes preventivos ou terapêuticos tem sido justificada, destacando-se a busca na natureza. Nesse contexto, extratos de própolis são candidatos em potencial, uma vez que estão descritos na literatura como antimicrobianos, anti-inflamatórios, antifúngicos, entre outros. Desse modo, o presente trabalho teve como objetivo avaliar in vitro a atividade antimicrobiana de extratos de própolis de origens geográficas distintas, e determinar a viabilidade celular em explantes mamários bovinos após exposição a estes extratos. Foram testadas amostras de própolis dos municípios catarinenses de Água Doce, Urupema e São Joaquim e o extrato típico de Minas Gerais (própolis verde). A extração foi realizada com etanol 70% (1:10, p/v) por 24 h. Após a remoção do solvente em estufa a 60º C, os resíduos foram analisados pelos testes de Folin-Ciocalteau, reação com Cloreto de Alumínio e 1,1-difenil-2-picrilidrazil (DPPH). A atividade antimicrobiana foi determinada através da técnica de Pour Plate, após dois períodos de contato (6 e 24 h) com um inóculo de 105 UFC/mL de cepas padronizadas de S. aureus e E. coli e isolados de leite mastítico, utilizando diferentes concentrações dos extratos (de 0 à 1000 µg/mL). A citotoxicidade foi avaliada em explantes de glândula mamária bovina cultivadas em meio DMEM-F12, após exposição aos extratos de própolis, nas concentrações de 0, 17.5, 35, 70, 140, 280 e 560 µg/mL por 48 h. O teor de fenólicos não diferiu entre os extratos variando de 97,97 à 116,29 µg de EAG/mg (P<0,05). Contudo, houve maior conteúdo de flavonoides no extrato de Minas Gerais (15,91 µg de EQ/mg) e menor no de Urupema (7,33 µg de EQ/mg) (P<0,05). O extrato de Urupema apresentou também a menor atividade antioxidante, enquanto os demais não diferiram entre si (P<0,05). O crescimento de S. aureus foi reduzido após exposição aos extratos. Porém, sua eficácia foi dependente da origem da própolis e concentração. Os extratos de Urupema, Minas Gerais e São Joaquim reduziram o crescimento de S. aureus em 4 log10 vezes a partir de 500 µg/mL e a zero na concentração de 1000 µg/mL. Por outro lado, houve fraca ação antimicrobiana sobre as cepas de E. coli. O extrato mineiro foi o único que reduziu o crescimento bacteriano em 2 log10 na concentração de 500 µg/mL,13enquanto os demais apenas a partir de 750 µg/mL. O ensaio in vitro com explantes da glândula mamária bovina mostrou-se adequado para avaliação da citotoxicidade, não ocorrendo queda na viabilidade celular após 96 h de cultivo (P<0,05). Porém, a origem e a concentração da própolis afetaram a viabilidade do tecido mamário. O extrato de Água Doce mostrou a menor citotoxicidade às células do úbere bovino (P<0,05). Os valores de IC50 encontrados foram 272,4 µg/mL, 171,8 µg/mL, 63,85 µg/mL e 13,26 µg/mL para os extratos de Água Doce, Urupema, São Joaquim e Minas Gerais, respectivamente. Considerando-se que na concentração próxima do IC50, o extrato de Urupema reduziu 1,2 log10 vezes o crescimento de S. aureus, este se destaca com maior potencial de uso no tratamento de mastite. Em conjunto, os resultados encontrados evidenciaram que a eficácia da própolis para o tratamento da mastite é dependente da sua origem. Além disso, verificou-se que as concentrações de maior atividade antimicrobiana mostraram-se prejudiciais à glândula mamária, restringindo o uso intramamário e justificando a necessidade de estudos futuros com nanoemulsões ou frações purificadas.<br> / Abstract : Mastitis is the most frequent and significant disease among dairy herds, affecting not only the production and quality of milk, but also causing antibiotic residues in the milk. As such, the discovery of new preventative agents or therapies are necessary, especially those coming from natural sources. In this context, propolis extracts are potential candidates as they are described in the literature as antimicrobial, anti-inflammatory, antifungal, among others. In the present study, the objective was to evaluate the antimicrobial activity of propolis extracts in vitro from distinct geographic locations and determine the cellular viability in bovine mammary explants after exposure to these extracts. Propolis extracts used in the study included samples from the municipalities of Agua Doce, Urupema, and São Joaquim in Santa Catarina State, and a typical extract from Minas Gerais State (green propolis). Extraction was realized with 70% ethanol (1:10, w/v) for 24 h. To remove the solvent, the solution was heated to 60º C, and the residue was then analysed using Folin-Ciocalteau test, Aluminium Chloride assay and 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). The antimicrobial activity was determined using the Pour Plate technique, after two contact periods (6 and 24 h) between an inoculum of 105 UFC/mL of standard strains and isolated from mastitic milk of S. aureus and E. coli treated with different concentrations of propolis extracts (from 0 to 1000 µg/mL). The cytotoxicity was evaluated in bovine mammary gland explants cultivated in DMEM-F12 medium, after exposure to propolis extracts in concentrations of 0, 17.5, 35, 70, 140, 280 and 560 µg/mL for 48 h. The level of phenolics did not differ between the extracts and ranged between 97.97 and 116.29 µg of GAE/mg (P<0.05). However, the greatest content of flavonoids were found in the extract from Minas Gerais (15.91 µg of Q-Eq/mg) and the lowest in the extract from Urupema (7.33 µg of Q-Eq/mg) (P<0.05). The extract from Urupema also presented the lowest antioxidant activity, while the others showed no differences between them (P<0.05). Growth of S. aureus was reduced after extract exposure. However, its efficacy was dependent on the origin of the propolis and the concentration. Extracts from Urupema, Minas Gerais, and São Joaquim reduced the growth of S. aureus by 4 log10 times using a concentration of 500 µg/mL and growth was reduced to zero at a concentration of 1000 µg/mL. On the other hand, there was weak antimicrobial activity on the strains of E. coli. Only the extract from Minas Gerais reduced the bacteria growth by152 log10 times at a concentration of 500 µg/mL, while the others reduced bacteria growth only with concentrations at 750 µg/mL and greater. The in vitro tests with bovine mammary gland explants were adequate for the evaluation of cytotoxicity as there was no drop in cellular viability after 96 h of cultivation (P<0.05). However, the geographical origin and concentration of the propolis affected the viability of mammary tissue. The extract from Agua Doce showed the lowest cytotoxicity for bovine udder cells (P<0.05). The IC50 values found were 272.4 µg/mL, 171.8 µg/mL, 63.85 µg/mL, and 13.26 µg/mL for extracts from Agua Doce, Urupema, São Joaquim, and Minas Gerais, respectively. Considering that at a concentration close to the IC50 the Urupema extract reduced S. aureus growth by 1.2 log10, the potential for its use in treating mastitis is evident. The results showed that the efficacy of propolis for the treatment of mastitis is dependent on its geographical origin, which is related to its chemical composition. Furthermore, the results showed that concentrations that produce higher levels of antimicrobial activity are harmful to the mammary gland, restricting intramammary use and justifying the need for further studies with nano-emulsions or purified fractions.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Agroecossistemas / Made available in DSpace on 2012-10-20T07:22:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 199904.pdf: 233708 bytes, checksum: 305889513a99f68a4489f82e2d6a8f51 (MD5) / Este trabalho teve duas hipóteses: 1º - há efeito de diferentes cargas animais instantâneas de vacas leiteiras em Pastoreio Racional Voisin (PRV) no comportamento de pastoreio, taxa de desaparecimento de pasto, produção de leite, resposta produtiva da pastagem sem impacto na compactação subsuperficial do solo. 2º - a massagem do úbere, ao final da ordenha, pode afetar o leite residual (LR) e, por conseqüência, a incidência de mastite. O experimento 1 e parte do 2 foram desenvolvidos no Assentamento Conquista na Fronteira, Dionísio Cerqueira - SC. O experimento 1 teve delineamento em blocos completamente casualizados, com duas cargas animais instantâneas (tratamentos): carga animal instantânea - baixa (BC= 80 UGM/ha) e alta (AC=240 UGM/ha). As vacas em lactação foram bloqueadas de acordo com número de partos, dias de lactação, e então, distribuídas aleatoriamente entre os tratamentos. Foram analisados produção de leite, comportamento de pastoreio, produção de pasto, taxa de desaparecimento do pasto, composição florística, resistência à penetração do solo e densidade aparente do solo. Não houve diferença em relação a produção de leite entre tratamentos. As vacas do tratamento AC pastaram por mais tempo do que as do tratamento BC. As vacas do tratamento BC ruminaram por mais tempo do que as do AC. Houve um maior crescimento de pasto no tratamento alta carga. Não houve diferença na composição botânica entre tratamentos, nem na resistência à penetração do solo. Concluiu-se que o uso de altas cargas instantâneas altera o comportamento de pastoreio, favorece a produção de pasto e não causa aumento da resistência à penetração no solo nem na densidade aparente. O experimento 2 foi feito em dois sub experimentos, um em uma granja comercial e outro em uma estação experimental. Foi feita massagem do úbere ao final da ordenha com o intuito de reduzir o LR e a incidência de mastite. LR não foi afetado pela massagem do úbere no sub experimento 1 (c=1.41, ± 0.19 kg), nem no sub experimento 2 (c=1.03 ± 0.32 kg). A massagem do úbere não teve efeito significativo na incidência de mastite (qui-quadrado; DF=1; p>0.68). Concluiu-se que, nas condições do experimento, a massagem do úbere ao final da ordenha não teve efeito no LR e nem na incidência de mastite.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2016. / Submitted by Nayara Silva (nayarasilva@bce.unb.br) on 2016-06-27T14:00:04Z No. of bitstreams: 1 2016_ElisangelaAlinePereira.pdf: 802072 bytes, checksum: 516a1149a3b2b4b2103a8fb940e6b57b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-06-27T18:52:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_ElisangelaAlinePereira.pdf: 802072 bytes, checksum: 516a1149a3b2b4b2103a8fb940e6b57b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T18:52:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_ElisangelaAlinePereira.pdf: 802072 bytes, checksum: 516a1149a3b2b4b2103a8fb940e6b57b (MD5) / Staphylococcus aureus é o microrganismo mais isolado nos casos de mastites bovina e destaca-se por possuir resistência aos tratamentos com antimicrobianos convencionais e devido ao seu potencial em produzir toxinas causadoras de doenças. O objetivo desse trabalho foi detectar a presença dos genes de enterotoxinas e da toxina da Síndrome do Choque Tóxico dos Staphylococcus aureus isolados do leite de animais em mastite clínica. Foram analisadas 75 amostras de S. aureus do banco de germoplasma do Laboratório de Microbiologia Médica Veterinário da Universidade de Brasília. As amplificações obtidas apresentaram valores maiores que o esperado para os genes de enterotoxinas. Foram identificados entre os isolados de S. aureus um percentual de 10,68% de amplificações com utilização de primers isoladamente (uniplex) e não houve amplificações em combinação com diferentes primers (multiplex). Analisando a PCR-uniplex, houve maior número de amplificações da enterotoxina SEA, presente em 8% dos isolados. Os genes SEB e SEC, foram detectados em 1,34% das amostras e os genes SED e TSST-1 não apresentaram nenhuma amplificação nesse estudo. O tamanho do fragmento para SEA foi de 1.200 pb em 4 amostras amplificadas, 1 amostra com 800 pb e outra com 620 pb. Em relação a SEB e a SEC, houve apenas amplificação de uma de suas amostras, com tamanho da banda de 1.200 pb e 1100 pb respectivamente. O conhecimento do perfil molecular dos S. aureus auxilia em estudos epidemiológicos de infecções intramamárias de rebanhos leiteiros e conhecendo o potencial toxigênico das estirpes de S. aureus, corrobora para prevenir e controlar as infecções nos rebanhos para melhorar a qualidade dos produtos oferecidos à população. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Staphylococcus aureus is the most frequently isolated organism in cases of bovine mastitis and stands by having resistance to conventional antibiotic treatments and due to its potential to produce toxins that cause diseases. The aim of this study was to detect the presence of enterotoxin genes and the Toxic Shock Syndrome toxin gene of Staphylococcus aureus isolated from the milk of animals with clinical mastitis. Seventy-five samples of S. aureus, from the gene bank of the Medical Veterinary Microbiology Laboratory of the University of Brasilia, were analysed. The obtained amplifications showed higher values than expected for the enterotoxin genes. We identified 10.68% amplifications when using singly primers (uniplex), but there were no amplification when combining different primers (multiplex). Analyzing the uniplex PCR, there were more amplifications of the SEA enterotoxin gene (8% of the isolates). The SEB and SEC genes were detected in 1.34% of the samples and the SED and the TSST-1 genes showed no amplification in this study. The size of the SEA fragment was 1.200 pb in 4 amplified samples, 800 pb in 1 sample and 620 pb in another one. Regarding the SEB and the SEC genes, there was the amplification of only one of the samples, that had a band size of 1.200 pb and 1100 bp, respectively. Knowledge about the molecular profile of S. aureus assists in epidemiological studies about mammary infections of dairy herds. Moreover, knowledge about the toxigenic potential of S. aureus strains helps to prevent and control infections in herds in order to improve the quality of the products offered to the population.

Orientador: José Carlos de Figueiredo Pantoja / Resumo: A mão de obra dos ordenhadores é um fator determinante da qualidade do leite. No entanto, sistemas de capacitação técnica que sejam validados cientificamente ainda não estão disponíveis. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver e validar um sistema de treinamento de procedimentos de ordenha que possa ser aplicado a ordenhadores com diferentes níveis de escolaridade. Trinta e quatro ordenhadores de 15 propriedades participantes, preferencialmente do projeto CATI-Leite, da Coordenadoria de Assistência Técnica Integral do Estado de São Paulo, foram incluídos no estudo. Foi aplicado um treinamento presencial de duas horas de duração, composto por uma palestra e uma dinâmica de grupo. Foram distribuídas apostilas didáticas desenvolvidas para melhorar o aprendizado. Os conhecimentos teórico e prático dos ordenhadores foram comparados em dois momentos, antes e depois do treinamento, por meio de avaliações realizadas nas propriedades. Um questionário foi desenvolvido para avaliação do conhecimento teórico dos ordenhadores e o conhecimento prático foi avaliado por meio de um sistema de escore de habilidade de ordenha baseado na observação do trabalho dos participantes. Modelos de medidas repetidas e de regressão logística foram utilizados para comparar a média dos escores teórico e prático e estimar as chances de realização de procedimentos de ordenha de forma correta antes e depois do treinamento, respectivamente. Houve aumento significante (P < 0,001) da média de ambos os esc... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-30Bitstream added on 2014-06-13T20:16:20Z : No. of bitstreams: 1 nobrega_db_me_botfmvz.pdf: 839809 bytes, checksum: cf66e109eac48d5e6d7140e6607bfbf2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho objetivou o isolamento de Klebsiella pneumoniae do ambiente de sala de ordenha e do ambiente dos animais, incluindo a sala de pré-ordenha, piquetes e, em algumas propriedades os galpões de free stall, do reto e membros posteriores dos animais, do leite do tanque de refrigeração e do leite dos tetos positivos ao teste do Califórnia Mastitis Test (CMT), pesquisar cepas produtoras de β-lactamases de espectro ampliado (ESβL) e, a partir da identificação clonal, verificar a semelhança entre as cepas. Em 28 (2,14%) amostras de leite coletadas dos animais foi detectada a presença de Klebsiella pneumoniae como patógeno responsável pela infecção intramamária (IMI). A partir de swabs ambientais, da pele dos animais e do leite oriundo do tanque de expansão das dez propriedades, foram isoladas 79 cepas de K. pneumoniae. Os resultados da prova de detecção fenotípica da produção de enzimas do tipo ESβL foram positivos em oito (7,47%) das cepas bacterianas isoladas. No Brasil ainda não há relatos de coliformes produtores destas enzimas oriundos de animais de produção, e no presente estudo uma das cepas foi isolada do tanque de expansão, representando um potencial perigo à saúde pública. Pelo resultado da PFGE, observou-se grande diversidade genética da bactéria dentro da propriedade e entre as propriedades. Demonstrou-se que patógenos ambientais multirresistentes estão presentes em rebanhos bovinos leiteiros, não apenas isolados de quadros de infecção intramamária como também de galpões de free stall, membros posteriores dos animais, sala de ordenha e tanque de expansão. Confirmou-se também, a alta variabilidade genética da K. pneumoniae em rebanhos bovinos leiteiros mesmo dentro de um mesmo rebanho, e a importância da PFGE como recurso na epidemiologia molecular / The present study aimed the isolation of Klebsiella pneumoniae from the milk parlor and the animal’s environment, including the pre milking room, paddocks and, in some properties the free stall, animal’s rectum and hind limbs, bulk tank milk and from all teats positive to the California Mastitis Test (CMT), search for strains producers of extended spectrum β-lactamases (ESβL) and, by the clonal identification, verify if similarities between the strains ocurred. In 2.14% (28) of the milk samples collected from the animals it was detected the presence of Klebsiella pneumoniae as the pathogen responsible for the intramammary infection (IMI). From environmental swabs and bulk milk tank of the ten properties, it was isolated 79 strains of K. pneumoniae. The results of phenotypic detection of the ESβL enzymes production were positive in eight (7.47%) bacterial strains isolated. It is important to know that, in Brazil there are no reports of coliforms producers of these enzymes isolated from livestock animals, and in the present study one of the strains was isolated from the bulk tank milk, representing a potential hazard to public health. The results of PFGE showed high genetic diversity of the bacteria within and between the dairy farms. It was demonstrated that environmental multidrug resistant pathogens are present in dairy herds, isolated from intramammary infections cases, free stall parlors, animal’s hindlimbs, milking parlor and bulk tank milk. This study also confirmed the high genetic diversity of K. pneumoniae in dairy herds within the same herd, and the importance of PFGE as a molecular epidemiology tool. Keywords: environment, extended-spectrum β-lactamases (ESβL), Klebsiella pneumoniae, mastitis, milk, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-30Bitstream added on 2014-06-13T20:35:35Z : No. of bitstreams: 1 salerno_t_me_botfmvz.pdf: 1170640 bytes, checksum: 4141fa14cadaa626e1808eaa0c9abaae (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Nos últimos anos, Prototheca zopfii tem sido considerada uma das causas mais importantes de mastite de origem ambiental, refratária a terapia convencional. As infecções mamárias por P. zopfii acarretam alterações na composição do leite e redução na produção leiteira. O presente estudo avaliou a sensibilidade “in vitro” de 27 linhagens de P. zopfii isoladas do leite de vacas no Brasil frente a diferentes antimicrobianos e anti-sépticos, aliado a caracterização genotípica dos isolados. Nistatina (100,0%) e gentamicina (66,7%) foram as drogas mais efetivas para as 27 linhagens estudadas. A multi-resistência a três ou mais antimicrobianos foi observada em 100,0% das estirpes, principalmente frente a ampicilina, cefoperazona, cloxacilina, enrofloxacina, florfenicol, neomicina e tetraciclina. Hipoclorito de sódio (0,03-0,15%) e iodo (0,15-0,62%) revelaram efetividade “in vitro” para todos os isolados em baixas concentrações. A caracterização genotípica pela técnica de PCR baseada no fragmento 18S rDNA mostrou similaridade à cepa controle de P. zopfii SAG 2021T, caracterizando todos os isolados como pertencentes ao genótipo 2. O presente estudo descreve pela primeira vez no Brasil, a caracterização genotípica de linhagens de P. zopfii isoladas de leite obtido de vacas com mastite clínica, subclínica e de tanque de expansão. / In last years, Prototheca zopfii has been considered one of the most important causes of mastitis from environmental origin, refractory to conventional therapy. The mammary infections caused by Prototheca zopfii lead to severe alterations in composition of the milk, and reduction in production. The present study evaluate the in vitro antimicrobials and anti-septic susceptibility, of 27 P. zopfii strains isolated from milk in cattle raised in Brazil, allied to the genotypic characterization of isolates. Nystatin (100.0%) and gentamicin (66.7%) were the most-effective drugs for 27 P. zopfii strains. Multiple drug resistance for three or more antimicrobials was observed in 100.0% of strains predominantly for ampicilin, cefoperazone, cloxacillin, enrofloxacin, florfenicol, neomycin e tetracycline. Sodium hypochlorite (0.03-0.15%) and iodine (0.15-0.62%) revealed “in vitro” efficacy in all isolates in low concentrations. The genotypic characterization using PCR technique based on the 18S rDNA displayed similarity to the strain-control of P. zopfii SAG 2021T characterizing all isolates belonging to the genotype 2. The present study describe by first time in Brazil the genotype characterization of P. zopfii strains isolated from milk, obtained in clinical and subclinical bovine mastitis and bulk tank milk.