El presente estudio es realizado en el Hospital Central de Aeronáutica donde se atiende población militar y civil (familiares directos de estos, y un escaso número de personal ajeno a la institución pero que voluntariamente solicita atención en dicho establecimiento), en donde la raza predominante es la mestiza, aunque existe un número relativamente considerable de personas que tienen fenotipo con riesgo de melanoma maligno, de acuerdo con lo mencionado antes; principalmente el personal de oficiales y/o sus familiares cercanos. Debido al considerable aumento progresivo de casos de melanoma maligno cutáneo, esta patología se está convirtiendo en un importante problema de salud pública en los países con la más alta incidencia de esta enfermedad. Por esta razón y para evaluar cómo es el comportamiento de esta entidad en la población que se atiende en el Hospital Central de la Fuerza Aérea, el cual es un centro asistencial de nivel IV, es que me motiva a realizar el presente estudio retrospectivo correspondiente a los últimos 10 años. / Tesis de segunda especialidad

Yes / BRAF V600E is the most common driver mutation in human cutaneous melanoma and is frequently accompanied by loss of the tumor suppressing phosphatase PTEN. Recent evidence suggests a co-operative role for RAC1 activity in BRAF V600E -driven melanoma progression and drug resistance. However, the underlying molecular mechanisms and the role of RAC1 downstream targets are not well explored. Here, we examine the role of the NCKAP1 subunit of the pentameric cytoskeletal SCAR/WAVE complex, a major downstream target of RAC1, in a mouse model of melanoma driven by BRAF V600E; PTEN loss. The SCAR/WAVE complex is the major driver of lamellipodia formation and cell migration downstream of RAC1 and depends on NCKAP1 for its integrity. Targeted deletion of Nckap1 in the melanocyte lineage delayed tumor onset and progression of a mutant Braf ; Pten loss driven melanoma mouse model. Nckap1 depleted tumors displayed fibrotic stroma with increased collagen deposition concomitant with enhanced immune infiltration. Nckap1 loss slowed proliferation and tumor growth, highlighting a role in cell cycle progression. Altogether, we propose that NCKAP1-orchestrated actin polymerization is essential for tumor progression and maintenance of tumor tissue integrity in a mutant Braf ; Pten loss driven mouse model for melanoma.

Yes / Genetic approaches that allow lineage tracing are essential to our future understanding of melanocytes and melanoma. To date, the approaches used to label melanocytes in mice have relied on random integration of transgenes driven by the promoters of the Tyrosinase and Dopachrome tautomerase genes, knock-in to the Dopachrome tautomerase locus or knock-in to the Mlana locus in a bacterial artificial chromosome. These strategies result in expression in other tissues such as telencephalon and other cell types such as nerves. Here we used homologous recombination in mouse embryonic stem cells to generate a targeted multicistronic allele of the Pmel locus that drives melanocyte-specific expression of CreERT2, nuclear localised H2B-Cerulean and membrane localised marcks-mKate2 allowing live imaging of melanocytes and activation of other conditional alleles. We combined this allele with R26R-EYFP mice allowing induction of EYFP expression on administration of tamoxifen or its metabolite 4-OHT. The fluorescent proteins H2B-Cerulean and marcks-mKate2 label the cell nucleus and plasma membrane respectively allowing live imaging and FACS isolation of melanoblasts and melanocytes as well as serving to provide an internal control allowing estimation of recombination efficiency after administration of tamoxifen. We demonstrate the utility of the transgene in embryonic and adult tissues. / Cancer Research UK. Grant Number: A15673. Medical Research Council. Grant Number: MC_PC_U127527200. National Centre for the Replacement Refinement and Reduction of Animals in Research. Grant Number: NC/K001612/1. North West Cancer Research Fund. Grant Number: CR1132. Medical Research Scotland. Grant Number: 436FRG

Se presenta el caso de un paciente de 60 años de edad que presenta dolor y sensación de cuerpo extraño en la región anal, asociado a deposiciones con restos de sangre. Al tacto rectal se palpó una lesión indurada en la cara anterior del conducto anal. En la colonoscopía se evidenció una lesión proliferante elevada, pigmentada “negruzca”, de aproximadamente 2 cm de diámetro, compatible con neoplasia maligna de canal anal. Se procedió a una biopsia e inmunohistoquímica, que dio como resultado el S-100 positivo y HMB-45 negativo. Una tomografía helicoidal multicorte toraco-abdomino-pélvico descartó tumoraciones y adenomegalias metastásicas. El paciente fue sometido a una resección local parcial transanal de la tumoración pigmentada. El resultado histopatológico posquirúrgico confi rmó el diagnóstico de melanoma maligno anal amelanótico (MMAA); el S-100 fue positivo; el Melan-A, positivo débil, y el KI-67, positivo. El paciente presentó una evolución favorable y fue dado de alta a los tres días de la cirugía / We present the case of a 60 year old patient suffering pain and the sensation of a foreign body in the anal region associated with traces of blood in stools. Digital rectal exam (DRE) revealed a hardened lesion located on the wall of the anal canal. Colonoscopy revealed a raised proliferating lesion with a blackish color which was about 2 inches in diameter. This was compatible with an anal canal malignancy. We proceeded to a biopsy and immunohistochemistry study which tested positive for S-100 and negative for HMB-45. A multislice helical chest, abdominal and pelvic CAT scan ruled out metastatic tumors and lymphadenopathy. The patient underwent local transanal excision of the partially pigmented tumor. Post- surgical histopathological results confi rmed the diagnosis of malignant anal amelanotic melanoma positive for S-100. The sample tested weakly positive for Melan-A and positive for KI-67. The favorable outcome of the procedure led to the patient’s discharge 3 days after surgery.

Tumores são definidos como microambientes compostos não só pelas células malignas, mas também por células endoteliais, fibroblastos e leucócitos, que promovem o crescimento tumoral e a angiogênese. Galectina-3, uma proteína que se liga a b- galactosídeos, é abundantemente expressa por monócitos/macrófagos, dentre outros leucócitos. Inúmeras evidências sugerem que galectina-3 atua como uma molécula reguladora da resposta inflamatória. Tendo em vista que o infiltrado inflamatório pode promover a progressão de tumores, o objetivo do presente trabalho foi avaliar se galectina-3, expressa tanto pela célula tumoral como pelas células estromais, modula o crescimento de melanoma. Para tal, células de melanoma murino Tm1 foram transfectadas com o gene de galectina-3. Ambos clones celulares (galectina-3 positivos e negativos) foram injetados na intrafáscia ou no subcutâneo de camundongos (fêmeas) C57BL/6 selvagens e/ou nocautes para o gene de galectina-3 para análise da implantabilidade e crescimento tumoral. Com relação à implantabilidade, não foi observado diferenças no estabelecimento de uma massa tumoral proliferativa em animais selvagens inoculados com células Tm1 transfectadas ou não com o gene de galectina-3 em animais selvagens. Em relação a taxa de crescimento dos tumores, nenhum animal nocaute inoculado com células Tm1 galectina-3 positivas apresentou tumores de dimensões mensuráveis até o 11º dia pós-inóculo. Independente do nível de expressão de galectina- 3 pela célula tumoral, os tumores originados nos animais nocautes apresentavam menor massa em gramas comparados ao grupo selvagem, sugerindo que galectina-3 expressa pelas células estromais promove o crescimento tumoral. Ainda, os tumores originados nos animais nocautes e no grupo selvagem inoculado com células Tm1 galectina-3 positivas apresentavam menor extensão de área necrótica do que os animais selvagens inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas. Interessantemente, os animais selvagens e nocautes inoculados com células Tm1 galectina-3 positivas apresentaram tumores com menor área vascular e menor número de estruturas vasculares funcionais quando comparados aos animais selvagens inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas. A análise de expressão gênica nos tumores mostrou que os níveis relativos de RNAm de VEFG (fator de crescimento de endotélio vascular) foram menores nos animais inoculados com células Tm1 galectina-3 positivas em relação aos inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas, indicando que galectina-3 expressa pelas células tumorais atua como uma molécula anti-angiogênica. Finalizando, o presente trabalho sugere que galectina-3 pode atuar como uma molécula pró- ou anti-tumoral, dependendo do tipo celular que a expressa no microambiente tumoral. / Tumors have been described as microenvironments composed not only by malignant cells, but also by endothelial cells, fibroblasts and leukocytes, which can promote tumor growth and angiogenesis. Galectin-3, a b-galactoside binding protein, is expressed by monocytes/macrophages and others leukocytes. In fact, several lines of evidence suggest that galectin-3 act as master regulators of the inflammatory response. Based on the fact that the inflammatory infiltrate can promote tumor progression, the proposal of this study was to evaluate if galectin-3, either from tumor or stromal cells could modulate melanoma growth. Tm1 murine melanoma cell line was transfected with the galectin-3 gene. Both clones (galectin-3 negative and positive) were injected in the foot pad or subcutaneous in female C57BL/6 wild-type (WT) and galectin-3 knock-out (KO) mice to tumor engraftment and growth analysis. There was no difference in the tumor engraftment between animas injected with Tm1 galectin-3 positive or negative cells. In addition, any knock-out mice injected with galectin-3 positive cells had measurable tumors up to day 11 post inoculation. Regardless the galectin-3 expression level in the melanoma cell, tumors from galectin-3 KO mice were smaller than those from WT animals, suggesting that galectin-3 expressed by stromal cells promotes tumor growth. Moreover, tumor necrotic area was smaller in KO mice and in wild-type animals injected with Tm1 galectin-3 positive cells compared to wild type animals injected with Tm1 galectin-3 negative cells. Interestingly, both vascular area and the number of functional vessels in animals injected with galectin-3 positive Tm1 cells were smaller in WT as well as in KO mice compared to the same animals injected with galectin-3 negative Tm1 cells. Gene expression analysis showed that VEGF (vascular endothelial growth factor) mRNA levels were smaller in wild type animals injected with Tm1 galectin-3 positive cells compared to those injected with Tm1 galectin-3 negative cells, indicating that galectin-3 expressed by tumor cells can act as an anti-angiogenic molecule. The present study suggests that galectin-3 can act either as a pro or antitumoral molecule, depending on which type of cell (tumoral or stromal) this lectin is expressed within tumor microenvironment.

O câncer tem múltiplas origens e suas causas incluem estilo de vida, fatores ambientais e suscetibilidade genética hereditária. Por isso, a busca por tratamentos mais eficazes e por um diagnóstico precoce das neoplasias malignas cresce cada vez mais. Apesar de o câncer, geralmente, derivar de um único clone de células transformadas, o processo de progressão tumoral promove considerável diversidade genética entre as células neoplásicas em crescimento. O melanoma cutâneo maligno origina-se dos melanócitos presentes predominantemente na pele ou de células precursoras multipotentes, como os nevus, e é o câncer cutâneo com maior grau de malignidade. Várias são as linhas de tratamento utilizadas atualmente para o câncer, porém muitas ainda não são tão eficazes, e a descoberta precoce ainda é uma das principais ferramentas para o combate ao problema. O presente projeto teve como objetivo verificar a resposta de células de fibroblastos e Hep2 in vitro tratadas com partículas de óxido de ferro e ferro-cálcio, assim como, a caracterização dessas partículas. A caracterização das partículas foi realizada por meio da análise granulométrica, de Microscopia eletrônica de varredura (MEV), teste de absorbância dos vidros e a medida da capacidade de aquecimento das partículas quando em solução nas concentrações de 50, 250 e 500 mg/ml. Os testes de toxicidade dos vidros foram realizados por meio de ensaios in vitro de difusão de extratos em solução e método de difusão em Agar utilizando-se linhagem celular de fibroblasto e células tumorais de laringe humana Hep2. E, testes in vivo com a administração das partículas obtidas pela via subcutânea. Os resultados da caracterização das partículas demonstraram que o diâmetro médio das partículas de fosfato de ferro foi de 830,2 nm e 745,3 nm para as partículas de fosfato de ferro-cálcio, o que foi confirmado pela MEV. O teste de absorbância mostrou que os vidros absorvem em ampla faixa do espectro eletromagnético, incluindo a faixa de 660 nm. O teste de aquecimento demonstrou a capacidade das partículas em variar em média 14 graus Celsius a temperatura da solução, independentemente da concentração utilizada. Os testes in vitro e in vivo mostraram que as partículas não foram citotóxicas e não causaram danos ao tecido subcutâneo, mesmo após o tempo de 1 semana da administração. Estes resultados mostram que a utilização de partículas de vidros de fosfato para o tratamento de câncer pode ser viável, assim com seu potencial para utilização no tratamento de melanoma. / Cancer has many origins and their causes include lifestyle, environmental factors and hereditary susceptibility. Therefore, the search for better treatments and early diagnosis of malignant neoplasms grows more and more. Although the cancer usually derives from a single clone of transformed cells, the process of tumor progression promotes genetic diversity between the neoplastic cells in growth. Cutaneous malignant melanoma arises from melanocytes predominantly present in the skin or multipotent progenitor cells, such as nevi, and is the skin cancer with the highest degree of malignancy. Several lines of treatment are currently used to treat the cancer, but many still not effective and early detection stills one of the main tools to combat the problem. This project aimed to verify the response of fibroblasts and Hep2 cells treated in vitro with particles of iron oxide and iron-calcium, as well as the characterization of these particles. Characterization of particles was performed by means of textural analysis, scanning electron microscopy (SEM), absorbance test of the glasses and measurement of the heating capability in particle solutions at concentrations of 50, 250 and 500 mg/ml. Toxicity tests of glasses were performed using in vitro tests of extracts of diffusion in solution and Agar diffusion method using a fibroblast cell line and tumor cells in Hep2 human larynx. And, in vivo tests with subcutaneous injection of the particles. The characterization results showed that the particle average diameter of particles of iron phosphate was 830.2 nm and 745.3 nm for the particles of iron-calcium phosphate, which was confirmed by SEM. The absorbance test showed that the glasses absorb in a wide range of the electromagnetic spectrum, including the band of 660 nm. The heating test demonstrated the capability of the particles to promote a 14ºC average temperature variation in the solution, regardless of the concentration. In vitro and in vivo tests showed that the particles were not cytotoxic and did not cause damage to the subcutaneous tissue, even after 1 week of administration. These results shows that the utilization of phosphate glasses particles can be feasible, as well as its potential for use in the treatment of melanoma.

O melanoma é composto por células malignas e também por um estroma de sustentação que inclui fibroblastos, células imunológicas, endoteliais, matriz extracelular, dentre outros fatores. Assim, os tumores não são entidades independentes, eles interagem ativamente com o microambiente adjacente de forma bidirecional através de sinais moleculares que modulam o fenótipo maligno. Um dos sinais bioquímicos para desenvolvimento desse fenótipo se dá pelo catabolismo de Trp pela via das quinureninas, que gera compostos com diversas atividades biológicas, que no tumor estão envolvidas com tolerância e imunoescape e, logo, com prognóstico ruim para os pacientes. Até o presente momento apenas o consumo de Trp e a formação de um único metabólito, a quinurenina (KYN), tem sido associada a malignidade dos melanomas. A fim de ampliar e elucidar os mecanismos bioquímicos do metabolismo desse aminoácido em melanomas, estudamos mais de quinze compostos de todas as rotas catabólicas de Trp em células da pele, células imunológicas, linhagens tumorais e amostras clínicas de melanoma. De forma inédita pudemos observar que as células da pele tem maior habilidade de sintetizar KYN quando comparadas às linhagens tumorais, demonstrando que o catabolismo de Trp peritumoral pode ser responsável pelos fenômenos de imunotolerância e escape. Além disso, o metabolismo de Trp pode estar envolvido nos mecanismos de homeostasia da pele, já que especificamente essas células produzem compostos com atividade biológica nesse órgão. As células imunológicas possuem um perfil metabólico completamente diferente umas das outras: monócitos, macrófagos e dendríticas possuem maior ativação da via KYN enquanto linfócitos e neutrófilos possuem maior indução da rota que gera serotonina e melatonina. Mesmo nos diferentes fenótipos de macrófagos, M1 e M2a, foram observadas marcações especificas de metabolismo, que podem estar relacionadas às atividades anti- ou pró-tumoral dessas células no microambiente. Em amostras clínicas, apesar da principal diferença entre nevos e melanomas ser a concentração de KYN, diversas outras alterações no metabolismo de tiptofano foram observadas, o que mostra a complexa magnitude deste metabolismo na fisiopatologia da pele / Melanoma is composed of malignant cells and also by a stromal support that includes fibroblasts, immune cells, endothelial cells, extracellular matrix, among other factors. Thus, tumors are not separate entities; they actively interact with the surrounding microenvironment bi-directionally through molecular signals that modulate the malignant phenotype. One of biochemical signals for the development of this phenotype occurs by Trp catabolism through kynurenine pathway, that generates compounds with diverse biological activities, which in tumors are involved with tolerance and imunoescape and therefore with poor prognosis for patients. To date only the consumption of Trp and formation of a single metabolite, kynurenine (KYN), has been associated with malignant melanomas. In order to enlarge and clarify the biochemical mechanisms of this amino acid metabolism in melanomas, we have studied more than fifteen compounds of all catabolic routes of Trp in skin cells, immune cells, tumor cell lines and clinical samples of melanoma. In an unique way we could observe that the skin cells has superior ability to synthesize KYN when compared to tumor cell lines, demonstrating that the peritumoral catabolism of Trp may be responsible for the phenomena of immune tolerance and escape. Furthermore, the Trp metabolism may be involved in skin homeostasis mechanisms, since these cells produce specific compounds with biological activity in this organ. The immune cells have a completely different metabolic profile among them: monocytes, macrophages and dendritic cells have greater KYN pathway activation, and lymphocytes and neutrophils possess greater induction of the route that generates serotonin and melatonin. Even in different macrophages phenotypes, M1 and M2a, we observed specific metabolic marks, which may be related to the anti- or pro-tumoral activity of these cells in the tumor microenvironment. In clinical samples, although the main difference between nevi and melanomas is the concentration of KYN, a range of other changes in Trp metabolism were observed, which shows the complex magnitude of this metabolism in the skin pathophysiology

Dicer é um membro da família RNase III que controla a maturação de microRNA. A up-regulação de Dicer está associada a características agressivas e proliferação do melanoma. Nosso objetivo foi avaliar a expressão de Dicer em amostras de pacientes com melanoma nos diferentes estadios e em linhagens celulares de melanoma correlacionando a expressão de Dicer com progressão tumoral e resistência à apoptose. Comparamos Dicer no tecido de pacientes diagnosticados com melanoma em diferentes estadios, os resultados sugerem que o aumento da expressão de Dicer está associado à progressão do melanoma. Avaliamos nas linhagens knockdown para dicer1 a proliferação, capacidade clonogênica e sobrevida global. A linhagem celular SK-MEL-5 DICER KD foi mais suscetível à apoptose após o tratamento com cisplatina. Essa sensibilidade pode ser pela regulação dos receptores de morte, FAS e TNFR1, que estão envolvidos na indução de apoptose. Concluímos que o aumento na expressão de Dicer está relacionado com a progressão do Melanoma e com a resistência ao tratamento com cisplatina. / Dicer is a member of the RNase III family that controls the maturation of microRNA. Up-regulation of Dicer is is only associated with melanoma. The aim of this study was to evaluate the expression of Dicer in samples of patients diagnosed with melanoma at different stages of the disease and in melanoma cell lines correlating the expression of Dicer with tumor progression and resistance to apoptosis. We compared Dicer protein in the tissue of patients diagnosed with melanoma at different stages. We observed that the increased dicer expression is associated with melanoma progression. Cell proliferation, clonogenic capacity and overall survival were evaluated in the knockdown cell lines for dicer1. The SK-MEL-5 DICER KD cell line was more susceptible to apoptosis after treatment with cisplatin. The regulation of FAS and TNFR1 death receptors expressed by knockdown cell line were important in the induction of apoptosis. We conclude that the increase in Dicer expression is related to the progression of Melanoma and resistance to treatment with cisplatin.

Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Berton, Juliana.pdf: 2602704 bytes, checksum: 2cb56990fbaa5b2f82264280c97a04df (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Histidine is an important amino acid in the differentiation of some cell types, such as hepatocytes, for example. Histamine is synthesized from histidine is present in many cancer types, including melanoma. This cancer has as characteristics no differentiated cell and the production a high amount of histamine. The purpose of this work was to study the effects of a histidine supplementation on differentiation and tumor progression. In vitro cell viability were performed by neutral red and MTT assays with histidine at 0,01, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0, 10 and 20 mM cimetidine at 0,01, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0, 10 mM, 10 mM histidine association cimetidine + 0,01 mM and 10 mM cimetidine association + 0,01 mM histidine and evaluated after 24, 48 and 72 hours using B16F10 cells and morphological analysis additionally performed. Histamine at 0,01, 0,1, 1 and 10 mM, terfenadine at concentrations 1, 10, 100 nM and 1 uM and thioperamide at concentrations 1, 10, 100 nM and 1 uM were also assessed by using the MTT cell B16F10. ELISA was performed to quantify histamine with cell culture supernatant treated with histidine, histamine, terfenadine, cimetidine, and thioperamide. For in vivo assays were used C57BL6/J mice underwent implantation of tumor cells and subsequently treated with histidine solution at a dose of 21.4 mg/kg cimetidine 343.3 mg/kg and association between both and evaluated for 11 days as the tumor growth were used. Histological analysis, hematological and biochemical determinations were also performed. Data were analysed by ANOVA One-Way, and Tukey post-test. The results of the MTT viability test, showed cell viability decreased histidine at a concentration of 0,01 mM in 72 hours, cimetidine in concentrations 3 to 10 mM at 48 and 72 hours and cimetidine 10 mM /histidine 0,01 mM association in 48 and 72 hours, results also found in neutral red. Histamine decreased the cell viability of B16F10 cells at 20 mM concentration in 48 h and concentrations 1 and 10 mM at 72 hours, terfenadine decreased cell viability at all concentrations tested at 24 h and stayed up to 10 nM 72 hours and thioperamide decreased the cell viability at all concentrations tested 72 hours MTT assay. In the morphological analysis it was observed that at lower concentrations of histidine discrete cell rounding occurred and the appearance of "blebs" and the highest concentrations of vacuolated cytoplasm. Cimetidine treated cells showed characteristics of apoptosis. The association histidine 0,01 mM/cimetidine 10 mM caused cell death. The histamine ELISA test showed that the treatment with the histamine H1 antagonist may increase or decrease production of histamine and its receiving treatment led to thioperamide produce less or blocking of histamine H3 receptors allows a greater uptake of histamine. In experiments in vivo treatments with histidine and cimetidine inhibited tumor growth by the seventh day of treatment. Biochemical determinations of AST, ALT showed no toxicity after treatment. The histological findings, the group treated with histidine showed necrotic areas and the cimetidine group showed leukocyte infiltration and promoted stimulation of angiogenesis. Metastases were not found in any of the organs analyzed groups. It was concluded that histidine plays an important role in tumor progression and stimulating or inhibitory depending on the dosage/day of treatment. / A histidina é um aminoácido importante fator na diferenciação de alguns tipos celulares, como hepatócitos, por exemplo. A histamina, sintetizada a partir da histidina, está presente em muitos tipos de câncer, entre eles o melanoma. Esse tipo de câncer tem como características a não diferenciação celular e a produção de grande quantidade de histamina. O propósito deste trabalho foi estudar os efeitos de uma suplementação de histidina sobre a diferenciação e progressão tumoral. Os ensaios in vitro de viabilidade celular MTT e vermelho neutro foram realizados com histidina nas concentrações 0,01, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0, 10 e 20 mM, cimetidina nas concentrações 0,01, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0, 10 mM, associação histidina 10 mM + cimetidina 0,01 mM e associação de cimetidina 10 mM + histidina 0,01 mM e avaliados após 24, 48 e 72 horas utilizando-se células B16F10 e adicionalmente realizada a análise morfológica. Histamina nas concentrações 0,01, 0,1, 1 e 10 mM, terfenadina nas concentrações 1, 10, 100 nM e 1 μM e tioperamida nas concentrações 1, 10, 100 nM e 1 μM também foram avaliadas pelo MTT utilizandose células B16F10. Foi realizado teste de ELISA para quantificação de histamina com sobrenadante de cultura celular tratada com histidina, histamina, terfenadina, cimetidina e tioperamida. Para o ensaio in vivo foram utilizados camundongos C57BL6/J, submetidos ao implante de células tumorais e posteriormente tratados com solução de histidina na dose de 21,4 mg/kg, cimetidina na dose de 343,3 mg/kg e associação entre ambas e avaliados por 11 dias quanto ao crescimento tumoral. Avaliações hematológicas, determinações bioquímicas e análise histológica também foram realizadas. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística ANOVA 1-VIA, e pos-test Tukey. Como resultados no teste de viabilidade MTT, a histidina diminuiu a viabilidade celular na concentração de 0,01 mM em 72 horas, da cimetidina nas concentrações de 3 e 10 mm em 48 e 72 horas e da associação cimetidina 10 mM/histidina 0,01 mM em 48 e 72 horas, resultados também encontrados no vermelho neutro. A histamina diminuiu a viabilidade celular das células B16F10 em 48 h na concentração de 20 mM e em 72 horas nas concentrações de 1 e 10 mM, a terfenadina diminuiu a viabilidade celular em todas as concentrações testadas em 24 h, permanecendo a de 10 nM até 72 horas e a tioperamida diminuiu a viabilidade celular em todas as concentrações testadas em 72 horas no ensaio de MTT. Na análise morfológica observou-se que nas menores concentrações de histidina ocorreu discreto arredondamento celular e aparecimento de “blebs” e nas concentrações maiores vacuolização de citoplasma. As células tratadas com cimetidina apresentaram indícios de apoptose. A associação histidina 0,01 mM/cimetidina 10 mM provocou morte celular. O teste de ELISA para histamina revelou que o tratamento com o antagonista H1 de histamina pode aumentar a produção de histamina ou diminuir sua receptação e o tratamento a tioperamida levou a uma menor produção de histamina ou o bloqueio dos receptores H3 permitindo uma maior recaptação de histamina. Na experimentação in vivo os tratamentos com histidina e cimetidina inibiram o crescimento tumoral até o sétimo dia de tratamento. As determinações bioquímicas das enzimas transaminase oxalacética e transaminase pirúvica revelaram que não houve toxicidade após os tratamentos. Nas avaliações histológicas, o grupo tratado com histidina apresentou áreas necróticas e o grupo cimetidina apresentou infiltrado leucocitário e promoveu estímulo da angiogênese. Metástases não foram encontradas nos órgãos analisados de nenhum dos grupos. Concluiu-se que a histidina tem um papel importante na progressão tumoral sendo inibitório ou estimulante dependendo da dosagem/dias de tratamento.

Os melanomas possuem diferentes comportamentos entre as espécies, sendo de grande importância a caracterização do mecanismo molecular que influencia tal diversidade comportamental. Objetivou-se neste estudo avaliar as características moleculares das neoplasias melanocíticas uveais em cães, a fim de compreender as diferenças entre o melanoma uveal humano e o canino. Foram utilizados 64 olhos de 64 cães com diagnóstico de neoplasia intraocular primária de origem melanocítica. Com base nos critérios histopatológicos estabelecidos foram diagnosticados 37 melanocitomas e 27 melanomas. Não houve predominância sexual e cães sem raça definida, Labrador Retriever e Cocker Spaniel Inglês foram os mais acometidos. Foram analisadas características morfológicas, taxa de mitose, grau de pigmentação, presença de extensão extraocular, localização, infiltrado inflamatório, loop vascular e necrose. Foi realizada análise imunoistoquímica avaliando os marcadores Melan-A, HMB-45, Ki-67 e COX-2. O Melan-A mostrou ser mais sensível, sendo expresso em 53,1% dos casos, enquanto o HMB-45 foi positivo em apenas 31,2% dos casos. O Melan-A e o HMB-45 foram menos frequentes nos melanocitomas comparado com os melanomas. Em 23 casos, nenhum dos dois marcadores reagiu. Os resultados do marcador de proliferação Ki-67 revelaram maior positividade entre os melanomas, com média do índice Ki-67 de 37,8%, enquanto a média dos melanocitomas foi de 15%. Não houve diferença estatística da marcação do Ki-67 com os tipos celulares dentre os melanomas. A COX-2 reagiu positivamente na maioria dos casos e não foi observada diferença estatística entre melanocitomas e melanomas. Dentre os melanomas não houve diferença estatística entre os tipos celulares para a marcação da COX-2. Os achados aqui discutidos revelam interessantes diferenças e similaridades entre as neoplasias melanocíticas uveais no homem e no cão / Melanomas have different behavior between species and is of great importance to characterize the molecular mechanism influencing this behavioral diversity. The objective of this study was to evaluate the molecular characteristics of uveal melanocytic neoplasias in dogs, in order to understand the differences between uveal melanoma in humans and dogs. Sixty-four eyes of 64 dogs diagnosed with primary intraocular neoplasia of melanocytic origin were studied. Based on the established histopathological criteria 37 melanocytomas and 27 melanomas were diagnosed. There was no sexual predominance and mixed breed dogs, Labrador Retriever and English Cocker Spaniel were the most affected. Morphological features, mitotic rate, degree of pigmentation, presence of extraocular extension, location, inflammatory infiltrate, vascular loop and necrosis were analyzed. Immunohistochemical analysis was performed to evaluate markers such as Melan-A, HMB-45, Ki-67 and COX-2. The Melan-A was more sensitive and expressed in 53.1% of cases, while the HMB-45 was positive in only 31.2%. The Melan-A, and HMB-45 were less frequent in melanocytomas compared to melanomas. In 23 cases, neither markers reacted. The results of the Ki-67 showed higher positivity among melanomas, mean Ki-67 index of 37.8%, while melanocytomas showed mean of 15%. There was no statistical difference in the Ki-67 labeling among melanoma's cell types. COX-2 reacted positively in most cases and found no statistically significant difference between melanocytomas and melanomas. Among the melanomas, there was no statistical difference between the cell types for COX-2. The findings discussed here reveal interesting differences and similarities between the uveal melanocytic neoplasms in humans and dogs