Mestre -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 1998.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do Extremo Sul Catarinense, UNESC, para obtenção do título de Doutor em Ciências da Saúde. / A meningite bacteriana é a doença infecciosa mais comum do sistema nervoso central (SNC), caracterizada por uma inflamação das meninges. O Streptococcus agalactiae é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em recém-nascidos em todo o mundo, causando sepse, pneumonia e meningite. Sobreviventes a meningite podem sofrer graves sequelas neurologicas a longo prazo. Nosso objetivo foi verificar os níveis de citocina/quimiocina, atividade de mieloperoxidase (MPO), o stress oxidativo e ruptura da barreira hematoencefálica (BHE) no hipocampo e córtex cerebral dos ratos Wistar recém-nascido após indução da meningite por S. agalactiae e os efeitos da meningite na vida adulta através de testes comportamentais e níveis de fator de crescimento neuronal (NGF) e fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF). Ratos Wistar recém-salina estéril como um placebo ou um volume equivalente de S. agalactiae em uma concentração de 1x106 UFCol/mL. em diferentes tempos após a indução da meningite, os animais foram mortos e o hipocampo e córtex cerebral foram retiradas para avaliação dos nívies das citocinas quimiotática indutora de neutrófilos tipo 1 (CINC-1), interleucina1 beta (IL-1β), IL-6, IL-10 e fator de crescimento tumoral (TNF-α) e permeabilidade da BHE. Sessenta dias após a indução, os animais foram submetidos a testes comportamentais e mortos, e o hipocampo e no córtex cerebral foram retirados para análise dos níveis de BDNF e NGF. No hipocampo os níveis de CINC-1 foram aumentados em 6 h e 12 h após a indução, IL-1β em 6, 12 e 24 h após, a IL-6 em 6, 24 e 96 h após, de IL-10 às 24, 48 e 96 h após e TNF-α às 24 h e 96 h após. No córtex cerebral os níveis CINC-1 e IL-1β foram encontrados aumentada 6 h após a indução da meningite. A atividade da MPO foi elevado em 24, 48 e 96 h após a indução no hipocampo e em 6, 12, 24, 48 e 96 h após a indução no córtex cerebral A ruptura da BHE teve inicio em 12 h após a indução. Os níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) foram elevados no hipocampo em 6, 12, 24, 48, 72 e em 96 h e no córtex cerebral as 72 e 96 h após a indução da meningite. Os níveis da carbonilação de protreínas foram elevadas no hipocampo e no córtex cerebral em 6, 24, 48, 72 e 96 h após. Houve uma diminuição da atividade da superóxido dismutase (SOD) no hipocampo e no córtex cerebral. A atividade da catalase (CAT) foi elevada no hipocampo em 6 h e no córtex cerebral de 12 e 96 h após a indução da meningite. O teste campo aberto não demonstrou nenhuma diferença motora, atividade exploratória e memória de habituação entre os grupos. O teste de esquiva inibitória, quando avaliamos a memória de longo prazo em 24h após a sessão de treino, verificou-se que o grupo meningite teve uma diminuição na memória aversiva, quando comparado com o teste de memória de longo prazo do grupo sham. Os níveis de BDNF foram diminuidos no hipocampo e córtex cerebral; no entanto, os níveis de NGF diminuiu apenas no hipocampo. Estes resultados sugerem que o modelo de meningite pode ser uma boa ferramenta de pesquisa para o estudo dos mecanismos biológicos envolvidos nas alterações comportamentais secundários da meningite por S. agalactiae.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThayseAS.pdf: 421769 bytes, checksum: da81d1c89c2fb11516509aaaad4a2595 (MD5) Previous issue date: 2008-04-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Despite advances in vaccine development and therapy, bacterial meningitis (BM) remains a major cause of death and long-term neurological disabilities. As part of the host inflammatory response to the invading pathogen, factors such as reactive oxygen species are generated, which may damage DNA and trigger the overactivation of DNA repair mechanisms. It is conceivable that the individual susceptibility and outcome of BM may be in part determined by non synonymous polymorphisms that may alter the function of crucial BER DNA repair enzymes as PARP-1, OGG-1 and APE-1. These enzymes, in addition to their important DNA repair function, also perform role of inflammatory regulators. In this work was investigated the non synonymous SNPs APE-1 Asn148Glu, OGG-1 Ser326Cys,PARP-1 Val762Ala, PARP-1 Pro882Leu and PARP-1 Cys908Tyr in patients with bacterial meningitis (BM), chronic meningitis (CM), aseptic meningitis (AM) and not infected (controls). As results we found increased frequency of variant alleles of PARP-1 Val762Ala (P = 0.005) and APE-1 Asn148Glu (P=0.018) in BM patients, APE-1 Asn148Glu in AM patients (P = 0.012) and decrease in the frequency of the variant allele OGG-1 Ser326Cys in patients with CM (P = 0.013), regarding the allelic frequencies in the controls. A major incidence of individuals heterozygous and/ or polymorphic homozygous in BM for PARP-1 Val762Ala (P= 0.0399, OD 4.2, 95% IC 1.213 -14.545) and PARP-1 Val762Ala/ APE-1 Asn148Glu (P = 0.0238, OD 11.111, 95% IC 1.274 - 96.914) was observed related to what was expected in a not infected population. It was also observed a major incidence of combined SNPs in the BM patients compared with the control group (P=0.0281), giving evidences that SNPs can cause some susceptibility to the disease. This combined effect of SNPs seems to regulate the principal cytokines and other factors related to BM inflammatory response and point the importance of DNA repair not only to repair activity when DNA is damaged, but to others essential functions to human organism balance. / Apesar dos avan?os no desenvolvimento de vacinas e terapias, a meningite bacteriana (MB) continua sendo uma das principais causas de morte e seq?elas neurol?gicas causadas por uma doen?a infecciosa. Como parte da resposta inflamat?ria ao pat?geno invasor, fatores como esp?cies reativas de oxig?nio (ROS) s?o geradas, podendo causar danos no DNA e ativar seus mecanismos de repara??o. ? poss?vel que a susceptibilidade individual do hospedeiro ? MB possa ser em parte determinada por polimorfismos n?o-sin?nimos (SNPs) que possivelmente alterem a fun??o de enzimas de reparo de DNA da via BER como PARP-1, OGG-1 e APE-1. Estas enzimas, al?m da importante fun??o na corre??o de danos no DNA, tamb?m desempenham papel de reguladores inflamat?rios. Neste trabalho foram investigados os SNPs n?o-sin?nimos APE-1 Asn148Glu, OGG-1 Ser326Cys, PARP-1 Val762Ala, PARP-1 Pro882Leu e PARP-1 Cys908Tyr em pacientes com meningite bacteriana (MB), meningite cr?nica (MC), meningite ass?ptica (MA) e n?o infectados (controles). Como resultado, foi encontrado um aumento na freq??ncia dos alelos variantes de PARP-1 Val762Ala (P = 0.005) e APE-1 Asn148Glu (P=0.018) em pacientes com MB, de APE-1 Asn148Glu em pacientes com MA (P = 0.012) e diminui??o da freq??ncia do alelo variante OGG1 Ser326Cys (P = 0.013) em pacientes com MC em rela??o ?s freq??ncias al?licas observada nos controles para estes polimorfismos. Foi observado um maior n?mero de indiv?duos heterozigotos e/ou homozigotos polim?rficos para os gen?tipos polim?rficos PARP-1 Val762Ala (P= 0.0399, OD 4.2, 95% IC 1.213 -14.545) e PARP-1 Val762Ala/ APE-1 Asn148Glu (P = 0.0238, OD 11.111, 95% IC 1.274 - 96.914) no grupo MB em rela??o ao que se era esperado dentro de uma popula??o n?o-infectada. Observou-se tamb?m uma maior incid?ncia de SNPs combinados em pacientes com MB quando comparado ao grupo controle. Estas rela??es trazem evid?ncias de que os SNPs analisados causam alguma susceptibilidade ? doen?a. O efeito combinado destes SNPs parece influenciar a regula??o das principais citocinas e de outros fatores relacionados com a resposta inflamat?ria a MB, mostrando a import?ncia da ativa??o de enzimas de reparo de DNA n?o somente quando o DNA ? danificado, mas para outras fun??es essenciais ao equil?brio do organismo humano.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade UnB Ceilândia, Programa de Pós-Graduação em Ciências e Tecnologias em Saúde, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-01-10T14:05:16Z No. of bitstreams: 1 2013_IndianaraMariaGrando.pdf: 23698328 bytes, checksum: 0ea3a3745510011939ef435189024e7e (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2014-01-23T14:27:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_IndianaraMariaGrando.pdf: 23698328 bytes, checksum: 0ea3a3745510011939ef435189024e7e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-23T14:27:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_IndianaraMariaGrando.pdf: 23698328 bytes, checksum: 0ea3a3745510011939ef435189024e7e (MD5) / As doenças causadas por Streptococcus pneumoniae, incluindo pneumonia, meningite e sepse, são importantes contribuintes para a mortalidade infantil. O desenvolvimento de vacinas eficazes contra a doença pneumocócica demonstra a sua importância como a principal causa de mortes infantis evitáveis por vacina. Entre a doença pneumocócica, meningite é a síndrome clínica com as maiores taxas de letalidade e mortalidade, especialmente entre crianças. Entre as etiologias da meningite bacteriana, a doença pneumocócica tem a maior taxa de sequela grave e morte. O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto da vacina pneumocócica conjugada 10-valente (PCV10) sobre as taxas de morbidade e mortalidade devido à meningite pneumocócica entre crianças brasileiras com idade ≤ 2 anos de 2007-2012. Trata-se de um estudo exploratório descritivo dos casos confirmados de meningite pneumocócica notificados ao Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN). Para a análise estatística, foram definidos os períodos pré-vacinação (2007-2009) e pós-vacinal (2011-2012), com exceção de 2010 como o ano da introdução da vacina. Para avaliar o impacto da PCV10, foram comparadas as taxas de incidência e mortalidade durante os períodos pré e pós - PCV10. Foram identificados 1.580 casos de meningite pneumocócica e 430 óbitos em crianças ≤ 2 anos, durante o período de estudo. A incidência de meningite pneumocócica diminuiu 46% (p <0,05) de 3,41 por 100.000 durante o período pré-vacina para 1,84 por 100.000 após a vacinação, enquanto que as taxas de mortalidade declinaram 60% (p< 0,05) de 1,17 par 0,40/100.000 crianças ≤ 2 anos. As maiores reduções foram observadas entre as crianças de 6 a 11 meses idade, com uma redução de 76 % na incidência e de 84 % na mortalidade em 2012, apesar de 33% da média de letalidade entre os casos notificados em todo o período. Esta análise identificou os grupos etários com as mais altas taxas de notificação de meningite pneumocócica e compara a incidência relativa e taxas de mortalidade antes e após a introdução da vacina, fornecendo evidências preliminares de impacto da PCV10 sobre a síndrome de meningite pneumocócica dentro de dois anos da sua utilização para a vacinação de rotina na infância. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Diseases caused by Streptococcus pneumoniae, including pneumonia, meningitis and sepsis, are important contributors to child mortality. The development of efficacious vaccines against pneumococcal disease have demonstrated its importance as the leading vaccine-preventable cause of infant mortality. Among pneumococcal disease, meningitis is the clinical syndrome with the highest case-fatality and mortality rates, especially in children. Among etiologies of bacterial meningitis, pneumococcal disease has the highest rate of severe sequella and fatality. The objective of this study was to assess the impact of 10-valent pneumococcal conjugate vaccines (PCV10) on the rates of morbidity and mortality due to pneumococcal meningitis among Brazilian children aged ≤ 2 years from 2007 to 2012. We conducted an exploratory descriptive analysis of the confirmed cases of pneumococcal meningitis reported to the Information System for Notifiable Diseases (SINAN). For statistical analysis, we defined pre-vaccine (2007-2009) and post-vaccine (2011-2012) periods, excluding 2010 as the year of vaccine introduction. To assess the impact of PCV10, we compared incidence and mortality rates during pre- and post-PCV10 periods. We identified 1580 cases of pneumococcal meningitis and 430 deaths of children ≤ 2 years during the study period. Incidence of pneumococcal meningitis decreased 46% (p< 0.05) from 3.41 per 100,000 during the pre-vaccine period to 1.84 per 100,000 after vaccination, while mortality rates declined 60% (p<0.05) from 1.17 to 0.40 per 100,000 children ≤ 2 years. The greatest reductions were observed in children from 6 to 11 month old, with a 76% reduction in incidence and 84% in mortality in 2012, despite average case-fatality rate (33%) of the reported cases throughout the period. This analysis identified the age band with highest pneumococcal meningitis notification rates and compares incidence and mortality rates before and after vaccine introduction, providing preliminary evidence of PCV10 impact on the syndrome of pneumococcal meningitis within two years of its use for routine childhood immunization.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:11:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 99.pdf: 2691977 bytes, checksum: 3fa2eff2b005ba0c1d8204b7a0ffaf2c (MD5) Previous issue date: 1998 / Descreve um estudo de Coorte Descritivo Retrospectivo, realizado com dados obtidos através de prontuários de pacientes internados no Instituto Estadual de Infectologia Säo Sebastiäo, no período de 11/96 a 06/97, que tiveram diagnóstico definitivo de meningite bacteriana ou viral. Procedeu-se às estimativas das gravidade e letalidade, de ambas as meningites, comparando-as entre si, bem como dos respectivos agentes etiológicos específicos. Com base nos 204 pacientes, 141 dos quais, portadores de meningite bacteriana e 63, de meningite viral, viu-se que as primeiras se apresentaram mais graves e mais letais que estas últimas, com excessos de risco de 17,6 e 7,8 por cento, respectivamente. Também evidenciou-se que, apesar de todas as infecçöes bacterianas apresentarem casos graves e incidência de óbitos, a que teve maior número destes desfechos foi a meningite pneumocócica, enquanto que, dentre as virais, a meningite por Herpes simples vírus, foi a única a apresentar tais eventos. Os maiores preditores para a gravidade foram a meningite pneumocócica, a meningite por Herpes simples vírus e a idade de 15 anos ou mais. Já para a letalidade, os preditores, além destes patógenos, foram os menores de 1 ano e evoluçäo clínica para o coma, na meningite bacteriana, e a idade de 15 anos ou mais e evoluçäo para torpor ou coma na viral. Ainda constatou-se que as características liquóricas seguem um padräo bem definido para cada uma das meningites em estudo. / This is a Retrospective Descriptive Cohort study, accomplished through reference book, with patients interned at the São Sebastião State Institute of Infectology, in Rio de Janeiro City, Brazil, in the period from 11/96 to 06/97, with definitive diagnosis of bacterial or viral meningitis. It was proceeded to the estimates of the severity and mortality, of both meningitis, comparing them to each other, as well as the respective pathogens. Based on the 204 patients, 141 of the which, carriers of bacterial meningitis and 63, of viral meningitis, the first ones came more severe and more lethal than these last ones, with excesses of risk of 17,6 and 7,8%, respectively. It was also evidenced that, in spite of all the bacterial infections they present severe cases and obits incidence, the one that had larger number of these was the pneumococcal meningitis, while, of the viral ones, the meningitis for Herpes simplex virus, was the only to present such events. The most importants predictores for the severity were pneumococcal meningitis, herpes simplex virus meningitis and the 15 years-old age or more. Already for the mortality, the predictores, besides these pathogens, was last then 1 year old and clinical evolution for the coma, in the bacterial meningitis, and the 15 years-old age or more and evolution for torpor or coma, in the viral one. It was still verified that the cerebrospinal fluid (CSF) characteristic follows a pattern very defined for each one of the meningitis in study.

Padronizou-se a PCR-Multiplex para a detecção do DNA de Neisseria meningitidis. Para tanto os primers escolhidos foram: RW01, DG74 e COR28 baseados na subunidade menor do ribossomo (16S rRNA) que apresenta regiões de seqüências conservadas encontradas em todas as bactérias conhecidas. Os primers RW01 e DG74 amplificaram o fragmento universal bacteriano de 370 bp e, os primers RW01 e COR28, o fragmento específico de N. meningitidis de 279 bp em uma única etapa. Os resultados obtidos nas amostras de LCR de 168 pacientes pelos métodos de cultura e PCR-Multiplex quando comparados à bacterioscopia mostraram que tal técnica apresentou alta sensibilidade (91,3%) no estudo de amostras de LCR de bacterioscopia positiva, enquanto que a cultura apresentou resultados menores (19,7%). Nas amostras de LCR com bacterioscopia negativa a sensibilidade da PCR-Multiplex (57,8%) também foi mais elevada do que da cultura (10%). Estes dados sugerem que a técnica aqui padronizada é altamente promissora para ser utilizada como método diagnóstico da meningite meningocócica, especialmente nos casos de pacientes submetidos à terapia antibiótica prévia. / The PCR-multiplex technique was standardized to detect N.meningitidis DNA. It was used universal primer for all bacteria showing sequence of minor subunit of 16S ribossome regions (RW01, DG74) by amplification of 370bp fragment and another (COR28) for specific sequence of N. meningitidis, amplifying 279bp fragment in one step. The results obtained in CSF samples of 168 patients by culture and PCR-Multiplex technique when compared with microscopy showed high sensitivity (91,3%) in samples with positive microscopy (81) to Gram negative diplococcus, however the culture presented only 19, 7% of positivity in the same samples. In other hand the CSF samples with negative bacterioscopy (67) the PCR-Multiplex sensitivity (57,8%) was higher to culture (10,0%) too. These data indicate a high sensitivity and specificity of PCR as a tool for a rapid diagnosis of meningococcal meningitis, mainly in that patient submitted to previous antibiotic therapy as in case of this work (90% of patients) besides the possibility of a rational practice of specific treatment.

Made available in DSpace on 2016-04-27T18:12:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aline Garrido.pdf: 1630937 bytes, checksum: d1c0a35bf9447042cc76027521626759 (MD5) Previous issue date: 2007-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: In this work, the articulation between Speech Teraphy and the Psychoanalysis delimited the inquiry perspective: the relation between language and psyquism in the deaf children who had suffered precocious organic blows. It is in this perspective that the deafness as sequel of the bacterial meningitis was analyzed, since the focus, from the clinical experience, had been the possible effect of such clinical picture in the symbolic functioning of these citizens. Front to the risk and the permanent marks of the illness, as much the corporal project as the unconscious image of the body, of these children, got weak (Dolto, 2004) and, such condition, was incresead by the hospitalization (Golse, 2003). Aim: to analyze the effect of the process of precocious illness, for bacterial meningitis, in the psychic functioning and of verbal language of deaf children Method: research of physician-qualitative nature, developed through the study of two clinical cases, João and Bela, that had respectively been sick by bacterial meningitis with 1:6 and 1 year of ages having, both, acquired bilateral deep deafness as sequel. The interpretation of the clinical material, systemize through written registers and of the memory of the researcher, was based on two axles: the functioning of the language and the psychic functioning. Results: The language disturbs, presented for the participant children of the studies of cases, were not justified, exclusively, for the auditory sensorial deficit. On the basis of the premise of that language and the psyquism is lended affected (Cunha, 2004), were possible to observe that the measure where the language of the children evolves, facilitated subjective constitution to it of the same ones. A new look for these children and family allowed to dislocate them of the place of the illness for the one of interlocutors. When assuming autonomy and breaking of listening and intervention in these two levels these children had improved its familiar, interpersonal relations and the corporal position. Conclusions: The case studies had confirmed the initial proposal of this research; also it was possible to establish the relation between precocious of the illness and aggravation of the psychic prognostic of language and; in both the cases the only organic sequel of the meningitis was the deafness, the symbolic sequels had been the main target of study, this because, in the studied cases, physical and symbolic removals had occurred, between the children and its familiar ones, that, allies the communication of the illness, had generated fight it anticipated in imaginary the familiar one; thus, ahead of a so forceful organic fact, one suggests that the therapists retake, with the patient and its familiar ones, the subjective contents of clinical history since the period of illness; the etiology of the deafness (in the case, the bacterial meningitis) was boarded in its bio-psychic dimension, leaving marks on the language, in the singularity of each particular clinical case / Introdução: Neste trabalho, a interlocução entre a Fonoaudiologia e a Psicanálise delimitou a perspectiva de investigação: a relação entre linguagem e psiquismo nas crianças surdas que sofreram golpes orgânicos precoces. É nessa perspectiva que a surdez como seqüela do acometimento por meningite bacteriana foi analisada, já que o foco, a partir da experiência clínica, foram os possíveis efeitos de tal quadro clínico no funcionamento simbólico desses sujeitos. Frente ao risco e às marcas permanentes da doença, tanto o esquema corporal como a imagem inconsciente do corpo das crianças fragilizam-se (Dolto, 2004) e, tal condição, é potencializada pela hospitalização (Golse, 2003). Objetivo: analisar os efeitos do processo de adoecimento precoce por meningite bacteriana, no funcionamento psíquico e de linguagem oral de crianças surdas Método: pesquisa de natureza clínico-qualitativa, desenvolvida através do estudo de dois casos clínicos, João e Bela, que foram acometidos por meningite bacteriana respectivamente com 1:6 e 1 ano de idades tendo, ambos, adquirido surdez profunda bilateral como seqüela. A interpretação do material clínico, sistematizado através de registros escritos e da memória da pesquisadora, foi baseada em dois eixos: o funcionamento da linguagem e o funcionamento psíquico. Resultados: Os transtornos de linguagem apresentados pelas crianças não se justificavam, exclusivamente, pelo déficit sensorial auditivo. Com base na premissa de que linguagem e o psiquismo afetam-se mutuamente (Cunha, 2004), foi possível observar que, a medida em que a linguagem das crianças evoluía, facilitava-se a constituição subjetiva das mesmas. A re- significação das crianças frente à família enlutada, permitiu deslocá-las do lugar de doentes para o de interlocutores; o que favoreceu a elaboração de conflitos e a redução do sofrimento psíquico de ambos. Conclusões: Os estudos de caso confirmaram a proposição inicial desta pesquisa e também foi possível estabelecer a relação entre precocidade do acometimento e agravamento do prognóstico de linguagem e psíquico. Em ambos os casos a única seqüela orgânica da meningite foi a surdez, contudo as seqüelas simbólicas foram intensas e articuladas aos afastamentos físicos e simbólicos, entre as crianças e seus familiares. Tais afastamentos, aliados a comunicação do diagnóstico da doença, geraram o luto antecipado no imaginário familiar. Assim, diante de um fato orgânico tão contundente, sugere-se que os fonoaudiólogos retomem, com o paciente e seus familiares, os conteúdos subjetivos da história clínica desde o período de adoecimento; de tal forma que a etiologia da surdez (no caso, a meningite bacteriana) seja abordada em sua dimensão bio-psíquica, na singularidade de cada caso clínico particular

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:05:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeonamGC_TESE.pdf: 2406262 bytes, checksum: 604659dd8ff62335f952679dda971b6e (MD5) Previous issue date: 2013-03-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Despite advances in antibiotic therapy, bacterial meningitis (BM) remains with high mortality and morbidity rates in worldwide. One important mechanism associated to sequels during disease is the intense inflammatory response which promotes an oxidative burst and release of reactive oxygen species, consequently leading to cell death. Activation of DNA repair enzymes during oxidative stress has been demonstrated in several neurological disorders. APE1/Ref-1 is a multifunctional protein involved in DNA repair and plays a redox function on transcription factors such as NFkB and AP-1.The aim of this study was assess the role of APE1/Ref-1 on inflammatory response and the possibility of its modulation to reduce the sequels of the disease. Firstly it was performed an assay to measure cytokine in cerebrospinal fluid of patients with BM due to Streptococcus pneumoniae and Neisseriae meningitides. Further, a cellular model of inflammation was used to observe the effect of the inhibition of the endonuclease and redox activity of APE1/Ref-1 on cytokine levels. Additionally, APE1/Ref-1 expression in cortex and hippocampus of rat with MB after vitamin B6 treatment was evaluated. Altogether, results showed a similar profile of cytokines in the cerebrospinal fluid of patients from both pathogens, although IFNy showed higher expression in patients with BM caused by S. pneumoniae. On the other hand, inhibitors of APE1/Ref-1 reduced cytokine levels, mainly TNF-?. Reduction of oxidative stress markers was also observed after introduction of inhibitors in the LPS-stimulated cell. In the animal model, BM increased the expression of the protein APE1/Ref-1, while vitamin B6 promoted reduction. Thereby, this data rise important factors to be considered in pathogenesis of BM, e.g., IFNy can be used as prognostic factor during corticosteroid therapy, APE1/Ref-1 can be an important target to modulate the level of inflammation and VIII oxidative stress, and vitamin B6 seems modulates several proteins related to cell death. So, this study highlights a new understanding on the role of APE1/Ref-1 on the inflammation and the oxidative stress during inflammation condition / A meningite bacteriana (MB) ? uma doen?a infecciosa que permanece com altas taxas de mortalidade e morbidade em todo o mundo, principalmente em pa?ses subdesenvolvidos, apesar dos avan?os na antibioticoterapia. Um dos principais mecanismos associados ?s sequelas durante a MB ? a elevada resposta inflamat?ria, que promove uma exacerbada quantidade de esp?cies reativas de oxig?nio (ERO) levando ?s c?lulas a apoptose ou necrose. A ativa??o de enzimas de reparo de DNA durante o estresse oxidativo tem sido demonstrada nas mais diversas desordens. Uma importante enzima envolvida neste processo ? a endonuclease apur?nica/apirimidinica1/fator redox-1 (APE1/Ref-1). Ela ? uma prote?na multifuncional envolvida no reparo de DNA e na redu??o de fatores envolvidos com a resposta inflamat?ria, tais como o fator nuclear kappa B (NFkB) e prote?na ativadora 1 (AP-1). Este estudo teve como objetivo identificar o envolvimento de APE1/Ref-1 na resposta inflamat?ria visando a possibilidade de sua utiliza??o como alvo terap?utico na redu??o de sequelas durante a MB. Para isto, inicialmente foi realizado uma an?lise no perfil de express?o de citocinas em l?quor de pacientes com meningite causada por Streptococcus pneumoniae e Neisseriae meningitidis visando selecionar moduladores inflamat?rios de interesse para ensaios em cultura de c?lula subsequentes. Em seguida, utilizando um modelo celular de indu??o com LPS foi avaliado o efeito da inibi??o da atividade de reparo e redox de APE1 sobre a express?o de citocinas inflamat?rias. Por fim, foi observada a express?o de APE1 no c?rtex (CX) e hipocampo (HC) de ratos com MB frente a uma terapia adjuvante com vitamina B6. Nossos resultados mostraram um perfil de moduladores inflamat?rios muito semelhante no l?quor dos pacientes com MB causada pelos pat?genos estudados, embora interferon gama (IFNy) tenha sido VI significativamente mais expresso em pacientes com S. pneumoniae do que N. meningitidis. Quanto ao uso dos inibidores das fun??es, redox e de reparo, de APE1/Ref-1 no modelo in vitro, houve redu??o significativa na express?o de algumas citocinas, principalmente o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?). Al?m disso, os inibidores demonstraram uma redu??o nos n?veis de ERO nas c?lulas estimuladas com LPS. No modelo animal, a express?o prot?ica de APE1/Ref-1, no CX e HC dos ratos, foi modulada ap?s introdu??o da vitamina B6. Portanto, esses dados fornecem um novo olhar para a fisiopatologia da MB, em que citocinas como IFNy podem ser usadas em um diagn?stico diferencial entre meningites causadas por S. pneumoniae e N. meningitidis. A prote?na de reparo de DNA, APE1/Ref-1, parece ser um alvo potencial na modula??o da resposta inflamat?ria e do estresse oxidativo, bem como a terapia adjuvante com vitamina B6 mostra ter um papel sobre a express?o de APE1/Ref-1. Consequentemente, o conhecimento obtido neste estudo pode ser importante na melhoria do progn?stico da MB, al?m de contribuir para entender a associa??o entre o reparo de DNA e inflama??o / 2020-01-01 / 2020-01-01

Dissertação de mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para a obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / A meningite ocasionada por Klebsiella pneumoniae tornou-se recentemente uma causa cada vez mais comum de infecção no sistema nervoso central, sendo esta caracterizada por uma intensa reação inflamatória. As doenças neurodegenerativas compartilham mecanismos comuns diretamente associados à agregação patológica de proteínas, como depósitos de fibras de amiloide em regiões vulneráveis do SNC, causando morte neuronal. O peptídeo amilóide induz a geração de EROs, prejudicando os sistemas antioxidantes celulares e é capaz de desencadear a ativação RAGE, o qual medeia uma série de eventos, incluindo a inflamação e dano oxidativo. A interação do receptor RAGE com seu ligante (β-amilóide, por exemplo) é capaz de estimular múltiplas vias de sinalização intracelular, incluindo a ativação e a translocação para o núcleo do fator de transcrição NF-B, que leva à produção de citocinas, quimiocinas, moléculas pró-inflamatórias, moléculas de adesão e estresse oxidativo, causando inflamação. Este estudo traz a hipótese de que durante a meningite bacteriana ocorre a ativação do eixo -amilóide-RAGE, causando assim, dano cognitivo a longo prazo e que o uso do inibidor de RAGE pode prevenir o dano cognitivo a longo prazo. Após a indução da meningite, os animais foram divididos em grupo sham e meningite, e foram eutanasiados em 1, 3 e 10 dias para avaliar o peptídeo β-amilóide, a expressão de RAGE e os níveis de HMGB-1 nas estruturas cerebrais. Os animais pertencentes ao grupo 10 dias, receberam antibioticoterapia, foram divididos em 3 grupos experimentais, sham, meningite e meningite+Ac-RAGE, e foram submetidos aos testes comportamentais. Em 1 dia após a indução, não foi encontrado diferença na expressão de -amilóide, RAGE e níveis de HMGB1. Em 3 dias, foi observado um aumento na expressão de RAGE no hipocampo e córtex pré-frontal no grupo meningite. Em 10 dias, foi observado que a expressão de -amilóide, RAGE e níveis de HMGB1 estavam aumentados em todas as estruturas do grupo meningite em comparação ao grupo sham, e que nos animais que receberam o tratamento com Ac-RAGE, esses estavam diminuídos ao comparar com o grupo meningite. Nos testes comportamentais os animais do grupo meningite demonstraram dano a memória de habituação e reconhecimento, estretanto, os animais pertencentes ao grupo que recebeu tratamento com Ac-RAGE, não apresentaram danos a essas memórias. Neste estudo, demonstrou-se que a infecção por K. pneumoniae desencadeia a ativação do eixo -amilóide-RAGE, aumentando os níveis de -amilóide, RAGE e HMGB1, causando assim, dano cognitivo a longo prazo. Contudo, mais estudos precisam ser realizados para elucidar melhor cada fase dessa ativação e compreender melhor o papel da via -amilóde-RAGE em doenças infeciosas, bem como o papel das doenças infecciosas nas doenças neurodegenerativas.

Tese de Doutorado apresentado ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde para obtenção do titulo de Doutor em Ciências da Saúde. / Apesar dos avanços na terapia antimicrobiana e nos cuidados intensivos avançados, a meningite bacteriana neonatal tem uma taxa de mortalidade superior a 10% e induz sequela neurológica em 20 a 50% dos casos. Escherichia coli K1 (E. coli K1) é o organismo gram-negativo mais comum que causa meningite neonatal. O objetivo desse estudo foi avaliar as alterações imunoquímicas e bioquímicas, integridade da barreira hematoencefálica no período neonatal e parâmetros comportamentais na vida adulta de ratos Wistar submetidos à meningite por E. coli K1. Para os experimentos foram utilizados ratos Wistar que tinham 3 e 4 dias de vida e que receberam líquido cefalorraquidiano (LCR) artificial ou 10 μL de suspensão bacteriana contendo E. coli K1 na concentração de 1 x 106 UFCol/ml, na cisterna magna, nos animais pertencentes ao grupo meningite. Após 6, 12, 24, 48 e 96 h, da indução, os animais foram mortos. Os resultados apontam que no hipocampo, a interleucina (IL)-4 aumentou em 96 h, IL-6 em 12, 48 e 96 h, IL-10 em 96 h e a citocina quimiotática indutora de neutrófilos (CINC-1) em 6, 12, 24, 48, 72 e 96 h, e fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) em 48 e 96 h. No LCR, os níveis de fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) aumentaram em 6, 12, 24, 48 e 96 h. Os parametros de estresse oxidativo, incluindo os equivalentes de malondialdeído (MDA), formação de carbonilação de proteínas, atividade mieloperoxidase (MPO), superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) em 6, 12, 24, 48, 72 e 96 h após a infecção. Além disso, os grupos sulfidrila, os níveis de nitrito e nitrato e as atividades das enzimas mitocondriais da cadeia respiratória (complexo I, II, III e IV) também foram avaliados no córtex frontal e no hipocampo. Os resultados deste estudo demonstraram o aumento significativo da carbonilação de proteína em 24, 48 e 72 h, MDA em 12, 24, 48, 72 e 96 h, MPO em 24, 48 e 72 h, e diminuição na atividade da SOD em 12, 24, 48 e 72 h no hipocampo de animais neonatos sobreviventes à meningite. Atividade da CAT não apresentou diferança significativa. Além disso, observou-se também o aumento significativo da atividade do complexo IV no hipocampo em 24 e 72 h e no córtex frontal em 24 e 96 h de ratos sobreviventes à meningite. A quebra da BHE ocorreu às 12 h no hipocampo e iniciou as 6 h no córtex cerebral. Assim, os resultados deste estudo reafirmam o papel do estresse oxidativo, óxido nítrico e seus compostos relacionados na fisiopatologia da meningite induzida por E. coli K1. Nos resultados dos parâmetros comportamentais na idade adulta os animais foram avaliados quanto à memória de habituação, aversiva e de reconhecimento de objeto e comportamentos do tipo depressivo. Os animais mostraram comprometimento da memória de habituação e aversiva. Desta forma este modelo animal de meningite é uma importante ferramenta para estudar as sequelas cognitivas e comportamentais em longo prazo induzida pela meningite no período neonatal.