Submitted by Lúcia Brandão (lucia.elaine@live.com) on 2015-07-15T16:37:00Z No. of bitstreams: 1 Tese - Edson Luís Marcon.pdf: 85655512 bytes, checksum: 1570974113b4b5ca83d06469e2e07f74 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-20T17:40:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Edson Luís Marcon.pdf: 85655512 bytes, checksum: 1570974113b4b5ca83d06469e2e07f74 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-20T17:43:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Edson Luís Marcon.pdf: 85655512 bytes, checksum: 1570974113b4b5ca83d06469e2e07f74 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-20T17:43:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Edson Luís Marcon.pdf: 85655512 bytes, checksum: 1570974113b4b5ca83d06469e2e07f74 (MD5) Previous issue date: 2013-06-06 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A total of 282 endophytic fungi were collected from these two plants, which were classified into 19 groups according to their morphological characteristics. Of these groups, 12 had their genus identified (Penicillium, Fusarium, Colletotrichum, Guignardia, Phomopsis, Cephalosporium, Bionectria, Xylaria, Aspergillus, Lirula, Pestalotiopsis and Trichoderma). Five strains (Penicillium, Fusarium, Cephalosporium, and two Xylaria) were selected for large-scale culture, whose extracts were fractionated. Fiveisolatedsubstanceswereidentified(austdiol19-20epoxycytochalasin Q, cytochalasin D, 7-decloro griseofulvin and 5-methoxycarbonyl-melein), one of which – austdiol – was produced in large quantities by a fungus of the Fusarium genus, which is the first report of this substance being produced by a fungus of the Hypocreales class. The endophytic fungi proved be a good source of substances with biological activity. / Um total de 282 fungos endof´ıticos foram coletados nas duas plantas, que foram classificados em 19 grupos, de acordo com suas caracter´ısticas morfol´ogicas. Destes, 12 grupos tiveram o gˆenero identificado (Penicillium, Fusarium, Colletotrichum, Guignardia, Phomopsis, Cephalosporium, Bionectria, Xylaria, Aspergillus, Lirula, Trichoderma e Pestalotiopsis). Cinco cepas (Penicillium, Fusarium, Cephalosporium, e duas Xylaria) foram selecionadas para cultura em larga escala, cujos extratos foram fracionados. Cinco substˆancias isoladas foram identificadas (austdiol, 1920 epoxi citocalasina Q, citocalasina D, 7-decloro griseofulvina e 5-metoxicarbonilmele´ına), sendo que uma delas – austdiol – foi produzida em grande quantidade por um fungo do gˆenero Fusarium, sendo esta o primeiro relato desta substˆancia sendo produzida por um fungo da classe Hypocreales. Os fungos endof´ıticos se mostraram uma boa fonte de substˆancias com atividade biol´ogica.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:31:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissFP.pdf: 4035388 bytes, checksum: 1dddd38b762636f6a68b29c9fa402e8c (MD5) Previous issue date: 2003-09-11 / Universidade Federal de Sao Carlos / Observações em campo, nas áreas de reserva de Cerrado da Universidade Federal de São Carlos e da Represa do Lobo (Itirapina), indicam que as duas espécies estudadas neste trabalho, Andira humilis Mart. Ex Benth. e Anacardium humile Mart., desenvolvem-se formando espaços entre elas e outras espécies que se desenvolvem ao seu redor. Resultados obtidos em testes preliminares, utilizando-se extratos aquosos de caules e folhas de ambas espécies, demonstraram efeitos inibitórios na germinação de sementes e no desenvolvimento de plântulas de alface (Lactuca sativa L.), confirmando a hipótese da presença de agentes alelopáticos. No presente trabalho, foram estudados os efeitos alelopáticos de extratos aquosos de caules e de folhas de Andira humilis e de Anacardium humile na germinação de sementes e no crescimento plântulas de Raphanus sativus L. (rabanete) e Lactuca sativa L. (alface), ambas utilizadas como bioindicadores. Efetuou-se, também, a análise dos princípios ativos responsáveis pelos efeitos alelopáticos ocasionados por folhas de Andira humilis, procurando-se definir a(s) classes(s) química(s) a que pertencem. Os extratos a 50,75 e 100% de caules e folhas de Andira humilis, em sementes de alface e rabanete, produziram redução significativa na velocidade de germinação e, a 100% de caules, a porcentagem de germinação foi significativamente reduzida. Em Anacardium humile, a porcentagem de germinação foi reduzida significativamente, apenas em semente de rabanete, por ação do extrato de folhas em concentração de 50%. Sementes de alface sofreram redução significativa na velocidade de germinação na presença de extratos de folhas de Anacardium humile em todas as concentrações. Entretanto, a velocidade de germinação em sementes de rabanete foi reduzida significativamente, pela ação dos extratos de caules na concentração de 50% e de folhas, nas concentrações 50, 75, 100%. Plântulas de alface e rabanete sofreram inibição significativa, em seu comprimento, pelos extratos de Andira humilis, exceto os extratos de folhas a 25 e 75%, os quais não causaram inibição em rabanete. Extrattos de caules de Anacardium humile inibiram significativamente o comprimento de plântulas de alface e rabanete, porém os extratos de folhas a 25 e 75% não inibiram o crescimento de plântulas de alface. A interferência dos extratos aquosos, de ambas espécies de Cerrado estudadas, na germinação e no crescimento em alface e rabanete, foi desassociada de qualquer efeito do potencial osmótico e do pH, indicando, portanto, atividade alelopática. Os resultados obtidos na identificação da classe química do(s) composto(s) responsável(is) pela atividade alelopática ocorrida, apontam que as moléculas do metabolismo secundário presentes nas folhas de Andira humilis, responsáveis por tais efeitos alelopáticos na germinação de sementes e no crescimento de plântulas de alface e de rabanete, pertençam à classe dos taninos.

Croton (Euphorbiaceae), é um gênero promissor para pesquisa de compostos bioativos, tanto pela variedade de compostos químicos encontrados, quanto pela diversidade de uso na medicina tradicional/popular. Estudos farmacológicos comprovaram atividades antimicrobianas, antivirais, anti-inflamatórias, antioxidantes e citotóxicas. Neste trabalho, foram obtidos extratos fracionados em Soxhlet (hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol) de folhas e caules de C. pallidulus Baill var. pallidulus (Baill.) L.B. Smith & S.F. Smith. Esses extratos foram avaliados quanto às atividades 1) antibacteriana pelo método de microdiluição em caldo, utilizando Staphylococcus aureus - cepas sensível e resistente à vancomicina, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli e Salmonella choleraesuis; 2) antioxidante (sequestro do radical livre DPPH); e quanto à toxicidade frente à Artemia salina. A fração mais ativa neste último ensaio foi selecionada para a avaliação da atividade citotóxica utilizando as células de sarcoma uterino humano. Os fenóis totais, e flavonóis e flavonas totais foram quantificados por métodos colorimétricos. O fracionamento dos extratos hexânico e diclorometânico foi feito por cromatografia em coluna de sílica, enquanto o dos extratos de acetato de etila e metanol, em coluna de PVPP. O isolamento das substâncias das frações ativas nos ensaios de atividade antibacteriana (S. aureus - sensível) e de toxicidade frente à A. salina foi realizado por CLAE semipreparativo. O teor de fenóis totais de C. pallidulus var. pallidulus foi de 1,95 g EAG/100g MS e de flavonóis e flavonas totais foi de 0,56 g EQ/100g MS. Todos os extratos apresentaram atividade contra S. aureus (sensível e resistente), com CBM de 2048 mg/L, exceto o extrato metanólico que apresentou atividade apenas contra S. aureus (sensível). Nenhum extrato apresentou atividade contra as demais cepas. As frações FH-5A - hexano (CBM de 256mg/L) e FA-7 - acetato de etila (CBM de 1024mg/L) foram as que apresentaram maior atividade antibacteriana. A fração FH-5A foi separada em coluna de sílica, e suas subfrações apresentaram atividades antibacterianas menores que a fração que lhe deu origem. Das sete substâncias majoritárias isoladas da fração FA-7, nenhuma apresentou atividade antibacteriana. Seis delas são flavonoides: três C-glicosídeos de apigenina, um O-glucosídeo de campferol, um O-galactosídeo de isoramnetina e um O-rutinosídeo de isoraminetina. Apenas o extrato diclorometânico apresentou atividade no ensaio de toxicidade frente à A. salina, com CL50 de 385mg/L. A fração com maior toxicidade foi a FD-4A, com CL50 de 101mg/L. As substâncias mais abundantes nesta fração foram isoladas e identificadas como 8,9-secocauranos, derivados da kongensina F. Quanto a atividade citotóxica, a atividade de FD-4A foi três vezes maior que a atividade do extrato diclorometânico. Os extratos de acetato de etila e de metanol apresentaram os maiores valores de atividade antioxidante: 12,11 e 11,77 gEQ/100g, respectivamente. Verificou-se que os flavonoides foram as substâncias fenólicas que mais influenciaram na atividade antioxidante das frações dos extratos de acetato de etila e de metanol. Com esses resultados verifica-se que C. pallidulus var. pallidulus possui ação antibacteriana, citotóxica e antioxidante, sendo uma potencial fonte para novos fármacos para tratamento de doenças infecciosas e câncer. Conseguiu-se também isolar três 8,9-secocauranos, derivados da kongensina F, que aparentemente não haviam ainda sido descritos / Croton (Euphorbiaceae), is a promising genre for investigation of bioactive compounds, both for the variety of compouds, as for the diversity of use in traditional medicine. Pharmacological studies have demonstrated antimicrobial, antiviral, anti-inflammatory, cytotoxic, and antioxidant activities. In this study, fractionated extracts of leaves and stems of C. pallidulus Baill var. pallidulus (Baill.) L.B. S.F. Smith & Smith were obtained throught Soxhlet (hexane, dichloromethane, ethyl acetate and methanol). The following activities of these extracts were tested: 1) antibacterial activity, through microbroth dilution assay using: Staphylococcus aureus - sensitive and vancomycin-resistant strains, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli and Salmonella choleraesuis; 2) antioxidant activity (free radical DPPH scavenging) and Artemia salina toxicity evaluation. The most active fraction in the latter test was selected to evaluate the cytotoxic activity using human uterine sarcoma cells. The total phenols, and total flavonols and flavones were quantified by colorimetric methods. The fractionation of hexane and dichloromethane extracts was done through silica column chromatography, while PVPP column was used for the ethyl acetate and methanol extracts. The isolation of the active fractions major compounds in the antibacterial activity (S. aureus - sensitive) and A. saline toxicity assays were performed by semipreparative HPLC. The total phenolic content of C. pallidulus var. pallidulus was 1.95 g GAE/100g DM and total flavonols and flavones was 0.56 g QE/100g MS. All extracts showed activity against S. aureus (sensitive and resistant), with MBC of 2048 mg/L, except for the methanol extract, which showed activity only against S. aureus (sensitive). Extracts showed no activity against the other strains. Fractions FH-5A-hexane (MBC: 256mg/L) and FA-7-ethyl acetate (MBC: 1024mg/L) showed the highest antibacterial activity. The fraction FH-5A was separated on a silica column, and its subfractions showed smaller antibacterial activity than FH-5A. The seven major compounds isolated from the FA-7 fraction, showed no antibacterial activity. Six of them are flavonoids, three apigenin C-glycosides, one kaempferol O-glucoside, one isorhamnetin O-galactoside and one isorhamnetin O-rutinoside. Only the dichloromethane extract showed activity in the A. salina toxicity assay, LC50: 385mg/L. The fraction with the highest toxicity was the FD-4A, LC50: 101mg/L. The most abundant substances in this fraction were isolated and identified as 8,9 - secokauranes derived from kongensin F. As for the cytotoxic activity, the FD-4A activity was three times higher than the dichloromethane extract activity. The extracts of ethyl acetate and methanol showed the highest antioxidant activity: 12.11 and 11.77 gQE/100g, respectively. It was observed that flavonoids were the phenolic substances that most influenced the antioxidant activity of the fractions of the ethyl acetate and methanol extracts. With these results we suggest that C. pallidulus var. pallidulus has antibacterial activity, cytotoxic and antioxidant properties, being a potential source of new drugs for treatment of infectious diseases and cancer. We also isolated three 8,9-secokauranes derived from kongensin F, which apparently had not been described yet

Sugarcane plants (Saccharum sp) originates from Southeast Asia but has adapted to the climate and soil in Brazil thus become the main crop for ethanol and sugar production. The main obstacles in sugarcane production are pests and plant diseases. Amongst the various sugarcane pests, Diatrea saccharalis, are of great importance as they attack the sugarcane stalk. Upon attack, sugarcane plants combine constitutive and induced defenses in order to prevent further damage. Volatile organic compounds and secondary metabolites are two mechanisms synthetized by the plant that provides protection against herbivores. Based on the attributes, secondary metabolites have gained great interest as a tool for pest management. This study aims to identify volatile metabolites and metabolite alterations upon herbivore attack in different sugarcane cultivars in order to determine resistance. In addition, the effect of various chlorogenic acid doses on the different life stages of D. saccharalis was evaluated. Initially, two sugarcane cultivars were analyzed, SP81-3250 and SP89-1115, that are considered to be susceptible and resistant, respectively. These cultivars were acquired by the germplant bank of the Genetic Improvement Program of sugarcane at the Federal University of Viscosa (RIDESA). In addition, different material from the Saccharum Complex was used, including Saccharum officinarum, Saccharum officinarum (Caiana), Miscanthu and Erianthus, all acquired from EMBRAPA Tabuleiros Costeiros. The following behavioral assays were conducted: choice assays using wind tunnel, oviposition assays and larval performance when exposed to two plant cultivars (SP81-3250 and SP89-1115). Extraction and identification of phenolic compounds, DIMBOA and chlorogenic acid from SP81-3250 and SP89-1115 was conducted. Results from the no choice oviposition assay using D.saccaralis demonstrated a significant preference for oviposition on the SP89-1115 cultivar. There was a significant difference between the volatile profiles of the two different cultivars, which could explain the preference of D.saccaralis. The two cultivars also presented a quantitative difference of phenolic compounds present in both leaf and root tissue with and without infestation, chlorogenic acid was only detected in leaf tissue and at higher concentrations in the resistant cultivar. Feeding adult D. saccharalis with a diet containing chlorogenic acid resulted in deformation after emerging from the pupae. The various materials from the “Saccharum complex” presented a varied VOC profile. This study demonstrated that there is a difference between cultivars of sugarcane plants and their direct and indirect defense mechanisms. This provides a potential aspect that should be further explored within genetic programs of sugarcane and the development of resistant cultivars. / A cana-de-açúcar (Saccharum sp.) é uma planta originária do sudeste da Ásia que adaptou-se bem ao clima e solo do Brasil, sendo a principal matéria-prima para a produção de etanol e açúcar. Um dos grandes entraves à produção de cana-de-açúcar ainda é o ataque de pragas e doenças. Dentre as pragas mais importantes para a cultura estão as que atacam o colmo e entre elas a broca-da-cana, Diatraea saccharalis. As plantas ao serem atacadas se protegem através da combinação de defesas constitutivas e induzidas que consequentemente, podem interromper a propagação do dano. Entre essas defesas está a síntese de compostos orgânicos voláteis (COVs) e a produção de metabólicos secundários tóxicos que lhes atribui proteção contra diferentes herbívoros. Este trabalho busca Identificar os metabólitos voláteis e as alterações metabólicas em diferentes cultivares de cana-de-açúcar que sejam induzidas em resposta a herbivoria, visando a busca de novas fontes de resistência. Além disso, avaliou-se o efeito de diferentes doses do ácido clorogênico sobre as diferentes fases do ciclo de vida de D. saccharalis. Primeiramente duas cultivares de cana-de-açucar foram analisadas SP81-3250 e SP89-1115 (consideradas resistente e suscetível, respectivamente). Estas foram adquiridas junto ao banco de germoplasma do Programa de Melhoramento Genético de cana-de-açúcar da Universidade Federal de Viçosa (RIDESA). Num segundo momento utilizaram-se diferentes materiais do “complexo Saccharum”, entre elas Saccharum officinarum, Saccharum officinarum (Caiana), Miscanthu e Erianthus que foram adquiridos junto a EMBRAPA Tabuleiros Costeiros. Foram realizados bioensaios de preferência em túnel de vento, comportamento de oviposição e performance larval, além de extração e identificação de compostos fenólicos, DIMBOA e ácido clorogênico nas duas cultivares SP81-3250 e SP89-1115. No teste de oviposição com chance de escolha D. saccharalis a mostrou preferência de oviposição para a cultivar suscetível SP89-1115. As diferenças encontradas entre os perfis dos COVs podem auxiliar a explicar este comportamento. As duas cultivares também apresentaram diferenças quantitativas e qualitativas nos compostos fenólicos presentes nos tecidos foliares e radiculares com e sem infestação, entre eles, o ácido clorogênico que foi detectado apenas no tecido foliar e em maior concentração na cultivar resistente. Quando adultos de D. saccharalis foram alimentados com dietas adicionadas de ácido clorogênico, estes apresentaram má formação após emergirem das pupas. Os diferentes materiais do “complexo Saccharum” apresentaram também diferenças nos perfil de COVs. Os resultados obtidos demonstram que diferentes cultivares de cana-de-açúcar possuem respostas de defesa direta e indireta distintas, apresentando-se como potencial a ser explorado e aplicado em Programas Genético de cana-de-açúcar no desenvolvimento de materiais mais resistentes.

Croton (Euphorbiaceae), é um gênero promissor para pesquisa de compostos bioativos, tanto pela variedade de compostos químicos encontrados, quanto pela diversidade de uso na medicina tradicional/popular. Estudos farmacológicos comprovaram atividades antimicrobianas, antivirais, anti-inflamatórias, antioxidantes e citotóxicas. Neste trabalho, foram obtidos extratos fracionados em Soxhlet (hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol) de folhas e caules de C. pallidulus Baill var. pallidulus (Baill.) L.B. Smith & S.F. Smith. Esses extratos foram avaliados quanto às atividades 1) antibacteriana pelo método de microdiluição em caldo, utilizando Staphylococcus aureus - cepas sensível e resistente à vancomicina, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli e Salmonella choleraesuis; 2) antioxidante (sequestro do radical livre DPPH); e quanto à toxicidade frente à Artemia salina. A fração mais ativa neste último ensaio foi selecionada para a avaliação da atividade citotóxica utilizando as células de sarcoma uterino humano. Os fenóis totais, e flavonóis e flavonas totais foram quantificados por métodos colorimétricos. O fracionamento dos extratos hexânico e diclorometânico foi feito por cromatografia em coluna de sílica, enquanto o dos extratos de acetato de etila e metanol, em coluna de PVPP. O isolamento das substâncias das frações ativas nos ensaios de atividade antibacteriana (S. aureus - sensível) e de toxicidade frente à A. salina foi realizado por CLAE semipreparativo. O teor de fenóis totais de C. pallidulus var. pallidulus foi de 1,95 g EAG/100g MS e de flavonóis e flavonas totais foi de 0,56 g EQ/100g MS. Todos os extratos apresentaram atividade contra S. aureus (sensível e resistente), com CBM de 2048 mg/L, exceto o extrato metanólico que apresentou atividade apenas contra S. aureus (sensível). Nenhum extrato apresentou atividade contra as demais cepas. As frações FH-5A - hexano (CBM de 256mg/L) e FA-7 - acetato de etila (CBM de 1024mg/L) foram as que apresentaram maior atividade antibacteriana. A fração FH-5A foi separada em coluna de sílica, e suas subfrações apresentaram atividades antibacterianas menores que a fração que lhe deu origem. Das sete substâncias majoritárias isoladas da fração FA-7, nenhuma apresentou atividade antibacteriana. Seis delas são flavonoides: três C-glicosídeos de apigenina, um O-glucosídeo de campferol, um O-galactosídeo de isoramnetina e um O-rutinosídeo de isoraminetina. Apenas o extrato diclorometânico apresentou atividade no ensaio de toxicidade frente à A. salina, com CL50 de 385mg/L. A fração com maior toxicidade foi a FD-4A, com CL50 de 101mg/L. As substâncias mais abundantes nesta fração foram isoladas e identificadas como 8,9-secocauranos, derivados da kongensina F. Quanto a atividade citotóxica, a atividade de FD-4A foi três vezes maior que a atividade do extrato diclorometânico. Os extratos de acetato de etila e de metanol apresentaram os maiores valores de atividade antioxidante: 12,11 e 11,77 gEQ/100g, respectivamente. Verificou-se que os flavonoides foram as substâncias fenólicas que mais influenciaram na atividade antioxidante das frações dos extratos de acetato de etila e de metanol. Com esses resultados verifica-se que C. pallidulus var. pallidulus possui ação antibacteriana, citotóxica e antioxidante, sendo uma potencial fonte para novos fármacos para tratamento de doenças infecciosas e câncer. Conseguiu-se também isolar três 8,9-secocauranos, derivados da kongensina F, que aparentemente não haviam ainda sido descritos / Croton (Euphorbiaceae), is a promising genre for investigation of bioactive compounds, both for the variety of compouds, as for the diversity of use in traditional medicine. Pharmacological studies have demonstrated antimicrobial, antiviral, anti-inflammatory, cytotoxic, and antioxidant activities. In this study, fractionated extracts of leaves and stems of C. pallidulus Baill var. pallidulus (Baill.) L.B. S.F. Smith & Smith were obtained throught Soxhlet (hexane, dichloromethane, ethyl acetate and methanol). The following activities of these extracts were tested: 1) antibacterial activity, through microbroth dilution assay using: Staphylococcus aureus - sensitive and vancomycin-resistant strains, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli and Salmonella choleraesuis; 2) antioxidant activity (free radical DPPH scavenging) and Artemia salina toxicity evaluation. The most active fraction in the latter test was selected to evaluate the cytotoxic activity using human uterine sarcoma cells. The total phenols, and total flavonols and flavones were quantified by colorimetric methods. The fractionation of hexane and dichloromethane extracts was done through silica column chromatography, while PVPP column was used for the ethyl acetate and methanol extracts. The isolation of the active fractions major compounds in the antibacterial activity (S. aureus - sensitive) and A. saline toxicity assays were performed by semipreparative HPLC. The total phenolic content of C. pallidulus var. pallidulus was 1.95 g GAE/100g DM and total flavonols and flavones was 0.56 g QE/100g MS. All extracts showed activity against S. aureus (sensitive and resistant), with MBC of 2048 mg/L, except for the methanol extract, which showed activity only against S. aureus (sensitive). Extracts showed no activity against the other strains. Fractions FH-5A-hexane (MBC: 256mg/L) and FA-7-ethyl acetate (MBC: 1024mg/L) showed the highest antibacterial activity. The fraction FH-5A was separated on a silica column, and its subfractions showed smaller antibacterial activity than FH-5A. The seven major compounds isolated from the FA-7 fraction, showed no antibacterial activity. Six of them are flavonoids, three apigenin C-glycosides, one kaempferol O-glucoside, one isorhamnetin O-galactoside and one isorhamnetin O-rutinoside. Only the dichloromethane extract showed activity in the A. salina toxicity assay, LC50: 385mg/L. The fraction with the highest toxicity was the FD-4A, LC50: 101mg/L. The most abundant substances in this fraction were isolated and identified as 8,9 - secokauranes derived from kongensin F. As for the cytotoxic activity, the FD-4A activity was three times higher than the dichloromethane extract activity. The extracts of ethyl acetate and methanol showed the highest antioxidant activity: 12.11 and 11.77 gQE/100g, respectively. It was observed that flavonoids were the phenolic substances that most influenced the antioxidant activity of the fractions of the ethyl acetate and methanol extracts. With these results we suggest that C. pallidulus var. pallidulus has antibacterial activity, cytotoxic and antioxidant properties, being a potential source of new drugs for treatment of infectious diseases and cancer. We also isolated three 8,9-secokauranes derived from kongensin F, which apparently had not been described yet