O infarto agudo do miocárdio (IAM) é a principal causa de mortalidade mundial. O IAM é acompanhado de remodelamento cardíaco, caracterizado por alterações gênicas, moleculares e celulares, com consequentes alterações no tamanho, forma e função do coração, e resultante disfunção ventricular e insuficiência cardíaca. Evidências experimentais e clínicas indicam que a prevenção ou o tratamento do remodelamento cardíaco beneficiam a função ventricular. A LDE é uma nanopartícula lipídica, com estrutura semelhante à lipoproteína de baixa densidade (LDL). A LDE tem a capacidade de se concentrar em células com superexpressão de receptores de LDL, como em processos proliferativos e inflamatórios, sendo utilizada com um direcionador de fármacos a sítios específicos. Nosso laboratório demonstrou que o tratamento com metotrexato (MTX), um fármaco antiproliferativo e imunossupressor, associado à LDE reduziu acentuadamente as lesões ateroscleróticas na aorta de coelhos submetidos à dieta hipercolesterolêmica. Esses resultados nos levaram à hipótese de que a LDE-MTX possa ser utilizada para minimizar o processo inflamatório pós-IAM, determinante para o remodelamento cardíaco, e seus efeitos deletérios. O objetivo do trabalho foi investigar o efeito do tratamento da LDE-MTX sobre o remodelamento cardíaco em ratos submetidos ao IAM. Ratos machos Wistar (300-400g) foram submetidos ao modelo cirúrgico de IAM ou à cirurgia fictícia (SHAM). Os grupos foram divididos entre: SHAM (solução fisiológica), IAM-LDE, IAMMTXc (metotrexato comercial), IAM-LDE-MTX. Os animais foram tratados uma vez por semana na dose de 1 mg/kg intraperitonealmente, por 6 semanas. Após 24 horas do IAM e ao final do seguimento, foi realizado o ecocardiograma. O coração, o pulmão, o fígado e os rins foram coletados para obtenção do peso relativo dos órgãos. O tamanho do IAM foi estimado pela média dos tamanhos dos IAM externo e interno. A avaliação da necrose dos miócitos, processo inflamatório, diâmetro dos miócitos e fibrose miocárdica nas regiões subendocárdica (SE) e intersticial (INT) foi realizada na região remota ao IAM. Marcadores de estresse oxidativo, inflamação, fibrose, angiogênese e os receptores de lipoproteínas foram quantificados por PCR em tempo real. O tratamento com LDE-MTX diminuiu a dilatação do VE, hipertrofia cardíaca, volumes sistólicos e diastólicos, espessura do septo interventricular e da parede posterior e massa do VE, comparado aos grupos IAM-LDE e IAM-MTXc. Além disso, houve uma melhora de aproximadamente 40% da função sistólica do VE em relação aos demais grupos IAM. O tratamento com LDE-MTX não alterou a função diastólica. O peso relativo do coração e do pulmão foi menor no grupo IAM-LDE-MTX quando comparado ao IAM-LDE. Na histomorfometria, houve diminuição no tamanho do infarto no grupo IAM-LDE-MTX quando comparado com IAMLDE. A necrose, infiltrado inflamatório e fração de volume do colágeno nas regiões INT e SE foram menores no IAM-LDE-MTX em relação aos grupos IAM-LDE e IAM-MTXc, assim como o diâmetro dos miócitos. A expressão gênica dos marcadores de estresse oxidativo e fibrose foi menor no grupo IAM-LDE-MTX quando comparado ao grupo IAM-MTXc. Com relação à inflamação, o grupo IAM-LDE-MTX apresentou menor expressão do gene para TNF-alfa quando comparado aos grupos IAM-MTXc e SHAM. No que se refere ao receptor de lipoproteína, nos grupos IAM-LDE-MTX houve menor expressão do gene para receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDLR) quando comparado ao grupo tratado com MTXc. Não foi observada toxicidade em nenhum grupo. Os resultados deste estudo indicam que o tratamento com LDE-MTX melhora significantemente a função cardíaca e atenua o remodelamento cardíaco em modelo experimental cirúrgico para IAM / Acute myocardial infarction (AMI) is the main cause of worldwide mortality. AMI is accompanied by cardiac remodeling, characterized by genetic, molecular and cellular alterations, with consequent changes in the size, shape and function of the heart, resulting in ventricular dysfunction and heart failure. Experimental and clinical evidence indicate that prevention or treatment of cardiac remodeling benefits the ventricular function. LDE is a lipid nanoparticle with a structure similar to low density lipoprotein (LDL). LDE has the ability to concentrate in cells with overexpression of LDL receptors, such as in proliferative and inflammatory processes, and is used with a drugtargeting agent at specific sites. Our laboratory demonstrated that the treatment with methotrexate (MTX), an antiproliferative and immunosuppressive drug, associated to LDE markedly reduced atherosclerotic lesions in aorta of rabbits submitted to the hypercholesterolemic diet. These results led us to the hypothesis that LDEMTX could be used to minimize the post-AMI inflammatory process, determinant for cardiac remodeling, and their deleterious effects. The aim of this study was to investigate the effect of LDE-MTX treatment on cardiac remodeling in rats submitted to AMI. Male Wistar rats (300-400g) were submitted to the surgical model of AMI or Sham surgery. The groups were divided into: SHAM (saline solution), AMI-LDE, AMI-MTXc (commercial methotrexate), AMI-LDE-MTX. The animals were treated once a week at a dose of 1 mg/kg intraperitoneally, for 6 weeks. After 24 hours of AMI and at the end of the follow-up, the echocardiogram was performed. The heart, lung, liver and kidneys were collected to obtain the relative weight of the organs. Infaction size was estimated by mean extern and intern size of IAM. Evaluation of myocyte necrosis, inflammatory process, myocyte diameter and myocardial fibrosis in the subendocardial (SE) and interstitial (INT) areas was performed in remote area from AMI. Markers of oxidative stress, inflammation, fibrosis, angiogenesis and lipoprotein receptors were quantified by quantitative real-time PCR. Treatment with LDE-MTX decreased LV dilation, cardiac hypertrophy, systolic and diastolic volumes, interventricular septum and posterior wall thickness and LV mass, compared to AMI-LDE and AMI-MTXc groups. In addition, there was an improvement of approximately 40% of LV systolic function compared to other AMI groups. Treatment with LDE-MTX did not alter diastolic function. The relative weight of the heart and lung were lower in the AMI-LDE-MTX group when compared to the AMI-LDE. In morphometry, infarct size decreased in the AMI-LDE-MTX group when compared to AMI-LDE. Necrosis, inflammatory infiltrate and collagen volume fraction in the INT and SE regions were lower in AMI-LDEMTX than in AMI-LDE and AMI-MTXc groups, as well as the myocyte diameter. The gene expression of oxidative stress and fibrosis markers were lower in the AMI-LDE-MTX group when compared to the AMI-MTXc. Regarding inflammation, the AMI-LDE-MTX group had lower expression of the TNF-alfa gene when compared to the AMI-MTXc group and the SHAM group. As regards the lipoprotein receptor, in the AMI-LDE-MTX there was lower expression of the gene for low-density lipoprotein (LDLR) receptor compared to MTXc treated animals. No toxicity was observed in any groups. The results of this study indicate that treatment with LDE-MTX significantly improves cardiac function and attenuates cardiac remodeling in an experimental surgical model for AMI

O uso da LDE como veículo para quimioterápicos tem mostrado ser uma boa estratégia para aumentar a eficácia terapêutica dos mesmos. Nesse estudo, a LDE foi empregada como veículo para um derivado lipofílico do metotrexato (MTX), o di-dodecil metotrexato, que foi obtido com rendimento elevado através de reação de esterificação do MTX. O aumento na lipofilicidade do derivado possibilitou incorporação na LDE com rendimento e estabilidade elevados. O IC50 de LDE-di-dodecil MTX foi cerca de 100 vezes menor em relação ao MTX comercial, sua captação celular mais elevada nas linhagens leucêmicas estudadas e sua toxicidade animal reduzida, mostrando que a LDE é um veículo promissor para este fármaco. / The use of LDE as vehicle to drugs is a great strategy to improve the therapeutic index and reduce the side effects. In this study LDE was used as vehicle to di-dodecyl methotrexate, a lipophilic derivative of MTX, obtained through an esterification reaction with a high yield. The increased lipophilicity of the derivative allowed a high association to LDE and good stability. The IC50 of LDE-di-dodecyl MTX was lower than that of the MTX and the uptake was higher in leukemic cells. The MTX toxicity in mice was reduced after association to LDE, showing that LDE is a promising vehicle to this drug.

O uso da LDE como veículo para quimioterápicos tem mostrado ser uma boa estratégia para aumentar a eficácia terapêutica dos mesmos. Nesse estudo, a LDE foi empregada como veículo para um derivado lipofílico do metotrexato (MTX), o di-dodecil metotrexato, que foi obtido com rendimento elevado através de reação de esterificação do MTX. O aumento na lipofilicidade do derivado possibilitou incorporação na LDE com rendimento e estabilidade elevados. O IC50 de LDE-di-dodecil MTX foi cerca de 100 vezes menor em relação ao MTX comercial, sua captação celular mais elevada nas linhagens leucêmicas estudadas e sua toxicidade animal reduzida, mostrando que a LDE é um veículo promissor para este fármaco. / The use of LDE as vehicle to drugs is a great strategy to improve the therapeutic index and reduce the side effects. In this study LDE was used as vehicle to di-dodecyl methotrexate, a lipophilic derivative of MTX, obtained through an esterification reaction with a high yield. The increased lipophilicity of the derivative allowed a high association to LDE and good stability. The IC50 of LDE-di-dodecyl MTX was lower than that of the MTX and the uptake was higher in leukemic cells. The MTX toxicity in mice was reduced after association to LDE, showing that LDE is a promising vehicle to this drug.

Aprofundamos o estudo dos efeitos farmacológicos da dexametasona, indometacina e tenoxicam e de uma droga citostática (metotrexato), assim como a análise dos mecanismos envolvidos na estimulação flogógena causada por agentes de intensidades fraca, média e forte. Para isso. empregamos o teste edemogênico, que demonstrou ser os fármacos antiinflamatórios não esteróides (tenoxicam e indometacina), os de maior potência na inibição da exsudação plasmática induzida pela paracoccidioidina. Todavia, com agentes flogógenos de intensidade média (carragenina), o metotrexato foi o medicamento mais potente; enquanto que com a placa microbiana dental (agente forte), a dexametasona e a indometacina foram os de maior potência antiinflamatória. Por meio da análise histomorfométrica relativa dos granulomas induzidos por esse último agente, verificamos, até 14 dias, a maior potência antiinflamatória apresentada pelo tenoxicam, comparativamente à da indometacina - em relação à inibição da região central de necrose supurativa-, demonstrando efeito semelhante ao da dexametasona; não obstante, nesse período experimental, em relação à inibição da densidade do volume do tecido granulomatoso, os fármacos mais potentes terem sido a indometacina e a dexametasona. Após 14 dias, foi constatada diferença não significativa (p>0.05) entre o efeito apresentado pelo tenoxicam e o da indometacina. O acentuado efeito apresentado pelos NSAIDs em relação à inibição da densidade de volume dos macrófagos, semelhante ao do metotrexato, sugeriu que os NSAIDs inibiram a proliferação das células progenitoras mielóides dos monócitos/macrófagos. Também agiram tanto aumentando (21 dias) como inibindo (28 dias) a densidade de volume ocupada pelas fibras colágenas; enquanto que a dexametasona apresentou efeito contrário. Tais resultados indicaram que no processo inflamatório induzido por agentes flogógenos de intensidade forte (PMD), estimulores da acentuada produção de LTs e PGs, o emprego de antiinflamatórios esteróides e não esteróides foi vantajosa em relação ao fármaco citostátco. / Was studied comparatively the mechanisms of action and the antiinflammatory effect presented by dexamethasone, tenoxican, indomethacin and methotrexate in acute and chronic inflammation induced by agent flogogenous of minim, media and elevated intensity. With the employ of edemogenic test was verified that the effect presented by nonsteroid antiinflammatory (tenoxican and indomethacin), in relation to inhibition of the plasmatic exsudation induced by paracoccidioidin, was more potent than other medicaments tested. Meanwhile, in the inhibition of the acute inflammation caused by carrageenan and dental microbian plaque, methotrexate, dexamethasone and indomethacin were the most potent pharmacs, respectively. The injection of the dental microbian plaque in the air pouch model induced two experimental granulomas susceptive to the antiinflammatory effects presented for the pharmacs tested, which were utilized in the determination of the weights and of the volume density occupied by structures presents in the periods experimental of 7, 14, 21 and 28 days. With relation the inhibition of the differential mid and dry weights, methotrexate and dexamethasone followed by indomethacin and tenoxican were the most effective pharmacs in decrescent order of potency. The histomorphometric studies of the volume density of the granulomatous tissue revealed that indomethacin reduced this structure comparatively to the tenoxican at 14 days. After this experimental period tenoxican presented the most potent anti-inflammatory effect; however, without significant statistical difference to indomethacin. Tenoxican too presented elevated inhibitory effect of the volume density of the region of supurative necrose (similar to dexamethasone) particularly along to first week. NSAIDs also showed in relation the inhibition of volume density of the collagen effect stimulator (21 days) and inhibitor (28 days), while that dexamethasone revealed contrary effect. The accentuate inhibitory effect of the volume density of macrophages presented by NSAIDs was similar to methotrexate, indicating that these medicaments possibly presented anti-mitotic effect to the progenitors myeloid cells of monocytes/macrophages. These results indicated that in the inflammatory process induced by flogogenous of strong intensity, stimulators of increased production of LTS and PGs, the administration of steroids and non-steroids anti-inflammatory was advantageous in relation to methotrexate.

No presente estudo avaliamos a influência do Metotrexato (MTX-3mg/kg/semana) e do Corticosteróide (CE- prednisona 1,05 mg/kg/semana), ministrados de forma isolada, associados entre si, ou associados ao Ácido Folínico (AF- 0,25 mg/kg/semana) e ao Ácido Zoledrônico (ZOL- 0,1mg/kg dose única) respectivamente, na osseointegração de implantes de titânio realizados 6 semanas após o início da administração das drogas, em coelhos NZW. Os animais (2,67 ± 0,67 Kg) foram tratados durante um total de 18 semanas com solução salina (CTL; n=6), MTX (n=6), CE (n=8), MTX-CE (n=6), MTX-AF (n=6) e CE-ZOL (n=6). Foram realizadas análises de densitometria mineral óssea (DMO) na tíbia e na coluna antes e após os tratamentos para avaliação da variação da DMO (Delta DMO). Os resultados revelaram perda de osso cortical nos grupos tratados com CE (Delta DMO tíbia: 0,018 ± 0,010 vs CTL: 0,040 ± 0,011 p= 0,001; Delta DMO coluna: 0,004± 0,011 vs CTL: 0,055 ± 0,009 p= 0,009). A adição de ZOL ao CE reverteu a perda de DMO (Delta DMO tíbia: 0,027 ± 0,003 p= 0,002 em relação ao CE; Delta DMO coluna: 0,043 ± 0,011 p= 0,02 em relação ao CE). O tratamento com MTX não promoveu alteração da DMO. As análises histomorfométricas das tíbias com e sem o implante, foram realizadas 12 semanas após a colocação dos implantes, e os resultados mostraram uma redução de espessura cortical e de tecido ósseo em função do tratamento com CE sendo que a adição de ZOL reverteu também esse parâmetro. Da mesma forma, o percentual de contato entre osso e o implante foi alterado pelo tratamento com CE (CE: 25,98% vs. CTL: 42,40%; p= 0,013) e o ZOL reverteu esse efeito (CE- ZOL: 38,95% vs. CE: 25,98%; p= 0,014). Em conjunto, nossos resultados mostraram que a terapia com MTX não alterou a osseointegração de implantes de titânio, enquanto que o CE promoveu uma diminuição de contato entre osso e implante que foi revertida pela administração de ZOL, comprovando a eficácia terapêutica dessa associação. / In this study we evaluated the influence of Methotrexate (MTX- 3mg/kg/week) and Corticosteroid (CE- prednisona 1, 05 mg/kg/week), alone and in association with Folinic Acid (FA- 0, 25 mg/kg/week) and Zoledronic Acid (ZOL-0,1mg/kg/week) respectively, on osseointegration of titanium dental implants performed 6 weeks after treatment started in adult male NZW rabbits. Six animals in each group and eight in CE, were treated with the drugs during 18 weeks with exception of ZOL, which was infused as a single dose, at the moment of surgery. Dual-energy X-ray absorptiometryies were performed before and after treatment to determine bone mineral density alterations (Delta BMD). After 12 weeks post-implant placement, the animals were sacrificed for histomorphometric analysis. The BMD was significantly reduced by treatment with CE (Delta tibia: 0.018±0.010 vs CTL: 0.040±0.011; Delta lumbar: 0.004±0.011 vs CTL: 0.055±0.009), with recovery of BMD after ZOL administration (Delta tibia: 0,027± 0,003 vs CE: 0,018±0,010; Delta lumbar: 0.043±0.011 vs CE: 0.004±0.011). The BMD was not altered by MTX treatment or MTX-FA. The histomorphometric analysis revealed cortical bone loss and reduction in bone tissue in tibia in animals treated with CE, and these parameters were reversed by ZOL. Similarly, the percentage of bone to implant contact was reduced in the group treated with CE (CE: 25.98% vs. CTL: 42.40%; p=0.013), and reverted by ZOL (CE+ZOL: 38.95% vs. CE: 25.98%; p=0.014).The MTX and MTX-FA treatments did not alter osseointegration of the implant (35.09% and 35.92% respectively). Together our results showed that therapy with MTX did not interfere on osseointegration of titanium implants, while the CE reduced the bone to implant contact. ZOL administration reversed this effect, showing the therapeutic importance of this association.

A Artrite Reumatóide (AR) é uma artropatia autoimune multifatorial com etiologia desconhecida que afeta aproximadamente 1% da população adulta. A estratégia padrão para o tratamento da AR consiste na administração de baixas doses de Metotrexato (MTX), cujo efeito anti-inflamatório está relacionado com a manutenção dos níveis elevados de adenosina (ADO) extracelular. No entanto, uma parte considerável dos pacientes com AR é refratária ao tratamento com MTX e o mecanismo pelo qual este fenômeno ocorre ainda não está totalmente esclarecido. Neste contexto, o presente estudo descreveu que a eficácia terapêutica ao MTX está associada com a expressão em células Tregs da ectoenzima CD39, cuja função biológica é a geração de ADO extracelular via metabolização do ATP. Especificamente, através da realização de um estudo longitudinal, observamos que pacientes respondedores ao MTX (R-MTX) apresentam uma expansão de células Tregs circulantes expressando CD39 após o tratamento com MTX. Por outro lado, identificamos que pacientes não respondedores ao MTX (UR-MTX) possuem uma redução da expressão de CD39 em células Tregs, o que culmina em um comprometimento das suas funções supressoras. Ainda, demonstramos que a expressão de CD39 em células Tregs é um biomarcador apto em predizer a resposta terapêutica ao MTX, visto que pacientes UR-MTX apresentam uma expressão reduzida de CD39 em Tregs mesmo antes do início do tratamento com MTX. Posteriormente, nós investigamos as bases moleculares que acarretam na expressão reduzida de CD39 observada em células Tregs de pacientes URMTX. Demonstramos que a estimulação com TGF-? tanto em células Tregs isoladas quanto diferenciadas in vitro aumenta a expressão de CD39 através da ativação sequencial da seguinte plataforma molecular: receptores de TGF-? (TGFBRII e TGFBRI), transdutor de sinal SMAD2, fator de transcrição CREB, de modo dependente da atividade de p38. Uma vez identificada a via envolvida com a indução da expressão de CD39, demonstramos que células Tregs diferenciadas de indivíduos que apresentam uma expressão reduzida de CD39 são incapazes de induzir a expressão desta ectoenzima através da estimulação com TGF-?. Por fim, transpondo nossos achados para pacientes com AR, observamos que pacientes UR-MTX apresentam uma redução nos níveis de RNAm para TGFBRII e CREB bem como também uma redução das proteínas fosforiladas SMAD2 e CREB em células CD4+ e Tregs, sugerindo que o comprometimento na cascata de sinalização de TGF-?, envolvida com a indução da expressão de CD39 em células Tregs, está associado com a resistência ao MTX. / Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune multifactorial arthropathy with unknown etiology that affects approximately 1% of the adult population. The standard strategy for RA treatment comprises the administration of low doses of methotrexate (MTX), whose antiinflammatory effects are associated with maintenance of high levels of extracellular adenosine (ADO). However, a considerable proportion of RA patients is resistant to MTX treatment and the mechanisms underlying this phenomenon occurs is poorly understood. Within this context, the present study showed that therapeutic efficacy of MTX is associated with expression on Treg cells of the ectoenzyme CD39, whose function is related to the generation of extracellular ADO by ATP metabolism. Specifically, we conducted a longitudinal study and observed that responsive patients to MTX (R-MTX) exhibit an increase in the frequency of circulating Treg cells expressing CD39 after MTX treatment. On the other hand, we found that non-responsive patients to MTX (UR-MTX) have a reduction of CD39 expression on Treg cells, which culminates in an impairment of Treg function. Furthermore, these findings indicate that CD39 expression on Treg cells is a biomarker for therapeutic response to MTX, since UR-MTX patients had a depressed CD39 expression on Treg cells even before MTX treatment. Subsequently, the present study investigated the molecular mechanisms that would cause the reduction of CD39 expression on Treg cells from UR-MTX patients. For this, we demonstrated that TGF-? stimulation increases CD39 expression in isolated and in vitro differentiated Treg cells through participation/activation of the following molecules: receptors of TGF-?, TGFBRII and TGFBRI, signal transducer SMAD2 and transcription factor CREB, through p38 activity dependent-manner. Once identified these molecules involved with CD39 induction, we demonstrated that differentiated Treg cells from healthy individuals with an intrinsic reduction of CD39 expression on circulating Treg cells are unable to increase CD39 expression by TGF-? stimulation. Transposing our findings to RA patients, we found that UR-MTX patients exhibit a reduction of mRNA for TGFBRII and CREB as well as reduction on levels of phospho-SMAD2 and phospho-CREB in CD4+ and Treg cells, suggesting that an impairment in TGF-? signaling pathway, related to induction of CD39 expression on Treg cells, is associated with MTX resistance.

O Metotrexato (MTX) é utilizado em altas doses no tratamento de neoplasias e em baixas doses como antiinflamatório. O objetivo deste estudo foi avaliar a reparação da fratura de côndilo mandibular e a simetria facial em ratos tratados com MTX. Foram utilizados 100 ratos, Wistar, machos que foram submetidos a procedimento cirúrgico utilizando modelo experimental de fratura de côndilo do lado direito. Os ratos foram distribuídos em quatro grupos e receberam os seguintes tratamentos: Controle - soro (um mL/semana); Dexametasona - dexametasona (0,15 mg/Kg); MTX Baixa dose - MTX (três mg/kg/semana); MTX Alta dose - MTX (30 mg/Kg). Os períodos de sacrifício foram de um dia, sete, 15, 30 e 90 dias de pós-operatório (n=cinco). O peso dos animais foi documentado. Foi realizada coleta de sangue para análise bioquímica de proteínas totais e fosfatase alcalina. Foi realizado exame radiográfico das cabeças em norma axial para análise cefalométrica. Foram realizadas mensurações lineares da maxila e mandíbula, bem como angulares do desvio mandibular. As amostras foram processadas histologicamente sendo obtidas lâminas com cortes no sentido coronal. Os dados quantitativos foram submetidos a análises estatísticas (=0,05). Os animais recuperaram peso ao longo do tempo, exceto no grupo MTX Alta dose. Os níveis séricos de proteínas totais mostraram aumento nos períodos iniciais e os de fosfatase alcalina queda nos períodos de formação do calo ósseo no tratamento com MTX. Houve redução no comprimento mandibular com alterações também na maxila e desvio progressivo da mandíbula em relação à base do crânio no grupo MTX Alta dose. A análise histológica revelou que houve reparo da fratura, pela formação de calo ósseo, e das estruturas da articulação sendo que no grupo MTX Alta dose ocorreu um retardo neste processo, havendo desvio do côndilo e em um espécime houve anquilose fibrosa. A histomorfometria revelou que a área de neoformação óssea foi menor no grupo MTX Alta dose. Foi concluído que o tratamento com MTX em alta dose teve efeito deletério na simetria facial de ratos submetidos à fratura do processo condilar e prejudicou a formação do calo ósseo e o reparo da articulação temporomandibular, com possível indução de anquilose fibrosa. / low doses as an antiinflammatory. The aim of this study was to evaluate the healing of the mandibular condyle fracture and facial symmetry in rats treated with MTX. 100 Wistar male rats undergone surgery using an experimental model of mandibular condyle fracture of the right side. The rats were distributed in four groups and received the following treatments: Control Saline (1 ml/week); Dexamethasone dexamethasone (0,15mg/kg); MTX Low dose MTX (3 mg/kg/week); MTX High dose MTX (30 mg/kg). Animals were sacrificed at one, seven, 15, 30 and 90 days postoperatively (n=5). Animals body weight were recorded. Blood has been taken to provide the biochemical analysis of total proteins and alkaline phosphatase. Radiographic axial exams from the heads were provided to cephalometric analysis. Linear measures of jaw and mandible, as well as angular measures of the mandibular deviation were done. The samples were histologically processed and coronal sections were obtained. Quantitative data were submitted to statistical analysis (=0,05). The animals regained body weight over the time, except in MTX High dose group. Total protein serum levels demonstrated the increase in initial periods and the alkaline phosphatase levels showed decrease in the periods of bone callus formation. There was reduction in the mandibular length and also changes in the jaw and progressive deviation in the mandible in relation to the skull basis in the MTX High dose group. The histological analysis revealed that there were repair of the bone and temporomandibular joint although in the MTX High dose group there was a delay in this process, in wich there was deviation of the condyle and one specimen was fibrous ankylosis. Histomorphometry revealed that the new bone formation area was lower in MTX High dose group. It was concluded that treatment with high dose MTX had a deleterious effect on facial symmetry of rats submitted to fracture of the condylar process and damaged the bone callus formation and repair of the temporomandibular joint, with possible induction of fibrous ankylosis.

Este estudo randomizado, duplo-cego e controlado com placebo avaliou a eficácia do laser de baixa intensidade, infravermelho, na prevenção e tratamento da mucosite em pacientes pediátricos portadores de leucemia linfoblástica aguda (LLA) em uso do agente quimioterápico metotrexato em altas doses (MTX >1g/m2). Os pacientes foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: o grupo teste em que os pacientes receberam aplicação de laser profilático e o grupo controle com laser placebo. Os dois grupos receberam aplicação de laser nos dias D1, D2, D3. Realizada esta fase, os pacientes que desenvolveram mucosite oral tiveram acesso ao tratamento e aqueles que apresentaram mucosa normal foram orientados a retornar à consulta no 8º dia. Concomitante, foi solicitado exame hematológico prévio ao tratamento e no dia D8. Foi também mensurado o nível sérico do MTX 42 horas após a infusão da quimioterapia. Os resultados hematológicos prévios se mostraram satisfatórios e alguns apresentaram alterações no dia D8. No nosso estudo não foi possível comprovar se o nível sérico do MTX tem relação com toxicidade oral. A mucosite foi avaliada segundo a escala WHO e a avaliação da dor pré e pós-tratamento pelas escalas VAS, de faces e comportamental. Mucosite foi observada em 6 pacientes, 4 tratados com laser placebo e 2 tratados com laser profilático. Esta diferença não foi estatisticamente significante (P > 0.5). Os 6 pacientes desenvolveram grau 2 de mucosite oral. Média de laserterapia foi de 5.8 dias. Com relação à sintomatologia dolorosa 2 pacientes não apresentaram dor, 1 paciente apresentou dor moderada, nos outros a sintomatologia foi leve. Os resultados deste estudo demonstraram que o laser 780nm não foi eficaz na prevenção da mucosite oral mas constatamos o potencial efeito do laser terapêutico no controle da mucosite oral e da dor em pacientes pediátricos portadores LLA. / This randomized, double-blind, placebo-controlled study evaluated the efficacy of low intensity laser in the prevention and treatment of oral mucositis in pediatric patients with acute lymphoblastic leukemia undergoing chemotherapy with highdose methotrexate (MTX>1g/m2). The patients were divided into two groups: the test group, the patients who received prophylactic low-intensity laser, and the control group who received laser without radiation (sham laser). Nor the clinician neither the patients knew which type of laser was being used until the end of the trial. The patients of each group received laser application in the days D1, D2, D3. After that, the patients who developed oral mucositis were treated with low-intensity laser and those without oral mucositis were instructed to return on day 8 for clinical reevaluation. Concomitantly, patients were screening for previous hematological examination and in the day D8. The plasma level of MTX was measured at 42 hours starting the infusion. Hematological analyses revealed no abnormality and other with alterations. In this present study, there was no correlation between the plasma level MTX and oral toxicity. Mucositis was evaluated by the WHO scale and pain was measured by VAS, face scales and behavioral. Six patients developed oral mucositis and had grade 2 by WHO scale. There was no significant difference between laser group and the control group (P > 0.5). Average time of therapeutic laser was 5.8 days. Laser applications reduced oral pain. Low-intensity laser 780 nm wavelength showed no efficient method in the prevention of oral mucositis but produced some benefits in the control of the oral mucositis and pain in pediatric patients of LLA after chemotherapy.

Introdução: O polimorfismo de inserção/deleção de 14 pb no éxon 8 do gene HLA-G é uma variante funcional com propriedades anti-inflamatórias, que tem sido associada a melhores respostas à monoterapia ou ao tratamento combinado com metrotexato (MTX) em pacientes com artrite reumatóide (AR). Objetivo: Determinar se o polimorfismo de 14 pb do gene HLA-G está associado com maior suscetibilidade à doença, com características clínicas e como fator preditivo da resposta à terapia em pacientes portadores de AR tratados com uma estratégia de tratamento intensivo com MTX. Métodos: Uma coorte prospectiva composta de 309 pacientes consecutivos foi estabelecida entre Junho de 2007 e Dezembro de 2009. Controles caucasianos saudáveis da mesma área geográfica e antecedentes étnicos foram selecionados. Um subgrupo de 188 pacientes com AR anteriormente não submetidos a decisões terapêuticas baseadas em escores de atividade da doença e sem critérios de doença em remissão pelo CDAI (>2.8) foram incluídos na análise de resposta clínica ao MTX (baseada em estratégia intensiva) e seguidos por um período de 14 meses (±5.29). Pacientes e controles foram genotipados para o polimorfismo de 14 pb por PCR com primers específicos para o éxon 8 do gene HLA-G. Uma análise multivariada foi realizada para investigar o efeito da homozigose para a deleção no polimorfismo 14bp do HLA-G sobre as mudanças no DAS28. Resultados: Entre os 309 pacientes com AR (média de idade 60.6 ±12.4 anos), não foram observadas diferenças nas freqüências alélicas em relação às características clínicas, incluindo escores de atividade e funcionais. Também não foram observadas diferenças significativas nas freqüências genotípicas e alélicas entre pacientes com AR e controles. Na análise de resposta clínica do subgrupo de 188 pacientes, medianas e médias dos escores de atividade da doença melhoraram ao final do estudo (DAS28: 5.0 vs. 4.2, p<0.001; respectivamente). A média de incremento da dose de MTX comparado ao baseline foi respectivamente 14.7 mg ±4.8 vs. 17.4 mg ± 4.7 (p<0.001). Em análise multivariada, o modelo foi significativamente associado às mudanças no DAS28 (R2ajustado=0.353; p<0.001) ou seja os fatores clínicos incluídos na análise explicaram 35% da variação do DAS28. O modelo apontou os fatores estatisticamente significativos na predição de resposta: valor do DAS28 basal (R2 semi parcial =0.261; p<0.001), gênero (R2 semi parcial = 0.034; p=0.003) e a interação entre a homozigose da deleção para 14 pb e o uso do MTX (R2semi-parcial = 0.017; p=0.031) como fatores preditivos independentes de resposta. Na análise estratificada pela presença de homozigose para a deleção ou outros genótipos, houve uma tendência para maior variação no DAS28 nos pacientes que utilizaram MTX no subgrupo -/-14-bp HLA-G (-1.4±0.3 vs. -0.4±0.5; p=0,071), o que não foi observado entre outros genótipos (-1,1 ±0,2 vs. -1,3 ±0,4; p=0,496). Conclusão: A ocorrência de homozigose para deleção de 14 pb no gene HLA-G foi independentemente associada com melhor resposta ao MTX em uma coorte prospectiva de pacientes com AR. Os achados trazem à luz um promissor marcador genético que precisa ser replicado em coortes independentes maiores. Maior número de estudos são necessários para que se possa identificar perfis genéticos capazes de selecionar individualmente os pacientes mais propensos a respostas ótimas ao MTX. / Background: 14-bp insertion/deletion in exon 8 of the HLA-G gene is a potentially functional polymorphism that has been implicated in the response to MTX monotherapy or combination in rheumatoid arthritis (RA) patients. Objectives: We sought to determine whether the 14-bp insertion/deletion polymorphism in exon 8 of the HLA-G gene is associated with susceptibility to RA, clinical features, or response to MTX therapy. Methods: We determined the HLA-G 14-bp insertion/deletion polymorphism genotypes in a prospective cohort of 309 consecutive RA patients and 294 healthy controls, and looked for associations between genotype and clinical features of RA. Multivariate analyses were performed to investigate the effect of homozygosity for the -14/-14 bp genotype on changes in DAS28 in response to MTX therapy in a subgroup of 188 RA patients. Results: Among the 309 RA patients, no correlations were observed between allele or genotype frequencies of the HLA-G gene polymorphism and clinical features, including disease activity scores and functional scores. No significant differences were observed in the genotype and allele frequencies between RA patients and controls. In the subgroup evaluated for clinical response to MTX, we observed a decrease in mean DAS28 over the course of the study. Furthermore, a better response to MTX treatment, measured by adjusted mean of DAS28 change, was observed in those patients with the HLA-G -14/-14-bp genotype, which was not observed among other genotypes. Conclusion: Homozygosity for the 14 bp deletion polymorphism within exon 8 of the HLA-G gene was associated with a better response to MTX in a prospective cohort of patients with RA. This is a promising genetic marker for predicting response to MTX therapy in RA.

No presente estudo avaliamos a influência do Metotrexato (MTX-3mg/kg/semana) e do Corticosteróide (CE- prednisona 1,05 mg/kg/semana), ministrados de forma isolada, associados entre si, ou associados ao Ácido Folínico (AF- 0,25 mg/kg/semana) e ao Ácido Zoledrônico (ZOL- 0,1mg/kg dose única) respectivamente, na osseointegração de implantes de titânio realizados 6 semanas após o início da administração das drogas, em coelhos NZW. Os animais (2,67 ± 0,67 Kg) foram tratados durante um total de 18 semanas com solução salina (CTL; n=6), MTX (n=6), CE (n=8), MTX-CE (n=6), MTX-AF (n=6) e CE-ZOL (n=6). Foram realizadas análises de densitometria mineral óssea (DMO) na tíbia e na coluna antes e após os tratamentos para avaliação da variação da DMO (Delta DMO). Os resultados revelaram perda de osso cortical nos grupos tratados com CE (Delta DMO tíbia: 0,018 ± 0,010 vs CTL: 0,040 ± 0,011 p= 0,001; Delta DMO coluna: 0,004± 0,011 vs CTL: 0,055 ± 0,009 p= 0,009). A adição de ZOL ao CE reverteu a perda de DMO (Delta DMO tíbia: 0,027 ± 0,003 p= 0,002 em relação ao CE; Delta DMO coluna: 0,043 ± 0,011 p= 0,02 em relação ao CE). O tratamento com MTX não promoveu alteração da DMO. As análises histomorfométricas das tíbias com e sem o implante, foram realizadas 12 semanas após a colocação dos implantes, e os resultados mostraram uma redução de espessura cortical e de tecido ósseo em função do tratamento com CE sendo que a adição de ZOL reverteu também esse parâmetro. Da mesma forma, o percentual de contato entre osso e o implante foi alterado pelo tratamento com CE (CE: 25,98% vs. CTL: 42,40%; p= 0,013) e o ZOL reverteu esse efeito (CE- ZOL: 38,95% vs. CE: 25,98%; p= 0,014). Em conjunto, nossos resultados mostraram que a terapia com MTX não alterou a osseointegração de implantes de titânio, enquanto que o CE promoveu uma diminuição de contato entre osso e implante que foi revertida pela administração de ZOL, comprovando a eficácia terapêutica dessa associação. / In this study we evaluated the influence of Methotrexate (MTX- 3mg/kg/week) and Corticosteroid (CE- prednisona 1, 05 mg/kg/week), alone and in association with Folinic Acid (FA- 0, 25 mg/kg/week) and Zoledronic Acid (ZOL-0,1mg/kg/week) respectively, on osseointegration of titanium dental implants performed 6 weeks after treatment started in adult male NZW rabbits. Six animals in each group and eight in CE, were treated with the drugs during 18 weeks with exception of ZOL, which was infused as a single dose, at the moment of surgery. Dual-energy X-ray absorptiometryies were performed before and after treatment to determine bone mineral density alterations (Delta BMD). After 12 weeks post-implant placement, the animals were sacrificed for histomorphometric analysis. The BMD was significantly reduced by treatment with CE (Delta tibia: 0.018±0.010 vs CTL: 0.040±0.011; Delta lumbar: 0.004±0.011 vs CTL: 0.055±0.009), with recovery of BMD after ZOL administration (Delta tibia: 0,027± 0,003 vs CE: 0,018±0,010; Delta lumbar: 0.043±0.011 vs CE: 0.004±0.011). The BMD was not altered by MTX treatment or MTX-FA. The histomorphometric analysis revealed cortical bone loss and reduction in bone tissue in tibia in animals treated with CE, and these parameters were reversed by ZOL. Similarly, the percentage of bone to implant contact was reduced in the group treated with CE (CE: 25.98% vs. CTL: 42.40%; p=0.013), and reverted by ZOL (CE+ZOL: 38.95% vs. CE: 25.98%; p=0.014).The MTX and MTX-FA treatments did not alter osseointegration of the implant (35.09% and 35.92% respectively). Together our results showed that therapy with MTX did not interfere on osseointegration of titanium implants, while the CE reduced the bone to implant contact. ZOL administration reversed this effect, showing the therapeutic importance of this association.