Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-04Bitstream added on 2014-06-13T20:16:34Z : No. of bitstreams: 1 barbosa_mf_me_sjrp.pdf: 803181 bytes, checksum: c782a8189e48115bd988158ad9a3c6c7 (MD5) / A necessidade mundial por tecnologias não poluidoras ou “limpas” obtidas de fontes renováveis e uso racional da terra, a produção de insumos cada vez mais deverá ser baseada na biotecnologia com emprego de resíduos agroindustriais. A polpa cítrica obtida da laranja (Citrus sinensis) é um importante resíduo que somente no Estado de São Paulo se estima em 7,693x106 toneladas produzidas pelas indústrias cítricas. Este trabalho teve como objetivo principal o estudo da sacarificação biotecnológica e química da polpa cítrica. A produção de extrato bruto enzimático usando a polpa cítrica proveniente da indústria cítrica foi estudada para a produção de celulases e poligalacturonases por fermentação em processo de batelada simples com reciclo de células e caldo usando os fungos Trichoderma reesei e Aspergillus niger. O resíduo proveniente dessa fermentação foi avaliado quanto à proteína bruta incorporada durante a fermentação. A polpa cítrica se mostrou um substrato eficiente na produção enzimática. Neste trabalho a atividade de poligalacturonase atingiu o pico de produção de 8,05 UI/mL com 72 h. de cultivo em seu terceiro ciclo com 12% de polpa cítrica, usando como inoculante o A. niger. Já a produção de celulase ocorreu tanto com o A. niger quanto com o T. reesei, com picos de 0,57 e 0,72 FPU/mL respectivamente. Quanto ao enriquecimento proteico da polpa cítrica após o cultivo com A. niger e T. reesei houve uma elevação de 7,97% para 22,8% e 26,8% respectivamente, através do processo com reciclo da biomassa e caldo fermentativo. Um estudo comparativo de sacarificação da polpa cítrica por via ácida também foi feito com 0,1% de H2SO4 a 121ºC e 1 atm em diferentes tempos. Os melhores tempos foram de 60 e 120 min. com... / The global need for clean technologies, renewable, and efficient use of land, more and more production will be based on the use of biotechnology with agribusiness residues. The citrus pulp obtained from orange (Citrus sinensis) is an important residue that only in the State of São Paulo is estimated at 7.693 x 106 tonnes produced by the citrus industry. This study aimed the evaluation of the biotechnological and chemical saccharification of citrus pulp peel. The production of crude enzyme extract using citrus pulp from the citrus industry has been studied to produce cellulase and polygalacturonase by fermentation in a simple batch procedure with cell and broth recycle using the fungi Trichoderma reesei and Aspergillus niger. The fermented residues were evaluated for the incorporated protein during fermentation. The citrus pulp proved to be an efficient substrate in enzyme production. In this work the results of polygalacturonase production peaked at 8.05 U/mL in 72 h. cultivation in its third cycle with 10% citrus pulp, using as inoculum A. niger. The production of cellulase occurred both with A. niger and T. reesei with, with peaks of 0.57 and 0.72 FPU/mL, respectively. As for the protein enrichment of citrus pulp after cultivation with A. niger and T. reesei there was an increase of 7.97% to 22.8% and 26.8%, respectively, through the process with recycling of biomass and fermented broth. A comparative study of the citrus pulp saccharification by acid was also done with 0.1% H2SO4 at 121 °C and 1 atm at different times. The best times were 60 and 120 min. with 43.8 grams of sugar and 42.1 respectively per 100 g of dried citrus pulp. This technique is fast and efficient, but the cost was not competitive when compared to the cost of sucrose from sugar cane. But the use of citrus pulp as a substrate for production... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-08Bitstream added on 2014-06-13T19:55:54Z : No. of bitstreams: 1 franco_fc_me_sjrp_parcial.pdf: 199075 bytes, checksum: 630b1fc6089407a1736a05e73e9855d8 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-28T16:08:51Z: franco_fc_me_sjrp_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-28T16:09:57Z : No. of bitstreams: 1 000642546.pdf: 1115303 bytes, checksum: d6482c2b3feea0fdfa2ba3efcc7c1cc9 (MD5) / A xilanase de Thermoascus aurantiacus codificada pelo gene xynA é uma enzima termofílica com uma promissora aplicação industrial. Neste trabalho, foi realizada a clonagem desse gene, que foi isolado pela técnica de RT-PCR, seguido de expressão heteróloga em Pichia pastoris. Realizada a caracterização da enzima nativa no extrato bruto do fungo filamentoso assim como da enzima recombinante antes e depois da purificação parcial, a qual foi realizada pelo processo de troca iônica. A atividade ótima das enzimas foi em pH 5,0 e as mesmas foram estáveis diante de ampla faixa de pH (3,5- 10,5, por 24h). Em relação à temperatura ótima e termoestabilidade houve algumas diferenças entre as três condições da xilanase. A xilanase nativa apresentou-se mais ativa a 75°C sendo estável na faixa de 35°C a 75°C após 1 hora de incubação, a xilanase recombinante antes e depois do processo de purificação apresentou temperatura ótima em 60°C, no entanto antes da purificação permaneceu estável entre 35°C e 80°C, e após a purificação entre 35°C e 65°C, em ambos os casos após a incubação por 1 hora. Esse foi o primeiro relato de expressão do gene xynA em P. pastoris. Com a purificação da enzima recombinante serão viabilizados estudos estruturais que requerem grandes quantidades da enzima. Além disso as características observadas de XynA em nossas análises mostraram-se bastante interessantes do ponto de vista biotecnológico. Nossos dados permitirão então outros estudos para adequação a aplicação dessa xilanase em processos industriais / A xilanase de Thermoascus aurantiacus codificada pelo gene xynA é uma enzima termofílica com uma promissora aplicação industrial. Neste trabalho, foi realizada a clonagem desse gene, que foi isolado pela técnica de RT-PCR, seguido de expressão heteróloga em Pichia pastoris. Realizada a caracterização da enzima nativa no extrato bruto do fungo filamentoso assim como da enzima recombinante antes e depois da purificação parcial, a qual foi realizada pelo processo de troca iônica. A atividade ótima das enzimas foi em pH 5,0 e as mesmas foram estáveis diante de ampla faixa de pH (3,5- 10,5, por 24h). Em relação à temperatura ótima e termoestabilidade houve algumas diferenças entre as três condições da xilanase. A xilanase nativa apresentou-se mais ativa a 75°C sendo estável na faixa de 35°C a 75°C após 1 hora de incubação, a xilanase recombinante antes e depois do processo de purificação apresentou temperatura ótima em 60°C, no entanto antes da purificação permaneceu estável entre 35°C e 80°C, e após a purificação entre 35°C e 65°C, em ambos os casos após a incubação por 1 hora. Esse foi o primeiro relato de expressão do gene xynA em P. pastoris. Com a purificação da enzima recombinante serão viabilizados estudos estruturais que requerem grandes quantidades da enzima. Além disso as características observadas de XynA em nossas análises mostraram-se bastante interessantes do ponto de vista biotecnológico. Nossos dados permitirão então outros estudos para adequação a aplicação dessa xilanase em processos industriais

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-28Bitstream added on 2014-06-13T20:16:35Z : No. of bitstreams: 1 bonine_bm_me_sjrp_parcial.pdf: 271271 bytes, checksum: a1a16a6b184f1569caadb05be1e3b280 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-28T16:08:49Z: bonine_bm_me_sjrp_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-28T16:09:56Z : No. of bitstreams: 1 000642594.pdf: 1254537 bytes, checksum: 109e6be54bdab2844575258370f4fad1 (MD5) / Este trabalho teve como objetivo avaliar a produção de lipase pelo fungo Myceliophthora sp F 2.1.4, por fermentação em estado sólido (FES), fermentação submersa (FS) e fermentação semi-sólida. Alguns testes foram realizados para a obtenção do meio nutricional que melhor proporciona a produção da lipase. Nas condições encontradas foi possível a obtenção de 21 U/mL de lipase na FES, enquanto que para a FS, a produção caiu bruscamente tendo conseguido somente 0,20 U/mL, indicando que a FES foi mais adequada para a produção de lipase por Myceliophthora sp F 2.1.4. As mesmas condições também foram testadas para a fermentação semi-sólida com o uso de buchas vegetais e, dessa forma, a produção enzimática voltou a aumentar com aproximadamente 9 U/mL. A caracterização parcial da lipase produzida pelo fungo Myceliophthora sp. F 2.1.4 por fermentação em estado sólido indicou que a enzima atua em seu máximo em pH entre 5,0 e 7,0 e a temperatura de 35ºC sendo estável entre 35 e 50ºC e em faixa de pH 4,0 e 9,0. A enzima foi sensível a SDS, Al 3+ e Hg 2+ e tolerante a etanol e metanol, solventes utilizados na produção de biodiesel. Quanto à especificidade aos substratos, a lipase apresentou atividade crescente com o aumento da cadeia acila dos substratos sintéticos, conseguindo atuar em substratos com cadeia superior a 10 carbonos, critério utilizado para classificar uma enzima como lipase. Além disso, ela atuou bem em todos os substratos naturais testados, mostrando sua eficiência para aplicações de digestão de óleos. A lipase foi imobilizada em alginato de cálcio e em quitosana sendo possível uma reutilização da enzima por 6 e 12 vezes consecutivas, respectivamente. Estes resultados mostram que as propriedades físico-químicas da lipase de Myceliophthora sp F 2.1.4 possuem um grande potencial para aplicações industriais / This study aimed to evaluate the production of lipase by the fungi Myceliophthora sp F 2.1.4, by solid-state fermentation (SSF), submerged fermentation (SmF) and semisolid fermentation. Several tests were made in order to obtain the best nutritional media to lipase production. This conditions were tested for SSF, SmF and semisolid fermentation. The results of the tests showed that for SSF it was possible to obtain 21 U/mL of lipase. On the other hand, for SmF, the production declined brusquely having obtained only 0,20 U/mL, indicating that the SSF was more appropriate for the production of lipase by Myceliophthora sp F 2.1.4 than SmF. In addition, for semisolid fermentation, using loofa sponges, the enzymatic production increased again with approximately 9 U/mL. Partial characterization of lipase produced SSF showed that this enzyme has maximum activity in both pH between 5,0 and 7,0 and temperature of 35 ºC, being stable between 35 and 50 ºC and in range of pH 4,0 and 9,0. The enzyme was sensible to SDS, Al 3+ and Hg 2+ , and tolerant to ethanol and methanol, solvent used for biodiesel production. Regarding the substrate specificity, the tests proved that the enzyme studied seems to be a real lipase since it could act in long-chain substrate. Moreover, it acted effectively for all natural substrates tested, being efficient for applications of oil digestion. Lipase was immobilized in alginate of calcium and chitosan, with the possibility of reuse of 6 and 12 consecutive times, respectively. These results imply that the physicochemical properties of lipase produced by Myceliophthora sp F 2.1.4 make it a great potential for industrial applications

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-23Bitstream added on 2014-06-13T19:14:43Z : No. of bitstreams: 1 zanchetta_a_me_sjrp.pdf: 809199 bytes, checksum: 95681c0db779d8f8c76077b27ca4f9e6 (MD5) / O aumento no consumo de combustíveis fósseis e a crescente preocupação ambiental multiplicaram o interesse por tecnologias limpas e de baixo custo, para a obtenção de produtos de valor agregado para as indústrias química, energética e de alimentos. Neste contexto, as enzimas tem sido importantes ferramentas em diversos processos, principalmente no que diz respeito à produção de etanol a partir de materiais lignocelulósicos. Neste trabalho foi avaliado o perfil de produção enzimática dos fungos termofílicos Chaetomium sp. N13, Humicola grisea var. thermoidea e Thermomucor indicae-seudaticae N31 por fermentação em estado sólido (FES) e fermentação submersa (FSm) em bagaço de cana e farelo de trigo (1:1, 1:9 ou 9:1), palha de milho e farelo de trigo (9:1), palha de milho e cevada (9:1), cevada e farelo de trigo (9:1) e, somente farelo de trigo como substratos. No processo de fermentação em estado sólido, a maior produção de xilanase (1569,4 U/g ou 78,5 U/mL) foi obtida por Chaetomium sp. N13 em 240h de cultivo em bagaço de cana e farelo de trigo (1:1). O fungo Humicola grisea var. thermoidea foi o melhor produtor de CMCase (232,8 U/g ou 11,6 U/mL), avicelase (18,1 U/g ou 0,9 U/mL) e beta-glicosidase (124,9 U/g ou 6,2 U/mL) em 240h de cultivo em bagaço de cana e farelo de trigo (1:1), 192h de cultivo em cevada e farelo de trigo (9:1) e 288h de cultivo em bagaço de cana e farelo de trigo (1:9), respectivamente. No processo de fermentação submersa, a maior produção de xilanase (35,4 U/mL) foi obtida por Chaetomium sp. N13 em 96h de cultivo em palha de milho e cevada (9:1). O fungo Humicola grisea var. thermoidea foi o melhor produtor de CMCase (6,4 U/mL) e beta-glicosidase (1,4 U/mL) em 120h de cultivo em bagaço de cana e farelo de trigo (1:1). As produções de avicelase, por Chaetomium... / The increase in the consumption of fossil fuels and the growing environmental concern have increased the interest in clean and low-cost technologies for the obtaining of added value products for chemical, energy and food industries. In this context enzymes have been important tools in several processes, especially regarding to the production of ethanol from lignocellulosic material. This study the profile of enzyme production of the thermophilic fungi Chaetomium sp. N13, Humicola grisea var. thermoidea and Thermomucor indicae-seudaticae N31 by solid state fermentation (SSF) and submerged fermentation (SF) on sugar cane bagasse and wheat bran (1:1, 1:9 or 9:1), maize straw and wheat bran (9:1), straw of maize and barley (9:1), barley and wheat bran (9:1) and only wheat bran as substrates were evaluated. By SSF, the largest production of xylanase (1569,4 U/g or 78.5 U/mL) was obtained by Chaetomium sp. N13 at 240h of cultivation in sugar cane bagasse and wheat bran (1:1). The fungus Humicola grisea var. thermoidea was the best producer of CMCase (232.8 U/g or 11.6 U/mL), avicelase (18.1 U/g or 0.9 U/mL) and beta-glucosidase (124.9 U/g or 6.2 U/mL) at 240h of cultivation in sugar cane bagasse and wheat bran (1:1), 192h of cultivation in barley and wheat bran (9:1) and 288h of cultivation in sugar cane bagasse and wheat bran (1:9), respectively. By SF, the largest production of xylanase (35.4 U/mL) was obtained by Chaetomium sp. N13 at 96h of cultivation in straw of maize and barley (9:1). The fungus Humicola grisea var. thermoidea was the best producer of CMCase (6.4 U/mL) and beta-glucosidase (1.4 U/mL) at 120h of cultivation in sugar cane bagasse and wheat bran (1:1). The productions of avicelase by Chaetomium sp. N13 and Themomucor indicae-seudaticae N31 were similar. The saccharification of sugarcane... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-30Bitstream added on 2014-06-13T20:56:18Z : No. of bitstreams: 1 albano_m_me_sjrp.pdf: 899652 bytes, checksum: 0556dccccf431c3b93be161fdeeb9b15 (MD5) / O interesse mundial pelo aproveitamento de resíduos agroindustriais como fonte renovável para produção de alimentos e biocombustíveis tem aumentado cada vez mais. Os materiais lignocelulósicos (MLCs) são uma fonte rica em polissacarídeos, celulose e hemicelulose, utilizados para o desenvolvimento de tecnologias na produção de álcool, xilose, xilitol, xilooligossacarídeos (XOS), entre outros. Fermentações submersas (FSm) e em estado sólido (FES) foram realizadas utilizando como substrato apenas bagaço de cana-de-açúcar ou suplementado com farelo de trigo, com o objetivo de produzir celulases (CMCase e Avicelase) e xilanases (β-1,4-xilanase e β-xilosidase) por seis fungos filamentosos isolados de bagaço de cana-de-açúcar em trabalhos anteriores. Dentre os estudados, a fermentação submersa (FSm) foi o melhor processo para a produção de xilanases e celulases. Para a produção de β-xilosidase o processo mais eficiente foi a fermentação em estado sólido (FES) . Dentre os microrganismos estudados para a produção de endoglucanases, destacaram-se os fungos filamentosos: U2370 (25,7 U/g), U19 (19,4 U/g) e Aspergillus fumigatus M51 (17,4 U/g), valores bem superiores aos encontrados na FES, cujos maiores destaques foram FS09 e U19 com aproximadamente 13 U/g. Para a produção de avicelase, os destaques foram: U19 (4,6 U/g) em FSM, T. reesei (3,0 U/g) e U2370 (3,8 U/g) todos em FSm. Para a produção de xilanase também os destaques foram todos em FSm: A. fumigatus M51 (1.263 U/g), N51 (1.247 U/g), FS 09 (1.133 U/g) e U 19 (1.129 U/g). Apenas a linhagem 100P (1.000 U/g) foi expressiva em FES. Já a enzima β-xilosidase foi produzida de forma bem mais expressiva apenas pela linhagem N51 (6,6 U/g) em FES. Nessa pesquisa apenas o fungo U19 se destacou para as três atividades (avicelase, xilanase e CMCase), o U2370... / The worldwide interest in the use of agro-industrial residues as a renewable source for food and biofuels production has increased even more. The lignocellulosic materials (MLCs) are a rich source of polysaccharides, cellulose and hemicelluloses, used in developing technology for the production of alcohol, xylose, xylitol and xilooligossacarids (XOS). Submerged fermentation (SmF) and solid state fermentation (SSF were performed using only bagasse cane sugar or supplemented with wheat bran) as substrate, with the goal of producing cellulases (CMCase and Avicelase) and xylanases (β-1, 4-xylanase and β-xylosidase) for six filamentous fungi isolated from crushed sugar cane in previous works. Among the studies, the submerged fermentation (SmF) was the best method for the production of xylanases and cellulases. For the production of β-xylosidase the most efficient process was the solid state fermentation (SSF). Among the microorganisms studied for producing endoglucanases, the most important filamentous fungi is: U2370 (25.7 U/ g), U19 (19.4 U/g) and Aspergillus fumigatus M51 (17.4 U/g), values much higher than those found in FES, whose major activities were FS09 and U19, with approximately 13 U/g. For the production of avicelase, activities were U19 (4.6 U/g) in FSm, T. reesei CCT 2768 (3.0 U/g) and U2370 (3.8 U/g) all in SmF. For the production of xilanases, the best activities were also all in SmF: A. fumigatus M51 (1263 U/g), N51 (1247 U/g), FS 09 (1133 U/g) and U19 (1,129 U/g). Only the strain 100P (1000 U/g) was significant in FES. The enzyme β-xylosidase was produced in a much more expressive only by strain N51 (6.6 U / g) in FES. In this study only the fungus U19 stood out for all three activities (avicelase, xylanase and CMCase), the U2370 is noted only as cellulolytic (avicelase and CMCase), and the N51 was the best producer... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-10Bitstream added on 2014-06-13T19:09:05Z : No. of bitstreams: 1 bueno_gf_me_sjrp.pdf: 579415 bytes, checksum: 31b9b13775e2ba4959f4e1b7b14af1c8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O processamento da mandioca para a produção da farinha ou fécula gera um resíduo líquido denominado manipueira, altamente tóxico, pois possui um glicosídeo que é enzimaticamente hidrolisável a cianeto. Também é altamente poluente devido ao alto teor de matéria orgânica, que pode chegar a 100 g DQO L–1. Este trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência de reatores aeróbios com paradas escalonadas da aeração no tratamento da manipueira. Para tanto, foram utilizados reatores cilíndricos de polietileno tereftalato (31 cm de altura x 9 cm de diâmetro), com capacidade total de 2 litros e 1,5 litros de volume de trabalho, com uma relação diâmetro-altura do líquido de 1:2,5, inoculados com lodo ativado. Foram efetuadas as análises de turbidez, pH, demanda química de oxigênio (DQO), sólidos totais, suspensos e dissolvidos, índice volumétrico de lodo (IVL) e relação alimento/microrganismo (A/M). Os reatores foram operados com tempo de corrida de 24 horas e concentrações de manipueira de aproximadamente 2.500, 6.000 e 10.000 mg DQO L-1. Foram utilizadas paralisações de aeração de 8, 12 e 16 horas, cada uma com três dinâmicas diferentes de tempos de parada. Também operou-se um reator com 19 horas de paralisação da aeração, com apenas uma dinâmica. Os melhores resultados nas dinâmicas de parada dentro dos reatores com DQO de 2.500 mg L-1 foram: com o tempo de 8 horas a variável F16P8, com uma redução média de DQO de 98,4%; com o tempo 12 horas a variável F6P6, que obteve uma redução média de 98,6% e no reator com 16 horas de paralisação a variável F4P8, com uma redução de 91,4%. Estas variáveis foram aplicadas nos reatores com concentração de DQO de 6.000 mg L-1 e o melhor resultado, encontrado nesta concentração, foi o reator com o tempo de parada... / The cassava processing for the flour and/or starch production generates a liquid waste called manipueira, which is highly toxic because of a glycoside enzymatically hydrolysable to cyanide. It is also highly pollutant due the high content of organic matter, which can reach 100 g COD L–1. The objective of this work was to evaluate the efficiency of aerobic reactors with staggered stoppages over the aeration in the manipueira treatment. To this verification, cilindric reactors of polyethylene terephthalate (31 cm in height x 9 cm in diameter) were utilized, with a total capacity of 2.0 liters and 1.5 liters of work volume, a diameter-height relation of 1:2.5 and an inoculation with activated sludge. Analysis of turbidity, pH, COD (Chemical Oxygen Demand), Suspended, Soluble and Total Solids, Sludge Volumetric Index (SVI) and Food to Microrganism (F/M) were effectuated. The reactors were operated with running of 24 hours and manipueira concentrations of aproximately 2,500, 6,000 e 10,000 mg L-1. Aeration stops of 8, 12, 16 hours were utilized, each one with three different stop dynamics. A reactor was also operated with stop aeration of 19 hours with just one dinamic. The best results over the dinamic stops for the reactors with the 2,500 mg L-1 COD were: with the time of 8 hours, the variable F16P8 with an average COD reduction of 98.4%; with the time of 12 hours, the variable F6P6, which obtained an average of 98.6% and in the reactor with 16 hours of paralyzation the variable F4P8 had a reduction of 91.4%. These variables were applied in the reactors with a COD concentration of 6,000 mg L- 1 and a reduction of 86% was the best result found at this concentration to the reactor with the stoppage time of 12 hours with the variable of F6P6. This variable was then applied in the concentration... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:02:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2846.pdf: 2305406 bytes, checksum: bdcfa4a73d44c510ec83c2cb9347cfaf (MD5) Previous issue date: 2009-12-11 / The need for new and useful compounds to provide assistance and relief in all aspects of human condition is ever-growing. Drug resistance in bacteria, the appearance of life-threatening viruses, and the increase in the incidence of fungal infections in the world s population all underscore our inadequacy to cope with these medical problems. Endophytic microorganisms that colonize internal tissues of plants without causing any negative effects are relatively unstudied as potential sources of novel natural products for medical and commercial exploitation. The Streptomycetes provide nearly 80% of all the world s antibiotics produced. The aim of this work was to investigate the Brazilian tropical savannah tree Solanum lycocarpum St. Hill (Lobeira) in São Carlos, in order to isolate the endophytic microorganisms associated with the plant, separating and purifying the bioactives substances produced by the endophytic microorganism. The bioactivity of S. tubercidicus against pathogenic microorganisms was analyzed. The obtained results point out the antagonistic potential of the endophytic isolated against microorganisms of interest in Public Health. The brute extract fresh produced by S. tubercidicus RND-C it presented antimicrobial potential maximum of 200 UA.mL-1 against Escherichia coli ATCC 25922 and Staphylococcus aureus ATCC 25923 after 48 h of cultivation; The bioactive substances produced by S. tubercidicus were submitted to different thermal and enzymatic treatments and pH variation to be determined the nature of the bioactive compounds. After it being submitted to enzymatic treatment with amylase and pepsin, the concentrated extract stayed bioactive, suggesting the lipidic and no-prothein nature of the bioactive substances. Already the active compounds against E. coli suggests the presence of a substance of glycidic and lipidic nature, due to resistance to the action of the enzyme invertase and lipase, respectively, suggesting that the substances contained in the brute extract of S. tubercidicus RND-C against E.coli can be a ´glycolipid. The concentrated extract stayed active biologically when exposed to lower (-20 and -80 ºC) and high (100 and 121 ºC) temperatures, suggesting that the bioactive compounds produced are not subject to spontaneous degradation. The extract stayed active against E. coli in acidity conditions (pH, 2,0 - 5,0) and it also presented bioactivity in pH 7,0 and 8,0. In conditions of high alkalinity (pH 9,0) bioactivity was not detected. Already against S. aureus, the extract stayed assets in the strip of pH 7,0. In conditions of acidity and alkalinity the bioactive substances produced by S. tubercidicus were inactivated. The molar mass of the substances was esteemed in minor than 3,0KDa. The bioactive molecules contained in the concentrated extract produced by S. tubercidicus RNC-C were purified and separated by bio monitoring analyzes, suggesting the presence of two different substances. The evaluation of the separation using a hight performance liquid chromatography (HPLC), suggests the existence of two different substances produced by S. tubercidicus, one being active against S. aureus and the other one active against E.coli and S. aureus. In the separation by using reverse-phase chromatography (Sep-Pak), were obtained four fractions (St. 1, St. 2, St. 3 and St. 4). The fractions St. 2 and St. 4 presented antimicrobial activity against bacteria and they were purified separately by Sephadex LH-20 Gel permeation chromatography obtaining the fractions St. 2-A; St. 2- B; St. 4-A and St. 4-B. The fractions St. 2-B was activity against S. aureus. Already the fractions St. 4-B was activity against S. aureus and E. coli. These results suggest the presence of two different substances. This work intends to contribute for understanding the interactions of endophitic and plants besides opening new perspectives on the biotechnological potential of the endophitics microorganisms of plants. The investigation of new composed assets biologically starting from microorganisms brings important contributions for the discovery of new drugs. / O aumento da incidência de doenças bacterianas, virais e fúngicas enfatiza a necessidade de investigar a produção microbiana de novos compostos bioativos. Microrganismos endofíticos que colonizam tecidos internos de plantas são relativamente pouco estudados como fontes potenciais de novos produtos naturais para a exploração médica e comercial. O gênero Streptomyces tem grande importância industrial devido à capacidade de produzir muitos metabólitos secundários, respondendo por 80% dos antibióticos utilizados atualmente. Com base neste contexto, o objetivo deste trabalho foi isolar Streptomyces spp., endofítico de plantas do Cerrado, da região de São Carlos, SP, separando e purificando as substâncias bioativas produzidas pelo isolado. O endofítico Streptomyces tubercidicus foi isolado de Solanum lycocarpum St. Hill (Lobeira) relatando, pela primeira vez, o endofitismo da bactéria isolada a partir de vegetação de Cerrado de São Carlos. A bioatividade de S. tubercidicus foi avaliada e os resultados obtidos ressaltam o potencial antagônico do endofítico isolado contra microrganismos de interesse em Saúde Pública, se constituindo em uma fonte promissora para a pesquisa de novos compostos bioativos. O extrato bruto fresco produzido por S. tubercidicus RND-C apresentou potencial antimicrobiano máximo de 200 UA.mL-1 contra Escherichia coli ATCC 25922 e Staphylococcus aureus ATCC 25923 após 48 h de cultivo; As substâncias bioativas produzidas por S. tubercidicus foram submetidas a diferentes tratamentos térmicos, enzimáticos e variação de pH para determinação da natureza dos compostos bioativos. Após ter sido submetido a tratamento enzimático com amilase e pepsina, o extrato concentrado manteve-se bioativo, sugerindo a natureza lipídica e nãoproteinácea das substâncias bioativas. Já o composto ativo contra E. coli sugere a presença de substância de natureza glicídica e lípidica, devido a resistência à ação da enzima invertase e lipase, respectivamente, sugerindo que as substâncias contidas no extrato bruto de S. tubercidicus RND-C contra E.coli pode ser um glicolipídio. O extrato concentrado manteve-se biologicamente ativo quando exposto a baixas (-20 e -80 ºC) e elevadas (100 e 121 ºC) temperaturas, sugerindo que os compostos bioativos produzidos não são sujeitos a degradação espontânea. O extrato manteve-se ativo contra E. coli em condições de acidez (pH, 2,0 5,0) e também apresentou bioatividade em pH 7,0 e 8,0. Em condições de alta alcalinidade (pH 9,0) não detectou-se bioatividade. Já contra S. aureus, o extrato manteve-se ativo apenas na faixa de pH 7,0. Em condições de acidez e acalinidade as substâncias bioativas produzidas por S. tubercidicus foram inativadas. A massa molar dos compostos bioativos produzidos por S. tubercidicus RND-C foram estimadas em menor que 3,0 kDa. As moléculas bioativas contidas no extrato concentrado produzidas por S. tubercidicus RND-C foram purificadas por separação biomonitorada, sugerindo a presença de duas substâncias diferentes. A avaliação da separação usando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) sugere a existência de duas substâncias diferentes produzidas por S. tubercidicus, sendo duas ativas contra S. aureus e a outra ativa contra E.coli e S. aureus. Na separação por cromatografia em coluna pré-empacotada de fase reversa do tipo Sep-Pak, foram obtidas quatro frações (St. 1, St. 2, St. 3 e St. 4). As frações St. 2 e St. 4 apresentaram atividade antimicrobiana contra bactérias e foram purificadas separadamente por cromatografia de permeação em gel de Sephadex LH-20 obtendo as frações St. 2-A; St. 2-B; St. 4-A e St. 4-B. A fração St. 2-B foi ativa contra S. aureus. Já a fração St. 4-B foi ativa contra S. aureus e E. coli. Estes resultados sugerem a presença de duas substâncias diferentes. Este trabalho pretende contribuir para a compreensão das interações endófitos/plantas além de abrir novas perspectivas sobre o potencial biotecnológico dos microrganismos endofíticos de plantas. A investigação de novos compostos biologicamente ativos a partir de microrganismos traz importantes contribuições para a descoberta de novas drogas.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2477.pdf: 853103 bytes, checksum: cf8d502909db7590755b118f3a0c49b5 (MD5) Previous issue date: 2008-08-28 / Universidade Federal de Minas Gerais / A great deal of microbiological and genetic research in the pharmaceutical industry is directed towards the development of effective strategies in the handling of microorganisms seeking the production of antibiotics that already known. In the process of obtaining clavulanic acid (CA) from Streptomyces clavuligerus, it is necessary to implement a system of strain conservation to maintain the capacity of microorganisms. Therefore, the purpose of this study was to test different preservation strategies of spores and vegetative cells of S. clavuligerus ATCC 27064 in order to ensure optimum conditions for the production of CA. Eight sets of vegetative cells stored in cryotubes were prepared, and they were evaluated for 12 months according to the number of growth stages (one or two 24-hour stages), the influence of the mycelium washing stage (washed or not), and the concentration of the cryoprotective agents (glycerol 10 or 20% v/v). Two sets of spores stored in cryotubes were also evaluated according to the concentration of cryoprotective agents. All cultures were performed in a rotating table incubator using the culture medium ISP1 for reactivation and complex medium for the production of CA. Morphology, cell growth, and the production of CA were evaluated in all cultures. The major findings were that the conservation of spores with 10% glycerol (E-10) allowed a more viable condition that the E-20 during the 360 days of storage, and the loss of CA production after 360 days was 18% but the condition E-20 was 50%. CL1-20 and CL2-20 were the best preservation conditions (more stable) for vegetative cells stored in cryotubes. Regarding the production of CA obtained, the maximum value was 1300 mg.L-1 at 144 h in the CNL 2-20 preservation condition. / Muitas pesquisas microbiológicas e genéticas na indústria farmacêutica são direcionadas para o desenvolvimento de estratégias eficazes na manipulação de microrganismos, visando à produção de antibióticos conhecidos. No processo de obtenção de ácido clavulânico (AC) a partir de Streptomyces clavuligerus faz necessário à implementação de um sistema de conservação da linhagem para manter a capacidade do microrganismo em questão. Baseado neste propósito o objetivo deste trabalho foi testar diferentes estratégias de preservação nas formas de esporos e células vegetativas de S. clavuligerus ATCC 27064 para garantir condições ótimas de produção de AC. Foram preparados 8 conjuntos de criotubos de células vegetativas e avaliados durante 12 meses em relação ao número de etapas de crescimento (uma ou duas etapas de 24 horas), à influência da etapa de lavagem do micélio (lavados ou não) e a concentração do agente crioprotetor (glicerol 10 ou 20% v/v). Dois conjuntos de criotubos de esporos também foram avaliados em relação à concentração do agente crioprotetor. Todos os cultivos foram realizados em mesa incubadora rotativa utilizando-se o meio de cultura ISP1 para reativação e, meio complexo para produção de AC. Avaliou-se em todos os cultivos a morfologia, o crescimento celular, e a produção de AC. Como resultados principais obteve-se que à conservação de esporos com 10% de glicerol permitiu uma viabilidade maior que a condição E-20 durante os 360 dias de armazenamento, sendo que a perda de produção de AC após 360 dias foi de 18% em comparação com a condição E-20 que foi de 50%. As formas de preservação CL1-20 e CL2-20 foram as melhores condições de preservação (mais estável) entre os criotubos preservados na forma de células vegetativas. Em relação às produções de AC obtidas, o valor máximo alcançado foi de 1300 mg.L-1 em 144 h, no modo de preservação CNL 2-20.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2376.pdf: 4470220 bytes, checksum: 644c37c19e76d1210fdcb9459057052a (MD5) Previous issue date: 2008-12-18 / Financiadora de Estudos e Projetos / The clavulanic acid is a powerful inhibitor of the beta-lactamases produced by bacterias resistants to penicillin and cefalosporin. This acid is produced industrially by strains of Streptomyces clavuligerus in complex medium whose carbon and nitrogen source are supplied by inexpensive substances that provide high production. The clavulanic acid has a high affinity for enzymes that attach to penicillin derivatives, what enable to be used with semi-synthetic penicillin, being the combination with amoxilin the best exemple of substances inhibitor of beta-lactamases. The genetic improvement using physical and chemical agents is a necessary strategy in programs of production of bioactive metabolit whereas the industrial strains lost its productivity due phenomenon of genetic instability. In this work it appraised morphologic and biochemistry characteristic of some mutant strains obtained by treatment with UV light and with MMS, always comparing the caracteristics of the mutants with the wild type (Streptomyces clavuligerus ATCC 27064). The results indicated that the mutations originated strains with differents phenotypes, and the larger changes were demonstrated through mutants strains AC116, MMS 150 and MMS 54, that exhibited absence of pigmentation in its mature spores. The strains MMS 150 presented a larger production of AC when cultured in semisynthetics mediums. Among the others mediums the wild type strain obtained a larger production, however when used the modifed complex medium, the MMS 150 strain showed changes in its lipolitic activity and a larger production of AC. / O ácido clavulânico é um poderoso inibidor de enzimas -lactamases produzidas por bactérias resistentes a penicilinas e cefalosporinas. Esse ácido é produzido industrialmente através de cultivos submersos de Streptomyces clavuligerus, em meios complexos cujas fontes de carbono e de nitrogênio são supridas por matérias primas de baixo custo que propiciam altas produtividades. O ácido clavulânico mostra uma grande afinidade por enzimas que se ligam a derivados da penicilina, facilitando a sua utilização frequente com penicilinas semi-sintéticas, sendo a combinação com a amoxicilina o melhor exemplo do uso de substâncias inibidoras de beta-lactamases. O melhoramento genético utilizando agentes físicos e químicos é uma estratégia necessária em programas de produção de metabólitos bioativos já que as linhagens de porte industrial perdem sua produtividade devido a fenômenos de instabilidade genética. Neste trabalho foram avaliadas características morfológicas e bioquímicas de algumas linhagens mutantes obtidas por tratamento com luz UV e com metil metano sulfonato, comparando sempre as características dos mutantes com as da linhagem selvagem (Streptomyces clavuligerus ATCC 27064). Os resultados indicaram que as mutações deram origem a linhagens fenotipicamente diferentes, sendo que as maiores mudanças foram demonstradas pelas linhagens mutantes AC116, MMS 150 e MMS 54, que apresentaram ausência de pigmentação dos seus esporos maduros. A linhagem MMS 150 apresentou uma maior produção de AC diante os cultivos realizados com os meios de cultura semi-sintéticos. Perante os outros meios de cultura a linhagem selvagem obteve uma maior produção, porém quando utilizado o meio de cultura complexo modificado, a linhagem MMS 150 apresentou mudanças na sua atividade lipolítica e uma maior produção de AC.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-02Bitstream added on 2014-06-13T18:47:36Z : No. of bitstreams: 1 aquino_plm_me_sjrp.pdf: 528292 bytes, checksum: 19f5670b2dc7ea09762a3927055f84a8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Not available