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Contribuição da genética de populações à investigação sobre o tráfico de fauna no Brasil: desenvolvimento de microssatélites e análise da estrutura genética em Paroaria dominicana e Saltator similis (Aves: Passeriformes: Thraupidae) / Contribution of population genetics to investigation efforts on wildlife trafficking in Brazil: development of microssatelites and analysis of the genetic structure of Paroaria dominicana and Saltator similis(Aves: Passeriformes: Thraupidae)Ferreira, Juliana Machado 13 August 2012 (has links)
O comércio ilegal de fauna é hoje uma das principais ameaças aos animais silvestres brasileiros, junto com a perda e degradação de habitats. O grupo pelo qual existe maior demanda é o das aves, principalmente as canoras. Paralelamente, o número de apreensões de aves provenientes do comércio ilegal tem crescido a cada ano. Apesar de um grande número de indivíduos não sobreviver, dos que sobrevivem, muitos são recuperados e estão, em teoria, aptos a voltarem à vida livre. Contudo, esforços de repatriação devem ser vistos com extrema cautela, já que grandes prejuízos podem ser trazidos para as populações naturais se inseridos nelas indivíduos de grupos genéticos diferentes. Com isso, tornam-se extremamente necessários estudos demográficos e de estrutura genética de espécies com grande demanda no comércio ilegal. Além de auxiliar tomadas de decisões sobre possíveis esforços de repatriação, estes estudos contribuirão com o maior conhecimento das espécies. Este projeto teve como objetivo o estudo da genética de populações de quatro espécies de passeriformes sabidamente de grande interesse para o comércio ilegal, procurando abranger a maior área possível de suas distribuições: o azulão (Cyanoloxia brissonii), o trinca-ferro (Saltator similis), o galo-da-campina (Paroaria dominicana) e o pixoxó (Sporophila frontalis). Foram realizadas 19 viagens a campo, coletadas 522 amostras (entre amostras de apreensão e de populações naturais) e outras foram obtidas por colaboração com diversas instituições. Foram construídas quatro bibliotecas genômicas com o intuito de desenvolver oligonucleotídeos iniciadores (primers) de marcadores microssatélites espécie-específicos, que foram posteriormente testados para as outras três espécies. Partido de mais de 700 clones sequenciados, foram descritos oito locos informativos para P. dominicana, nove para S. similis, sete para C. brissonii e quatro para S. frontalis. Por conta de dificuldade de obtenção de amostragens representativas, as análises populacionais foram realizadas com P. dominicana e S. similis. As análises de estrutura genética populacional (com 74 amostras) indicaram estruturação populacional sutil, porém significativa (p<0.01) para P. dominicana, com a descrição de três clusters: (1) nordeste, que englobou as localidades de coleta Paraíba, Trindade e Petrolina, e apresentou heterozigose observada (Ho) média de 0.736 e heterozigose esperada (He) média de 0.753; (2) sudoeste, composto pelas localidades Parnaguá, Beira Rio e Vitória da Conquista, com Ho 0.624 e He 0.731; e (3) leste, composto por Canudos e Feira de Santana, Ho 0.750 e He 0.768. A presença de estrutura genética nos marcadores nucleares e ausência no DNA mitocondrial (observada em estudos anteriores) podem indicar que existe filopatria dos machos e dispersão diferencial em P. dominicana. O teste kg não identificou sinal de expansão populacional, portanto, a hipótese de expansão populacional recente da espécie com base na expansão da Caatinga datada de quinze mil anos não foi corroborada. Foram encontrados sinais significativos de gargalo populacional recente com dois testes diferentes (Bottleneck e M-ratio) condizentes com a ocupação e degradação da Caatinga e a super-exploração da espécie nos últimos 200 anos. Além disso, os resultados permitiram o surgimento de uma nova hipótese, interessante para ser tratada em trabalhos futuros: um possível corredor de fluxo gênico entre os clusters nordeste e sudoeste, ao longo do Rio São Francisco. Por fim, foram também realizados testes de atribuição com 49 amostras de indivíduos da espécie provenientes de apreensões de fauna comercializada ilegalmente em São Paulo e todas foram atribuídas com probabilidade que variou de a 0.554 e 0.713 ao cluster nordeste. Essa tendência é relevante, e deverá ser levada em conta tanto para esforços de prevenção do tráfico da espécie, quanto o desenvolvimento de planos de repatriacão dos indivíduos apreendidos. Contudo, vale mencionar que, mesmo sempre sendo de suma importância que indivíduos apreendidos e reabilitados sejam soltos o mais próximo possível de sua real população de origem, dificilmente a mistura entre indivíduos de clusters diferentes levaria a uma depressão por exocruzamento. Não foi encontrada estrutura genética populacional significativa para S. similis (66 amostras) nem com a análise de diferenciação com populações definidas a priori, e nem através de duas análises de partição de amostras (análise discriminante de componentes principais e a realizada pelo Structure, baseada em algoritmo Bayesiano). Logo, não foi possível refutar a hipótese nula de pan-mixia. A espécie apresentou heterozigose média observada 0.643 enquanto que a esperada foi de 0.757. Os altos níveis de Hardy-Weinberg detectados sugerem que o cenário observado possa ser devido a efeitos demográficos. Os testes kg não identificaram sinal de expansão populacional recente. Entretanto, dois testes de gargalo populacional (Bottleneck e M-ratio) indicaram sinais de redução populacional recente, condizentes com a maior ocupação e degradação da Mata Atlântica e do Cerrado nos últimos 200 anos. A variação nos dialetos do canto observada para a espécie provavelmente está ligada à propagação do som nos diferentes ambientes e não a um isolamento genético entre populações. A ausência de estrutura genética permite afirmar que a probabilidade de ocorrência de depressão por exocruzamento causada por fluxo gênico entre indivíduos de origens diferentes é praticamente nula para S. similis / Wildlife trafficking is a major threat to Brazilian biodiversity, with millions of specimens withdrawn from nature every year to supply the consumer markets. In Brazil, the pet trade generates a major demand for birds. After seizure from the illegal trade, rehabilitation and release is one way of mitigating the negative impacts on wild bird populations, but those releases could create more problems for the natural populations. Knowledge of the species\' genetic structure is crucial to help avoid the possibility of outbreeding depression and to guide responsible releases. This project´s main goal was the study of the genetic structure of four passerine species, among the most trafficked birds in Brazil: ultramarine grosbeak (Cyanoloxia brissonii), green-winged saltator (Saltator similes), red-cowled cardinal (Paroaria dominicana) and buffy-fronted seedeater (Sporophila frontalis). We obtained 522 tissue/blood samples (from individuals with known orginin as well as those seized from the ilegal trade) both in field work trips and through collaboration with various institutions. We built four species-specific genomic libraries, all of which were cross-tested in the other three sepcies. From over 700 sequenced clones, we developed eight informative microsatellite loci for P. dominicana, nine for S. similes, seven for C. brissonii and four for S. frontalis. Genetic structure analyzes were performed only for P. dominicana and S. similis due to the difficulty of obtaining representative samples for the other two species. Data was analyzed both with and without a priori definition of populations using discriminant analysis of principal components, Bayesian clustering algorithms, and fixation indices. Genetic structure of P. dominicana was inferred using 71 samples with known origin and subtle but significant (p<0.01) genetic structure was found, with the description of three clusters: (1) northeast, which encompass the sampling localities of Paraíba, Trindade e Petrolina, with mean observed heterozigosity (Ho) of 0.736 and mean expected heterozigosity (He) of 0.753; (2) southwest, which encompass the localites Parnaguá, Beira Rio e Vitória da Conquista, with Ho 0.624 and He 0.731; and (3) east, which encompass Canudos and Feira de Santana, with Ho 0.750 and He 0.768. Occurrence of outbreeding depression for this species is unlikely due to high gene flow among clusters. The presence of genetic structure for nuclear markers not detected for mtDNA (previous studies) indicates male philopatry and different dispersion patterns between male and females. No population expansion signal was detected using kg tests, which precludes us from corroborating a previously proposed hypothesis of population expansion congruent with the Caating expansion 15 thousand years ago. Two tests (Bottleneck e M-ratio) indicated the occurrence of recent population bottlenecks for P. dominicana, which can be explained by the intense occupation, habitat degradation and over-exploitation of the Caatinga in the last 200 years. We also propose a new hypothesis, to be tested in future studies: the existence of a dispersion route along the Sao Francisco river, promoting gene flow between northeast and southwest clusters. Furthermore, we performed assignment tests in 49 samples from specimens seized from the illegal trade in Sao Paulo. All of them were assigned to the same \"northeast\" cluster with probability 0.554-0.713, showing a clear trend and a relevant result which corroborates police intelligence information. For S. similis, no significant genetic structure was detected (using 66 samples), so we could not refut the pan-mixia null hypothesis. Although this species\' range is a large, and now fragmented area, the possibility of outbreeding depression resulting from mixing populations is higly unlikely, which does not preclude consideration of other characteristics prior to release into the wild. The observed heterozigosity was 0.643 while the expected was 0.757. High levels of deviations from Hardy-Weinberg equilibrium may be due to population fluctuations. No population expansion signal was detected (kg test), but two tests (Bottleneck e M-ratio) indicate the occurrence of recent population bottlenecks, which could be related to the intense occupation, habitat degradation and over-exploitation of the Cerrado and Atlantic Forest in the last 200 years. Variation in song dialects observed in this species is probably related to characteristics of sound propagation in different environments, rather than to genetic isolation. Knowledge of genetic structure is one of the most important steps towards intelligent management of rehabilitated seized animals
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Contribuição da genética de populações à investigação sobre o tráfico de fauna no Brasil: desenvolvimento de microssatélites e análise da estrutura genética em Paroaria dominicana e Saltator similis (Aves: Passeriformes: Thraupidae) / Contribution of population genetics to investigation efforts on wildlife trafficking in Brazil: development of microssatelites and analysis of the genetic structure of Paroaria dominicana and Saltator similis(Aves: Passeriformes: Thraupidae)Juliana Machado Ferreira 13 August 2012 (has links)
O comércio ilegal de fauna é hoje uma das principais ameaças aos animais silvestres brasileiros, junto com a perda e degradação de habitats. O grupo pelo qual existe maior demanda é o das aves, principalmente as canoras. Paralelamente, o número de apreensões de aves provenientes do comércio ilegal tem crescido a cada ano. Apesar de um grande número de indivíduos não sobreviver, dos que sobrevivem, muitos são recuperados e estão, em teoria, aptos a voltarem à vida livre. Contudo, esforços de repatriação devem ser vistos com extrema cautela, já que grandes prejuízos podem ser trazidos para as populações naturais se inseridos nelas indivíduos de grupos genéticos diferentes. Com isso, tornam-se extremamente necessários estudos demográficos e de estrutura genética de espécies com grande demanda no comércio ilegal. Além de auxiliar tomadas de decisões sobre possíveis esforços de repatriação, estes estudos contribuirão com o maior conhecimento das espécies. Este projeto teve como objetivo o estudo da genética de populações de quatro espécies de passeriformes sabidamente de grande interesse para o comércio ilegal, procurando abranger a maior área possível de suas distribuições: o azulão (Cyanoloxia brissonii), o trinca-ferro (Saltator similis), o galo-da-campina (Paroaria dominicana) e o pixoxó (Sporophila frontalis). Foram realizadas 19 viagens a campo, coletadas 522 amostras (entre amostras de apreensão e de populações naturais) e outras foram obtidas por colaboração com diversas instituições. Foram construídas quatro bibliotecas genômicas com o intuito de desenvolver oligonucleotídeos iniciadores (primers) de marcadores microssatélites espécie-específicos, que foram posteriormente testados para as outras três espécies. Partido de mais de 700 clones sequenciados, foram descritos oito locos informativos para P. dominicana, nove para S. similis, sete para C. brissonii e quatro para S. frontalis. Por conta de dificuldade de obtenção de amostragens representativas, as análises populacionais foram realizadas com P. dominicana e S. similis. As análises de estrutura genética populacional (com 74 amostras) indicaram estruturação populacional sutil, porém significativa (p<0.01) para P. dominicana, com a descrição de três clusters: (1) nordeste, que englobou as localidades de coleta Paraíba, Trindade e Petrolina, e apresentou heterozigose observada (Ho) média de 0.736 e heterozigose esperada (He) média de 0.753; (2) sudoeste, composto pelas localidades Parnaguá, Beira Rio e Vitória da Conquista, com Ho 0.624 e He 0.731; e (3) leste, composto por Canudos e Feira de Santana, Ho 0.750 e He 0.768. A presença de estrutura genética nos marcadores nucleares e ausência no DNA mitocondrial (observada em estudos anteriores) podem indicar que existe filopatria dos machos e dispersão diferencial em P. dominicana. O teste kg não identificou sinal de expansão populacional, portanto, a hipótese de expansão populacional recente da espécie com base na expansão da Caatinga datada de quinze mil anos não foi corroborada. Foram encontrados sinais significativos de gargalo populacional recente com dois testes diferentes (Bottleneck e M-ratio) condizentes com a ocupação e degradação da Caatinga e a super-exploração da espécie nos últimos 200 anos. Além disso, os resultados permitiram o surgimento de uma nova hipótese, interessante para ser tratada em trabalhos futuros: um possível corredor de fluxo gênico entre os clusters nordeste e sudoeste, ao longo do Rio São Francisco. Por fim, foram também realizados testes de atribuição com 49 amostras de indivíduos da espécie provenientes de apreensões de fauna comercializada ilegalmente em São Paulo e todas foram atribuídas com probabilidade que variou de a 0.554 e 0.713 ao cluster nordeste. Essa tendência é relevante, e deverá ser levada em conta tanto para esforços de prevenção do tráfico da espécie, quanto o desenvolvimento de planos de repatriacão dos indivíduos apreendidos. Contudo, vale mencionar que, mesmo sempre sendo de suma importância que indivíduos apreendidos e reabilitados sejam soltos o mais próximo possível de sua real população de origem, dificilmente a mistura entre indivíduos de clusters diferentes levaria a uma depressão por exocruzamento. Não foi encontrada estrutura genética populacional significativa para S. similis (66 amostras) nem com a análise de diferenciação com populações definidas a priori, e nem através de duas análises de partição de amostras (análise discriminante de componentes principais e a realizada pelo Structure, baseada em algoritmo Bayesiano). Logo, não foi possível refutar a hipótese nula de pan-mixia. A espécie apresentou heterozigose média observada 0.643 enquanto que a esperada foi de 0.757. Os altos níveis de Hardy-Weinberg detectados sugerem que o cenário observado possa ser devido a efeitos demográficos. Os testes kg não identificaram sinal de expansão populacional recente. Entretanto, dois testes de gargalo populacional (Bottleneck e M-ratio) indicaram sinais de redução populacional recente, condizentes com a maior ocupação e degradação da Mata Atlântica e do Cerrado nos últimos 200 anos. A variação nos dialetos do canto observada para a espécie provavelmente está ligada à propagação do som nos diferentes ambientes e não a um isolamento genético entre populações. A ausência de estrutura genética permite afirmar que a probabilidade de ocorrência de depressão por exocruzamento causada por fluxo gênico entre indivíduos de origens diferentes é praticamente nula para S. similis / Wildlife trafficking is a major threat to Brazilian biodiversity, with millions of specimens withdrawn from nature every year to supply the consumer markets. In Brazil, the pet trade generates a major demand for birds. After seizure from the illegal trade, rehabilitation and release is one way of mitigating the negative impacts on wild bird populations, but those releases could create more problems for the natural populations. Knowledge of the species\' genetic structure is crucial to help avoid the possibility of outbreeding depression and to guide responsible releases. This project´s main goal was the study of the genetic structure of four passerine species, among the most trafficked birds in Brazil: ultramarine grosbeak (Cyanoloxia brissonii), green-winged saltator (Saltator similes), red-cowled cardinal (Paroaria dominicana) and buffy-fronted seedeater (Sporophila frontalis). We obtained 522 tissue/blood samples (from individuals with known orginin as well as those seized from the ilegal trade) both in field work trips and through collaboration with various institutions. We built four species-specific genomic libraries, all of which were cross-tested in the other three sepcies. From over 700 sequenced clones, we developed eight informative microsatellite loci for P. dominicana, nine for S. similes, seven for C. brissonii and four for S. frontalis. Genetic structure analyzes were performed only for P. dominicana and S. similis due to the difficulty of obtaining representative samples for the other two species. Data was analyzed both with and without a priori definition of populations using discriminant analysis of principal components, Bayesian clustering algorithms, and fixation indices. Genetic structure of P. dominicana was inferred using 71 samples with known origin and subtle but significant (p<0.01) genetic structure was found, with the description of three clusters: (1) northeast, which encompass the sampling localities of Paraíba, Trindade e Petrolina, with mean observed heterozigosity (Ho) of 0.736 and mean expected heterozigosity (He) of 0.753; (2) southwest, which encompass the localites Parnaguá, Beira Rio e Vitória da Conquista, with Ho 0.624 and He 0.731; and (3) east, which encompass Canudos and Feira de Santana, with Ho 0.750 and He 0.768. Occurrence of outbreeding depression for this species is unlikely due to high gene flow among clusters. The presence of genetic structure for nuclear markers not detected for mtDNA (previous studies) indicates male philopatry and different dispersion patterns between male and females. No population expansion signal was detected using kg tests, which precludes us from corroborating a previously proposed hypothesis of population expansion congruent with the Caating expansion 15 thousand years ago. Two tests (Bottleneck e M-ratio) indicated the occurrence of recent population bottlenecks for P. dominicana, which can be explained by the intense occupation, habitat degradation and over-exploitation of the Caatinga in the last 200 years. We also propose a new hypothesis, to be tested in future studies: the existence of a dispersion route along the Sao Francisco river, promoting gene flow between northeast and southwest clusters. Furthermore, we performed assignment tests in 49 samples from specimens seized from the illegal trade in Sao Paulo. All of them were assigned to the same \"northeast\" cluster with probability 0.554-0.713, showing a clear trend and a relevant result which corroborates police intelligence information. For S. similis, no significant genetic structure was detected (using 66 samples), so we could not refut the pan-mixia null hypothesis. Although this species\' range is a large, and now fragmented area, the possibility of outbreeding depression resulting from mixing populations is higly unlikely, which does not preclude consideration of other characteristics prior to release into the wild. The observed heterozigosity was 0.643 while the expected was 0.757. High levels of deviations from Hardy-Weinberg equilibrium may be due to population fluctuations. No population expansion signal was detected (kg test), but two tests (Bottleneck e M-ratio) indicate the occurrence of recent population bottlenecks, which could be related to the intense occupation, habitat degradation and over-exploitation of the Cerrado and Atlantic Forest in the last 200 years. Variation in song dialects observed in this species is probably related to characteristics of sound propagation in different environments, rather than to genetic isolation. Knowledge of genetic structure is one of the most important steps towards intelligent management of rehabilitated seized animals
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Análise das alterações genéticas e epigenéticas dos tumores gástricos infectados por Helicobacter pylori e v rus Epstein-BarrFerrasi, Adriana Camargo [UNESP] January 2007 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2007Bitstream added on 2014-06-13T20:01:07Z : No. of bitstreams: 1
ferrasi_ac_dr_rcla.pdf: 1030993 bytes, checksum: 9a0fbcc4634e2697322fd343cddaa074 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Gastric cancer (GC) is one of the most common cancer types and it is associated with high mortality frequencies. Although a decrease in the worldwide incidence is observed, the prognosis of this disease still remains poor, mainly when the diagnosis is carried out at advanced stages. Recent evidences have identified DNA methylation as an important mechanism for tumor suppressor gene inactivation. Helicobacter pylori infection is considered one of the most important etiological factors and the CagA gene is associated with more severe pathologies including cancer. Likewise, EBV is another infectious agent that has been associated with gastric carcinoma in at least 10% of the cases. In this study, we determined the promoter methylation status of the CDH1, DAPK, COX2, hMLH1 and CDKN2A and MSI frequency in 89 primary gastric carcinomas and correlated the findings with the presence of H. pylori and EBV infections and also with clinicopathological features of gastric carcinomas. COX2 was the most frequently hypermethylated gene (63.5%) in these patients, followed by DAPK (55.7%), CDH1 (51%), CDKN2A (36%) and hMLH1 (30.3%). In this study, MSI was correlated with hMLH1 methylation, as shown before, and there was an inverse correlation between DAPK hypermethylation and MSI. Also, MSI was inversely correlated with H. pylori CagA+, providing new evidence for the association of MSI and better prognosis.
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Estudo comparativo da variabilidade genética de Plasmodium vivax provenientes de infecções primárias e episódios de recaída após tratamento com Primaquina e CloroquinaAraújo, Flávia Carolina Faustino de January 2012 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-09-11T14:28:57Z
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FlaviaCarolinaFaustinoAraujo_Estudo comparativo da variabilidade genetica de plasmodium vivax provenientes de infecções primarias e episódios de recaída após tratamento com Primaquina e Cloroquina_2012.pdf: 1462963 bytes, checksum: ef871e04e689d7f6a46a593ebf6d70a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-11T14:28:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1
FlaviaCarolinaFaustinoAraujo_Estudo comparativo da variabilidade genetica de plasmodium vivax provenientes de infecções primarias e episódios de recaída após tratamento com Primaquina e Cloroquina_2012.pdf: 1462963 bytes, checksum: ef871e04e689d7f6a46a593ebf6d70a8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Fundação de Amparo à Pesquisa de Minas Gerais (FAPEMIG)
Rede malária Pronex – CNPq, MS-DECIT, Fapemig, Fapemat, Faperj Centro de Pesquisas René Rachou / A malária humana é causada por protozoários do gênero Plasmodium.
Aproximadamente 40% da população mundial encontra-se em risco de infecção. No Brasil foram registrados 333.339 casos da doença em 2010, sendo 85% deles causados pelo Plasmodium vivax. O P. vivax apresenta uma característica importante em seu ciclo de vida, a possibilidade de desenvolver formas latentes no fígado, os hipnozoítos, que podem causar episódios de recaída. Pouco se sabe a respeito dos mecanismos de latência e ativação dos hipnozoítos. Porém dados da
literatura relatam uma correlação entre cepa do parasito e padrão de recaída, sugerindo uma programação genética dos parasitos. A escassez de marcadores genéticos para P. vivax tem dificultado as análises de importantes fenótipos do parasito, tais como os padrões de recaídas. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi estudar a variabilidade dos parasitos presentes nas infecções primárias e nos episódios de recaída. Sessenta e cinco amostras pareadas de 30 pacientes foram genotipadas utilizando 10 marcadores moleculares (08 microssatélites e os blocos 2 e 10 da MSP-1) através de eletroforese capilar em sequenciador automático de DNA. Além disso, a presença de infecção múltipla nos pacientes foi confirmada através da clonagem dos fragmentos amplificados e genotipagem a
partir de diferentes colônias. Na análise baseada nos alelos predominantes foi
demonstrado que os parasitos da recaída são principalmente heterólogos em relação à infecção primária e que geralmente ocorre uma flutuação entre os alelos predominantes nos diferentes episódios do indivíduo. Entretanto, o número de alelos por marcador foi limitado e geralmente os alelos foram idênticos nos diferentes episódios da doença num mesmo paciente. A principal contribuição deste trabalho foi demonstrar uma alta taxa de infecções múltiplas tanto das infecções primárias como nas recaídas, pela primeira vez demonstrada, sendo que infecções múltiplas puderam ser identificadas com apenas 5 marcadores. A presença de repetidas
recaídas após o tratamento cloroquina/primaquina pode sugerir presença de parasitos resistentes ao tratamento. Com estes resultados espera-se contribuir para
o esclarecimento dos aspectos relacionados à diversidade genética dos parasitos das recaídas do P. vivax, que poderão ajudar no seu prognóstico, direcionamento o tratamento e auxiliando no controle da doença. / Human malaria is caused by protozoa from the genus Plasmodium.
Approximately 40% of world population is at risk of infection. In Brazil, 333,339 cases
of the disease were recorded in 2010 and 80% of these are caused by Plasmodium vivax. P. vivax presents an important characteristic in its life cycle which is the possibility to develop latent forms of the parasite, the hypnozoítes which can cause relapses. Little is known about the mechanism of latency and activation. However, the literature reports a correlation between parasite strain and pattern of relapse, suggesting a genetic programming of parasites. The scarcity of genetic markers for P. vivax has hampered the analysis of important parasite phenotypes, such as patterns of relapse.In this context, the aim of this work was to study the variability of the parasites present in primary infections and relapse episodes. Sixty-five paired samples of 30 patients were genotyped using 10 molecular markers (08 microsatellites and blocks 2 and 10 of MSP-1) by capillary electrophoresis on an automated DNA sequencer. Moreover, the presence of multiple infections was
confirmed by cloning of amplicons and genotyping of different colonies. We showed
that relapse parasites are mainly heterologous compared to the ones of the primary infection and that a change in the alleles composition occurs in the different episodes of the individual. However, the number of alleles per marker was usually limited and the alleles were identical in the different episodes of the disease in the same patient.
The main contribution of this work was to demonstrate a high rate of multiple
infections both in primary infection and relapse, demonstrated for the first time, and
multiple infections could be identified with only five markers. The presence of repeated relapses after treatment chloroquine / primaquine may suggest the presence of parasites resistant to treatment. With these results we hope to contribute to the clarification of aspects of the genetic diversity of parasites in relapses of P.
vivax, which may help in the prognostic treatment guidance and ultimately help
control disease.
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Estudos genético moleculares em forrageiras tropicais / Molecular genetic studies in tropical foragesSousa, Adna Cristina Barbosa de 16 August 2018 (has links)
Orientadores: Anete Pereira de Souza, Liana Jank / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T21:01:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Sousa_AdnaCristinaBarbosade_D.pdf: 46726921 bytes, checksum: 60ae5b770dc5cf0bdfbd91ea55920e41 (MD5)
Previous issue date: 2010 / Resumo: As pastagens cultivadas, utilizadas em pastejo, constituem a forma mais econômica de fornecer alimentação abundante e de qualidade aos animais. Entre as principais forrageiras cultivadas, está a gramínea Panicum maximum Jacq. que ocupa uma posição de destaque na pecuária brasileira por apresentar elevada produção e qualidade, ser facilmente propagada por sementes e altamente palatável ao gado. As leguminosas forrageiras também são importantes não só pela qualidade e quantidade de forragem produzida, mas também pela fixação de nitrogênio atmosférico e transferência às gramíneas associadas, reduzindo os custos de produção. Entre elas citamos, Cajanus cajan (L.) Millsp., Centrosema pubescens Benth. e Calopogonium mucunoides Desv. Apesar de estas forrageiras terem sido estudadas dos pontos de vista morfológico e agronômico, conhecimentos genéticos ainda são limitados. A caracterização do sistema reprodutivo e o conhecimento da extensão da variabilidade genética contida dentro dos bancos de germoplasma podem auxiliar no planejamento de estratégias para maximizar os ganhos genéticos em programas de melhoramento. Nesse contexto, foram utilizados marcadores microssatélites para estimar a diversidade genética de acessos do banco de germoplasma de P. maximum, C. cajan, C. pubescens e C. mucunoides. Foram desenvolvidos 75 marcadores microssatélites polimórficos para P. maximum, 26 para C. pubescens, 23 para C. mucunoides e para C. cajan foram selecionados 43 microssatélites da literatura. Os resultados mostraram a eficiência desses marcadores para estimar a diversidade genética intra e interespecífica, obtida através de similaridades genéticas. Foi possível observar a formação de grupos bem definidos entre os acessos dessas espécies e adicionalmente, a transferibilidade desses marcadores específicos para outras espécies de forrageiras tropicais. Considerando o potencial de C. pubescens e C. mucunoides para as pastagens cultivadas brasileiras, o sistema reprodutivo dessas espécies foi caracterizado com os microssatélites
desenvolvidos. A taxa de cruzamento encontrada para C. pubescens foi de 26% e para C. mucunoides foi de 16%, mostrando que ambas as espécies apresentam um sistema misto de reprodução com predominância de autogamia. Esses dados devem ser considerados durante a multiplicação de sementes para manutenção do banco de germoplasma, a fim de manter a integridade individual de cada acesso. O conhecimento da estrutura genética da população de uma espécie, aliado ao conhecimento de outras características biológicas de interesse, pode fornecer subsídios para programas de conservação do germoplasma, manejo sustentável, domesticação e melhoramento genético da espécie. Os marcadores microssatélites desenvolvidos nesse trabalho, a caracterização da diversidade genética e a taxa de cruzamento são resultados fundamentais, promissores e consistentes para uso no melhoramento, podendo contribuir de forma eficiente na seleção e uso dos recursos genéticos disponíveis. / Abstract: Cultivated pastures used for grazing, are the most economical way to provide abundant high quality feed to animals. Among the main fodder crops, the grass Panicum maximum Jacq. occupies a prominent position in the Brazilian livestock industry by presenting high yield and quality, being easily propagated by seeds and highly palatable to livestock. The legumes also are important not only due to the quality and quantity of fodder produced, but also due to fixation of atmospheric nitrogen and transfer to the associated grasses, reducing production costs. Among them, Cajanus cajan (L.) Millsp., Centrosema pubescens Benth. and Calopogonium mucunoides Desv. Although these forages have been studied from the morphological and agronomic standpoint, genetic information is still limited. The characterization of the reproductive system and the knowledge of the extent of genetic variability contained within the germplasm banks can assist in planning strategies to maximize genetic gains. In this context, microsatellite markers were used to estimate the genetic diversity of germplasm banks of selected accessions of P. maximum, C. cajan, C. pubescens and C. mucunoides. Seventy-five polymorphic microsatellite markers were developed for P. maximum, 26 for C. pubescens, 23 for C. mucunoides and for C. cajan 43 microsatellites were selected from the literature. The results showed the efficiency of these markers to estimate the intra and interspecific genetic diversity obtained through genetic similarities. It was possible to observe the formation of welldefined clusters among the accessions within these species and in addition, the transferability of these specific markers to other species of tropical forages. Considering the potential of C. pubescens and C. mucunoides for the Brazilian cultivated pastures the reproductive system of these species were characterized with the microsatellites developed. The outcrossing rate was 26% for C. pubescens and 16% for C. mucunoides, showing that both species have a mixed mating system with predominance of autogamy. This information should be considered during
the multiplication of seeds for maintenance of the germplasm bank, in order to conserve the integrity of each individual genotype. Knowledge of the genetic structure, together with other biological characteristics of interest can provide support to germplasm conservation programs, sustainable management, domestication and breeding of the species. The microsatellite markers developed in this research, the characterization of the genetic diversity and crossing rates are fundamental results, both promising and consistent to be used in breeding and may contribute to the efficiency of selection and use of the available genetic resources. / Doutorado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Doutor em Genetica e Biologia Molecular
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Desenvolvimento de microssatelites e analise populacional de especies de Physalaemus do grupo "cuvieri" (Anura, Leiperidae) / Microsatellites development and populational analysis of Physalaemus species of the "cuvieri" group (Anura, Leiperidae)Conte, Monica 14 August 2018 (has links)
Orientadores: Shirley Maria Recco Pimentel, Anete Pereira de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T04:15:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2009 / Resumo: Muitas espécies de anfíbios estão entre as mais ameaçados de extinção, e no entanto, informações sobre a variabilidade genética e a estruturação genética das suas populações são ainda limitadas. No presente trabalho, a variabilidade genética de populações da espécie Physalaemus cuvieri foi analisada utilizando microssatélites como marcadores moleculares. Considerando-se sua ampla distribuição geográfica, variação morfológica interpopulacional e variação intra- e interpopulacional em algumas características citogenéticas, espécimes de dez populações de P. cuvieri foram amostradas, em São Pedro da Água Branca (MA), Urbana Santo (MA), Porto Nacional (TO), Uberlândia (MG), Vitória Brasil (SP), Palestina (SP), Nova Itapirema (SP), Chapada dos Guimarães (MT), Vitória da Conquista (BA) e Passo Fundo (RS). Dez locos de microssatélites de P. cuvieri foram isolados a partir de uma biblioteca enriquecida em repetições (CA)8 e (GT)8. A amplificação desses locos em 160 indivíduos de P. cuvieri revelou uma média de 5,7 alelos por loco e uma heterozigosidade esperada variando de 0,30 a 0,85. Embora a maior parte da variação genética esteja dentro das populações, o valor global do FST encontrado indica uma alta diferenciação entre essas populações. O baixo fluxo gênico encontrado sugere baixa capacidade dispersiva, no padrão de escala geográfica usado neste trabalho, e condiz com o comportamento filopátrico atribuído aos anuros. Nesse estudo foi ainda verificado que não existe correlação entre distância geográfica e distância genética das populações amostradas, sugerindo uma alta fidelidade dessa espécie aos seus locais de desova. Os resultados indicam que a distância geográfica sozinha não explica a variabilidade genética dessas populações. Duas populações, São Pedro da Água Branca (MA) e Nova Itapirema (SP), possivelmente passaram por efeito de gargalo populacional (bottleneck), que pode ser resultado, entre outros fatores, da destruição de habitat levando à fragmentação da população. Dos dez locos de microssatélites desenvolvidos para P. cuvieri, nove foram utilizados para verificar a possibilidade de amplificação e sua aplicabilidade no estudo da estrutura genética de duas outras espécies do grupo cuvieri muito proximamente relacionadas à P. cuvieri. Essas espécies são: P. ephippifer (15 indivíduos) e P. albonotatus (11). As duas populações estudadas ficaram isoladas das cinco de P. cuvieri, mostrando um alto grau de diferenciação genética, e indicando claramente sua condição de espécie distinta de P. cuvieri. A população de Crateús - CE agrupou com Urbano Santos - MA (ambas P. cuvieri). Este resultado corrobora os resultados de estudos citogenéticos. As populações de Porto Nacional (TO) e Passo Fundo (RS) formaram dois grupos de indivíduos cada uma. Parte dos indivíduos de Porto Nacional agrupou com a população de Uberlândia (MG) de P. cuvieri, e o restante dos indivíduos não mostrou nenhum agrupamento com qualquer outra população e espécies analisadas neste trabalho. Resultados semelhantes foram obtidos com a população de Passo Fundo, que não mostrou agrupamento com nenhuma outra população analisada. Estudos adicionais dessas populações serão necessários para melhor compreender esses dados. O conhecimento do padrão de dispersão da variabilidade genética de P. cuvieri, avaliada por microssatélites, somado ao conhecimento acumulado, obtido por meio de outras metodologias, poderá contribuir para a definição de estratégias de conservação e contribuir para o delineamento entre as fronteiras taxonômicas dessa espécie. / Abstract: Even though many amphibian species are among the most endangered animals, the knowledge about their genetic variability and population genetic structure is still limited. In the present work, natural populations of the barker frog Physalaemus cuvieri
were analyzed for genetic variability and differentiation using microsatellites, considering its wide geographic distribution, interpopulational morphological variation and cytogenetic intra- and interpopulational variation. Analyzes comprised specimens from ten P. cuvieri populations sampled in the following regions of Brazil: São Pedro da Água Branca (MA), Urbano Santo (MA), Porto Nacional (TO), Uberlândia (MG), Vitória Brasil (SP), Palestina (SP), Nova Itapirema (SP), Chapada dos Guimarães (MT), Vitória da Conquista (BA) and Passo Fundo (RS). Ten microsatellite loci were isolated for P. cuvieri from a library enriched in (CA)8 and (GT)8 repeats. In 160 P. cuvieri individuals, the average number of alleles per locus was 5.7 and the expected heterozygosity ranged from 0.30 to 0.85. Although most of the genetic variation was found within populations, the overall FST value indicated high genetic differentiation among the populations. The low gene flow among populations suggested low dispersion capability within the geographic scale pattern used in this work, which is compatible with the anuran philopatric behavior. In addition, there was no correlation between geographic and genetic distances of these populations, suggesting fidelity of P. cuvieri populations to their spawning place. These results indicated that the geographic distance alone does not explain the genetic variability observed among these populations. The data also indicated that the populations from São Pedro da Água Branca (MA) and Nova Itapirema (SP), respectively in the Northeast and Southeast regions of Brazil, have likely gone through a recent population bottleneck effect. Destruction of natural habitats leading to population fragmentation could be a major cause of this suggested bottleneck effect. Of the ten microsatellite loci developed for P. cuvieri, nine were used to investigate cross-amplification and suitability for population genetic structure studies in two other species of the cuvieri group closely related to P. cuvieri. These species are: P. ephippifer (15 specimens) and P. albonotatus (11 specimens). These two populations
remained isolated from all populations of P. cuvieri, demonstrating its high genetic differentiation, pointing that these two species are distinct from P. cuvieri. The Crateús (CE) population was grouped with Urbano Santos (MA) population (both P. cuvieri). This result corroborated previous cytogenetic results. The Porto Nacional (TO) and Passo Fundo (RS) populations were divided in two sets of individuals each one. Part of Porto Nacional individuals were clustering with P. cuvieri from Uberlândia (MG), and the remaining did not show any grouping with none of other analyzed species. Similar results were found to Passo Fundo population, which also did not show any group with the analyzed species. The knowledge of the dispersion pattern of the P. cuvieri genetic variability evaluated by microsatellites, in addition to the genetic variability data obtained using other methodologies, will contribute for the development of future ecological and conservation strategies and to improve the taxonomy of this species. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural
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Estudo da diversidade genetica e da taxa de cruzamento em Stylosanthes spp. atraves de marcores microssatelites / Genetic diversity and mating system in Stylosanthes spp. as revealed by microsatellite markersSantos-Garcia, Melissa de Oliveira 14 August 2018 (has links)
Orientadores: Anete Pereira de Souza, Rosangela M. S. Resende / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T22:16:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2009 / Resumo: No Brasil, a pecuária bovina é baseada principalmente na utilização de pastagens para alimentação animal, sendo a maioria destas cultivadas. Gramíneas do gênero Urochloa P. Beauv. originárias da África Setentrional têm sido as mais utilizadas pelos pecuaristas, juntamente com algumas leguminosas de origem sul-americana. Os maiores problemas enfrentados pelos produtores são a degradação das pastagens e o seu alto custo de recuperação, principalmente pela necessidade de uso de fertilizantes químicos nitrogenados. Devido à capacidade das leguminosas de transformar o nitrogênio atmosférico e fixá-lo no solo, seu uso consorciado a gramíneas pode ser indicado como uma alternativa menos onerosa para recuperação das pastagens. Dentre as leguminosas já testadas como pastagens, as do gênero Stylosanthes Sw. têm se mostrado passíveis de utilização em regiões de solos de baixa fertilidade, apresentando bons resultados quando consorciadas a gramíneas. O Brasil é o maior centro de origem e diversidade deste gênero, com ocorrência das espécies de maior potencial forrageiro, havendo vários acessos disponíveis em bancos de germoplasma. Para que os programas de melhoramento possam utilizar de forma adequada os bancos de germoplasma existentes, é necessário um conhecimento da quantidade e da distribuição da diversidade genética dentro dessas coleções. Além disso, para grande parte das espécies do gênero, as taxas de cruzamento são desconhecidas ou foram estimadas com base em caracteres morfológicos, que podem sofrer influência do ambiente e são encontrados em número restrito. Nesse contexto, no presente trabalho foram desenvolvidos marcadores microssatélites para três espécies do gênero Stylosanthes Sw. (S. capitata Vog., S. guianensis (Aubl.) Sw. e S. macrocephala Ferr. et Costa). Devido à disponibilidade dos experimentos, foi possível utilizar os microssatélites desenvolvidos para estimar a taxa de cruzamento de S. capitata Vog. e S. guianensis (Aubl.) Sw., mostrando que ambas as espécies apresentam um sistema misto de reprodução com predominância de autogamia. Considerando que as flores de Stylosanthes são cleistógamas, a taxa de cruzamento encontrada foi alta (26% ara S. guianensis (Aubl.) Sw. e 31% para S. capitata Vog.) e deve ser considerada durante a multiplicação de sementes para manutenção do banco de germoplasma, a fim de manter a integridade individual de cada acesso. Foi também observada uma variação da taxa de cruzamento entre diferentes progênies. Também foi avaliada a diversidade genética em bancos de germoplasma de duas espécies do gênero (S. guianensis (Aubl.) Sw. e S. macrocephala Ferr. et Costa), mostrando a formação de grupos bem definidos entre os acessos dessas espécies e que podem ser considerados durante o melhoramento. Em S. guianensis (Aubl.) Sw., que apresenta uma classificação taxonômica controversa, os grupos formados estão de acordo com um dos modelos taxonômicos propostos. Os microssatélites desenvolvidos, assim como os dados de taxa de cruzamento e de diversidade genética gerados nesse trabalho, são um passo em direção a um melhor entendimento do gênero e uma ferramenta para que novos trabalhos possam ser realizados. / Abstract: In Brazil, most of the cattle are grown in cultivated pastures. Forage grasses belonging to the African genus Urochloa P. Beauv. have been the most commonly used, together with some American legumes. Soil degradation and high costs for reclaiming are the major problems of pastures, since nitrogen enrichment is necessary. Considering that legumes can fix atmospheric nitrogen into soil, their use in consortium with grasses has been a plausible alternative for soil reclaiming. Among feasible legumes for pastures, those belonging to the genus Stylosanthes Sw. have proved to be suitable for low fertile soils and and for consortium with grasses. Brazil is the major center of origin and diversity of this genus, including its most promising species. Many Stylosanthes Sw. accessions are available in germplasm collections and their use could be potentiated by further knowledge on the available genetic diversity. In addition, there is still limited knowledge on the mating system of most of Stylosanthes Sw. species. In the present work, microsatellite markers were developed for S. capitata Vog., S. guianensis (Aubl.) Sw. and S. macrocephala Ferr. et Costa aiming at studying the genetic diversity and mating systems of Stylosanthes Sw. species. The microsatellite analysis on the mating system of S. capitata Vog. and S. guianensis (Aubl.) Sw. showed a
mixed mating system with predominance of self-fertilization. Considering that Stylosanthes flowers are cleistogamous, the observed outcrossing rates wererelatively high, being 26% for S. guianensis (Aubl.) Sw. and 31% for S. capitata Vog.. These outcrossing rates should be taken into consideration in seed multiplication, for the purpose of maintaining the genetic integrity of individual accessions. Variation in the estimates of outcrossing among different progenies was observed. The microsatellite studies on the genetic diversity in S. guianensis (Aubl.) Sw. and S. macrocephala Ferr. et Costa demonstrated that there are genetic distinct groups within the germplasm collection that could be useful for breeding purposes. In S. guianensis (Aubl.) Sw., which has a controversial taxonomy, the observed groups were in agreement with one of the proposed taxonomical classification. The microsatellites developed for Stylosanthes Sw. species and the data on mating system and genetic diversity presented herein represent important knowledge and tools towards the understanding of this genus and are potentially useful for further studies. / Doutorado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Doutor em Genetica e Biologia Molecular
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Variabilidade genética de Tetragonisca angustula (Hymenoptera, Apidae, Meliponini) de duas áreas urbanizadas / Genetic variability of Tetragonisca angustula (Hymenoptera, Apidae, Meliponini) from two urbanized areasGustavo Valadares Barroso 08 December 2011 (has links)
As abelhas da tribo Meliponini apresentam ampla distribuição, ocupando principalmente as regiões neotropicais do planeta. São encontradas mais de 400 espécies pertencentes a 50 gêneros. Tetragonisca angustula é uma espécie que se distribui por praticamente toda a América Latina, sendo em geral bastante abundante.No presente projeto foram empregadas técnicas moleculares (sequenciamento de DNA mitocondrial e análise de loci de microssatélites) no intuito de se verificar a variabilidade em duas pequenas populações de Tetragonisca angustula distribuídas nos campi da USP de Ribeirão Preto e São Paulo. Para a obtenção de um panorama da variabilidade da espécie, foram coletados e analisados indivíduos de áreas externas aos campi. Os resultados de sequenciamento mostraram que a variabilidade do genoma mitocondrial das amostras externas é muito maior que a variabilidade nas amostras dos campi. Além disso, ficou claro que os campi contêm populações monofiléticas bastante isoladas entre si, e que cada uma possui maior similaridade com as amostras externas do que com as amostras do outro campus. Em contrapartida, os resultados de microssatélites mostraram que a variabilidade dessas populações para os loci estudados é extremamente similar. Isso sugere que a filopatria da espécie é muito grande, e que o vôo dos machos é responsável por, de certa forma, homogeneizar a variabilidade genética das populações, impedindo que haja muita estruturação. Dessa maneira, em uma população de T. angustula, existem dois números efetivos populacionais: um para as fêmeas (estimado pela variabilidade do DNA mitocondrial) e outro maior para machos (estimado pela variabilidade dos microssatélites). Os resultados indicam que a colonização dos campi se deu por um número pequeno de rainhas que posteriormente aumentaram a população por conta da grande quantidade de recursos que os campi possuem / The bees of the Meliponini tribe have a broad distribution, mainly throughout the neotropical regions of the planet. There are over 400 species distributed among 50 genera. Tetragonisca angustula is a species which occupies almost all Latin America, generally in large individual numbers. In this study we used molecular techniques (mitochondrial DNA sequencing and analysis of microsatellite loci) to obtain measures of the genetic variability in two small populations of T. angustula located in both the campi of USP, Ribeirão Preto and São Paulo. In order to get a better idea of the variability of the species as a whole, we also analyzed individuals from populations from outside the campi. The results of the DNA sequencing showed that the variability of these external samples is far bigger than the variability of the other two populations. Also, it became clear that both campi have monophyletic populations that are very isolated from each other, and that each one of these campus populations is phylogenetically closer to the external samples than they are to each other. On the other hand, the results obtained with microsatellites showed that the variability of the populations from both campi are very similar to the variability of the external samples. This suggests that there is a high degree of filopatry in the species, and that the male flight is responsible, in a way, for mixing the genetic variability of the populations, this way keeping them from getting structured. Thus, in a given population of T. angustula, there are two different effective population sizes: of for the females (measured by the variability in the mitochondrial DNA) and another for the males (measured by the variability in the microsatellites). Our results indicate that the process of colonization in both campi was carried out by a few queens, which lately were responsible for increasing the population sizes due to the big amount of resources found in the campi
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Variabilidade genética de Tetragonisca angustula (Hymenoptera, Apidae, Meliponini) de duas áreas urbanizadas / Genetic variability of Tetragonisca angustula (Hymenoptera, Apidae, Meliponini) from two urbanized areasBarroso, Gustavo Valadares 08 December 2011 (has links)
As abelhas da tribo Meliponini apresentam ampla distribuição, ocupando principalmente as regiões neotropicais do planeta. São encontradas mais de 400 espécies pertencentes a 50 gêneros. Tetragonisca angustula é uma espécie que se distribui por praticamente toda a América Latina, sendo em geral bastante abundante.No presente projeto foram empregadas técnicas moleculares (sequenciamento de DNA mitocondrial e análise de loci de microssatélites) no intuito de se verificar a variabilidade em duas pequenas populações de Tetragonisca angustula distribuídas nos campi da USP de Ribeirão Preto e São Paulo. Para a obtenção de um panorama da variabilidade da espécie, foram coletados e analisados indivíduos de áreas externas aos campi. Os resultados de sequenciamento mostraram que a variabilidade do genoma mitocondrial das amostras externas é muito maior que a variabilidade nas amostras dos campi. Além disso, ficou claro que os campi contêm populações monofiléticas bastante isoladas entre si, e que cada uma possui maior similaridade com as amostras externas do que com as amostras do outro campus. Em contrapartida, os resultados de microssatélites mostraram que a variabilidade dessas populações para os loci estudados é extremamente similar. Isso sugere que a filopatria da espécie é muito grande, e que o vôo dos machos é responsável por, de certa forma, homogeneizar a variabilidade genética das populações, impedindo que haja muita estruturação. Dessa maneira, em uma população de T. angustula, existem dois números efetivos populacionais: um para as fêmeas (estimado pela variabilidade do DNA mitocondrial) e outro maior para machos (estimado pela variabilidade dos microssatélites). Os resultados indicam que a colonização dos campi se deu por um número pequeno de rainhas que posteriormente aumentaram a população por conta da grande quantidade de recursos que os campi possuem / The bees of the Meliponini tribe have a broad distribution, mainly throughout the neotropical regions of the planet. There are over 400 species distributed among 50 genera. Tetragonisca angustula is a species which occupies almost all Latin America, generally in large individual numbers. In this study we used molecular techniques (mitochondrial DNA sequencing and analysis of microsatellite loci) to obtain measures of the genetic variability in two small populations of T. angustula located in both the campi of USP, Ribeirão Preto and São Paulo. In order to get a better idea of the variability of the species as a whole, we also analyzed individuals from populations from outside the campi. The results of the DNA sequencing showed that the variability of these external samples is far bigger than the variability of the other two populations. Also, it became clear that both campi have monophyletic populations that are very isolated from each other, and that each one of these campus populations is phylogenetically closer to the external samples than they are to each other. On the other hand, the results obtained with microsatellites showed that the variability of the populations from both campi are very similar to the variability of the external samples. This suggests that there is a high degree of filopatry in the species, and that the male flight is responsible, in a way, for mixing the genetic variability of the populations, this way keeping them from getting structured. Thus, in a given population of T. angustula, there are two different effective population sizes: of for the females (measured by the variability in the mitochondrial DNA) and another for the males (measured by the variability in the microsatellites). Our results indicate that the process of colonization in both campi was carried out by a few queens, which lately were responsible for increasing the population sizes due to the big amount of resources found in the campi
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Estudos moleculares, anat?micos e express?o g?nica de gen?tipos de bananeira contrastantes quanto ao despencamento dos frutosRodrigues, Marciene Amorim 31 August 2015 (has links)
Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2015-10-15T01:03:28Z
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Previous issue date: 2015-08-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The finger drop of banana is closely related to the maturation process and involves the softening and weakening of the pedicel. The aim of this study was to evaluate the genetic diversity of banana genotypes with contrasting levels of fruit finger drop by means of molecular markers and evaluate the susceptibility and resistance to finger drop from anatomical studies and analysis of gene expression via real-time quantitative PCR.The genotyping data generated by microsatellites was carried out based on the number of base pairs of each fragment and dendrogram cluster calculated by UPGMA method. Of the 30 microsatellite primer evaluated, 139 alleles were obtained, with the average of 4.66 alleles per locus. No relationship was found between the polymorphism detected by microsatellite markers and the degree of finger drop fruit. For the anatomical characterization, genotypes in the maturation stages 4, 5 and 6, and from different ploidy levels and finger drop resistance patterns, were used. In genotype 017041-01, susceptible, the presence of air parenchyma, was observed, a feature which was not evidenced in the resistant genotypes genotypes BB France, Khai Nai and BRS On Preciosa. Higher values of variable AF and increased deposition of lignin in the vascular bundles, were related to finger drop resistance. The values of Ct (cycle threshold) were used to determine the gene expression difference on cell wall modifier genes (PEL1, EXP1 and XTH4) between different stages of maturation in the finger drop zone (ZD) and in the middle of the fruit (control zone-ZC). To perform the analysis of relative expression, the 2? ?? CT method, was used. RT-qPCR analysis showed that there was a differential expression between the stages of maturation. Ploidy levels and resistance patterns, did not show correlation with the results of the expression. Genes XTH4 and PEL1 showed expression profiles related to finger drop in fruits in different genotypes being good candidates for functional studies in bananas, and may be useful in strategies of genetic improvement aiming the production of banana fruits with resistance to finger drop. / O despencamento natural dos frutos da bananeira est? estreitamente relacionado com o processo de matura??o e envolve o amolecimento e enfraquecimento do pedicelo. O objetivo deste trabalho foi estudar a diversidade gen?tica de gen?tipos de bananeira com n?veis contrastantes ao despencamento dos frutos por meio de marcadores moleculares e avaliar a suscetibilidade e resist?ncia ao despencamento a partir de estudos anat?micos e an?lise de express?o g?nica via PCR quantitativo em tempo real. A genotipagem dos dados gerados pelos microssat?lites foi realizada com base no n?mero de pares de base de cada fragmento e para o agrupamento no dendrograma, utilizou-se o m?todo UPGMA. Dos 30 iniciadores microssat?lites avaliados, obteve-se 139 alelos, com m?dia de 4,66 alelos por loco. N?o foi observada rela??o entre o polimorfismo detectado pelos marcadores microssat?lites e o grau de despencamento dos frutos Para a caracteriza??o anat?mica, foram utilizados gen?tipos nos est?dios de matura??o 4, 5 e 6, de diferentes ploidias e padr?es de resist?ncia ao despencamento. No gen?tipo suscet?vel 017041-01 foi observada presen?a marcante de par?nquima aer?fero, caracter?stica que n?o foi evidenciada nos gen?tipos resistentes BB Fran?a, Khai Nai On e BRS Preciosa. As mudan?as anat?micas, observadas durante o amadurecimento nos est?dios de matura??o, foram mais evidentes no gen?tipo suscet?vel 017041-01. Maiores valores da vari?vel AF e maior deposi??o de lignina nos feixes vasculares mostraram-se relacionados ? resist?ncia ao despencamento. Os valores dos Ct (cycle threshold) foram utilizados para determinar a diferen?a da express?o g?nica relativa dos genes modificadores da parede celular (PEL1, EXP1 e XTH4) entre diferentes est?dios de matura??o na zona de despencamento (ZD) e na regi?o mediana da casca (zona controle - ZC). Para realizar a an?lise de express?o relativa, foi utilizado o m?todo 2? ?? CT. Os resultados finais da an?lise por RT-qPCR mostraram que houve uma express?o diferencial entre os est?dios de matura??o nos gen?tipos estudados. Os genes PEL1 e XTH4 demonstraram perfis de express?o relacionados com o despencamento dos frutos em diferentes gen?tipos sendo bons candidatos para estudos funcionais em bananeira, podendo ser utilizado para direcionar o programa de melhoramento da cultura visando ? produ??o de frutos com resist?ncia para essa caracter?stica.
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