Orientador: Anibal Eugenio Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T19:01:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fagian_MarciaMarilia_M.pdf: 2846231 bytes, checksum: 62b0fe54049a5a247549286aa9e0c1d3 (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Nossos resultados mostram que 'Sr POT.2+¿ intramitocondrial, similarmente ao 'ca POT.2+¿, inibe a fosforilação oxidativa em mitocondria de figado de rato. Ambos, 'Ca POT.2+¿ e 'Sr POT.2+¿ também inibem a atividade hidrolítica da ATPase em partículas submitocondriais. Metade da inibição máxima dessa atividade ATPásica foi encontrada numa concentração de 2,5mM de 'Ca POT.2+¿ ou 5,0 mM de 'Sr POT.2+¿ , quando a concentraçao de 'Mg POT.2+¿ no meio era 1,0 mM. A inibição da atividade ATPásica por ambos os cátions foi rapidamente decrescida com o aumento da concentração de 'Mg POT.2+¿ no meio de reaçao. Dados cinéticos, na presença de dlferentes concentraçoes de 'Ca POT.2+¿ ou 'Sr POT.2+¿ e a determinação nessas condições da concentração de MgATP, o substrato da ATPase, indicam fortemente que estes cátions inibem a hidrólise de ATP competindo com 'Mg POT.2+¿ para a formação do complexo MgATP. Com base na concordância entre estes resultados obtidos em partículas submitocondriais e os resultados de titulações da fosforilação oxidativa com carbo xiatractilato ou oligomicina,em mitocondrias carregadas com 'Sr POT.2+¿, concluímos que Ca POT.2+¿ ou 'Sr POT.2+¿ intramitocondrial inibem a fosforilação oxidativa em mitocondrias intactas pelo decréscimo da disponibilidade de nucleotídeos de adenina tanto para o translocador ADP/ATP quanto para a ATPsintetase. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Intramitochondrial 'Sr POT.2+¿, similarly to 'ca POT.2+¿, inhibits oxidative hosphorylation in intact rat liver mitochondria. Both Ca2+ and Sr2+ also inhibits the hydrolytic activity of ATPase in submitochondrial particles. Half-maximal inhibition of ATPase activitywas attained at a concentration of 2,5mM 'Ca POT.2+¿ or 5,0 mM 'Sr POT.2+¿,when the concentration of 'Mg POT.2+¿in the medium was l,0 mM. The inhibition of ATPase activity by both cations was rapidly decreased by increasing the 'Mg POT.2+¿concentrations in the reaction medium. In addition, kinetical data and the determination of the concentrations of MgATP, the substrate of the ATPase, in the presence of different concentration of 'Ca POT.2+¿ or 'Sr POT.2+¿ strongly indicate that these cations inhibit ATP hydrolysis by competing with Mg for the formation of MgATP. On the basis of a good agreement between these results with submitochondrial particles and the results of titrations of oxidative phosphorylationwith carboxyatractylosideor oligomycinin mitochondria loaded with 'Sr POT.2+¿ it can be concluded that intramitochondrial Ca or Sr inhibits oxidativephosphorylation inintact mitochondria by decreasing the availability of adenine nucleotides to both the ADP/ATP carrier and the ATP synthase. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Quivo S. Tahin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T10:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cavalcanti_TerezaCristinaSamico_M.pdf: 6606881 bytes, checksum: a5182587efdd3d6cb98c36cf42acc2d0 (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Ratas Sprague-Dawley virgens de 50-60 dias de idade, quando inoculadas i.p. com 20 mg/ml de DMBA e alimentadas com dietas semi-sintéticas e isocalóricas, contendo 12% de lipídios, provenientes do óleo de semente de girassol (rica em AGPI n-6) ou do óleo de sardinha (rica em AGPI n-3), não apresentaram diferenças importantes no ganho de peso corpóreo nos tempos de 30 ou 63 dias. O tecido mamário das ratas alimentadas com a dieta óleo de semente de girassol, apresentou alterações histológicas mais severas do que o das alimentadas com a dieta óleo de sardinha, após o tratamento com o DMBA nos tempos estudados. A atividade específica da ATPase mitocondrial do tecido mamário dos animais controle e tratados com o DMBA, apresentou alterações mais significativas naqueles animais alimentados com a dieta óleo de semente de girassol, quando comparada com os que se alimentaram com a dieta óleo de sardinha nos tempos estudados. No grupo óleo de semente de girassol, as atividades especificas da ATPase foram de 17,2¿+ ou ¿' 6,4 e 40,3 ' + ou ¿' 12,0 unidades de atividade ATPásica (p<0,01), respectivamente aos dias 30 ou 63 de experimento para as ratas controles e de 33,1 : 21,4 e 70,0: 19,2 unidades especifica de AT Pase (p< 0,01), respectivamente após os 30 ou 63 dias de experimento com DMBA. Neste grupo dietário, o tratamento com o DMBA causou aumento na atividade específicas da ATPase de 92% (p<0,01) e 88% (p<0,01), respectivamente após 30 ou 63 dias. No grupo de óleo de sardinha, as atividades específicas da ATPase foram de 37,6¿ + o0u ¿' 9,2 e 50,3 '+ ou ¿' 25,8 unidades de ATPase especifica (N.S.) para as ratas controles e de 40,2 '+ ou ¿' 16,0 e 59,2 '+ ou ¿' 15,3 unidades específicas de atividade ATPásica (p<0,01) para as ratas tratadas com DMBA, respectivamente após 30 ou 63 dias. Neste grupo dietário o DMBA também causou o aumento na atividade ATp.ásica, porém não foi estatistidaIrente' significante. Quanto a incorporação dos ácidos graxos pelos lipídios das mitocôndrias, ressaltamos que nos animais controles não foi detectado alterações importantes na incorporação dos AGS totais e AGMI totais frente às duas dietas e ao tempo de experimento; que os AGPI n-6 foram mais incorporados pelos animais alimentados com a dieta óleo de semente de girassol, quando comparados com os que se alimentaram com a dieta óleo de sardinha nos tempos estudados, o mesmo acontecendo com os AGPI n-3. O tratamento com o DMBA,diminui a incorporação pelos lipídios das mitocôndrias dos AGS totais, aumentou a incorporação dos AGMI totais naqueles animais alimentados com a dieta óleo de semente de girassol, aumentou a incorporação dos AGPI n-6, principalmente do ácido linoléico e eicosatrienóico, sem contudo aumentar a incorporação do ácido araquidônico nos animais alimentados com a dieta óleo de semente de girassol, ocorrendo o efeito contrário nos animais alimentados com a dieta óleo de sardinha e aumentou a incorporação dos AGPI n-3 pelos lipídios mitocondriais dos animais alimentados com a dieta óleo de sardinha, quando comparados com os que se alimentaram com a dieta óleo de semente de girassol nos tempos estudados / Abstract: Female virgin rats Sprague-Dawley (50-60 days old), were injected, i.p., with 20 mg/ml of 7,12-dimethylbenzenanthracene (DMBA) and fed semipurified and isocaloric diets, containing 12% of sunflower seed oil (rich in AGPI n-6) or 12% of sardine oil (rich in AGPI n-3), during 30 or 63 days. During the experimental time alI groups of rat, present few alterations on the gain of body weights. Rats fed sunflower seed oil showed, more severe histological alterations in the mammary tissues after DMBA treatment in comparasion to controls and to sardine oil. ATPase activity mammary mitochondria were a1ter in function of time, diet and DMBA treatment , after 30 or 63 days, respectively. ATPase of control animaIs of sunflower seed oil diet were 17,2 i 6,4 and 40,3 i 2,0 units of ATPase activity (p<0,01), and after DMBA tre atment we found 33,1 i 21,4 and 70,0 i 19,2 units of ATPase activity (p<0,01) after 30 or 63 days, respectivelYi the specificNP ase of control animaIs fed ardine oil, were 37,6 i 9,2 and 50,3 -98-f 25,8 units of specific ATPase (N.S.), and after DMBA treatment, were 40,2 f 16,0 and 59,2 f 15,3 units of ATPase (p<0,01)." In sun flower seed oil group, after 30 or 63 days of DMBA treatment we bbserved an increase of 92% (p<0,01) and 88% (p<0,01), respective ly in comparisionto controls. In sardine oil group the alterations caused by DMBA treatment after 30 or 63 days in comparasion of controls group was not significant. There was not impoEtant alterations on total saturated fatty acid (SFA), and total monounsaturated fatty acid (MUFA) contents on mammary mitochondriaI lipids of two diets group. The total n-6 polyunsaturated fatty acid (PUFA) and n-3 fatty acids of mitochondrial lipids sunflower seed oil were higher than sardine oil group in function of time. DMBA treatment cause an increase in the SFA contents, and on the n-6 PUFA contents in sunflower seed oil group, mainly increasing linoleic acid and eicosatrienoic acid but noarachildonic acid. However, in the sardine oil group it was observed the reversal event, increasing n-3 PUFA after DMBA treatment / Mestrado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador : Anibal Eugenio Vercesi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T11:27:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_IoneSalgado_D.pdf: 3252459 bytes, checksum: 4d405ba9de2a48bb0a70e0f913975223 (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: Mitocôndrias acop1adas isoladas de folhas brancas de repolho (Brassica oleracea L. varo capitata) apresentaram-se incapazes e captar 'Ca POT. 2+¿ quando energizadas por respiração, em contraste com mitocôndrias isoladas de coleoptiles ou raízes de milho (Zea mays L.) que apresentaram a habilidade de captar 'Ca POT. 2+¿ do meio, embora com uma atividade muito menor do que mitocôndrias de fígado de rato. A curva de velocidade inicial de captação de 'Ca POT. 2+¿ ou ejeção de H+ por mitocôndria de coleoptiles de milho em função da concentração de 'Ca POT. 2+¿ mostrou ser sigmoidal e sugeriu uma estequiometria de 2H+/'Ca POT. 2+¿ como ocorrem em mitocôndrias animais. Na presença de baixas concentrações de 'Ca POT. 2+¿ livre no meio de incubação as mitocôndrias de coleoptiles ou raízes de milho foram capazes de captar o íon atingindo uma concentração de ¿steady state" na faixa de 2 'mu¿M e de manter este equilíbrio por vários minutos. Perturbação deste equilíbrio pela adição de 'Ca POT. 2+¿ ou EGTA foi seguida pela captação ou liberação de 'Ca POT. 2+¿, respectivamente, até que o equilíbrio fosse novamente atingido com a concentração livre de 'Ca POT. 2+¿ extramitocondria1 original. A concentração de 'Ca POT. 2+¿ extramitocondrial na qual o "steady state" era atingido mostrou ser dependente do conteúdo de 'Ca POT. 2+¿ intramitocondrial e da presença de 'Mg POT. 2+¿ no meio de reação. Os resultados indicam que mitocôndrias de coleoptiles ou raízes de milho, assim como mitocôndrias animais, têm a habilidade de tamponar o 'Ca POT. 2+¿ externo e talvez estejam envolvidas na manutenção a homeostase do 'Ca POT. 2+¿ na célula / Abstract: Coupled mitochondria isolated from the white leaves of cabbage (Brassica oleracea L. var. capitata) were inactivein respiration-coupled 'Ca POT. 2+¿ accumulation, in contrast to mitochondria isolated from etiolated corn (Zea mays L.) which showed the ability to take up 'Ca POT. 2+¿ from the medium, although with a much lower activity than liver mitochondria. Abstract: The rate of 'Ca POT. 2+¿ uptake or H+ ejection by corn mitochondria plotted versus 'Ca POT. 2+¿ concetration showed a sigmoidal curve and the H+/'Ca POT. 2+¿ ratio was very close to 2.0 as occurs in animal mitochondria. The addition of corn coleoptile or root mitochondria to a medium containing a low free 'Ca POT. 2+¿ concentration resulted in 'Ca POT. 2+¿ uptake with a decrease in free 'Ca POT. 2+¿ concentration until a steady state of about 2.0 'mu¿M was reached and maintained constant for several minutes. Perturbation of this steady state by the addition of 'Ca POT. 2+¿ or EGTA was followed by 'Ca POT. 2+¿ uptake or release, respectively, until the steady state was attained at the original extramitochondrial free 'Ca POT. 2+¿ concentratlon. The steay state free 'Ca POT. 2+¿ concentration was dependent of the intramitochondrial 'Ca POT. 2+¿ content and external 'Mg POT. 2+¿.These results indicate that corn but not cabbage mitochondria, as some animal mitochondria, have the ability to buffer external 'Ca POT. 2+¿ and may be involved in the maintenance of 'Ca POT. 2+¿ homeostasis in the cell / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador : Anibal Eugenio Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T18:22:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valle_ValderezGarciaRodrigues_M.pdf: 2841589 bytes, checksum: 9ef7f58d4f8f66dce35b175b05e4397a (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Este trabalho descreve experimentos mostrando que safranina, em concentrações geralmente empregadas para monitorar o potencial elétrico da membrana mitocondrial, causa efeitos indesejáveis sobre o transporte de 'CA POT. ++' por mitocôndrias de fígado. Nossas observações indicam que: (i) Safranina potencializa a descarga espontânea de 'CA POT. ++' mitocondrial induzida por fosfato ou acetoacetato. A liberação de 'CA POT. ++' é paralelamente acompanhada pela potencialização da liberação do estado respiratório - 4 ' e pela potencialização do aumento de volume mitocondrial, indicando uma ação generalizada do corante sobre a membrana mitocondrial. (ii) O efluxo do 'CA POT. ++ ' mitocondrial induzido por hidroperóxido é estimulado na presença de safranina mesmo na presença de estabilizadores de membrana como 'MG POT. ++' e ATP. Conclui-se que o uso de safranina para indicar mudanças no potencial elétrico de membrana durante o transporte de 'CA POT. ++' por mitocôndrias deve ser evitado ou devem ser tomados cuidados especiais. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: This work describes experiments showing that safranine, at the concentrations usually employed as a probe of mitochondrial membrane potential, causes significant undesirable side effects on 'CA POT. ++' transport by liver mitochondria. The major observations are: (i) safranine potentiates the spontaneous 'CA POT. ++' release from liver mitochondria induced by phosphate or acetoacetate. This is paralelled by potentiation of the release of state -4 -respiration and of the rate of mitochondrial swelling, indicating a generalized effect of the dye on the mitochondrial membrane; (ii) The efflux of mitochondrial 'CA POT. ++induced by hidroperoxide is stimulated in the presence of safranina even if membrane stabilizers such as 'MG POT. ++' and ATP are present. It is concluded that the use of safranine to monitor the changes in membrane potential during 'CA POT. 2+' transport by mitochondria should be avoided or special care be taken. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Fisiologia e Biofisica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Lucia Pereira da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T12:24:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Macedo_DeniseVazde_D.pdf: 4866200 bytes, checksum: 168aa5c20312bef638bfa207ebc599b4 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Neste trabalho, apresentamos evidências experimentais suficientes para propor o envolvimento direto do carreador ADP/ATP no processo de abertura do poro dependente de Ca2+, responsável pelo fenômeno de transição de permeabilidade da membrana mitocondrial interna. Comparando a proteção conferida pelo ADP ¿ substrato do carreador ADP/ATP, ditiotreitol ¿ redutor de grupamentos sulfidrila e butil hidroxitolueno - sequestrador de radicais livres, mostramos que o ADP sempre foi o mais efetivo contra o dano mitocondrial, quando presente no meio de reação desde o inicio. Esta proteção conferida pelo ADP parece ser contra os efeitos específicos do Ca2+ sobre a membrana, independente do agente liberador utilizado ser um oxidante ou fosfato inorgânico. Esses resultados descartaram a possibilidade de um ataque de radicais de oxigênio aos lipídeos ou proteínas da membrana como o evento primário que dispara a permeabilização mitocondrial. Quando pré-incubamos mitocôndrias desenergizadas com Ca2+, mostramos uma diminuição no conteúdo de translocases ativas na membrana, sensível à presença de ciclosporina A. Estes dados indicaram um envolvimento direto do carreador ADP/ATP na abertura do poro dependente de Ca2+. Nossos resultados descartaram também a oxidação de grupos tiólicos desta proteína como a responsável por sua inativação. Nos experimentos com partículas sub-mitocondriais, demonstramos pela primeira vez a abertura do poro dependente de Ca2+, sensível à ciclosporina A também na membrana invertida das partículas, o que descarta definitivamente a interação da ciclofilina com o carreador ADP/ATP como o mecanismo responsável pela abertura do poro dependente de Ca2+. Esses experimentos também forneceram evidências da existência de dois sítios de ligação para Ca2+ na membrana, com efeitos opostos sobre sua abertura. Os resultados apresentados neste trabalho, no seu conjunto, nos permitiram apresentar a nossa hipótese para o mecanismo molecular de abertura do poro dependente de Ca2+, modulado pelo carreador ADP/ATP. Sugerimos que a ligação do Ca2+ ao carreador, quando este está no estado conformacional "c" induz a dissociação da estrutura dimérica funcional desta proteína, transformando gradativamente o próprio carreador ADP/ATP no poro dependente de Ca2+. Palavras Chave: transição de permeabilidade, poro dependente de Ca2+, carreador ADP/ATP, ciclosporina A, permeabilização da membrana mitocondrial interna / Abstract: In this work we presented sufficient experimental evidences to propose the direct involvement of the ADP/ATP carrier in the permeabilization processes of the inner mitochondrial membrane. Comparing the protection conferred by ADP - a subtrate of the ADP/ATP carrier, dithiothreitol - a disulfide reductant and butylhydroperoxide - a radical scavenger, it was found that ADP was always the most effective against the mitochondrial damage, when present in the incubation medium from the beginning. Our results also indicate that the protection of ADP is against the specific Ca2+ effect in the membrane, independently an pyridine nucleotide oxidant t-butylhydroperoxide or inorganic phosphate were used and discard the possibility of an attack of oxygen radicals on lipids or proteins of the mitochondrial membrane as the primary event that triggers the permeability transition of the inner mitochondrial membrane. Experiments where deenergized mitochondria were preincubated with Ca2+ showed a decrease on the content of active ADP/ATP carrier, indicating a direct involvement of this protein in the formation of an unspecific Ca2+ dependent pore. They also discard the -SH oxidation as a cause of the carrier inactivation. Our experiments with submitochondrial particles provide good evidence for then existence of two binding sites for Ca2+ in the mitochondrial membrane. These resulte also discard cyclophilin as mediator of the pore opening. Key Words: permeability transition, pore Ca2+-dependent, ADP/ATP carrier, cyclosporin A, mitochondrial inner membrane / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências

Orientador: Lucia Pereira da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T11:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_ArmindoAntonio_M.pdf: 5893539 bytes, checksum: 3fb5538dc100f360ca6bd135dcc1b6ad (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Neste trabalho estudamos o papel dos íons de ferro na peroxidação lipídica induzida por FeSO4 em mitocôndrias isoladas de fígado de rato (MFR). Na literatura aparecem duas teorias distintas para explicar o papel dos íons de ferro na iniciação da peroxidação lipídica. A primeira propõe que o ferro é o catalisador das reações de Haber-Weiss e de Fenton que produzem o radical hidroxila (OR) que atacaria os ácidos graxos polinsaturados das membranas. Uma segunda hipótese contesta a primeira, por considerar que o 'OH é muito reativo para difundir-se dos sítios onde é formado até a parte hidrofóbica da membrana, onde estão os ácidos graxos passíveis de ataque. Neste caso, a proposta é que a peroxidação lipídica seria induzida por complexos radicalares fonnados por Fe2+, Fe3+ e O2. Estas espécies teriam reatividade suficiente para abstrair átomos de hidrogênio das pontes metilênicas entre as duplas ligações dos ácidos graxos polinsaturados. Nossos resultados. mostram que a peroxidação lipídica induzida por FeSO4 causa alterações na fluidez das membranas mitocôndriais e é dependente de uma relação Fe2+/Fe3+ equimolar para atingir seu efeito máximo. Fatores que levem a um aumento na velocidade de oxidação do Fe2+ a Fe3+ pelo O2 contribuem para um aumento significativo da lipoperoxidação. Entre esses estão a presença de H2O2, o vazamento de elétrons quando as mitocôndrias estão energizadas, e íons como Pi presentes no meio de reação. Os experimentos em que a peroxidação lipídica foi inibida pelo sequestrador de radicais butilhidroxitolueno (BHT) permitem afirmar que a iniciação do processo peroxidativo depende da geração de uma espécie radicalar além da presença de FeSO4. O fato do manitol, conhecido sequestrador do radical hidroxila, não ter apresentado efeito inibitório sobre essa peroxidação, somado à observação anterior, permite descartar a hipótese de ser o radical hidroxila o iniciador do processo. Os resultados aqui apresentados, corroboram a hipótese de que complexos radicalares de valências mistas de ferro e 02 seriam os iniciadores da peroxidação lipídica induzida por FeSO4 em mitocôndrias isoladas, nas condições por nós estudadas / Abstract: Here we have studied the role of iron ions on the mitochondrial lipid peroxidation induced by FeSO4 in isolated rat liver mitochondria. There are two hypothesis to explain the role of iron ions on the initiation of this peroxidative process. The first one suggests that iron catalyses Haber Weiss and Fenton reactions generating the hydroxyl radical (OR). This later would attack the polly saturated fatty acids of the membrane phospholipids. The second explanation discards a direct participation of OIL as it is a very reactive species to difuse from its generating site to the hydrophobic part of the membrane, where are situated the fatty acids. In this case, the proposal is that the peroxidative process would be initiated by complexes of Fe2+ and Fe3+ and O2. These species would be reactive enough to react with the hydrogen from the methylenic bridges between the polly saturated fatty acid double bonds. Our results show that the FeS04-induced lipid peroxidation causes alterations on the mitochondrial membrane fluidity and the maximum effect is reached when an equimolar Fe2+/Fe3+ relation is achieved. Conditions favouring an increase on the Fe2+ to Fe3+ oxidation by O2 contribute to a significant increase on lipid peroxidation. Among these are the presence of H2O2, the electron leak occuring when energized mitochondria were used and phosphate ions in the reaction medium. The experiments showing that the peroxidation is inhibited by butylhydroxytoluene (BHT), a known radical scavenger, lead to the conclusion that to initiate the peroxidative process a radical should be generated besides the presence of FeSO4. As mannitol was found unable to inhibit this process and it is known that mannitol scavenges OH, the hypothesis that hydroxil is the radical species needed to initiate this process can be discarded by our results. Moreover, our data support the proposal that complexes of iron mixed valences and O2 would be the real initiators of the lipid peroxidation induced by FeSO4 in isolated mitochondria / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Anibal Eugenio Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T01:15:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coelho_JorgeLuizCavalcante_M.pdf: 3191844 bytes, checksum: 75e8bdd0512d82d89489430cd6cd04a5 (MD5) Previous issue date: 1979 / Resumo: Medidas simultâneas da captação de 'Ca POT. 2+¿, consumo de oxigênio, efluxo de 'Mg POT. 2+¿ endógeno e aumento de volume em mitocôndrias cardíacas e hepáticas, energizadas por succinato na presença de rotenona, mostraram que mitocôndria cardíaca é mais resistente ao desacoplamento induzido por 'Ca POT. 2+¿ e fosfato, que mitocôndria hepática. A extensão do efluxo de 'Mg POT. 2+¿ e entumescimento mitocondrial, induzidos pelo acúmulo de 'Ca POT. 2+¿, são também muito menos pronunciados em mitocôndrias cardíacas. O desacoplamento e aumento de volume em mitocôndria hepática, foi demonstrado ser resultado da perda de 'Mg POT. 2+¿ ligado a membrana, em conseqüência da reciclagem de 'Ca POT. 2+¿ induzida por fosfato através da membrana. 'Mg POT. 2+¿ exógeno protege a mitocondria hepática contra o efeito deletério do 'Ca POT. 2+¿, através da inibição do efluxo de 'Ca POT. 2+¿ insensível à vermelho de rutênio induzido por fosfato. Este último não induz reciclagem de 'Ca POT. 2+¿ em mitocôndria cardíaca. Por outro lado, quando mitocôndria cardíaca é energizada com substratos-dependentes de NAD ou com succinato na ausência de rotenona, comporta-se como mitocôndria hepática quanto as alterações induzidas pelo movimento da 'Ca POT. 2+¿. Neste caso, a reciclagem de 'Ca POT. 2+¿ é conseqüência do estado mais oxidado dos nucleotídoes de piridina mitocondrial / Abstract: Parallel measurements of 'Ca POT. 2+¿ uptake, oxygen consumption, endogenous 'Mg POT. 2+¿ efflux and swelling in rotenone poisoned rat liver and rat heart mitochondria, showed that heart mitochondria is much more resistant to uncoupling by 'Ca POT. 2+¿ in the presence of phosphate than rat liver mitochondria. The extents of 'Mg POT. 2+¿ efflux and swelling induced by 'Ca POT. 2+¿ accumulation are also much less pronounced in heart mitochondria. Uncoupling and swelling in liver mitochondria seems to be a result of the loss of membrane bound 'Mg POT 2+¿ as a consequence of 'Ca POT. 2+¿ recycling across the membrane induced by phosphate. Exogenous 'Mg POT 2+¿ protects liver mitochondria against the deleterious effects of 'Ca POT. 2+¿ by inhibiting a ruthenium red-insensitive 'Ca POT. 2+¿ efflux induced by phosphate. Phosphate does not induce recycling of 'Ca POT. 2+¿ in heart mitochondria. On the other hand when respiring on NAD-linked substrates or with succinate in the absence of rotenone heart mitochondria behave like liver mitochondria with respect to the alterations caused by 'Ca POT. 2+¿ movements. In this case the recycling of 'Ca POT. 2+¿ is a consequence of the more oxidized state of mitochondrial Pyridine Nucleotides / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Lucia Pereira da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T11:58:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nepomuceno_MariadeFatima_D.pdf: 6284886 bytes, checksum: c85da90c368d47232e46f8882bc4484f (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: É geralmente aceito que o processo de peroxidação lipídica causa distúrbios nas funções mitocondriais (Vladimirov et alii, 1980) e que tal processo é desencadeado pelo ataque de espécies ativas de oxigênio aos lipídeos de membrana (Bindoli, 1988; Carbonera e Azzone, 1988). A geração de espécies ativas na mitocondria a nível de cadeia respiratória, leva a formação da espécie ativa de oxigênio mais agressiva, o radical hidroxila, de vida extremamente curta e que reage praticamente com todos os compostos orgânicos, oxidando grupos sulfidrílicos, degradandoDNA e causando peroxidação lipídica(Halliwell e Gutteridge, 1988). Por outro lado, o aumento na permeabilidade da membrana mitocondrial, conhecido como transição de permeabilidade, pode ser induzido por vários agentes, entre eles Ca2+ e Pi ou Ca2+ e hidroperóxidos, sendo que estes últimos podem conduzir a um aumento na geração de espécies ativas causando danos à membrana mitocondrial interna devido ao ataque dessas espécies aos lipídios e proteínas componentes de membrana. Neste trabalho estudamos o possível envolvimento do processo de peroxidação lipídica com alterações na permeabilidade da membrana mitocondrial interna e subseqüente liberação de íons e moléculas de baixa massa molecular. Nossos resultados mostraram claramente a independência entre esses mecanismos, pois em condições onde a transição de permeabilidade foi prevenida pela presença de inibidores específicos, mesmo assim foi possível observar ocorrência de peroxidação lipídica. Embora ambos os processos mostrassem ser dependentes de Ca2+, nossos resultados mostraram que a transição de permeabilidade pode ser revertida pela simples remoção do íon pelo quelante EGTA porém a peroxidação lipídica, uma vez iniciada, não sofreu interrupção com a remoção do Ca2+.Também a trifluoperazina e a ciclosporina A, conhecidos inibidores da transição de permeabilidade não impediram ou bloquearam ocorrência de peroxidação lipídica. Por outro lado, alterações na fluidez de membrana só foram detectada quando o processo oxidativo foi provocado por FeSO4 , um clássico indutor da peroxidação lipídica. E interessante ressaltar que este modelo oxidativo mostrou-se ineficaz na indução de transição de permeabilidade, mesmo observando-se a formação de altos níveis de TBARS. Este conjunto de resultados permitiu-nos descartar uma correlação direta entre a peroxidação lipídica e a transição de permeabilidade. o mecanimo do processo peroxidativo parece ocorrer após a transição de permeabilidade (decorrente da abertura de um poro protéico dependente de Ca2+) em situação onde a geração de espécies ativas de oxigênio supera a capacidade dos mecanismos de defesa / Abstract: It is generally accepted that lipid peroxidation leads to mitochondrial disfunction (Vladimirov et alii, 1980) and that this process is triggered by oxygen reactive species on membrane lipids (Bindoli, 1988;Carbonera e Azzone, 1988). The generation of such reactive species, at the level of respiratory chain, leads to formation of radicals among which the hydroxyl radical, a short-lived but extremely reactive one. This radical reacts with nearly all organic compounds, oxidizing sulphydryl groups, breaking DNA and casing lipid peroxidation ( Halliwell and Gutteridge, 1988). On the other hand, mitochondrial permeabilization can be induced by several agents, as Ca2+ and inorganic phosphate (Pi) Of Ca2+ and hydroperoxides. This later condition would increase the generation of oxygen reactive species, leading to damage at the mitochondrial inner membrane level, due to the attack of these species to lipids and proteins of this membrane. We studied the involvement of the lipid peroxidation process with alterations on the mitochondrial inner membrane permeability and, as consequence, the release of ions and low molecular mass compounds, Our results clearly showed that these two processes are independent. Since under conditions where the permeability transition process was. Prevented by specific inhibitors, it was observed the occurrence of lipid peroxidation. Although both processes were dependent on the presence of Ca2+, our reults showed that the permeability transition could be reverted by Ca2+ Chelation with EGTA, but the lipoperoxidation, once initiated , was not stopped by EGTA addition. Two other drugs, cyclosporin A and trifluoperazine, well known permeability transition inhibitors were inefficient in preventing or stopping the lipid peroxidation process. On the other hand, membrane fluidity alteratians evaluated by changes an the sparameter arder, were only detected when the oxidative process was greater, as that induced by a FeS04. lnterestingly this condition did not Ied to permeability transition, even when very high levels of TBARS were observed. These data allowed to discard any direct correlation between lipid peroxidation and permeability transition. The first process seems to occur after the later one, and is probably consequence of the opening of a Ca2+ dependent pore, under conditions where the generation of oxygen reactive species exceeds the capacity of the antiaxidant endogenous systems / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador : Anibal Eugenio Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T19:14:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferraz_ValmirLauro_M.pdf: 4120238 bytes, checksum: d75b94495b9b93bd90a2e5e978d7dba5 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: Mitocôndrias de fígado de rato desenergizadas sofrem inchamento quando incubadas na presença de cálcio e um oxidante de nucleotídeos de piridina mitocondriais. Este inchamento é estimulado por fosfato e aumento da temperatura de incubação, e inibido por vermelho de rutênio, ATP+Mg2+ e dibucaína. O grau de inibição pela dibucaína varia inversamente com a concentração de cálcio. A inibição causada por vermelho de rutênio é eliminada completamente pela adição do ionóforo de cálcio ionomicina, indicando que o efeito do cátion é mediado por sítios internos de ligação. Visto que as mitocôndrias foram desenergizadas, os resultados indicam não há necessidade de movimento cíclico de cálcio através que da membrana neste mecanismo. Além disso, os resultados mostram que mitocôndrias de cérebro de rato, cuja fosfolipase A2 dependente de cálcio,é menor que 20% da de mitocôndrias de fígado, são bastante sensíveis aos efeitos deletérios do cálcio + fosfato ou oxidantes de NAD(P)H, sugerindo que a remoção de fosfolípideos da membrana, por esta enzima, não representa o fator mais significativo no mecanismo do inchamento. Um ponto de transição da temperatura em torno de 26 graus deve indicar ainda uma subordinação do mecanismo do inchamento à fluidez da membrana / Abstract: Deenergized rat liver mitochondria undergo extensive swelling when incubated in the presence of calcium plus an oxidant of mitochondrial pyridine nucleotide. This swelling is stimulated by phosphate and increasing incubation temperature, and is inhibited by ruthenium red, ATP plus Mg2+ and dibucaine. The degree of inhibition by dibucaine varies inversely with the calcium concentration. The inhibition caused by ruthenium red is completely eliminated by the addition of the calcium ionophore ionomycin indicating that the effect of the cation is mediated by internal binding sites. Since the mitochondria were deenergized the data definitely rule out the requirement for calcium cycling across the membrane in this mechanism. Furthermore, rat brain mitochondria whose Ca2+ dependent phospholipase A2 activity is less than 20% of that from liver, are very sensitive to the deleterious effects of calcium plus phosphate or NAD(P)H oxidants suggesting that the withdrawal of membrane phospho-lipids by this enzyme may not be the major factor in the swelling mechanism. A temperature transition value of 26 degress may still indicate a swelling mechanism-dependence membrane fluidity / Mestrado / Fisiologia e Biofisica / Mestre em Ciências Biológicas