Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T02:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_RodrigoFranco_M.pdf: 3057488 bytes, checksum: cb959542187ac7e8cd6b5b095813ad77 (MD5) Previous issue date: 2000 / Mestrado

Orientadores: Margaret de Castro, Maricilda Palandi Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T06:46:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torres_Natalia_M.pdf: 1866447 bytes, checksum: 8703fb4eb0e03b2794a2485e136c4f58 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A hiperplasia adrenal congênita (HAC) constitui um grupo de doenças hereditárias decorrentes da deficiência de uma das enzimas necessárias para a esteroidogênese adrenal. A forma mais comum de HAC é decorrente da deficiência da 21-hidroxilase (21-OH), correspondendo a 90-95% de todos os casos, cuja herança é autossômica recessiva. Mutações no gene CYP21 são responsáveis pelas diferentes formas da doença. O gene CYP21 codifica a enzima 21-OH e se alternam em tanden com o pseudogene CYP21P, ambos apresentando 98% de homologia, favorecendo o emparelhamento desigual dos cromossomos durante a meiose, levando ao aparecimento de duplicações, deleções ou conversões destes genes. Estudos de mutagênes e in vitro permitiram quantificar a atividade enzimática de cada mutação e sua correlação com as diferentes formas clínicas da doença. O objetivo deste estudo foi delinear o perfil do complexo gênico 21-OH em famílias com pelo menos um membro portador de HAC por deficiência da 21-OH, determinar as freqüências de haplótipos com mutações de ponto no gene CYP21 e estabelecer uma correlação entre genótipo e fenótipo dos indivíduos afetados. Foram estudadas 50 famílias não correlacionadas, sendo 20 indivíduos portadores da forma clássica perdedora de sal (PS), 17 da forma clássica virilizante simples (VS) e 13 da forma não clássica (NC) de deficiência de 21-OH. Utilizamos DNA genômico para amplificação do gene CYP21 por PCR alelo-específico. Mutações foram identificadas em 93 alelos, sendo mais freqüentemente encontrada a mutação I172N (20,4%), seguida da V281L (18,2%), IVS2, A/C>G,-12 (Sp2) (14,0%) e R356W (6,5%), Q318X (1,1%), P30L (1,1%) e 706_713del8 (D8) (1,1%). Os genótipos foram divididos em grupos A, B e C, em ordem crescente da atividade enzimática, e foram comparados com as formas clínicas de HAC: PS, VS e NC, respectivamente. Em nossa amostragem, houve, ainda, uma forte correlação do genótipo com o fenótipo (100% para o C grupo, 100% para o B e 88,8% para o A). A freqüência de microconversões encontrada neste estudo foi semelhante à observada na população mundial e brasileira / Abstract: Congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency (CAH-21OHD) is one of the most common inborn metabolism errors. It presents a wide spectrum of clinical manifestations, varying from a severe form with prenatal virilization and neonatal dehydration to a mild form in which the signs appear around puberty onset. It presents recessive autosomal inheritance and occurs due to mutations in the CYP21 gene, which codifies the 21-hydroxylase enzyme. Mutations leading to less enzymatic activity are related to the classical form and those with more enzymatic activity with nonclassical form of the disease. We studied the frequency of the 7 most frequent point mutations reported in CYP21 gene in 50 families with CAH-21OHD, 21 with classic salt wasting patients (SW), 17 with classic simple virilizing patients (SV) and 13 with nonclassic form (NC). In addition, we correlated the phenotype with the genotype observed in all patients studied. We used genomic DNA to amplify CYP21 gene by allele-specific PCR. Mutations had been identified in 93 alleles. The more frequent mutation found was I172N (21.5%) followed by V281L (18.2%), IVS2, A/C>G,-12 (Sp2) (14.0%) and R356W (6.5%), Q318X (1.1%) and P30L (1.1%) and 706_713del8 (D8) (1.1%). The genotype was divided in groups A, B and C, in an increasing order of enzymatic activity. These three groups were compared to the SW, SV and NC forms, respectively. There was a strong correlation of phenotype with the genotype (100% for C group, 100% for B group and 88.8% for A group). In conclusion, the frequency of microconversions found in this study was similar to those observed in the worldwide and in a Brazilian sub population / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores : Maria de Fatima Sonati, Monica Barbosa de Melo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T14:43:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jorge_SimoneBordignonde_M.pdf: 1672707 bytes, checksum: 1ca1b039159c022f6091792558490b00 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Mutações de ponto e pequenas inserções ou deleções nos genes da globina a humana podem produzir variantes estruturais de cadeia a e a-talassemia. As mutações podem ser identificadas tanto pelo sequenciamento total dos genes, como por métodos de triagem, os quais selecionam o exon mutado para, então, ser seqüenciado. Embora sejam pequenos (cerca de 1Kb, com 3 exons e 2 introns), os genes da globina a são duplicados (a2 and a1) e extremamente ricos em ligações G-C, o que torna difícil a desnaturação e reduz a eficiência do sequenciamento, causando freqüentes artefatos e necessidade de repetições. Como o sequenciamento é ainda um método demorado e de custo elevado para muitos laboratórios, nós modificamos algumas condições do Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP) com o intuito de otimizar a triagem de mutações nos genes da globina a humana / Abstract: Point mutations and small insertions or deletions in the human a-globin genes may produce a-chain structural variants and a-thalassemia. Mutations can be detected either by direct sequencing of the whole gene or by screening methods, which select the mutated exon for sequencing. Although small (around 1 Kb, 3 exons and 2 introns), the a-globin genes are duplicate (a2 and a1) and extremely G-C rich, what makes them difficult to denature and reduces sequencing efficiency, causing frequent artifacts and the need of repetitions. As DNA sequencing is still a time-consuming and expensive method for many laboratories, we modified some conditions of the Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP) in order to optimize mutation detection in the a-globin genes / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Edi Lucia Sartorato, Andrea T. Maciel Guerra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:24:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brianti_MitsueTaukeuti_M.pdf: 3392678 bytes, checksum: 88dc15b47c9245c79d493f2070d20835 (MD5) Previous issue date: 2003 / Mestrado

Orientadores: Iscia Lopes Cendes, Fernando Cendes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:07:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_PatriciaAlineOliveiraRibeirodeAguiar_M.pdf: 6980410 bytes, checksum: a30b4048981d48a03f1d0feb8a745b57 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As epilepsias generalizadas idiopáticas (EGI) perfazem aproximadamente 50% de todas as epilepsias e possuem em sua etiologia fatores genéticos envolvidos. A epilepsia mioclônica juvenil (EMJ), uma das formas mais comuns de EGI, foi a primeira síndrome epiléptica a ter um locus mapeado, em 1988 e, desde então, vários estudos foram realizados mas a localização de um ou mais loci para a EMJ e outras formas de EGI permanece ainda uma questão aberta e muito atual. o objetivo deste projeto foi mapear loci envolvidos na predisposição para a EMJ e outras formas de EGI por estudos de ligação e associação em pacientes brasileiros. Os estudos de ligação foram realizados utilizando-se seis famílias não relacionadas, com pelo menos dois pacientes com EGI, sendo o probando com EMJ. Para os estudos de associação foram utilizados 44 pacientes com EMJ, não relacionados e, como grupo controle, 63 indivíduos sem história pessoal ou familiarde epilepsia. Para ambos os estudos foram genotipados oito marcadores microssatélites nas regiões cromossômicas 6p21 e 6p12 e quatro marcadores que flanqueassem o locus 5q34. Para o estudo de ligação foram realizadas as análises de dois pontos e de múltiplos pontos com o aplicativo LINKAGE. Para a análise de associação foram utilizados os testes Qui-quadrado e exato de Fisher, quando indicado, e o cálculo de odds ratio com intervalo de confiança de 95%. Também foi realizada uma pesquisa direta de mutação do exon 9 do gene GABRA1, localizado em 5q34, pela análise de SSCP em 71 pacientes e 82 controles e subseqüentemente foi realizado seqüenciamento das variantes encontradas. Os nossos resultados do estudo de ligação não evidenciaram a presença de um gene principal nas regiões 6p21, 6p12 ou 5q34. No entanto, a análise de associação demonstrou a possível presença de genes de suscetibilidade (menor efeito) ou genes modificadores, nos pacientes com EMJ estudados, nas três regiões. A análise de mutação do exon 9 do gene GARRA] não revelou qualquer variante potencialmente patológica. Em conclusão, os nossos dados vêm contribuir para o melhor entendimento da EMJ e das EGI em geral, reforçando o conceito de doenças complexas, nas quais existe possivelmente uma herança poligênica e a presença de heterogeneidade genética / Abstract: The idiopathic generalized epilepsies (IGE), for which a genetic cause is widely accepted, account for approximately 50% of all epilepsies. Juvenile myoclonic epilepsy (JME), one of the most common forms of IGE, was the first epileptic syndrome to be mapped to a chromosome (ch) region, in 1988, and since then, although several studies were carried out, the localization of one or more loci for the JME and other forms of IGE remains still an open and very current question. The objective of this project was to map loci involved in the predisposition for JME and other forms of lGE, using linkage and association studies, in Brazilian patients. Linkage studies were carried out using six non-related families, with at least two patients with IGE, with the proband having JME. For the association studies 44 on-related individuals were genotyped. In addition, 63 normal controls without epilepsy, were studied. For both studies we genotyped eight microsatellite markers in ch 6p21 and ch 6p12 and four markers in ch 5q34. For linkage studies we used the LINKAGE software to calculate two-point and multipoint lod scores. For the association analyses, we used qui-square and Fisher's exact tests, when it was indicated, and odds ratio with 95% confidence intervalo. We also performed a mutation screening on exon 9 of the GABRA1 gene, on ch 5q34, for 71 patients and 82 controls using SSCP analysis and, subsequently,sequencing of the variants found. Our linkage results showed no evidence of a major locus on cromossomal regions 6p21, 6p12 or 5q34. However, association studies found some evidence for susceptibility genes (minor effect) or modifier genes in all three regions. Mutation screening of exon 9 of the GABRA1 gene did not identify any potential pathological variant. In conclusion,our data contribute for the general view of JME and other forms of IGE as complex trait, in which polygenic inheritance and genetic heterogeneity are probably / Mestrado / Neurociencias / Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientadores: Maria Cecilia Barisson Vilares, Marcelo de Carvalho Ramos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:36:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pavan_EricaMary_M.pdf: 4511784 bytes, checksum: f18e2ccff3e501d32cd9bb36915d1074 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A isoniazida, a rifampicina e a pirazinarnida, têm sido utilizadas no tratamento da Tuberculose em muitos países, inclusive no Brasil. A resistência das cepas de Mycobacterium tuberculosis aos antibióticos tem resultado em falência do tratamento e aumento do custo para o sistema de saúde. As Mycobacterium tuberculosis resistentes às drogas de primeira linha tem emergido e estas tem sido reportadas mundialmente. Nas mutações no gene rpo? têm se evidenciado o mecanismo de resistência prevalente das cepas de Mycobacterium tuberculosis resistentes à rifampicina. A fim de caracterizar as bases genéticas da resistência às drogas, do Mycobacterium tuberculosis, foram analisadas mutações envolvendo a resistência à rifampicina utilizando os métodos SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism) e sequenciamento. As cepas de MTB (Mycobacterium tuberculosis) foram genotipadas e avaliadas quanto à suscetibilidade a rifampicina. Como resultado, foram encontradas 13 cepas sensíveis a rifampicina e 65 resistentes. O DNA genômico foi obtido de cada cepa e um fragmento constando de 157pb do gene rpo? foi amplificado, submetido ao SSCP e ao sequenciamento. As mutações identificadas pertenciam a região do gene rpo? entre o códon 511 e 533. A S531L (44%) foi a mutação de maior prevalência, seguida das mutações H526D (21%), H526Y (3%), L533P (3%), D516V (3%) e a inserção Phe514 e Met515 (3%) / Abstract: Isoniazid, rifampin, and pyrazinamide, have been used as the standard treatment for tuberculosis in many countries, including Brazil. Antimicrobial resistance among Mycobacterium tuberculosis strains results in increased morbidity, mortality and costs of health care. Control of tuberculosis is thus threatened by widespread emergence of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis as reported worldwide. Mutations in the rpo? gene seems to be the most prevalent mechanism involved in rifampin resistance among M. tuberculosis strains. To characterize the genetic basis of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis in Brazil, mutations involved in rifampin resistance were detected using single strand conformation polymorphism (SSCP) and sequencing studies. A sample consisting of 73 isoniazid resistant and 5 isoniazid sensitive isolates recovered from August, 1999 through September, 2000 was screened for susceptibility to rifampin. As a result, 13 susceptible, and 65 resistant strains were detected. Genomic DNA was obtained from each isolate, and a fragment consisting of 157 bp of the rpo? gene was amplified, and submitted to SSCP and sequencing studies. Mutations involving codon 511 through codon 533 were identified. S531L (44%) was the most prevalent mutation found, followed by H526D (21%), and H526Y, L533P, D516V, Ins Phe514, Met515 (3% each). Our study corroborates previous studies done in Brazil which identified S531L as the most prevalent mutation, and several other mutations on the same gene segment (codon 511 through 533) / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Yong Kun Park / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-24T09:31:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Contado_JoseLuis_D.pdf: 5265713 bytes, checksum: d8b1e9c15dba1c02f381597ff13b0f09 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Frutooligossacarídeos, ou Neosugar, são oligômeros de sacarose, constituídos de uma molécula de glicose unida com 2, 3 ou 4 unidades de frutose por ligação ß-2,1, resultando em estruturas designadas como 1-kestose (GF2), nistose (GF3) e 1f-frutofuranosil nistose (GF4), respectivamente. Sabe-se que os frutooligossacarídeos existem naturalmente em muitos tipos de plantas. Podem também ser obtidos a partir de sacarose através da transfrutosilação catalisada pela enzima ß-frutofuranosidase (E.C.3.2.1.26) de microrganismos. Frutooligossacarídeos têm-se tomado de grande interesse por estimular o crescimento de bifidobactérias benéficas do trato digestivo, diminuir o teor do colesterol total e lipídeos no soro sanguíneo, reduzir a constipação intestinal, e em geral melhorar a saúde humana. Neosugar é uma mistura de frutooligossacarídeos, 1-kestose (GF2), nistose (GF3) e 1f-frutofuranosil nistose (GF4) e é comercialmente produzido a partir de sacarose usando a ß-frutofuranosidase obtida de A. niger. O objetivo deste trabalho foi induzir um mutante de Aspergillus niger, utilizando o reagente N-Metil N' -Nitro N-Nitrosoguanidina (M.N.N.G.) e raios ultravioleta (UV), que produzisse uma ß-frutofuranosidase com maior atividade de transfrutosilação para produção de frutooligossacarídeos do que a linhagem parental e comparar as características das duas enzimas. Uma linhagem mutante (nº 12) de A. niger, obtida pelo tratamento com M.N.N.G.-UV, foi selecionada por apresentar mais que o dobro da atividade ß-frutofuranosidase que a linhagem parental. Esta linhagem mutante produziu menos conídea em PDA e mostrou-se morfologicamente diferente apresentando colônias bege. A ß-frutofuranosidase extracelular da linhagem mutante foi purificada cerca de 15,8 vezes em relação a enzima bruta sendo obtido 39,2 % de rendimento. A enzima purificada apresentou atividade específica de 4,26 unidades/mg de proteína. A enzima apresentou pH e temperatura ótima de atividade na faixa de 5,5-6,0 e 50-55°C, respectivamente. A enzima mostrou-se estável na faixa de pH 5,0 a 6,0 e a temperaturas inferiores a 55°C. Os valores de km e Vmáx da ß-frutofuranosidase para sacarose foram 0,47 M e 1,02 µmol/ml/min, respectivamente. A atividade enzimática foi inibida com 1 mM de N-bromosuccinimida, ß-mercaptoetanol, HgCl2 e I2, e com 10 mM de AgNO3, após 30 minutos a 55°C. A ß-frutofuranosidase extracelular da linhagem mutante foi purificada cerca de 15,4 vezes em relação a enzima bruta sendo obtido 31,7 % de rendimento. A enzima purificada apresentou atividade específica de 1,66 unidades/mg de proteína. A enzima apresentou pH e temperatura ótima de atividade na faixa de 5,0-6,0 e 50-55°C, respectivamente. A enzima mostrou-se estável na faixa de pH 5,0 a 6,0 e a temperaturas inferiores a 55°C. Os valores de Km e Vmáx da ß-frutofuranosidase para sacarose foram 0,37 M e 1,12 µmol/ml/min, respectivamente. A atividade enzimática foi inibida com 1 mM de N-bromosuccinimida, ß-mercaptoetanol, HgCl2 e I2. e com 10 mM de AgNO3, após 30 minutos à 55°C.O maior rendimento de frutooligossacarídeos (54,41%) em relação aos açúcares totais foi obtido utilizando-se ß-frutofuranosidase e 30% substrato sacarose em tampão citrato-fosfato pH 5,5 após 6 horas de incubação a 55°C. A concentração de substrato e o tempo de incubação são importantes para obter a proporção de GF2/GF3/GF4 desejada / Abstract: Fructooligosaccharides (or Neosugar) are sucrose oligomers, which are composed of glucose attached via a ß-(2-1) linkage to 2, 3 or 4 fructose units. The resulting structures are designated as l-kestose (GF2), nystose (GF3) and lf-fructofuranosylnystose (GF4), respectively. It is known that fructooligosaccharides exist naturally in many kinds of plants. They can also be prepared from sucrose through the transfructosylating action of enzyme ß-fructofuranosidase (E.C. 3.2.1.26) obtained from microorganisms. Fructooligosaccharides have become of major interest due to their growth stimulation of beneficial bifidobacteria in the digestive tract, decrease of total cholesterol and lipid in the serum, relief of constipation, and general improvement of human health. Neosugar is a mixture of the fructooligosaccharides, l-kestose (GF2), nystose (GF3) and 1f-fructofuranosylnystose (GF4), and is commercially produced from sucrose using the enzyme ß-frutofuranosidase enzyme obtained from A. niger ATCC 20611. The objective of this work was to induce a mutant of Aspergillus niger, using M-Methyl N'-Nitro N-Nitrosoguanidine (M.N.N.G.) and ultraviolet ligth (UV) producing higher ß-fructofuranosidase activity for the production of fructooligosaccharides than the parent strain and to study the characteristics of the enzyme. A mutant strain(nº 12) of A. niger, obtained by treatment with M.N.N.G.-UV, was selected, producing 100% more ß-fructofuranosidase than the parent strain. The mutant produced less conidia on PDA and was morphologically different: brownish white colonies. The extracellular ß-fructofuranosidase of the mutant strain was purified about 15.8-fold (40.2% yield) with respect to the crude enzyme preparation, showing a specific activity of 4.26 units/mg protein. It was found that the optimum pH and temperature for activity were 5.5-6.0 and 50-55°C, respectively. The enzyme was stable from pH 5.0 to 6.0 and at temperatures below 55°C. The Km and Vmáx values of the ß-fructofuranosidase for sucrose were 0.47 M and 1.02 µmol/ml/min., respectively. The activity of the enzyme was inhibited by 1 mM by N-bromosuccinimide, ß-mercaptoethanol, HgCl2 and I2, and by 10 mM AgNO3 after 30 minutes at 55°C. The extracellular ß-fructofuranosidase parent strain was purified about 15.4-fold (38.6 % yield) with respect to the crude enzyme preparation showing a specific activity of 1.66 units/mg protein. It was found that the optimum pH and temperature for activity were 5.0-6.0 and 50-55°C, respectively. The enzyme was stable from pH 5.0 to 6.0 and at temperatures below 55°e. The enzyme was stable from pH 5.0 to 6.0 and at temperatures below 55 °e. The Km and Vmax values of the ß -fructofuranosidase for sucrose were 0.37 M and 1.12 µmol/ml/min.., respectively. The activity of the enzyme was inhibited by 1 mM by N-bromosuccinimide, ß-mercaptoethanol, HgCl2 and I2, and by 10 mM AgNO3 after 30 minutes at 55°C. Maximum conversion yeld from sacarose to fructo-oligosaccharides (54.41%) was obtained when added ß-frutofuranosidase in 30% sucrose, at 55°C and pH 5,5, for 6 hrs incubation. The production efficienceis of GF2/GF3/GF4 depending on sucrose concentration and the reaction time / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T12:07:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Grignoli_CarlosRobertoEscrivao_M.pdf: 6927532 bytes, checksum: 04f15dab880c63f76741351c93bd0646 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: As hemoglobinas humanas, compreendem um grupo de moléculas protéicas responsáveis pelo transporte de oxigênio dos capilares alveolares dos pulmões para os tecidos. As moléculas variantes de hemoglobinas são caracterizadas pela anormalidade estrutural de uma subunidade particular da globina e podem ou não resultar em alterações clínicas detectáveis. Existem alterações que levam a uma redução no ritmo de síntese de uma ou mais cadeias polipeptídicas da hemoglobina denominada de síndromes talassêmicas. Neste estudo identificamos as alterações moleculares em pacientes portadores de variante de cadeia d, 7 pacientes com variantes de cadeia (3 e 2 pacientes com talassemia Beta. A caracterização das alterações foi feita pelo sequenciamento de DNA dos genes de globina beta e delta após amplificação pela reação em cadeia da polimerase. Variantes como as Hbs Lepore-Boston-Washington, Leiden, Korle-Bu e A2 'B2 representam os primeiros casos descritos na nossa população sendo que as Hbs Leiden e Korle-Bu foram demonstradas pela primeira vez por análise de DNA. Uma nova variante de cadeia ß eletroforeticamente silenciosa detectada pela eletroforese de cadeia de globinas, denominada de Hb Rio Claro ß34(B16)Val->Met, e encontrada em associação com Hb Hasharon (a47 Asp->His) e alfa talassemia-2 (-a3.7). Foi descrita neste trabalho adicionalmente uma nova mutação de ponto afetando o codon 6 no gene da beta globina (GAG->TAG), criando um "stop codon" e uma alteração rara na nossa população na região promotora do gene da globina beta (-88), ambas levando a talassemia ß / Abstract: Not informed / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador : William Jose da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T00:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maluf_MirianPerez_M.pdf: 3876462 bytes, checksum: 3b86e7a3fca8f97c106a5093910c2fff (MD5) Previous issue date: 1991 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Edi Lucia Sartorato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:21:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis_FernandadeCastro_D.pdf: 7069046 bytes, checksum: 4006acb8e366e7771cb736c45bdedef5 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Osteogenesis Imperfecta (01) é a denominação de um grupo heterogêneo de doenças hereditárias associadas a anormalidades tanto na síntese quanto na estrutura do colágeno tipo I. Esta é a proteína mais abundante encontrada nos ossos, pele, tendões e ligamentos, revestimento dos vasos sanguíneos, e outros tecidos conjuntivos, exceto a cartilagem. Em mais de 90% dos casos, o fenótipo é resultante de mutações espontâneas ou de transmissão dominante em famílias afetadas em um dos dois Zoeiresponsáveis pela síntese do colágeno tipo I, onde se localizam os genes COLIAI e COLIA2. O defeito molecular resulta em uma grande variedade de formas clínicas, desde assintomáticas até letais no período neonatal. As formas mais leves da doença são freqüentemente provocadas por mutações que inativam um dos alelos do gene COLIAI resultando numa quantidade normal, porém reduzida de colágeno tipo I. Por outro lado, as formas mais graves da doença resultam de mutações dominante negativas nos genes COLIAI ou COLIA2, as quais produzem defeitos estruturais na molécula de colágeno. A correlação genótipofenótipo observada em pacientes com 01 depende, portanto da natureza e posição das mutações. O principal objetivo do presente estudo foi identificar mutações no gene COLIAI em indivíduos portadores dos diversos tipos de 01, uma vez que o diagnóstico molecular não é um exame de rotina oferecido pelos laboratórios e, portanto, não há estudo da prevalência dessas mutações em nosso país. A metodologia empregada para tal diagnóstico foi o seqüenciamento automático direto do produto da PCR do gene COLIAI. Os exons 6 a 52, que compreendem o domínio da tripla hélice e o domínio C-terminal da molécula do colágeno tipo I, foram seqüenciados em 13 pacientes portadores de 01. Foram identificadas seis mutações associadas ao fenótipo, sendo quatro novas (c.1885de1G,p.P239A, p.G592S, p.G649D) e duas já descritas (p.R237X e p.G382S), além de polimorfismos em exons e introns e outras substituições. Este foi o primeiro estudo molecular realizado com 01 no Brasil. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que não existem mutações prevalentes em nossa amostra e que as características das mutações encontradas estão de acordo com os dados da literatura, onde substituições de glicina por outro aminoácido no domínio da tripla hélice do gene COLIAI são as principais responsáveis pelos tipos mais graves de 01, tipos II,III e IV / Abstract: Osteogenesis imperfecta (01), commonly known as "brittle bone disease", is a dominant autosomal disorder and is caused by mutations in type I collagen genes, COLIAl and COLIA2, which are responsible for the synthesis of the main protein of bone, skin, ligaments, tendon and most other connective tissues. 01 is a genetic disorder of increased bone ffagility and low bone mass. Severity varies widely, ranging ffom intrauterine ffactures and perinatal lethality to very mild forms without ffactures. The mild forms are usually caused by mutations which inactivate one allele of COLIAl gene resuIting in a reduced amount of normal type I collagen. On the other hand, the severe and lethal forms result ffom dominant negative mutations in COLIAl or COLIA2, which produce structural defects in the collagen molecule. The varied clinical characteristics of 01 reflect different classes of mutations in different regions of type I collagen genes. These aIterations vary in type and location, aIthough the most common in COLlloci are single-base substitutions in the part ofthe gene coding for the triple helix domain, which changes a codon for a glycine to a codon for an amino acid with a bulkier side chain. Therefore, the presence of glycine at every third amino acid is essential to allow the a-chains to adopt the characteristic collagen triple helix. The main objective ofthe present study was to search for mutations in the COLIAl gene in patients previously diagnosed as having 01. Also, providing information about the characteristics of mutations in this gene in our sample. Therefore, here we report the resuIts ofthe molecular investigation on the COLIAI gene in 13 Brazilian 01 patients. Mutational analysis was performed by direct sequencing ofPCR product for each exon. We have found six mutations, four are novel (c.1885deIG, p.P239A, p.G592S, p.G649D) and two were previously described (p.R237X and p.G382S). This is the first molecular study of 01 in Brazil. Our findings showed that there are no prevalent mutaÍions in our sample, and that their distribution is similar to that reported by other authors, with a preponderance of substitutions on glycine residues in the triple helix domain causing 01 types II, III and IV / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas