Orientador: Juliana Campos Junqueira / Resumo: A terapia fotodinâmica (TFD) é uma técnica que combina um fotossensibilizador (FS) com luz visível e oxigênio molecular, podendo ser utilizada como agente antimicrobiano no controle de diversas doenças infecciosas, como a cárie dentária. A quitosana vem demonstrando atividade promissora quando associada à alguns fotossensibilizadores. Portanto, o objetivo desse trabalho foi investigar a associação da quitosana com o fotossensibilizador Photodithazine® (PDZ) na TFD sobre culturas planctônicas e biofilmes de S. mutans, bem como avaliar sua eficácia sobre biofilmes microcosmos orais. Inicialmente, foi preparada uma suspensão de S. mutans UA 159 padronizada em 106 células/mL. Para o estudo em culturas planctônicas, foi adicionada a suspensão de S. mutans em placas de 96 poços. Para o estudo em biofilmes, foram confeccionadas amostras de esmalte de dentes bovinos como substrato para a formação do biofilme em placas de 24 poços. As culturas planctônicas e os biofilmes foram tratados de acordo com os grupos experimentais, recebendo adição de PDZ, quitosana ou PBS, seguido pela irradiação ou pela manutenção em ambiente escuro (controle). Os efeitos dos tratamentos foram analisados por meio da contagem de UFC/mL de S. mutans em ágar Infusão Cérebro Coração (BHI) incubadas por 48h a 37°C (5% de CO2) e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Além disso, para confirmar a penetração do FS e da quitosana nas células de S. mutans foi realizado teste de absorbância. A seguir, foram estuda... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Resumo: Estudos realizados in vitro tem demonstrado que Streptococcus mutans podem produzir metabólitos capazes de inibir Candida albicans, tornando interessante a identificação e desenvolvimento de novas substâncias para o tratamento da candidose bucal. Assim, o objetivo desse estudo foi extrair, fracionar e identificar as substâncias produzidas por S. mutans e avaliar seus efeitos sobre a patogenicidade de C. albicans e na resposta imunológica em modelos de estudo in vivo. As substâncias do sobrenadante da cultura de S. mutans foram extraídas com acetato de etila e posteriormente fracionadas em coluna de sílica derivatizada C-18 (150 g, Φ = 3,5 cm) utilizando diferentes soluções de MeOH:H2O (36:64, 49:51, 60:40, 76:24, 100:0) como eluente, obtendo cinco diferentes frações (SM-F1, SM-F2, SMF3, SM-F4 e SM-F5). A identificação das substâncias contidas no extrato bruto e frações foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas. Foram testados os efeitos do extrato bruto e frações do sobrenadante da cultura de S. mutans sobre a candidose experimental induzida em modelo invertebrado de Galleria mellonella e em camundongos imunossuprimidos. Para a escolha da concentração a ser testada nos modelos in vivo foi realizada a determinação da Concentração Inibitória Mínima do extrato bruto e frações sobre C. albicans. No modelo de infecção experimental com G. mellonella, os efeitos do extrato e frações foram analisados pelos testes de curva de sobrevivência, quantificaç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / In vitro studies have shown that Streptococcus mutans can produce metabolites capable of inhibiting Candida albicans, becoming interesting the identification and development of new substances for the treatment of oral candidiasis. Thus, the objective of this study was to extract, fractionate and identify the substances produced by S. mutans and evaluate their effects on the pathogenicity of C. albicans and on the immune response in in vivo study models. Substances from the S. mutans culture supernatant were extracted with ethyl acetate and subsequently fractionated on a C-18 derivatized silica column (150 g, Φ = 3.5 cm) using different solutions of MeOH:H2O (36:64, 49:51, 60:40, 76:24, 100:0) as eluent, obtaining five different fractions (SM-F1, SM-F2, SM-F3, SM-F4 and SM-F5). The identification of the substances contained in the crude extract and fractions was performed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). The crude extract products and the fractions of the supernatant of the S. mutans culture were assessed on experimental candidiasis induced in invertebrate model of Galleria mellonella and in immunosuppressed mice. For a choice of the concentration to be tested in the in vivo models, a determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the crude extract and fractions on C. albicans was performed. In the model of experimental infection with G. mellonella, the effects of extract and fractions were analyzed by the survival curve test, (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

La caries dental es una de las patologías orales más comunes en nuestra población, según MINSA1 el 90% de la población padece esta patología. Entre los factores causales de esta enfermedad se encuentran huésped, dieta, el tiempo y los microorganismos. En cuanto al factor microbiológico se encuentran entre las principales: Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus y Actinomyces naeslundii. El Streptococcus mutans se caracterizan por ser cocos gram positivos, anaerobio facultativo forman parte de la flora residente en la cavidad bucal y vías respiratorias altas; autores tales como Berkowitz, Kohler, col. y Van Houte han sugerido al Streptococcus mutans como el principal agente de la formación de caries dental.2 Entre los factores de patogenicidad en el Streptococcus mutans destaca: poder acidogénico, acidófilo y acidúrico; síntesis de polisacáridos extracelulares de tipo glucanos insoluble y solubles, fructanos; síntesis de polisacáridos intracelulares; capacidad adhesiva por la proteínas salivales; producción de bacteriocinas con actividad sobre otros microorganismos. Ante esta problemática existen numerosos tratamientos para impedir que la caries dental siga dañando estructuras dentarias, que van desde aplicaciones de sustancias tópicas como flúor en forma preventiva, restauraciones, entre otros. Actualmente se emplean plantas medicinales para combatir ciertas enfermedades, como es el uso de la “muña” Minthostachys mollis, planta oriunda de la sierra del Perú, su uso ampliamente difundido en diversas regiones del país, se debe por poseer propiedades curativas, las cuales atribuyen a sus componentes, entre los cuales destaca el aceite esencial, el cual actúa dependiendo del tipo de microorganismo y está principalmente relacionado con la estructura de la pared celular y la membrana externa de los mismos,3 además que interferirían en la fase de metabolismo intermedio de los microorganismos inactivan enzimas de reacción.4 En el trabajo realizado se utilizó el aceite esencial de Minthostachys mollis en cepas de Streptococcus mutans y se evaluó su efecto antibacteriano comparado con el control positivo (amoxicilina). / This paper antibacterial effect in vitro of the essential oil of Minthostachys mollis in Streptococcus mutans was evaluated, the plant species was collected from the city of Tarma (Junín) about 8 kilos of leaves muña, which were processed to obtain the essential oil, held at the Faculty of Pharmacy and Biochemistry (San Marcos) The pattern of Streptococcus mutans strain was purchased, was revived and plated in culture medium with trypticase soy agar (TSA), susceptibility testing was performed. For these tests, essential oil dilutions were prepared. Paper discs were soaked sterile filter with 10 microliters muña essential oil 100 %, other discs were prepared with essential oil muña 50 % and 25 % used as a solvent and DMSO (dimethyl sulfoxide) negative control were used, and as a positive control was used amoxicillin discs. Each disc was placed in an orderly and equidistantly in the culture medium; incubated anaerobically by the method of extinguishing the candle at 37 ° C for 48 hours. Allow time observation and interpretation of the results was performed. Measurements of inhibition zones were performed using vernier. In the samples of essential oil Minthostachys mollis 100 % scored average of 10.79 mm, essential oil Minthostachys mollis 50 % average of 7.6 mm essential oil Minthostachys mollis 25 % average of 5 mm (size disks) as the negative control (DMSO), positive control (amoxicillin) average of 49.3 mm. Data were processed in SPSS version 19 and ANOVA analysis of numerical data of the inhibition halos was performed, was obtained p (0.000) <0.005 (statistically significant). It was concluded that Minthostachys mollis essential oil 100 % compared with the positive control (amoxicillin) had lower antibacterial effect.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / ntroducción: Determinar el riesgo cariogénico del paciente es un requisito fundamental al realizar un diagnóstico. Éste nos permitirá elaborar un plan de tratamiento que responda a las necesidades particulares de cada paciente. La importancia de establecer el recuento de estreptococcus mutans (S. mutans) sobre restauraciones de amalgama versus resina compuesta, permitiría identificar el nivel de riesgo microbiológico en desarrollar caries secundaria, teniendo en conocimiento que esta es la principal causa de fallas de restauraciones, reduciendo en el futuro su recambio, con la consecuente pérdida de tejido sano que ocurre en cada reemplazo. Conocer la colonización de microbiota cariogénica en restauraciones de amalgama y resina compuesta, podría ser un aspecto a considerar en las decisiones de tratamiento, eligiendo así un material de obturación y medidas preventivas, ajustada con el riesgo cariogénico local y propio de cada paciente. Material y Método: Se seleccionaron 69 pacientes de la clínica de Operatoria Dental de 4to año de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile, durante el periodo de Septiembre a Diciembre del 2011. En cada uno de ellos se tomó una muestra de microbiota dental de una pieza dentaria restaurada con amalgama y con resina compuesta utilizando la técnica de la cubeta. Este método consiste en realizar una impresión directa sobre las superficies oclusales de restauraciones, mediante una cubetilla de flúor modificada cargada con agar TYCSB. Las cubetas se incubaron en estufa a 37°C por 48 horas, para posteriormente proceder al recuento bacteriano. Resultados: Mediante el método de la cubeta se logró aislar Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de S. mutans de la superficie de restauraciones 1 oclusales de amalgama y resina compuesta en el 94,2% de las muestras. Se observó una diferencia estadísticamente significativa (p <0,05) donde las muestras de biofilm de placa bacteriana depositada sobre las restauraciones de resina presentaban mayor cantidad de UFC/cm 2 que las superficie de restauraciones de amalgama. Conclusiones: Existen diferencias significativas en el recuento de Streptococcus mutans en restauraciones de resina compuestas y en la superficie de restauraciones de amalgama, siendo mayor en restauraciones de resina compuestas a partir de muestras de placa bacteriana dental obtenidas mediante la técnica de la cubeta.

El inicio de la infancia es la época más importante para la salud bucal del individuo. Durante este periodo los dientes erupcionan, las bacterias inician su colonización y los hábitos de salud bucal se empiezan a establecer. Existe evidencia considerable para afirmar que los Streptococcus del grupo mutans son los principales microorganismos asociados a la caries de infancia temprana y de que éstos son transmitidos de madre a hijo. Convencionalmente, se cree que la colonización inicial por Streptococcus del grupo mutans ocurre después de la erupción de las piezas dentarias deciduas. Sin embargo, algunos estudios recientes demuestran que esta colonización puede ocurrir a la edad de 3 meses, con ausencia de piezas dentarias. La edad en que el niño es colonizado es importante, debido a que los estudios sugieren que mientras más temprano es colonizado el niño, su experiencia de caries aumenta Varios factores suelen contribuir a la colonización por Streptococcus del grupo mutans como son la erupción de las piezas dentarias, la práctica de inadecuados hábitos alimenticios y una deficiente higiene oral. El objetivo de este estudio fue evaluar el nivel de Streptococcus del grupo mutans en relación a la edad, número de piezas dentarias, hábitos alimenticios e higiene oral, en los infantes entre 0 – 24 meses de edad que asistieron a la Unidad del Bebé del Área de Odontopediatría del Instituto Especializado de Salud del Niño durante los meses de Mayo – Junio del 2005.

Tendo em vista o importante papel desempenhado pelos Streptococcus mutans e pelos Streptococcus sobrinus na etiologia da cárie dental, assim como a relevância do meio de cultura empregado para a detecção desses microrganismos, os objetivos do presente estudo foram: Capítulo 1- Avaliar a eficácia do meio de cultura SB-20 modificado (SB-20M) na diferenciação morfológica de colônias de S. mutans e de S. sobrinus, comparativamente à análise bioquímica das colônias isoladas, na saliva de crianças; Capítulo 2- Comparar os meios de cultura SB-20, SB-20M e MSB na quantificação (contagem) de unidades formadoras de colônias (ufc) e na diferenciação morfológica e bioquímica de S. mutans e S. sobrinus, na saliva de crianças; e Capítulo 3- Empregar o meio de cultura SB-20M sem ágar, denominado Caldo Sacarose-Bacitracina modificado (CaSaB- 20M), para avaliar a viabilidade de cepas padrão de S. mutans (ATCC25175) in vitro e a viabilidade de estreptococos do grupo mutans in vivo, nas cerdas de escovas dentais, após diferentes períodos de secagem. No Capítulo 1, a eficácia do meio SB-20M foi avaliada tomando-se amostras de saliva não-estimulada de 145 crianças de 6 a 12 anos de idade, por meio da técnica da espátula de madeira. Após semeadura e incubação em microaerofilia, foi efetuada a contagem das ufc em microscópio estereoscópico e realizada a identificação morfológica e bioquímica (biotipagem) das colônias de S. mutans e de S. sobrinus. Os resultados obtidos após as identificações morfológicas e bioquímicas foram comparados empregando o teste x2. No Capítulo 2, a comparação dos meios de cultura SB-20, SB-20M e MSB foi efetuada em amostras de saliva não-estimulada, colhidas de 20 crianças na faixa etária de 4 a 12 anos, em tubos de ensaio. Amostras de saliva pura e diluídas até 10-4 foram semeadas em placas contendo os referidos meios, por meio de um micrométodo, e incubadas em microaerofilia. A seguir, foi efetuada a contagem das ufc e a identificação morfológica e bioquímica das colônias de S. mutans e de S. sobrinus. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística, utilizando o teste de Wilcoxon e o teste exato de Fisher. No estudo in vitro do Capítulo 3, um total de 45 escovas dentais infantis, divididas em 9 grupos (n=5 por grupo), foram ontaminadas com uma suspensão contendo Streptococcus mutans (cepa ATCC 25175), na concentração de 1.720.000 unidades formadoras de colônias por mL (escala 0,5 de McFarland), durante 4 minutos. Logo após a lavagem, as escovas do Grupo 1 (controle) foram submetidas ao processamento microbiológico. As escovas dos Grupos 2 a 9 foram mantidas à temperatura ambiente por 4, 8, 12, 24, 36, 48, 60 e 72 horas, respectivamente, previamente ao processamento microbiológico, em meio de cultura CaSaB-20M. A seguir, foi efetuada a contagem de ufc de S. mutans nas cerdas. Os resultados obtidos foram analisados por meio do teste de Kruskal-Wallis. No estudo in vivo do Capítulo 3 participaram 20 crianças de 4 a 8 anos com alto risco à cárie dental. Cada criança recebeu 13 escovações, com intervalo de 3 dias entre cada escovação, empregando sempre uma escova dental nova, sem dentifrício. As 260 escovas obtidas foram divididas em 13 grupos (n=20 por grupo). Logo após a lavagem, as escovas do Grupo 1 (controle) foram submetidas ao processamento microbiológico. As escovas dos Grupos 2 a 13 foram mantidas à temperatura ambiente por 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44 e 48 horas, respectivamente, previamente ao processamento microbiológico, ou seja, semeadura e incubação em meio CasB-20M. Após a incubação foi efetuada a contagem de ufc de S. mutans e a quantificação dos polissacarídeos extracelulares presentes nas cerdas. Os dados obtidos foram avaliados por meio do teste de Wilcoxon. O nível de significância em todas as análises estatísticas foi de 5%. Com base nos resultados obtidos, pôde-se concluir que o método de identificação morfológica, empregando o meio de cultura SB-20M, foi confiável para a identificação de S. mutans e S. sobrinus. Os meios SB-20 e SB-20M foram semelhantes na quantificação de estreptococos do grupo mutans e na identificação morfológica e bioquímica de S. mutans e de S. sobrinus, evidenciando que a ubstituição da sacarose pelo açúcar cristal não alterou a eficácia do meio. Quando comparado ao meio MSB, o SB-20M apresentou resultados estatisticamente superiores, com relação à uantificação de ufc e com relação à identificação morfológica e bioquímica de S. mutans e de S. sobrinus. O Caldo Sacarose-Bacitracina modificado (CaSaB-20M) permitiu avaliar a viabilidade de estreptococos do grupo mutans nas cerdas de escovas dentais, após diferentes períodos de secagem. De acordo com o estudo in vitro com cepa padrão de Streptococcus mutans (ATCC 25175), observou-se viabilidade de microrganismos nas escovas dentais por até 8 horas. Por outro lado, no estudo in vivo, os estreptococos do grupo mutans permaneceram viáveis por períodos superiores (44 horas) / The important role veloped by Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus in dental caries ethyology as well as the relevance of the culture medium used for the detection of these microorganisms, the aims of the present study were divided into three parts as follows: Chapter 1 To evaluate the modified SB-20 culture medium efficacy (SB-20M) in the morphologic differentiation of the S. utans and S. sobrinus colonies comparatively to the biochemical analysis of the isolated colonies in childrens saliva samples; Chapter 2 To compare the culture media SB- 20, SB-20M, and MSB in the quantification (counting) of the colony forming units (cfu), and in the morphological and iochemical differentiation of S. mutans and S. sobrinus in childrens saliva; and Chapter 3 To employ the SB-20M culture medium without agar, called Sucrose Bacitracin Broth Modified (CaSaB-20M), in order to evaluate the viability of the in vitro S. mutans pattern strains (ATCC 25175), and the viability of the in vivo mutans streptococci in toothbrush bristles after different dry periods. In Chapter 1, the efficacy of the SB-20M was evaluated by wood spatula technique using non-stimulated saliva samples of 145 children of 6 to 12 years old. After seeding and incubation in microaerophilic conditions, the cfu counting in stereoscopic microscope, and the morphological and biochemical identification (biotyping) of S. mutans and S. sobrinus colonies were made. The results obtained after morphological and biochemical identifications were compared by the X2 test. In Chapter 2, the comparison of the SB-20, SB-20M, and MSB culture medium was made using assay tubes with non-stimulated saliva samples of 20 children with age between 4 and 12 years old. Samples of pure and diluted saliva (until 10-4) were seeded by a micromethod in Petri dishes with the culture media, and incubated under microaerophilic conditions, followed by the cfu counting, and morphological and biochemical identification of S. mutans and S. sobrinus colonies. The results obtained were submitted to the statistical analysis using Wilcoxon test and the exact Fisher test. In the in vitro study of the Chapter 3, a total of 45 childrens toothbrush divided in 9 groups (n=5 per group) were infected with a Streptococcus mutans (strain ATCC25175) suspension, under the concentration of 1.720.000 colony forming unities by mL (McFarland 0.5 scale) during 4 minutes. Briefly, after washing the Group 1 toothbrushes (control) were submitted to the microbiological processing. Group 2 to 9 toothbrushes were maintained in room temperature for 4, 8, 12, 14, 24, 36, 48, 60, and 72 hours respectively, previously to microbiological processing in CaSaB-20M culture medium. After that, the S. mutans cfu counting in the bristles were made. The results obtained were analysed by KruskalWallis test. In the in vivo study of the Chapter 3, 20 high caries risk children of 4 to 8 years old children have been participated. Each child received 13 times brushing, with intervals of 3 days between each brushing using always a new toothbrush with no toothpaste. The 260 obtained toothbrushes were divided into 13 groups (n=20 per group). After whashing the Group 1 toothbrushes (control) were submitted to microbiological processing. The other ones (groups 2 to 13) were maintained in room temperature for 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, and 48 hours respectively, previously the microbiological processing (CaSaB-20M). After incubation the S. mutans cfu counting and the quantification of extracellular polysaccharides present in the bristles were made. The data obtained were evaluated by Wilcoxon test. The level of significance in all statistical analysis was 5%. Based on the results obtained we could conclude that de morphological method for identification using SB-20M culture medium was trustable for the identification of S. mutans and S. sobrinus. The SB-20 and SB-20M showed the same effect in the quantification of the mutans streptococci, and in the morphological and biochemical identification of S. mutans and S. sobrinus evidentiating that the substitution of sucrose for coarse granular cane sugar (SB-20M) did not altered the efficacy of the medium. When compared to MSB medium, the SB-20M showed results statistically superiors with relation to cfu quantification, and morphological and biochemical of S. mutans and S. sobrinus. Sucrose-Bacitracin modified broth (CaSaB-20M) allowed the evaluation of the viability of mutans streptococci in toothbrush bristles after different drying times. According to the in vitro study with Streptococcus mutans (ATCC 25175), we could observe viability of microorganisms in toothbrush bristles for 8 hours remaining. On the other hand, in the in vivo study the mutans streptococci remain viable for extended periods (44 hours).

A colonização bucal por patógenos, como os estreptococos mutans (EM) e Porphyromonas gingivalis, microrganismos associados respectivamente à cárie e à doença periodontal, é pré-requisito para o desenvolvimento dessas doenças multifatoriais. Este estudo longitudinal investigou o momento de aquisição e a estabilidade de colonização de EM e de periodontopatógenos BANA-positivos (P.gingivalis, T.denticola e T.forsythensis), bem como de fatores facilitadores, em 14 primogênitos que tinham no início do estudo (visita 1), 7-8 meses de idade. A amostra, selecionada com base na positividade das mães para EM, foi composta por 14 famílias, constituídas do pai, mãe, bebê e avó ou tia, quando presente na mesma residência. Na visita 1, nos adultos foram feitos exames clínico e radiográfico para cárie, determinação do índice de sangramento papilar (ISP), teste BANA em amostras subgengivais e língua, colheita de saliva estimulada para avaliar os níveis de EM e, aplicados questionários sobre hábitos de risco de transmissão, alimentação e higiene dos bebês e saúde, condições socioeconômicas e educacionais das famílias; na visita 2, foram repetidos nos adultos o exame clínico de cárie e a colheita de saliva para contagem de EM. O teste BANA foi reaplicado nas visitas 2 e 3 somente nas mães. Nos bebês foram investigadas a presença e porcentagem de EM na saliva não estimulada, a presença de dentes, e o teste BANA lingual nas 3 visitas. Com exceção de um pai, negativo para EM, todos os pais e mães apresentaram EM nas duas visitas. Não houve diferença nos índices CPOS, ISP e IG e total de testes BANA positivos entre mães e pais. Somente na visita 3, três das 14 crianças (21,4%) se tornaram EM-positivas, com contagens > 1.000.000/ml de saliva. Ficou evidenciado que a mãe é o membro da família a ser investigado, para avaliar a possibilidade de aquisição de EM pelo filho. As condições que pareceram mais associadas à positividade das crianças foram atividade de cárie recente e elevados níveis salivares de EM nas mães. Mesmo elas, porém, devem ser acompanhadas pela maior parte das seguintes condições: baixa condição sócio-econômica e educacional, muitos hábitos de risco para a transmissão, higiene bucal deficiente e uso desnecessário ou freqüente do açúcar, para garantir a associação. Nenhum bebê foi colonizado por periodontopatógenos BANA-positivos, visto que os resultados positivos, ocorridos nas 3 visitas, foram transitórios. As investigações sobre aquisição de patógenos bucais por bebês devem ser longitudinais. / Oral colonization by pathogens as mutans streptococci (MS) and Porphyromonas gingivalis, microorganisms associated with caries and periodontal disease, respectively, is a pre-requirement for development of these multifactorial diseases. This longitudinal study investigated the period of acquisition and stability of colonization of MS and BANA-positive periodontal pathogens (P. gingivalis, T. denticola and T. forsythensis), as well as facilitating factors, in 14 firstlings aged 7-8 months at onset of the study (visit 1). The sample, selected based on the positivity of mothers to MS, consisted of 14 families comprising father, mother, infant and grandmother or aunt, living at the same home. At visit 1, the adults were submitted to clinical and radiographic examination for dental caries, establishment of the papillary bleeding index (PBS), BANA test in subgingival samples and tongue, collection of stimulated saliva for evaluation of the MS levels, and application of a questionnaire on health, transmission risk habits, feeding, hygiene and socioeconomic and educational conditions; at visit 2, the adults were once again submitted to clinical examination for dental caries and saliva collection for MS counting. The BANA test was reapplied at visits 2 and 3 only in mothers. The infants were assessed as to the presence and percentage of MS in non-stimulated saliva, presence of teeth, and lingual BANA test at the 3 visits. Except for one father, negative for MS, all fathers and mothers presented MS at the two visits. There was no difference in the DMFS, PBS and GI indexes and total of positive BANA tests between mothers and fathers. Only at visit 3, three out of the 14 children (21.4%) were MS-positive, with counting > 1,000,000/ml of saliva. It was demonstrated that the mother is the family member that should be investigated, for evaluation of the possibility of acquisition of MS by the child. The conditions that seemed to be most associated with positivity of children were recent caries activity and high MS salivary levels in the mothers. However, even they should also present most of the following conditions: low socioeconomic and educational level, many transmission risk habits, poor oral hygiene and unnecessary or frequent utilization of sugar, to assure the association. No infant was colonized by BANA-positive periodontal pathogens, since the positive outcomes, observed in the 3 visits, were transitory. Investigations on the acquisition of oral pathogens by infants should be longitudinal.

En la presente investigación se evaluó la actividad antibacteriana in vitro del Aceite de la cáscara de la nuez del Anacardium occidentalea partir de distintas concentraciones (al 100 %, al 60 %, al 50 %, al 40 % y al 30 %) sobre dos tipos de cepas de Streptococcus mutans (cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175 y aisladas de muestras de pacientes) La siembra, cultivo y recolección del fruto fue llevada a cabo en la ciudad de Iquitos (Loreto-Perú), la extracción del aceite se realizó mediante la técnica sólido-líquido o Soxhlet, el diluyente del aceite fue el Hidróxido de Sodio al 0.1 N, y el control positivo la Clorhexidina al 0,12 %. El aceite de la cáscara de la nuez del Anacardium occidentale en todas las concentraciones utilizadas presentó acción antibacteriana mediante el método de difusión in vitro, sobre ambos tipos de cepas de Streptococcus mutans y tuvo mejor actividad antibacteriana que la Clorhexidina al 0,12 % (p>0,05). No se pudo encontrar diferencias significativas en la acción antibacteriana del aceite a las diversas concentraciones en ambos tipos de cepa, y las cepas de procedencia clínica fueron estadísticamente más sensibles que las cepas ATCC. / Tesis

Orientador: Douglas Roberto Monteiro / Coorientador: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Banca: Farli Aparecida Carrilho Boer / Banca: Debora de Barros Barbosa / Resumo: O tirosol é uma molécula de quorum-sensing (QS) que participa do controle da morfogênese em Candida albicans. Contudo, seu efeito como agente antimicrobiano sobre biofilmes de Streptococcus mutans permanece desconhecido. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tirosol em diferentes concentrações sobre a produção de ácido e formação de biofilmes por S. mutans ATCC 25175, bem como quantificar biofilmes pré-formados desta espécie desenvolvidos sobre espécimes de hidroxiapatita (HA) e tratados com tirosol. A concentração inibitória mínima (CIM) de tirosol sobre células no estado planctônico foi determinada de acordo com o método da microdiluição. Na sequência, biofilmes de S. mutans foram formados durante 48 horas sobre espécimes de HA na presença de diferentes concentrações de tirosol (11,25, 22,5, 50, 100 e 200 mmol l-1), usando saliva artificial como meio de cultura. Após, a produção de ácido foi avaliada através da mensuração do pH do meio, enquanto a formação de biofilmes foi determinada através da quantificação da biomassa total (BT), atividade metabólica (AM) e número de unidades formadoras de colônias (UFCs). Ainda, biofilmes pré-formados (24 horas) de S. mutans foram tratados com tirosol a 100 e 200 mmol l-1 por 1 minuto, duas vezes ao dia, durante três dias, totalizando biofilmes de 96 horas. Em seguida, a atividade antimicrobiana foi avaliada por meio da quantificação da BT, AM, número de UFCs e composição da matriz extracelular (proteínas e carboidratos). Gluconato de clorexidina (490 μmol l-1) foi usado como controle positivo. Os dados foram analisados por ANOVA a um critério, seguido pelos testes de Tukey e Holm-Sidak (α = 0,05). Microscopia eletrônica de varredura (MEV) foi utilizada na análise da estrutura dos biofilmes. A CIM de tirosol foi 90 mmol l-1. Tirosol em concentrações... / Abstract: Tyrosol is a quorum-sensing molecule (QS) that participates in the control of Candida albicans morphogenesis. However, its effect as an antimicrobial agent on Streptococcus mutans biofilms remains unknown. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of tyrosol at different concentrations on the acid production and biofilm formation by S. mutans ATCC 25175, as well as to quantify pre-formed biofilms of this species developed on hydroxyapatite (HA) specimens and treated with tyrosol. Minimum inhibitory concentration (MIC) of tyrosol against planktonic cells was determined in accordance with the microdilution method. Subsequently, S. mutans biofilms were formed during 48 hours on HA specimens in the presence of different concentrations of tyrosol (11.25, 22.5, 50, 100 and 200 mmol l-1), using artificial saliva as culture medium. Next, the acid production was assessed by pH determination of the medium, while the biofilm formation was determined through quantification of total biomass (TB), metabolic activity (MA) and number of colony-forming units (CFUs). Further, S. mutans pre-formed biofilms (24 h) were treated with tyrosol at 100 and 200 mmol l-1 twice a day for 1 min, during 3 days, totaling 96-h biofilms. Then, the antimicrobial activity was evaluated through quantification of TB, MA, number of CFUs and composition of biofilms' extracellular matrix (proteins and carbohydrates). Chlorhexidine gluconate (490 μmol l-1) was used as positive control. Data were analyzed by one-way ANOVA, followed by Tukey's and Holm-Sidak's tests (α = 0.05). Scanning electron microscopy (SEM) observations were performed in order to analyze biofilms' structure. MIC of tyrosol was 90 mmol l-1. Tyrosol at sub-inhibitory concentrations (11.25 and 22.5 mmol l-1) was not able to significantly reduce acid production by S. mutans biofilms. However, biofilms... / Mestre

Orientador: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Coorientador: Juliano Pelim Pessan / Coorientador: Douglas Roberto Monteiro / Banca: Robson Frederico Cunha / Banca: Denise Pedrini Ostini / Banca: Marília Afonso Rabelo Buzalaf / Resumo: O presente estudo teve como objetivo verificar o efeito do hexametafosfato de sódio (HMP), associado ou não ao fluoreto (F), sobre a composição orgânica, inorgânica e no pH do biofilme mistos de S. mutans e C. albicans formados in vitro. Para todos os estudos, os biofilmes foram formados em poços de placas de microtitulação, colocando uma suspensão (1x107 células/mL C. albicans + 1x108 células/mL S. mutans) em saliva artificial suplementada com sacarose (0,4%), a qual tinha metade de seu conteúdo renovada a cada 24 horas. Os biofilmes foram tratados três vezes (72, 78 e 96 horas de formação), por um minuto, com soluções contendo HMP (0.25, 0.5 ou 1%) com ou sem 500 ppm F, além de soluções contendo 500 e 1100 ppm F. A saliva artificial foi utilizada como controle negativo. Para o estudo microbiológico, após o terceiro tratamento foram realizados os testes de quantificação de células cultiváveis (CFU), biomassa total (teste colorimétrico de cristal violeta - CV), atividade metabólica (redução de XTT) e quantificação dos componentes da matriz extracelular (proteína, carboidrato e ácidos nucleicos). Todos os ensaios foram realizados em triplicata, em três ocasiões diferentes. Os resultados foram submetidos à análise de variância a um critério, seguida pelo teste Fisher LSD (p <0.05). O HMP apresentou efeito redutor principalmente na biomassa, metabolismo e nos componentes da matriz extracelular do biofilme. Biofilmes formados por 96 h formam expostos a três diferentes concentraçõ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to verify the effect of sodium hexametaphosphate (HMP), associated or not to fluoride (F), on the inorganic, organic composition and pH of the mixed biofilm of S. mutans and C. albicans, formed in vitro. For all studies, the biofilms were formed in wells of microtiter plates by placing a suspension (1 x 107 cells/mL C. albicans + 1x108 cells/mL S. mutans) in artificial saliva supplemented with sucrose (0,4%), which had half of its content renewed every 24 hours. Biofilms were treated three times (72, 78 and 96 hours of formation), for one minute, with solutions containing HMP (0.25, 0.5 or 1%) with or without 500 ppm F, as well as solutions containing 500 and 1100 ppm F. Artificial saliva was used as a negative control. For the microbiological study, the following tests were performed: quantification of cultivable cells (UFC), total biomass (colorimetric crystal violet test - CV), metabolic activity (XTT reduction) and quantification of matrix components (protein, carbohydrate and nucleic acid). All assays were performed in triplicate on three different occasions. The results were submitted to one-way analysis of variance, followed by the Fisher LSD's test (p <0.05). HMP showed a reducing effect mainly on the biomass, metabolism and components of the extracellular matrix of the biofilm. Biofilms formed for 96 h were exposed to three different concentrations of sucrose (10, 20 or 30%) for 1, 3 or 5 min. The pH was measured before exposure to su... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor