O urubu-de-cabeça-preta (Coragyps atratus) é uma ave de vida livre com ampla distribuição no Brasil. Esta espécie é comumente encontrada em áreas urbanas concentrando-se em locais de deposição de lixo. O fato de se alimentarem de carcaças em decomposição facilita o contato de urubus-de-cabeça-preta com muitos patógenos. No entanto, ainda não está clara qual a real implicação de muitos desses microrganismos para a saúde dos mesmos. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência de alguns patógenos selecionados, avaliar o perfil hematológico e a microbiota cloacal de C. atratus em ambiente urbano. Para isso, amostras de sangue, soro e swab cloacal foram obtidos de 120 urubus de vida-livre capturados na Fundação Parque Zoológico de São Paulo, SP. A prova de soroaglutinação rápida (SAR) foi utilizada na detecção de anticorpos contra Salmonella Pullorum/Gallinarum, Mycoplasma synoviae e M. gallisepticum. O teste de aglutinação em látex (AL) foi utilizado para a pesquisa de antígeno de Cryptococcus neoformans. Foram utilizadas técnicas convencionais de hematologia, microbiologia e testes de sensibilidade microbiana. Das amostras de soro analisadas pela SAR, 15% foram reagentes para M. gallisepticum. Anticorpos contra S. Pullorum/Gallinarum e M. synoviae não foram detectados. Nenhuma amostra foi positiva para C.neoformans ou para hemoparasitas. A média e o desvio padrão dos seguintes valores hematológicos foram obtidos para 61 aves: eritrócitos (1.8x10¹²/L); leucócitos (13,11x10/L); hemoglobina (10,4 g/dL); hematócrito (48,44%); VCM (275,1 fL); HCM (42 pg); CHCM (15,8 g/dL); proteína sérica total (3,76 g/dL); heterófilos (78%); linfócitos (13,5%); eosinófilos (5,4%); monócitos (2,8%); basófilos (0,1%); trombócitos (14,14x10/L). De 75 colônias bacterianas isoladas de 20 swabs cloacais, 78,7% foram Gram-positivas e 21,3% Gram-negativas, sendo Enterococcus sp. o gênero mais frequente. Aproximadamente 86,7% das cepas isoladas foram resistentes a pelo menos um dos antibióticos testados. Cepas de Bacillus sp. e Enterococcus casseliflavus apresentaram resistência a sete dos oito antibióticos testados. Leveduras não foram isoladas em nenhumas das culturas. As informações obtidas nessa pesquisa são de suma importância, uma vez que poucos estudos avaliam o estado de saúde de urubus no mundo. / Black vulture (Coragyps atratus) is a free-living bird widely distributed across Brazil. These birds feed on rotting carcasses and large groups are commonly found in urban areas, including rubbish dumps. By feeding on decomposing carcasses, they are often exposed to innumerous pathogens. However, the role of infectious microorganisms on vultures health still need to be clarify. Thus, the aim of this study was to investigate the occurrence of selected infectious agents, the hematological profile and cloacal microbiota of black vulture in urban areas. Therefore, blood, serum and cloacal swabs were obtained from 120 free-living vultures trapped in Fundação Parque Zoológico de São Paulo, SP. The rapid seroagglutination test (RST) was performed for detection of antibodies against Salmonella Pullorum/Gallinarum, M. synoviae and M. gallisepticum. Furthermore, latex agglutination test was used to detect Cryptococcus neoformans \' antigen. Conventional techniques for hematology, microbiology and antimicrobial susceptibility testing were performed. From the serum samples analyzed by RST, 15% were positive for M. gallisepticum, antibodies against S. Pullorum/Gallinarum and M. synoviae were not detected. None sample was positive to Cryptococcus neoformans or hemoparasites. Mean and standard deviation from the following hematological values were obtained for 61 birds: erythrocytes (1.8x10¹²/L); leukocytes (13.11x10/L); hemoglobin (10.4 g/dL); hematocrit (48.44%); MCV (275,1 fL); MCH (42 pg); MCHC (15,8 g/dL); total serum protein (3.76 g/dL); heterophils (78%); lymphocytes (13.5%); eosinophils (5.4%); monocytes (2.8%); basophils (0,1%); thrombocyte (14.14x10/L). From 75 bacterial colonies isolated from 20 cloacal swabs, 78.7% were Gram-positive and 21.3% were Gram-negative. Enterococcus sp. was the most frequent genus. Approximately 86.7% of the isolated strains were resistant to at least one of the antibiotic tested. Bacillus sp. and Enterococcus casseliflavus strains shown resistance to seven in eight antibiotics tested. Yeasts were not isolated. The information obtained in this research is of paramount important since few studies have been carried out on the vultures health condition in the world.

O urubu-de-cabeça-preta (Coragyps atratus) é uma ave de vida livre com ampla distribuição no Brasil. Esta espécie é comumente encontrada em áreas urbanas concentrando-se em locais de deposição de lixo. O fato de se alimentarem de carcaças em decomposição facilita o contato de urubus-de-cabeça-preta com muitos patógenos. No entanto, ainda não está clara qual a real implicação de muitos desses microrganismos para a saúde dos mesmos. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência de alguns patógenos selecionados, avaliar o perfil hematológico e a microbiota cloacal de C. atratus em ambiente urbano. Para isso, amostras de sangue, soro e swab cloacal foram obtidos de 120 urubus de vida-livre capturados na Fundação Parque Zoológico de São Paulo, SP. A prova de soroaglutinação rápida (SAR) foi utilizada na detecção de anticorpos contra Salmonella Pullorum/Gallinarum, Mycoplasma synoviae e M. gallisepticum. O teste de aglutinação em látex (AL) foi utilizado para a pesquisa de antígeno de Cryptococcus neoformans. Foram utilizadas técnicas convencionais de hematologia, microbiologia e testes de sensibilidade microbiana. Das amostras de soro analisadas pela SAR, 15% foram reagentes para M. gallisepticum. Anticorpos contra S. Pullorum/Gallinarum e M. synoviae não foram detectados. Nenhuma amostra foi positiva para C.neoformans ou para hemoparasitas. A média e o desvio padrão dos seguintes valores hematológicos foram obtidos para 61 aves: eritrócitos (1.8x10¹²/L); leucócitos (13,11x10/L); hemoglobina (10,4 g/dL); hematócrito (48,44%); VCM (275,1 fL); HCM (42 pg); CHCM (15,8 g/dL); proteína sérica total (3,76 g/dL); heterófilos (78%); linfócitos (13,5%); eosinófilos (5,4%); monócitos (2,8%); basófilos (0,1%); trombócitos (14,14x10/L). De 75 colônias bacterianas isoladas de 20 swabs cloacais, 78,7% foram Gram-positivas e 21,3% Gram-negativas, sendo Enterococcus sp. o gênero mais frequente. Aproximadamente 86,7% das cepas isoladas foram resistentes a pelo menos um dos antibióticos testados. Cepas de Bacillus sp. e Enterococcus casseliflavus apresentaram resistência a sete dos oito antibióticos testados. Leveduras não foram isoladas em nenhumas das culturas. As informações obtidas nessa pesquisa são de suma importância, uma vez que poucos estudos avaliam o estado de saúde de urubus no mundo. / Black vulture (Coragyps atratus) is a free-living bird widely distributed across Brazil. These birds feed on rotting carcasses and large groups are commonly found in urban areas, including rubbish dumps. By feeding on decomposing carcasses, they are often exposed to innumerous pathogens. However, the role of infectious microorganisms on vultures health still need to be clarify. Thus, the aim of this study was to investigate the occurrence of selected infectious agents, the hematological profile and cloacal microbiota of black vulture in urban areas. Therefore, blood, serum and cloacal swabs were obtained from 120 free-living vultures trapped in Fundação Parque Zoológico de São Paulo, SP. The rapid seroagglutination test (RST) was performed for detection of antibodies against Salmonella Pullorum/Gallinarum, M. synoviae and M. gallisepticum. Furthermore, latex agglutination test was used to detect Cryptococcus neoformans \' antigen. Conventional techniques for hematology, microbiology and antimicrobial susceptibility testing were performed. From the serum samples analyzed by RST, 15% were positive for M. gallisepticum, antibodies against S. Pullorum/Gallinarum and M. synoviae were not detected. None sample was positive to Cryptococcus neoformans or hemoparasites. Mean and standard deviation from the following hematological values were obtained for 61 birds: erythrocytes (1.8x10¹²/L); leukocytes (13.11x10/L); hemoglobin (10.4 g/dL); hematocrit (48.44%); MCV (275,1 fL); MCH (42 pg); MCHC (15,8 g/dL); total serum protein (3.76 g/dL); heterophils (78%); lymphocytes (13.5%); eosinophils (5.4%); monocytes (2.8%); basophils (0,1%); thrombocyte (14.14x10/L). From 75 bacterial colonies isolated from 20 cloacal swabs, 78.7% were Gram-positive and 21.3% were Gram-negative. Enterococcus sp. was the most frequent genus. Approximately 86.7% of the isolated strains were resistant to at least one of the antibiotic tested. Bacillus sp. and Enterococcus casseliflavus strains shown resistance to seven in eight antibiotics tested. Yeasts were not isolated. The information obtained in this research is of paramount important since few studies have been carried out on the vultures health condition in the world.

Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum and Candidatus Mycoplasma turicensis are the causative agents of feline mycoplasmosis, these agents are gram-negative, pleomorphic, small and that adhere to the surface of erythrocytes of the animal involved. Clinical signs of feline mycoplasmosis are manifestations of acute or chronic anemia, occurring weight loss, anorexia, depression, pale mucous membranes, weakness, joint pain, soreness and occasionally splenomegaly and jaundice, the animal may come to death in severe cases. The diagnosis is based on detection of the parasite in blood smears and also in molecular diagnostics using PCR. Aiming to determine the occurrence of Mycoplasma spp. in domestic cats in a region of Belém, Pará, and hematological changes of animals naturally infected by these parasites were collected 201 blood samples with EDTA for Count Blood Cells (CBC) analysis and extraction of DNA for performing the Polymerase Chain Reaction (PCR) as well as blood smears ear tip for detection of the parasite on the surface of erythrocyte. Found 5.47% (11/201) of positive examination of blood smears, being 1.47% (1/68) of males and 7.51% (10/133) than females. The DNA of Candidatus Mycoplasma haemominutum was found in 7.96% (16/201) where 16.17 % (11/68) were males and 3.75% (5/133) females, was detected Mycoplasma haemofelis in 1.49% (3/201) of samples totaling 2.94% (2/68) of males and 0.75% (1/133) of females. The CBC showed changes in erythrocytes, hematocrit and hemoglobin only in those animals with DNA of Mycoplasma haemofelis. / Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis são os agentes causadores da micoplasmose felina, estes agentes são bactérias gram-negativas, pleomórficas, pequenas e que se aderem à superfície dos eritrócitos do animal acometido. Os sinais clínicos da micoplasmose felina são manifestações de anemia aguda ou crônica, ocorrendo perda de peso, anorexia, depressão, membranas mucosas pálidas, fraqueza, dores articulares, hiperestesia e, ocasionalmente esplenomegalia e icterícia, podendo o animal vir a óbito nos casos mais graves. O diagnóstico é baseado na detecção do parasita em esfregaços sanguíneos e também no diagnóstico molecular pela PCR. Objetivando determinar a ocorrência de Mycoplasma spp. em felinos domésticos da região de Belém-Pará, e as alterações hematológicas dos animais naturalmente infectados por estes parasitos, foram coletadas 201 amostras de sangue com EDTA para análise de hemograma e extração de DNA para realização de Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) bem como esfregaços sanguíneos de ponta de orelha para detecção do parasita na superfície do eritrócito. Foram encontrados 5,47% (11/201) de positividade no exame de esfregaço sanguíneo, sendo 1,47% (1/68) de machos e 7,51% (10/133) de fêmeas. O DNA de Candidatus Mycoplasma haemominutum foi encontrado em 7,96% (16/201) dos animais onde 16,17% (11/68) eram machos e 3,75% (5/133) eram fêmeas, já Mycoplasma haemofelis foi detectado em 1,49% (3/201) das amostras, totalizando 2,94% (2/68) de machos e 0,75% (1/133) de fêmeas. O hemograma mostrou alterações em eritrócitos, volume globular e hemoglobina apenas nos animais em que foi detectado DNA de Mycoplasma haemofelis.

Columbiformes sinantrópicos podem ter um importante papel na epidemiologia de patógenos com potencial zoonótico ou de impacto econômico para a indústria avícola. Dentre eles destacam-se: Mycoplasma spp., Salmonella spp., paramixovírus aviário tipo 1 (APMV-1), inseridos no Programa Nacional de Sanidade Avícola (PNSA) e a Chlamydophila psittaci, agente de uma das principais zoonoses relacionada com aves silvestres. Dentro desse contexto, este trabalho objetivou pesquisar, sazonalmente, a ocorrência destes patógenos em pombos-domésticos (Columba livia) em dois entrepostos no Estado de São Paulo. Ao longo de um ano, mensalmente 10 pombos foram capturados em cada entreposto para a colheita de amostras de suabe cloacal e sangue. A técnica de soroaglutinação rápida em placa (SAR) foi utilizada para a detecção de anticorpos anti-M. synoviae, anti-M. gallisepticum e anti-S.Pullorum/Gallinarum; para a confirmação dos sororeagentes foram utilizadas a prova de inibição da hemaglutinação e soroaglutinação lenta, respectivamente. Para a detecção do DNA de C. psittaci e RNA de AMPV-1 foram utilizados métodos moleculares, PCR e RT-PCR. Para investigação de anticorpos anti-APMV-1 foi empregada a técnica de HI. Na SAR, 3,3% dos soros foram reagentes para M. synoviae; 2,5% para M. gallisepticum e 0,4% para S. Pullorum/Gallinarum. No entanto, essas amostras foram negativas nas técnicas confirmatórias. A ocorrência do APMV-1 não foi detectada. O DNA de C. psittaci foi detectado em 13,3% das amostras sendo 10,8% provenientes de aves capturadas na estação seca e 15,8% na estação chuvosa. Tais resultados são relevantes, pois demonstram que a C. psittaci ocorre em pombos presentes em áreas públicas frequentadas por um grande número de pessoas. Frente à escassez de pesquisas realizadas em Columbiformes no país, novos estudos são necessários para a determinação do real risco que pombos-domésticos podem representar quanto à transmissão de patógenos para aves comerciais e a influência da sazonalidade na disseminação desses microrganismos. / Columbiformes may play an important role in the epidemiology of pathogens with zoonotic potential or economic impact in the poultry industry. Among these pathogens there are Mycoplasma spp., Salmonella spp., Avian Paramyxovirus type 1 (APMV-1), included in the National Poultry Health Program (PNSA) and Chlamydophila psittaci, etiologic agent of an important zoonosis associated with wild birds. Thus, the aim of this study was to investigate, seasonally, the occurrence of the pathogens listed above in feral pigeons (Columba livia) in two warehouses in São Paulo State. During one year, 10 birds were captured monthly in each locality and cloacal swabs and blood samples were collected from each pigeon. The rapid seroagglutination test was performed for the detection of antibodies against M. synoviae, M. gallisepticum and Salmonella Pullorum/Gallinarum. Positive results were submitted to the hemagglutination inhibition and slow seroagglutination test, respectively. For the C. psittacis DNA and APMV-1s RNA diagnosis, molecular techniques PCR and RT-PCR were performed. Hemagglutination inhibition test was also performed in order to detect antibodies against APMV-1. From the serum samples analyzed by rapid seroagglutination test, 3.3% were positive for M. synoviae, 2.5% for M. gallisepticum and 0.4% for S. Pullorum/Gallinarum. However, none of these samples was positive on the confirmatory tests. APMV-1 was not detected in any of the laboratory tests used. C. psittacis DNA was detected in 13.3% of the samples being, 10.8% from pigeons captured during the dry season and 15.8% in the rainy season. These results are relevant since they indicate that C. psittaci occurs in birds living in public areas frequented by a large number of people. The occurrence of the other pathogens was not detected. Nevertheless, due to lack of information about the pigeons sanitary status in the country, additional researches are necessary to determine the risk that feral pigeons can pose in the transmission of pathogens for poultry and the influence of each season in the spread of these microorganisms.

Com o objetivo de avaliar a magnitude da infecção por micoplasmas hemotrópicos nos felinos anêmicos, amostras sangüíneas de 270 felinos anêmicos (Ht≤29%) e 53 felinos saudáveis foram submetidas à exames hematológicos, bioquímicos séricos (proteína total, albumina, fosfatase alcalina, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, gamaglutamil transferase, bilirrubinas, uréia e creatinina), avaliação citológica do esfregaço sangüíneo e testes moleculares para a detecção de material genético de Mycoplasma spp. Foram encontradas 25 amostras positivas no grupo dos felinos anêmicos, pela técnica de Nested-PCR utilizando-se primers que amplificam fragmentos do gene 16S rRNA dos hemoplasmas. Dentre as amostras positivas, 23 foram caracterizadas por meio de seqüenciamento como Mycoplasma haemofelis e as duas restantes como \"Candidatus Mycoplasma turicensis\" e Mycoplasma haemocanis, respectivamente. As seqüências de nucleotídeos encontradas nesse estudo estão disponíveis no GenBank, sob os números de acesso EU442616 a EU442640, sendo os números EU442629 e EU442623, referentes ao \"Candidatus M. turicensis\" e M. haemocanis, respectivamente. Nos felinos infectados por M. haemofelis a anemia foi mais intensa quando comparados aos animais anêmicos negativos para qualquer uma das espécies de micoplasmas. Quanto à bioquímica sérica, as concentrações das bilirrubinas e a atividade sérica da ALT foram maiores nos felinos infectados. Adicionalmente, com o intuito de avaliar o papel desempenhado pelos retrovírus no desenvolvimento ou agravamento da anemia causada por micoplasmas hemotrópicos, todos os felinos foram avaliados quanto à infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) e da leucemia felina (FeLV), por meio de testes imunoenzimáticos (ELISA) para a detecção de ambos os vírus, de imunofluorescência indireta para detecção do antígeno do FeLV e de técnicas moleculares de detecção do DNA viral do FIV. Dentre os felinos saudáveis não foi observada nenhuma amostra positiva para os micoplasmas hemotrópicos e/ou retrovírus. A associação entre M. haemofelis e FIV (p=0,009) e entre o M. haemofelis e FeLV (p=0,015) , foi evidenciada. O felino infectado por \"Candidatus M. turicensis\" apresentou discreta diminuição do hematócrito e ausência de sinais de regeneração medular e o felino positivo para M. haemocanis apresentou anemia mais profunda com sinais de regeneração. No primeiro a infecção por nenhum dos retrovírus foi identificada, enquanto que o segundo apresentou co-infecção por FIV e FeLV. As informações obtidas das alterações hematológicas e bioquímicas correlacionadas à infecção pelo M. haemofelis evidenciaram o potencial patogênico dessa espécie de micoplasma hemotrópico. A disfunção imunológica resultante da infecção pelos retrovírus pode predispor à infecção por M. haemofelis, não se excluindo a possibilidade de infecção por outros hemoplasmas. / The present study aimed to evaluate the magnitude of the hemotrophic mycoplasmas infections in anemic cats. Samples from 270 anemic cats (PCV≤29%) and 53 healthy cats were submitted to hematological analysis (CBC, cytologic evaluation of blood smear), serum biochemistry (total protein, albumin, alkaline phosphatase, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, gama glutamil transferase, bilirubins, urea and creatinin), and molecular assays for hemoplasma DNA detection in blood samples. Among the anemic cats, 25 samples were positive by Nested-PCR for the gender Mycoplasma using primers targeting the 16S rRNA. For species identification, sequencing of the products revealed that 23 cats were infected with Mycoplasma haemofelis, one with \"Candidatus M. turicensis\" and another with M. haemocanis. The GenBank accession numbers of the nucleotide sequences derived in this study are from EU442616 to EU442640 (EU442629 and EU442623 refer to \"Candidatus M. turicensis\" and M. haemocanis, respectively). M. haemofelis-infected cats presented significantly more severe anemia and higher bilirubins concentration and ALT serum activity. Additionally, with purpose to evaluate the role play by the retrovirus in the development or aggravation of the anemia caused by hemotrophic mycoplasmas, all cats were tested for FeLV p27 antigenemia by enzyme-linked immunosorbent assay and by indirect immunofluorescence, and anti-FIV antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay and viral DNA by Nested-PCR. None of the healthy cats presented infection with hemotrophic mycoplasmas and/or retroviruses. The association between M. haemofelis and retroviruses (FIV, p=0,009 and FeLV, p=0,015) in anemic cats was evidenced. In the \"Candidatus M. turicensis\"-infected cat, slightly decreased hematocrit with no signs of regeneration were observed; and in the M. haemocanis-infected cat anemia was severe and regenerative. In the first, retroviruses infections were not detected, whereas the second was infected with FIV and FeLV. The hematological and biochemistry abnormalities correlated to the M. haemofelis infection had evidenced the pathogenic potential of this hemoplasma species. In conclusion, immunological dysfunction resulting from retrovirus infection may predispose to M. haemofelis infection, without excluding the possibility of infection with other hemoplasma.

Columbiformes sinantrópicos podem ter um importante papel na epidemiologia de patógenos com potencial zoonótico ou de impacto econômico para a indústria avícola. Dentre eles destacam-se: Mycoplasma spp., Salmonella spp., paramixovírus aviário tipo 1 (APMV-1), inseridos no Programa Nacional de Sanidade Avícola (PNSA) e a Chlamydophila psittaci, agente de uma das principais zoonoses relacionada com aves silvestres. Dentro desse contexto, este trabalho objetivou pesquisar, sazonalmente, a ocorrência destes patógenos em pombos-domésticos (Columba livia) em dois entrepostos no Estado de São Paulo. Ao longo de um ano, mensalmente 10 pombos foram capturados em cada entreposto para a colheita de amostras de suabe cloacal e sangue. A técnica de soroaglutinação rápida em placa (SAR) foi utilizada para a detecção de anticorpos anti-M. synoviae, anti-M. gallisepticum e anti-S.Pullorum/Gallinarum; para a confirmação dos sororeagentes foram utilizadas a prova de inibição da hemaglutinação e soroaglutinação lenta, respectivamente. Para a detecção do DNA de C. psittaci e RNA de AMPV-1 foram utilizados métodos moleculares, PCR e RT-PCR. Para investigação de anticorpos anti-APMV-1 foi empregada a técnica de HI. Na SAR, 3,3% dos soros foram reagentes para M. synoviae; 2,5% para M. gallisepticum e 0,4% para S. Pullorum/Gallinarum. No entanto, essas amostras foram negativas nas técnicas confirmatórias. A ocorrência do APMV-1 não foi detectada. O DNA de C. psittaci foi detectado em 13,3% das amostras sendo 10,8% provenientes de aves capturadas na estação seca e 15,8% na estação chuvosa. Tais resultados são relevantes, pois demonstram que a C. psittaci ocorre em pombos presentes em áreas públicas frequentadas por um grande número de pessoas. Frente à escassez de pesquisas realizadas em Columbiformes no país, novos estudos são necessários para a determinação do real risco que pombos-domésticos podem representar quanto à transmissão de patógenos para aves comerciais e a influência da sazonalidade na disseminação desses microrganismos. / Columbiformes may play an important role in the epidemiology of pathogens with zoonotic potential or economic impact in the poultry industry. Among these pathogens there are Mycoplasma spp., Salmonella spp., Avian Paramyxovirus type 1 (APMV-1), included in the National Poultry Health Program (PNSA) and Chlamydophila psittaci, etiologic agent of an important zoonosis associated with wild birds. Thus, the aim of this study was to investigate, seasonally, the occurrence of the pathogens listed above in feral pigeons (Columba livia) in two warehouses in São Paulo State. During one year, 10 birds were captured monthly in each locality and cloacal swabs and blood samples were collected from each pigeon. The rapid seroagglutination test was performed for the detection of antibodies against M. synoviae, M. gallisepticum and Salmonella Pullorum/Gallinarum. Positive results were submitted to the hemagglutination inhibition and slow seroagglutination test, respectively. For the C. psittacis DNA and APMV-1s RNA diagnosis, molecular techniques PCR and RT-PCR were performed. Hemagglutination inhibition test was also performed in order to detect antibodies against APMV-1. From the serum samples analyzed by rapid seroagglutination test, 3.3% were positive for M. synoviae, 2.5% for M. gallisepticum and 0.4% for S. Pullorum/Gallinarum. However, none of these samples was positive on the confirmatory tests. APMV-1 was not detected in any of the laboratory tests used. C. psittacis DNA was detected in 13.3% of the samples being, 10.8% from pigeons captured during the dry season and 15.8% in the rainy season. These results are relevant since they indicate that C. psittaci occurs in birds living in public areas frequented by a large number of people. The occurrence of the other pathogens was not detected. Nevertheless, due to lack of information about the pigeons sanitary status in the country, additional researches are necessary to determine the risk that feral pigeons can pose in the transmission of pathogens for poultry and the influence of each season in the spread of these microorganisms.

Com o objetivo de avaliar a magnitude da infecção por micoplasmas hemotrópicos nos felinos anêmicos, amostras sangüíneas de 270 felinos anêmicos (Ht≤29%) e 53 felinos saudáveis foram submetidas à exames hematológicos, bioquímicos séricos (proteína total, albumina, fosfatase alcalina, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, gamaglutamil transferase, bilirrubinas, uréia e creatinina), avaliação citológica do esfregaço sangüíneo e testes moleculares para a detecção de material genético de Mycoplasma spp. Foram encontradas 25 amostras positivas no grupo dos felinos anêmicos, pela técnica de Nested-PCR utilizando-se primers que amplificam fragmentos do gene 16S rRNA dos hemoplasmas. Dentre as amostras positivas, 23 foram caracterizadas por meio de seqüenciamento como Mycoplasma haemofelis e as duas restantes como \"Candidatus Mycoplasma turicensis\" e Mycoplasma haemocanis, respectivamente. As seqüências de nucleotídeos encontradas nesse estudo estão disponíveis no GenBank, sob os números de acesso EU442616 a EU442640, sendo os números EU442629 e EU442623, referentes ao \"Candidatus M. turicensis\" e M. haemocanis, respectivamente. Nos felinos infectados por M. haemofelis a anemia foi mais intensa quando comparados aos animais anêmicos negativos para qualquer uma das espécies de micoplasmas. Quanto à bioquímica sérica, as concentrações das bilirrubinas e a atividade sérica da ALT foram maiores nos felinos infectados. Adicionalmente, com o intuito de avaliar o papel desempenhado pelos retrovírus no desenvolvimento ou agravamento da anemia causada por micoplasmas hemotrópicos, todos os felinos foram avaliados quanto à infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) e da leucemia felina (FeLV), por meio de testes imunoenzimáticos (ELISA) para a detecção de ambos os vírus, de imunofluorescência indireta para detecção do antígeno do FeLV e de técnicas moleculares de detecção do DNA viral do FIV. Dentre os felinos saudáveis não foi observada nenhuma amostra positiva para os micoplasmas hemotrópicos e/ou retrovírus. A associação entre M. haemofelis e FIV (p=0,009) e entre o M. haemofelis e FeLV (p=0,015) , foi evidenciada. O felino infectado por \"Candidatus M. turicensis\" apresentou discreta diminuição do hematócrito e ausência de sinais de regeneração medular e o felino positivo para M. haemocanis apresentou anemia mais profunda com sinais de regeneração. No primeiro a infecção por nenhum dos retrovírus foi identificada, enquanto que o segundo apresentou co-infecção por FIV e FeLV. As informações obtidas das alterações hematológicas e bioquímicas correlacionadas à infecção pelo M. haemofelis evidenciaram o potencial patogênico dessa espécie de micoplasma hemotrópico. A disfunção imunológica resultante da infecção pelos retrovírus pode predispor à infecção por M. haemofelis, não se excluindo a possibilidade de infecção por outros hemoplasmas. / The present study aimed to evaluate the magnitude of the hemotrophic mycoplasmas infections in anemic cats. Samples from 270 anemic cats (PCV≤29%) and 53 healthy cats were submitted to hematological analysis (CBC, cytologic evaluation of blood smear), serum biochemistry (total protein, albumin, alkaline phosphatase, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, gama glutamil transferase, bilirubins, urea and creatinin), and molecular assays for hemoplasma DNA detection in blood samples. Among the anemic cats, 25 samples were positive by Nested-PCR for the gender Mycoplasma using primers targeting the 16S rRNA. For species identification, sequencing of the products revealed that 23 cats were infected with Mycoplasma haemofelis, one with \"Candidatus M. turicensis\" and another with M. haemocanis. The GenBank accession numbers of the nucleotide sequences derived in this study are from EU442616 to EU442640 (EU442629 and EU442623 refer to \"Candidatus M. turicensis\" and M. haemocanis, respectively). M. haemofelis-infected cats presented significantly more severe anemia and higher bilirubins concentration and ALT serum activity. Additionally, with purpose to evaluate the role play by the retrovirus in the development or aggravation of the anemia caused by hemotrophic mycoplasmas, all cats were tested for FeLV p27 antigenemia by enzyme-linked immunosorbent assay and by indirect immunofluorescence, and anti-FIV antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay and viral DNA by Nested-PCR. None of the healthy cats presented infection with hemotrophic mycoplasmas and/or retroviruses. The association between M. haemofelis and retroviruses (FIV, p=0,009 and FeLV, p=0,015) in anemic cats was evidenced. In the \"Candidatus M. turicensis\"-infected cat, slightly decreased hematocrit with no signs of regeneration were observed; and in the M. haemocanis-infected cat anemia was severe and regenerative. In the first, retroviruses infections were not detected, whereas the second was infected with FIV and FeLV. The hematological and biochemistry abnormalities correlated to the M. haemofelis infection had evidenced the pathogenic potential of this hemoplasma species. In conclusion, immunological dysfunction resulting from retrovirus infection may predispose to M. haemofelis infection, without excluding the possibility of infection with other hemoplasma.

O cultivo de células humanas para fins experimentais e terapêuticos se firmou como um dos pilares da biologia celular e tem se tornado uma prática laboratorial cada vez mais disseminada. Associada a esse processo está a contaminação por microrganismos, dentre os quais se destacam as bactérias do gênero Mycoplasma spp., os quais são os contaminantes detectados com maior frequência in vitro. Um dos pontos críticos no processo de garantia da qualidade, pureza e segurança para uso destas células é a adoção de uma metodologia analítica, para detecção de Mycoplasma spp., que seja simples e de rápida execução, com sensibilidade e especificidade adequada e economicamente viável. O objetivo desse trabalho foi desenvolver uma plataforma molecular (PCR em tempo real) para detecção de Mycoplasma spp. em culturas celulares. Para tanto, foram testados diversos conjuntos de primers (gene 16S rDNA) dentre os quais um foi selecionado para a plataforma molecular. Foram utilizadas amostras de DNA obtidas a partir do sobrenadante de cultura. A PCR em tempo real in house foi padronizada utilizando o intercalante fluorescente de DNA dupla fita BRYT Green® e produziu um fragmento de 270 pares de bases. A temperatura de melting para as amostras positivas foi definida no intervalo de 81 a 84°C. A plataforma molecular foi validada por meio dos parâmetros sensibilidade analítica e diagnóstica, especificidade analítica, potencial de arraste, precisão e robustez. O limite de detecção do teste (LOD) foi de 5 cópias/5 ?L. Para a especificidade, foi observada reação cruzada com bactérias de relação filogenética próxima e com DNA de célula humana. A sensibilidade diagnóstica foi de 100%. Não foi houve contaminação por arraste. O coeficiente de variação encontrado no parâmetro precisão foi de 0,64% e 1,80% para a avaliação intra-ensaio e inter-ensaio, respectivamente. O coeficiente de variação da análise robustez foi de 5,42%. Ao comparar a plataforma molecular com o teste comercial, observou-se que 29,85% (n=40) das amostras apresentaram resultados falso-negativos pelo teste comercial. Determinou-se ainda que a PCR em tempo real in house foi mais sensível do que o teste comercial. A análise por microscopia eletrônica de varredura demonstrou a presença de estruturas sugestivas de espécies de Mycoplasma spp. na superfície das células. A análise filogenética permitiu a classificação das espécies encontradas. Os resultados obtidos neste trabalho permitiram propor o algoritmo para aplicação de um método de detecção simples e rápido para Mycoplasma spp.; e fazer deste uma ferramenta para o controle de qualidade das células cultivadas, garantindo a eficiência destas células para uso em pesquisa e maior segurança para uso em terapia celular. / The culture of human cells for experimental and therapeutic purposes has been consolidated as one of the foundations of cell biology and has increasingly become a widely used laboratory practice. The contamination by microorganisms is associated with this process, among them we can highlight bacteria of the genus Mycoplasma spp., which are contaminants more frequently detected in vitro. One of the critical points in the process of assuring quality, purity, and safety for the use of these cells is the adoption of an analytical methodology for the detection of mycoplasma that is simple and fast to conduct, with proper sensitivity and specificity and that is also economically viable. The objective of this work was to develop a molecular platform (real time PCR) for the detection of mycoplasmas in cell cultures. Therefore, we tested several sets of primers (16S rDNA gene), among them one was selected for the molecular platform. DNA samples used were obtained from the culture supernatant. In house real time PCR was standardized using BRYT Green® double-stranded DNA intercalating fluorescent and produced a fragment of 270 pair bases. The melting temperature for the positive samples was set in the range 81 to 84°C. The molecular platform was validated through the parameters: analytical and diagnostic sensitivity, analytical specificity, carry-over contamination, precision and robustness. The limit of detection of the test (LOD) was 5 copies/5 ?L. For specificity, it was observed a cross reaction with bacteria of close phylogenetic relationship and with human cell DNA. Diagnostic sensitivity was 100%. There was no carry-over contamination. The coefficient of variation was found in the precision values of 0.64% and 1.80% for intra-assay and inter-assay assessment, respectively. The variance coefficient of the robustness analysis was 5.42%. By comparing the molecular platform with the commercial test, we observed that 29.85% (n=40) of the samples showed false negative results by the commercial test. It has been determined further that the real-time PCR in house was more sensitive than the commercial test. The analysis by scanning electron microscopy demonstrated the presence of suggestive structures of Mycoplasma spp. species in the surface of cells. Phylogenetic analysis allowed the classification of the species found. The results obtained in this work allowed us to propose the algorithm for application of a simple and fast method for mycoplasma detection and making from this tool for quality control for cultured cells, assuring the efficiency of these cells for use in research and greater safety for use in cell therapy more safety to patients subjected to cell therapy.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Sandra Batista dos Santos.pdf: 939793 bytes, checksum: fad008b3d49abcd0c16da05450ee089f (MD5) Previous issue date: 2009-02-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Mycoplasma are the smallest and more fastidious prokaryotes known, being responsible by high economical losses in livestock production. Mycoplasmas has been found frequently in the ear canal of goats. In these cases, are very closely related with mites, Psoroptidae and Raillietidae, that carried and disseminate mycoplasmas among the flocks. In Brazil, studies related mycoplasmas in the ear canal of bovine inexist. Like this, in the Chapter I, were surveyed up data on prevalence of mycoplasmas in the ear canal of bovine and your association with mites Raillietia spp., and identification of the two Raillietia species that occur in bovine of southeast, State Rio de Janeiro. The prevalence of Mycoplasma spp. in the ear canal of bovine was considered high, 80% (48/60). In these animals high prevalence was verified Raillietia spp. 76.7% (46/60). The parasitism by mycoplasmas and mites was verified in 40 animals (74.1%), this association was highly significant (p<0.001). Of the females of identified Raillietia 52.3% (101/193) were R. auris and 47.7% (92/193) were R. flechtmanni. In this study, was proven that mycoplasmas and mites in the ear canal of the bovine are closely related and these habitat occur pottentially patogenic mycoplasmas for cattle herds. In the Chapter 2, Mycoplasma mycoides Cluster (GMM) was diagnosed by PCR-REA and indirect immunoperoxidase (IPI), both, carried out in mycoplasmas isolates of hte ear canal. In this study, 35 strains selected in agreement with their biochemistry and physiologic proprieties, were used. Under IPI the prevalence obtained for GMM was 20.0% (12/60) while by PCR-REA it was 41.7% (25/60). The IPI typing of these isolates resulted in 58.3% (7/12) for M.mycoides mycoides LC and 41.7% (5/12) for M. capricolum. PCR-REA for M. mycoides Cluster was confirmed by the amplicon size of 785bp, compatible with this group. After restriction analysis with AluI in all M. mycoides cluster strains and ear canal samples the fragments size obtained were compatible with this group, and neither fragment of 370bp that is compatible with MmmSC of bovine origen it was visualized. / Mycoplasmas s?o os menores e mais fastidiosos procariotos conhecidos, sendo respons?veis por altas perdas econ?micas relacionadas a produtividade em ruminantes. Micoplasmas tem sido encontrados com frequ?ncia em conduto auditivo de caprinos. Nestes casos, est?o estreitamente relacionados com ?caros Psoroptidae e Raillietidae, que carreiam e disseminam micoplasmas entre os rebanhos. No Brasil, estudos sobre Mycoplasma em conduto auditivo de bovinos inexistem. Assim, no Cap?tulo I, foram levantados dados sobre preval?ncia de micoplasmas presentes no conduto auditivo de bovinos e sua associa??o com ?caros Raillietia spp., al?m da identifica??o das duas esp?cies de Raillietia spp. parasitas de conduto auditivo de bovinos da regi?o sudeste do Estado do Rio de Janeiro. A preval?ncia de Mycoplasma spp. no conduto auditivo de bovinos foi considerada alta, 80% (48/60). A preval?ncia de Raillietia spp. foi de 76,7% (46/60). Em 40 (74,1%) animais verificou-se parasitismo por Raillietia spp. e Mycoplasma spp., esta associa??o foi altamente significativa (p<0,001). Das f?meas de Raillietia identificadas 52,3% (101/193) foram R. auris e 47,7% (92/193) foram R. flechtmanni. comprovou-se que micoplasmas e ?caros do conduto auditivo de bovinos est?o estreitamente relacionados e que neste s?tio de localiza??o est?o presentes Mycoplasmas com alto potencial patog?nico para bovinos. No Cap?tulo II, foi realizada tipifica??o molecular dos isolados de Mycoplasma pertencentes ao Grupo Mycoplasma mycoides (GMM) atrav?s da t?cnica de PCR-REA, sendo estes resultados comparados com os obtidos na t?cnica de imunoperoxidase indireta (IPI). A preval?ncia obtida para o GMM na IPI foi de 20,0% (12/60) enquanto na PCR-REA foi de 41,7% (25/60). Das esp?cies de Mycoplasma tipificadas pela IPI 58,3% (7/12) foram M. mycoides subsp. mycoides LC e 41,7% (5/12) foram M. capricolum. Na PCR-REA, GMM, foi confirmado pela visualiza??o de um amplicon de 785bp, compat?vel com este grupo. Na clivagem do produto da PCR com a enzima de restri??o AluI, os fragmentos obtidos foram compat?veis com cepas padr?o do GMM, e dos isolados de conduto auditivo de bovinos estudados, nenhum fragmento de 370pb compat?vel com MmmSC, biotipo bovino foi encontrado.

O cultivo de células humanas para fins experimentais e terapêuticos se firmou como um dos pilares da biologia celular e tem se tornado uma prática laboratorial cada vez mais disseminada. Associada a esse processo está a contaminação por microrganismos, dentre os quais se destacam as bactérias do gênero Mycoplasma spp., os quais são os contaminantes detectados com maior frequência in vitro. Um dos pontos críticos no processo de garantia da qualidade, pureza e segurança para uso destas células é a adoção de uma metodologia analítica, para detecção de Mycoplasma spp., que seja simples e de rápida execução, com sensibilidade e especificidade adequada e economicamente viável. O objetivo desse trabalho foi desenvolver uma plataforma molecular (PCR em tempo real) para detecção de Mycoplasma spp. em culturas celulares. Para tanto, foram testados diversos conjuntos de primers (gene 16S rDNA) dentre os quais um foi selecionado para a plataforma molecular. Foram utilizadas amostras de DNA obtidas a partir do sobrenadante de cultura. A PCR em tempo real in house foi padronizada utilizando o intercalante fluorescente de DNA dupla fita BRYT Green® e produziu um fragmento de 270 pares de bases. A temperatura de melting para as amostras positivas foi definida no intervalo de 81 a 84°C. A plataforma molecular foi validada por meio dos parâmetros sensibilidade analítica e diagnóstica, especificidade analítica, potencial de arraste, precisão e robustez. O limite de detecção do teste (LOD) foi de 5 cópias/5 ?L. Para a especificidade, foi observada reação cruzada com bactérias de relação filogenética próxima e com DNA de célula humana. A sensibilidade diagnóstica foi de 100%. Não foi houve contaminação por arraste. O coeficiente de variação encontrado no parâmetro precisão foi de 0,64% e 1,80% para a avaliação intra-ensaio e inter-ensaio, respectivamente. O coeficiente de variação da análise robustez foi de 5,42%. Ao comparar a plataforma molecular com o teste comercial, observou-se que 29,85% (n=40) das amostras apresentaram resultados falso-negativos pelo teste comercial. Determinou-se ainda que a PCR em tempo real in house foi mais sensível do que o teste comercial. A análise por microscopia eletrônica de varredura demonstrou a presença de estruturas sugestivas de espécies de Mycoplasma spp. na superfície das células. A análise filogenética permitiu a classificação das espécies encontradas. Os resultados obtidos neste trabalho permitiram propor o algoritmo para aplicação de um método de detecção simples e rápido para Mycoplasma spp.; e fazer deste uma ferramenta para o controle de qualidade das células cultivadas, garantindo a eficiência destas células para uso em pesquisa e maior segurança para uso em terapia celular. / The culture of human cells for experimental and therapeutic purposes has been consolidated as one of the foundations of cell biology and has increasingly become a widely used laboratory practice. The contamination by microorganisms is associated with this process, among them we can highlight bacteria of the genus Mycoplasma spp., which are contaminants more frequently detected in vitro. One of the critical points in the process of assuring quality, purity, and safety for the use of these cells is the adoption of an analytical methodology for the detection of mycoplasma that is simple and fast to conduct, with proper sensitivity and specificity and that is also economically viable. The objective of this work was to develop a molecular platform (real time PCR) for the detection of mycoplasmas in cell cultures. Therefore, we tested several sets of primers (16S rDNA gene), among them one was selected for the molecular platform. DNA samples used were obtained from the culture supernatant. In house real time PCR was standardized using BRYT Green® double-stranded DNA intercalating fluorescent and produced a fragment of 270 pair bases. The melting temperature for the positive samples was set in the range 81 to 84°C. The molecular platform was validated through the parameters: analytical and diagnostic sensitivity, analytical specificity, carry-over contamination, precision and robustness. The limit of detection of the test (LOD) was 5 copies/5 ?L. For specificity, it was observed a cross reaction with bacteria of close phylogenetic relationship and with human cell DNA. Diagnostic sensitivity was 100%. There was no carry-over contamination. The coefficient of variation was found in the precision values of 0.64% and 1.80% for intra-assay and inter-assay assessment, respectively. The variance coefficient of the robustness analysis was 5.42%. By comparing the molecular platform with the commercial test, we observed that 29.85% (n=40) of the samples showed false negative results by the commercial test. It has been determined further that the real-time PCR in house was more sensitive than the commercial test. The analysis by scanning electron microscopy demonstrated the presence of suggestive structures of Mycoplasma spp. species in the surface of cells. Phylogenetic analysis allowed the classification of the species found. The results obtained in this work allowed us to propose the algorithm for application of a simple and fast method for mycoplasma detection and making from this tool for quality control for cultured cells, assuring the efficiency of these cells for use in research and greater safety for use in cell therapy more safety to patients subjected to cell therapy.