Antimicrobials are commonly used to treat mycoplasmosis in animals. In spite of this and the fact that antimicrobial resistance has been recorded for this group of bacteria there are no universally accepted in vitro means of testing for this resistance, nor is resistance testing for mycoplasmas a routine in most veterinary laboratories. So prior to testing for resistance to a number of mycoplasmas isolated from animals in South Africa it was necessary to compare different tests including broth and agar microdilution tests to find out which one would perform best. Using the field strains M. bovis, M. crocodyli, M. felis, M. gallisepticum and M. synoviae, and the reference strains M. gallisepticum 56USDA, M. gallisepticum VaxSafe MG vaccine strain, M. mycoides T1/44 vaccine strain, and M. mycoides Ygoat (11706) broth- and agar-microdilution minimum inhibitory concentration (MIC)tests were performed using either modified Hayflicks or Mycoplasma synoviae media. Two different metabolism indicator systems were compared in the broth microdilution test (BrMIC) namely sugar fermentation (glucose or pyruvate) with phenol red (SFS) and evidence of reduction with resazurin (AlamurBlue®). It was also tested whether amoxicillin and clavulanic acid (ACA) could be used in the tests to reduce problems associated with contamination. Statistical analyses of the tests (repeatability and linear association) indicated that the BrMIC with SFS was the most reproducible method (pooled standard deviation = 0.14). The antimicrobial ACA was found to not to affect the MIC values (R2= 0.976 to 0.996). Furthermore one hundred forty two field strains including 93 M. bovis, 5 M. synoviae, 21 M. gallisepticum, 13 M. bovirhinis, 8 M. crocodyli and 6 M. felis were tested using the BrMIC+SFS with ACA method. Generally the mycoplasmas originating from poultry were resistant to commonly used antimicrobials and had higher MIC50 and MIC90 values than isolates originating from cattle, crocodiles and cats. It was found that most of the mycoplasmas were susceptible to doxycycline (tetracycline) and enrofloxacin with the exception of M. gallisepticum where 17.9% of strains were resistant to both. Resistance to tiamulin (100%) and tylosin (20 to 64%) was high for the poultry mycoplasmas. Most field isolates tested were resistant to erythromycin, nalidixic acid, florfenicol, norfloxacin, neomycin, sulphamethoxazole, trimethoprim and sulphamethoxazole/ trimethoprim combination, mostly resistant to norfloxacin and florfenicol. It is concluded that BrMIC+SFS with ACA method is a reproducible method that reduces any problems with bacterial contamination. As observed with the poultry strains, it is quite clear that antimicrobial resistance is developing to commonly used antimicrobials such as tylosin, the related pleuromutilins, fluoroquinolones and tetracyclines. In species where antimicrobial therapy is applied routinely such as poultry and possibly feedlot cattle, it is recommended that MIC testing is done prior to any therapeutic interventions. / Dissertation (MSc)--University of Pretoria, 2010. / Veterinary Tropical Diseases / unrestricted

Foram analisadas, para fins de diagnóstico das micoplasmoses da reprodução, 105 amostras de muco prepucial e 80 amostras de sêmen in natura, provenientes de touros de quatro propriedades rurais e 70 amostras de muco prepucial e 63 amostras de sêmen in natura, provenientes de touros de uma central de inseminação artificial, localizadas no Estado de São Paulo. As amostras foram submetidas ao isolamento bacteriano e PCR, para demonstração de presença de Mycoplasma bovis, M. bovigenitalium e Ureaplasma diversum. Colheitas foram realizadas no período de 1999 à 2002, antes e após a implantação de dois métodos de antibioticoterapia, utilizando-se para tal, oxitetraciclina di-hidratada ou fumarato de hidrogênio de tiamulin. O Sistema MGSO/GPO-1 de detecção de Mycoplasmatales pela PCR foi testado frente ao isolamento bacteriano. A associação entre a idade e forma de manejo reprodutivo, além da qualidade seminal e a presença dos microrganismos foi analisada através da odds ratio. A eficiência dos métodos de tratamento sobre a qualidade seminal dos touros foi analisada estatisticamente pelos testes de Mann Whitney e Wilcoxon. As freqüências de detecção de Mycoplasma spp pelo isolamento e pela PCR nas amostras de muco prepucial, foram 45,1 e 63,7%, respectivamente. Nas amostras de sêmen, as freqüências foram 22,5% (isolamento) e 24,1 (PCR). O Sistema MGSO/GPO-1 mostrou-se pouco eficiente na detecção dos agentes. Análise estatística revelou que animais com menos de quatro anos têm de 1,39 (M. bovigenitalium) até 7,54 (U. diversum) vezes mais chance de serem portadores dos microrganismos. A odds ratio de 4,01 até 4,68 (muco prepucial) e de 1,71 até 18,29 (sêmen) mostrou a importância da higiene no manejo reprodutivo. Os animais da Central de Inseminação Artificial apresentaram resposta significativa sobre a motilidade espermática no tratamento com oxitetraciclina (p=0,033). As estimativas de risco, pós-tratamento, foram menores para os parâmetros motilidade e defeitos menores, associados à Mycoplasma spp e, motilidade e defeitos maiores, associados à U. diversum . / Prepucial mucuses and fresh semen were collected from bulls under two kinds of reproductive management: a) natural breeding with cows in four farms, b) an Artificial Insemination Center. All of them located in São Paulo State, Brazil. The samples were collected from 1999 to 2002. In the farms it were collected 105 samples of prepucial mucuses and 80 samples of fresh semen and in the Artificial Insemination Center, 70 samples of prepucial mucuses and 63 of fresh semen. The laboratory tests applied for demonstration of Mycoplasma bovis, M. bovigenitalium and Ureaplasma diversum were classical cultivation and polymerase chain reaction (PCR). The therapeutic assay were performed with oxytetracicline, 20 mg./kg. of body weight, IM, or tiamulin hydrogen fumarate, 15 mg./kg. of body weight, IM. Mycoplasma spp was demonstrated in 45,1% and 63,7% of prepucial mucuses samples, respectively by cultivation and PCR and in 22,5% and 24,1% of fresh semen samples, respectively by cultivation and PCR. Ureaplasma diversum was demonstrated in 66,5% and 72,9% of prepucial mucuses samples, respectively by cultivation and PCR and in 51,7% and 56,6% of fresh semen samples, respectively by cultivation and PCR. The MGSO/GPO-1 PCR System, was able for demonstration of Mycoplasma spp DNA in bovine semen and U. diversum in prepucial mucuses, with results in agreement with cultivation. Animals younger than four years of age presented a higher infection rate than older: odds ratio 1.39 (M. bovigenitalium) and up to 7.54 (U. diversum). Odds ratio from 4.01 to 4.68 (prepucial mucuses) and from 1.71 to 18.29 (semen) showed the importance of the hygienic status of the reproduction management. The animals from Insemination Center, showed better motility after the treatment with oxytetracicline (p=0,033). After therapeutic assay, the odds ratio was small for the motility and morphologic aspects of the semen associated to Mycoplasma spp and U. diversum contamination.

Orientador: Helio Langoni / Resumo: O gênero Mycoplasma inclui mais de 200 espécies responsáveis por causar doenças nos animais. Apresenta células de tamanho reduzido e em formatos variáveis. Ocasiona mastite em bovinos, podendo também, estar relacionado a outras manifestações como artrite e pneumonia em bezerros e novilhas. Neste estudo, objetivou-se o isolamento de espécies de micoplasmas a partir de amostras de leite de mastite clínica bovina, bem como, a detecção de Mycoplasma (M.) bovis pelas técnicas moleculares de PCR convencional e PCR em tempo real. Um total de 1166 amostras de leite de casos de mastite clínica, provenientes de nove propriedades leiteiras da região da bacia leiteira ABCW – Paraná e de uma propriedade situada na região de São Pedro – São Paulo foram avaliadas para a presença do DNA de Mollicutes. Desse total, em 100 amostras de leite que foram positivas à PCR para a classe Mollicutes, realizou-se a PCR para detecção de M. bovis obtendo-se positividade de 13% (13/100). Na análise pela PCR em tempo real obteve-se 11% (11/100) de amostras positivas para M. bovis. No cultivo microbiológico, obteve-se 6% (6/100) de crescimento ao se utilizar o meio Hayflick e, 11% (11/100) de crescimento ao se utilizar o meio SP4 (incluindo as positivas ao primeiro). A partir desses isolados em caldo PPLO, nove deles foram positivos à PCR convencional para M. bovis e dois, negativos. Na análise filogenética dos isolados, a partir dos resultados do sequenciamento, obteve-se 100% de M. bovis para todos os isol... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Mycoplasma genus includes more than 200 species responsible for causing diseases in animals. It presents cells of reduced size and in variable shapes. It may cause mastitis in cattle, and may also be related to other manifestations such as arthritis and pneumonia in calves and heifers. The objective of this study was to isolate mycoplasma species from bovine clinical mastitis milk samples, as well as the detection by molecular techniques of conventional PCR and real-time PCR of M. bovis. A total of 1166 milk samples from clinical mastitis cases from nine dairy farms in the ABCW - Paraná dairy region and from a property located in the São Pedro region - São Paulo were evaluated for the presence of Mollicutes DNA. From this total, 100 milk samples that were PCR positive for the Mollicutes class, the PCR was performed to detect the M. bovis, obtaining 13% positivity (13/100). Real-time PCR analysis yielded 11% (11/100) of positive samples for M. bovis. In the microbiological culture, 6% (6/100) of growth was obtained when using the Hayflick medium and 11% (11/100) growth when using SP4 medium (including positive ones in the first one). From these isolates in PPLO broth, nine of them were positive to conventional PCR for M. bovis and two, negative. In the phylogenetic analysis of the isolates, from the results of the sequencing, 100% of M. bovis was obtained for all the isolates. In view of the results obtained, the importance of further studies for the elucidation of other s... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Foram analisadas, para fins de diagnóstico das micoplasmoses da reprodução, 105 amostras de muco prepucial e 80 amostras de sêmen in natura, provenientes de touros de quatro propriedades rurais e 70 amostras de muco prepucial e 63 amostras de sêmen in natura, provenientes de touros de uma central de inseminação artificial, localizadas no Estado de São Paulo. As amostras foram submetidas ao isolamento bacteriano e PCR, para demonstração de presença de Mycoplasma bovis, M. bovigenitalium e Ureaplasma diversum. Colheitas foram realizadas no período de 1999 à 2002, antes e após a implantação de dois métodos de antibioticoterapia, utilizando-se para tal, oxitetraciclina di-hidratada ou fumarato de hidrogênio de tiamulin. O Sistema MGSO/GPO-1 de detecção de Mycoplasmatales pela PCR foi testado frente ao isolamento bacteriano. A associação entre a idade e forma de manejo reprodutivo, além da qualidade seminal e a presença dos microrganismos foi analisada através da odds ratio. A eficiência dos métodos de tratamento sobre a qualidade seminal dos touros foi analisada estatisticamente pelos testes de Mann Whitney e Wilcoxon. As freqüências de detecção de Mycoplasma spp pelo isolamento e pela PCR nas amostras de muco prepucial, foram 45,1 e 63,7%, respectivamente. Nas amostras de sêmen, as freqüências foram 22,5% (isolamento) e 24,1 (PCR). O Sistema MGSO/GPO-1 mostrou-se pouco eficiente na detecção dos agentes. Análise estatística revelou que animais com menos de quatro anos têm de 1,39 (M. bovigenitalium) até 7,54 (U. diversum) vezes mais chance de serem portadores dos microrganismos. A odds ratio de 4,01 até 4,68 (muco prepucial) e de 1,71 até 18,29 (sêmen) mostrou a importância da higiene no manejo reprodutivo. Os animais da Central de Inseminação Artificial apresentaram resposta significativa sobre a motilidade espermática no tratamento com oxitetraciclina (p=0,033). As estimativas de risco, pós-tratamento, foram menores para os parâmetros motilidade e defeitos menores, associados à Mycoplasma spp e, motilidade e defeitos maiores, associados à U. diversum . / Prepucial mucuses and fresh semen were collected from bulls under two kinds of reproductive management: a) natural breeding with cows in four farms, b) an Artificial Insemination Center. All of them located in São Paulo State, Brazil. The samples were collected from 1999 to 2002. In the farms it were collected 105 samples of prepucial mucuses and 80 samples of fresh semen and in the Artificial Insemination Center, 70 samples of prepucial mucuses and 63 of fresh semen. The laboratory tests applied for demonstration of Mycoplasma bovis, M. bovigenitalium and Ureaplasma diversum were classical cultivation and polymerase chain reaction (PCR). The therapeutic assay were performed with oxytetracicline, 20 mg./kg. of body weight, IM, or tiamulin hydrogen fumarate, 15 mg./kg. of body weight, IM. Mycoplasma spp was demonstrated in 45,1% and 63,7% of prepucial mucuses samples, respectively by cultivation and PCR and in 22,5% and 24,1% of fresh semen samples, respectively by cultivation and PCR. Ureaplasma diversum was demonstrated in 66,5% and 72,9% of prepucial mucuses samples, respectively by cultivation and PCR and in 51,7% and 56,6% of fresh semen samples, respectively by cultivation and PCR. The MGSO/GPO-1 PCR System, was able for demonstration of Mycoplasma spp DNA in bovine semen and U. diversum in prepucial mucuses, with results in agreement with cultivation. Animals younger than four years of age presented a higher infection rate than older: odds ratio 1.39 (M. bovigenitalium) and up to 7.54 (U. diversum). Odds ratio from 4.01 to 4.68 (prepucial mucuses) and from 1.71 to 18.29 (semen) showed the importance of the hygienic status of the reproduction management. The animals from Insemination Center, showed better motility after the treatment with oxytetracicline (p=0,033). After therapeutic assay, the odds ratio was small for the motility and morphologic aspects of the semen associated to Mycoplasma spp and U. diversum contamination.

Orientador: Helio Jose Montassier / Resumo: As infecções do trato respiratório de aves têm-se constituído em problemas crescentes e com marcantes consequências negativas sobre a produção avícola em várias partes do mundo, notadamente onde a avicultura é mais desenvolvida como no Brasil. Dentre essas enfermidades, destacam-se as micoplasmoses aviárias e a pneumovirose aviária, que, apesar de suas relevâncias em sanidade avícola, não têm sido investigadas de forma sistematizada no Brasil, em especial no que concerne à interação entre esses agentes ou a ocorrência de co-infecção em frangos de corte. O presente estudo investigou a ocorrência de infecção por Mycoplasma gallisepticum (MG) e pelos subtipos A ou B de Metapneumovírus aviário (AMPV) em frangos de corte de plantéis avícolas comerciais mantidos em granjas mais tecnificadas localizadas nas regiões Sudeste e Centro-Oeste do Brasil. Para tanto, as técnicas de PCR e de RT-Nested-PCR foram usadas na detecção e/ou identificação, respectivamente de MG e AMPV em amostras de suabes nasais e traqueais colhidos de 87 lotes de frangos de corte com problemas respiratórios e oriundos de 15 granjas de produção comercial de frangos de corte. Dos lotes amostrados, dois deles em um total de 87 (2,3%) e de uma única granja da região Sudeste, mostraram-se positivos para MG, enquanto que nenhum dos lotes investigados revelou-se positivo para AMPV. A baixa ou nenhuma incidência desses agentes pode ser explicada pela utilização de medidas cada vez mais efetivas para o controle sanitário... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Respiratory infections of poultry may be an increasing and negative problem with poultry production in several parts of the world, especially when poultry farming is more widely used than in Brazil. These diseases include avian mycoplasmosis and avian pneumovirosis, which, despite their relevance in poultry health, have not been systematically investigated in Brazil, especially with regard to the interaction between these agents or the occurrence of co-infection in broilers. The present study investigated the occurrence of infection by Mycoplasma gallisepticum (MG) and A or B subtypes of avian Metapneumovirus (AMPV) in broiler commercial poultry farms located in the Southeast and Center-West regions of Brazil. For this, PCR and RT-Nested-PCR techniques were used in the detection and / or identification, respectively of MG and AMPV in nasal and tracheal swab samples collected from 87 lots of broilers with respiratory problems and from 15 commercial production of broilers. Of the sampled lots, two of them in 87 (2.3%) were positive for MG, whereas none of the lots were positive for AMPV. The low or no incidence of these agents can be explained by the use of increasingly effective measures for the sanitary control of these agents in the commercial farms of sampled broilers. Our findings also suggest, however, that other bacterial and viral infectious agents not investigated in this study may be involved in the etiology of the respiratory problems of these birds, since those that... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Helio Langoni / Resumo: Mycoplasma spp., tem distribuição mundial e é um patógeno relevante em medicina veterinária. As mastites causadas por Mycoplasma spp. mais frequentes em grandes rebanhos leiteiros, porém este patógeno é subestimado no Brasil, onde se têm poucos relatos como agente causador de mastite, o que se deve possivelmente a quantidade reduzida de laboratórios que inclui a análise de M. bovis em sua rotina. Devido a necessidade de meios seletivos e de condições especiais para o seu isolamento. Diante disso um dos objetivos do presente estudo foi pesquisar a participação de Mycoplasma bovis na etiologia das mastites clínicas em amostras de leite de vacas de propriedades leiteiras de sete estados do Brasil, totalizando 561 amostras de leite, que foram cultivas em meio Hayflick adicionado de acetato de tálio a 0,01%, incubadas em ambiente de microaerofilia com 5% de CO2. Foram também submetidas a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Mycoplasma spp. e Mycoplasma bovis. Pesquisouse também a microbiota aeróbica envolvida nas mastites, cultivando-se as mesmas amostras de leite em meios de ágar sangue bovino 5% e ágar MacConkey resultando 225 amostras positivas. Obtiveram-se 11 (1,96%) amostras positivas para Mycoplasma spp., no exame microbiológico, enquanto na detecção molecular obteve-se um total de 17 (3,03%) amostras positivas para Mycoplasma bovis. Pode-se concluir com os resultados obtidos pela presença e dispersão do Mycoplasma bovis nos rebanhos leiteiros avaliados, ap... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by NATHÁLIA BRANCATO JUNQUEIRA null (nbjunqueira@gmail.com) on 2017-08-08T18:23:55Z No. of bitstreams: 1 Defesa - Nathália FINAL.pdf: 993046 bytes, checksum: 72c9ada79f938498b772638050887a58 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-08-10T20:32:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 junqueira_nb_me_bot.pdf: 993046 bytes, checksum: 72c9ada79f938498b772638050887a58 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-10T20:32:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 junqueira_nb_me_bot.pdf: 993046 bytes, checksum: 72c9ada79f938498b772638050887a58 (MD5) Previous issue date: 2017-08-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Mycoplasma spp., tem distribuição mundial e é um patógeno relevante em medicina veterinária. As mastites causadas por Mycoplasma spp. mais frequentes em grandes rebanhos leiteiros, porém este patógeno é subestimado no Brasil, onde se têm poucos relatos como agente causador de mastite, o que se deve possivelmente a quantidade reduzida de laboratórios que inclui a análise de M. bovis em sua rotina. Devido a necessidade de meios seletivos e de condições especiais para o seu isolamento. Diante disso um dos objetivos do presente estudo foi pesquisar a participação de Mycoplasma bovis na etiologia das mastites clínicas em amostras de leite de vacas de propriedades leiteiras de sete estados do Brasil, totalizando 561 amostras de leite, que foram cultivas em meio Hayflick adicionado de acetato de tálio a 0,01%, incubadas em ambiente de microaerofilia com 5% de CO2. Foram também submetidas a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Mycoplasma spp. e Mycoplasma bovis. Pesquisouse também a microbiota aeróbica envolvida nas mastites, cultivando-se as mesmas amostras de leite em meios de ágar sangue bovino 5% e ágar MacConkey resultando 225 amostras positivas. Obtiveram-se 11 (1,96%) amostras positivas para Mycoplasma spp., no exame microbiológico, enquanto na detecção molecular obteve-se um total de 17 (3,03%) amostras positivas para Mycoplasma bovis. Pode-se concluir com os resultados obtidos pela presença e dispersão do Mycoplasma bovis nos rebanhos leiteiros avaliados, apesar de sua prevalência ser menor quando se compara com outros países, e ainda pela participação de outros patógenos aeróbicos com a associação de Staphylococcus coagulase negativa (17,6%) e Streptococcus dysgalactiae (11,7%) em 29% das amostras positivas para M. bovis. / Mycoplasma spp., has a worldwide occurrence and can cause severe pneumonia in calves and mastitis in lactating cows. The mastitis caused by Mycoplasma spp. are relatively common in large dairy herds. This pathogen, however, is still underestimated, especially in Brazil, with few reports of its occurrence as causative agent of mastitis due to small number of laboratories that include the M. bovis analysis as part of their routine. Such lack of analysis is due to the fact that such analysis requires selective means and special conditions for its isolation. Therefore, the aim of this study was to research the participation of Mycoplasma bovis in the etiology of clinical mastitis of dairy properties of the seven diferent states from Brazil. A total of 561 milk samples from animals with clinical mastitis were evaluated. The samples were grown on Hayflick broth added of thallium acetate 0.01%, incubated in microaerophilic atmosphere at 5% CO2. The samples were also subject to molecular evidence polymerase chain reaction (PCR) for the detection of Mycoplasma spp. and Mycoplasma bovis. The aerobic microbiota involved in the mastitis was also investigated, and the same milk samples were cultured in media of 5% bovine blood and MacConkey agar resulting in 225 positive samples. Colonies of Mycoplasma spp were isolated in 11 (1.96%) samples. The 561 milk samples included in this study were subjected to molecular detection for Mollicutes family, from which 17 (3.03%) samples were positive. All identified as positive were reassessed for the molecular diagnosis for Mycoplasma bovis. It can be concluded with the results of this research, the presence of Mycoplasma bovis in dairy herds evaluated, but with a lower incidence of this pathogen when compared to other countries, and 29% of the positive samples for M. bovis were also associated with other aerobic pathogens such as Staphylococcus coagulase negative (17.6%) and Streptococcus dysgalactiae (11.7%).

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-28T12:55:08Z No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 1040308 bytes, checksum: b0653bfe634b8d58d0d6d1c3c04816e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T12:55:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 1040308 bytes, checksum: b0653bfe634b8d58d0d6d1c3c04816e9 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Mycoplasma agalactiae is the main causative organism of contagious agalactia (CA), a disease characterized by mastitis followed by agalactia, polyarthritis, and keratoconjunctivitis. In 2001, M. agalactiae was isolated and identified in Brazil, causing great economic losses. Considering the need for characterization of Brazilian strains of M. agalactiae and implementation of effective control, this work was performed in three steps. The first article describes the biochemical and protein profile of isolates of M. agalactiae in small ruminants through the culture in modified Hayflick medium, biochemical tests, polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunogenicity of these proteins by Western blot (WB). The samples had similar protein in the profile bands ranging from 30-135 kDa in SDS-PAGE, in addition the presence of a protein of 48 kDa immunodominant WB was shown. To continue identifying the agent involved in the AC in Brazil, the second article describes the analysis of ten sequences of M. agalactiae isolated from goats and sheeps. A DNA fragment of 360 bp of the 16S rRNA gene was amplified by PCR and sequenced. The analysis revealed a high degree of similarity among all the sequences. The study revealed greater than 99% similarity with the reference samples of M. agalactiae. In the third article, efficacy of three inactivated vaccines prepared with a local of M. agalactiae sample and adsorbed with three adjuvants was evaluated in goats and sheep. The antibody response in vaccinated animals was analyzed using an indirect ELISA. The three vaccines induced antibody production, and can be an alternative to reduce economic losses and prevent contagious agalactia. These results confirms the presence and spread of M. agalactiae in the country and enhances the possibility of controlling the disease through the adoption of livestock vaccination. / Mycoplasma agalactiae é o principal microrganismo causador da agalaxia contagiosa (AC), doença caracterizada por mastite seguida de agalaxia, poliartrite e ceratoconjuntivite. Em 2001, M. agalactiae foi isolado e identificado no Brasil, determinando grandes prejuízos econômicos. Considerando a necessidade de caracterização de amostras brasileiras de M. agalactiae e da implantação de medidas eficazes de controle, esse trabalho foi realizado em três etapas. O primeiro artigo descreve o perfil bioquímico e protéico de isolados de M. agalactiae de pequenos ruminantes através do cultivo em meio Hayflick modificado, testes bioquímicos e eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e a imunogenicidade destas proteínas por Western Blot (WB). As amostras apresentaram similaridade no perfil protéico com bandas variando de 30 a 135 kDa no SDS-PAGE, além da presença de uma proteína imunodominante de 48 kDa no WB. Para dar continuidade a identificação do agente envolvido na AC no Brasil, o segundo artigo descreve a análise de dez sequências de M. agalactiae isolados de caprinos e ovinos. Um fragmento de DNA de 360 bp do gene 16S rRNA amplificado por PCR foi sequenciado. A análise revelou alto grau de similaridade, entre as dez sequências e uma similaridade maior que 99% com amostras de referência de M. agalactiae. No terceiro artigo, a eficiência de três vacinas inativadas, preparadas com amostra local de M. agalactiae e adsorvidas com três adjuvantes, foi avaliada em caprinos e ovinos. A resposta sorológica dos animais vacinados foi analisada através de um ELISA indireto. As três vacinas induziram produção de anticorpos, podendo ser utilizadas como uma alternativa para reduzir as perdas econômicas e prevenir a agalaxia contagiosa. Estes resultados confirmam a presença e disseminação do M. agalactiae no país e fortalece a possibilidade de controle da doença pela adoção da vacinação dos rebanhos.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-19T14:41:27Z No. of bitstreams: 1 Melania Loureiro Marinho.pdf: 672807 bytes, checksum: 000062f3c512fab676ae388d8a3d3f00 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-19T14:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melania Loureiro Marinho.pdf: 672807 bytes, checksum: 000062f3c512fab676ae388d8a3d3f00 (MD5) Previous issue date: 2008-02-01 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The goal of this paper was to evaluate of biotherapy of Mycoplasma agalactiae in the treatment of goats with natural infection of Contagious Agalactia (CA) of sheep and goats from Cariri region of Paraiba state. Mastitis, agalactia, arthritis and keratoconjunctivitis were the principal clinical signs observed in animals with natural infection. The diagnosis of CA was made by bacterial isolation with modified Hayflick medium. All isolates produced not only the displayed fried-egg colony morphology but also films and spots. Fermentation of glucose, and arginine in liquid medium were not observed. The biotherapic was made from M. agalactiae isolated from milk of goat with natural infection. The animals received the biotherapic dinamized at 30D diluted in water by oral via three times a day during eight weeks. The results showed not only the absence of clinical signs in the treated animals, but also they get back the productivity, good performance status and the disappearance of outbreak in the study region. At the end of 12 months post treatment no clinical signs of the disease and bacteriological isolation were observed. These results indicate that Mycoplasma nosode showed high efficacy to control the contagious agalactia in goats from different epidemiological situations. / Este trabalho foi realizado em criações de caprinos de municípios do estado da Paraíba, com o objetivo de avaliar a ação terapêutica do bioterápico de Mycoplasma agalactiae em caprinos com Agalaxia Contagiosa dos Ovinos e Caprinos (ACOC). Os sinais clínicos mais frentes observados nos animais foram: mastite seguida de agalaxia, poliartrite e ceratoconjuntivite. O diagnostico etiológico foi realizado através do isolamento de Mycoplasma agalactiae por meio do cultivo de leite em meio Hayfick modificado que resultou em colônias com aspecto de ovo frito, com presença de manchas e filmes, não fermentadores de glicose e arginina. Estas características foram observadas em todas as colônias dos animais testados suspeitos de ACOC. O Mycoplasma agalactae foi utilizado no preparo do bioterápico na D30, administrado três vezes ao dia, via oral, durante oito semanas. A eficácia do tratamento com o bioterápico foi observada através do desaparecimento dos sinais clínicos em todos os animais. Observou-se concomitantemente retorno da capacidade produtiva e ausência de surtos na região. Doze meses após a administração do bioterápico todas as culturas foram negativadas. A utilização do bioterápico de M. agalactiae teve uma ação eficiente no tratamento da ACOC nos animais estudados, devendo ser avaliado em surtos com diferentes situações epidemiológicas.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-05T15:07:53Z No. of bitstreams: 1 Silvio Gomes de Sa.pdf: 1708875 bytes, checksum: a786d439ef8b4d1c09becfbe1f091fb2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T15:07:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silvio Gomes de Sa.pdf: 1708875 bytes, checksum: a786d439ef8b4d1c09becfbe1f091fb2 (MD5) Previous issue date: 2014-06-30 / The aim of the present study was to assess the occurrence of antibodies anti-Mycoplasma gallisepticum and anti-Toxoplasma gondii among chickens and turkeys on rural family properties in the state of Pernambuco, Brazil, as well as to identify risk factors associated with these infections. In chickens, antibodies anti-Mycoplasma gallisepticum were sought using the Immunoenzymatic assay (ELISA) and antibodies anti-Toxoplasma gondii were sought using the Immunofluorescence assay (IFA). In turkeys, antibodies anti-Toxoplasma gondii were investigated using the Modified Agglutination Test (MAT). In turkeys, antibodies anti-Toxoplasma gondii were investigated based on 204 serum samples on 28 properties. In chickens, antibodies anti-Toxoplasma gondii were investigated based on 629 serum samples from 39 properties, of which 421 samples came from 29 properties that participated in the study of risk factors. Antibodies anti-Mycoplasma gallisepticum were analyzed based on 300 serum samples from 23 properties, all of which participated in the study of risk factors. In the present study, an investigative questionnaire was applied on the properties and risk factors were checked based on univariate analysis (chi-squared test or Fischer’s exact test), followed by multivariate analysis (Logistic regression). The relative frequency of turkeys that were positive for antibodies anti-T. gondii was 11% (21/204). Thirteen (13) properties contained at least one reactive turkey (46.5%). The general prevalence of chickens that were positive for antibodies anti-Toxoplasma gondii in the region was 28% (176/629). The following variables exhibited significant associations with chicken infections in the multivariate analysis (logistic regression): the slaughter of animals on the properties (OR=1,66; p=0,027); the presence of sheep (OR=1,96; p= 0,004); the occurrence of sheep births (OR=1,72; p= 0,014) and reproductive disorders among sheep (OR=2,29; p=0,003). The prevalence of chickens infected by Mycoplasma gallisepticum was 53.33% (157/300), while 100% of the properties exhibited foci. The following risk factors were confirmed in the multivariate analysis: the presence of poultry such as Numida meleagris (OR=2,22; p=0,005); different species of parrots (OR=1,72; p=0,027) and the presence of passerines (OR=1,88; p=0,007). The results of the present study indicate that Mycoplasma gallisepticum and Toxoplasma gondii infection are quite widespread in the region studied. Chickens and turkeys infected with Toxoplasma gondii could serve as a source of human infection if their meat and viscera are poorly cooked and then consumed. The large number of Mycoplasma gallisepticum foci is significant, considering the dangers associated with backyard animal reproduction and the risks for the surrounding industrial poultry plants. The chickens and turkeys assessed in the present study were good indicators of the presence of these pathogens in the environment, highlighting the need for greater care on behalf of sanitary authorities in relation to control and educating the population. / Objetivou-se estudar a ocorrência de anticorpos anti Mycoplasma gallisepticum e Toxoplasma gondii em galinhas e perus de propriedades familiares rurais no estado de Pernambuco, Brasil e identificar os fatores de risco associados a estas infecções. Em galinhas, pesquisaram-se anticorpos contra Mycoplasma gallisepticum por meio de ensaio de imunoadsorção enzimática indireto (ELISA) e contra Toxoplasma gondii por meio da Imunofluorescência Indireta (RIFI); para pesquisa de anticorpos contra Toxoplasma gondii em perus utilizou-se o teste de Aglutinação Modificado (MAT). Para pesquisa de anticorpos contra Toxoplasma gondii em perus foram analisadas 204 amostras de soro sanguíneo em 28 propriedades. Para pesquisa de anticorpos contra Toxoplasma gondii em galinhas foram analisadas 629 amostras de soro sanguíneo originadas de 39 propriedades, das quais 421 amostras de 29 propriedades participaram do estudo dos fatores de risco. Para pesquisa de anticorpos contra Mycoplasma gallisepticum foram analisadas 300 amostras de soro sanguíneo de 23 propriedades e todas as propriedades participaram do estudo dos fatores de risco. Para este estudo, um questionário investigativo foi aplicado nas propriedades e os fatores de risco foram verificados numa análise univariada (Qui-quadrado ou Exato de Fischer) seguida de análise multivariada (Regressão Logística). A frequência relativa de perus positivos para anticorpos anti-T. gondii foi de 11% (21/204) e treze (13) foram as propriedades com pelo menos um peru reagente (46,5%). A prevalência de galinhas positivas para anticorpos contra Toxoplasma gondii na região foi de 28% (176/629). A ocorrência de abate de animais nas propriedades (OR=1,66; p=0,027), a presença de ovinos (OR=1,96; p= 0,004), a ocorrência de partos de ovinos (OR=1,72; p= 0,014) e distúrbios reprodutivos em ovinos (OR=2,29; p=0,003) foram as variáveis que apresentaram associação significativa com a infecção das galinhas na análise multivariada (regressão logística). A prevalência de galinhas infectadas por Mycoplasma gallisepticum foi de 53,33% (157/300) com 100% de propriedades foco e os fatores de risco confirmados na análise multivariada foram a criação de outras espécies de aves nas propriedades como Numida meleagris (OR=2,22; p=0,005), espécies de psitacídeos (OR=1,72; p=0,027) e a criação de passeriformes (OR=1,88; p=0,007). Os resultados indicaram que a infecção por Mycoplasma gallisepticum e Toxoplasma gondii ocorre na região estudada de forma bastante disseminada. Tanto perus quanto as galinhas infectadas por Toxoplasma gondii podem servir de fonte de infecção para humanos se estes consumirem carnes e vísceras mal cozidas. O grande número de focos para Mycoplasma gallisepticum é de grande importância, tendo em vista os prejuízos causados à criação de fundo de quintal e os riscos para as criações industriais circunvizinhas. As galinhas e perus neste estudo foram bons indicadores da presença destes patógenos no ambiente suscitando maior atenção das autoridades sanitárias em relação à educação da população e ao seu controle.