BRAGA NETO, Manuel Bonfim. Genótipos da membrana externa, homA e homB, do Helicobacter pylori em pacientes com gastrite, úlcera péptica e câncer gástrico do Nordeste do Brasil. 2013. 66 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-15T13:32:05Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_mbbraganeto.pdf: 1386120 bytes, checksum: 47e6d0d89ccfc473ae649b6bcd7d9280 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-15T14:12:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_mbbraganeto.pdf: 1386120 bytes, checksum: 47e6d0d89ccfc473ae649b6bcd7d9280 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-15T14:12:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_mbbraganeto.pdf: 1386120 bytes, checksum: 47e6d0d89ccfc473ae649b6bcd7d9280 (MD5) Previous issue date: 2013 / Recently, the Hom family of Helicobacter pylori outer-membrane proteins have been studied as novel virulence markers. Most studies have found that the homB gene is strongly associated with peptic ulcer disease (PUD) and the homA gene with non-ulcer disease. Furthermore, it has been shown that the HomB protein plays a role in the proinflammatory properties and adherence of Helicobacter pylori. However, the clinical association and the function of the hom gene remains unclear. This study aimed to determine the prevalence of homA and homB genes and evaluate the association with gastric disease. We evaluated, prospectively, 183 H. pylori-positive patients (48 with gastric cancer, 71 with PUD and 64 with gastritis) undergoing upper digestive endoscopy or surgery at the Hospital Universitário Walter Cantídio, Federal University of Ceará. DNA was extracted, followed by PCR and electrophoresis for genes ureA, vacA, homA e homB. Of the 183 patients evaluated, 47 were homB-positive (25.7%), 85 were homA-positive (46.4%), 42 positive for both homA e homB (22.9%) e 9 patientes were negative for homA and homB. Samples positive for both homA and homB were excluded from the analysis. There was no association between homA and gastric disease. A significant inverse association between homA and PUD (O.R=0.353; p=0.005) and gastric ulcer (O.R=0.304; p=0.032) was found. The homB genotype was significantly associated with PUD (O.R=2.974; p=0.004). Of the 183 patientes, 71% were vacAs1 and 87.9% were vacAm1, considered more virulent strains. The homB genotype was not associated with the vacAs1m1 genotype (p=0.441).These data suggest that in this population the presence of homB gene may be a good predictor for PUD. / Recentemente, a família Hom de proteínas da membrana externa do Helicobacter pylori vêm sendo estudadas como potenciais marcadores de virulência. A maioria dos estudos evidenciou forte associação do gene homB com doença ulcerosa péptica (DUP) e do gene homA, com doença não ulcerosa péptica. Além disso, demonstrou-se que a proteína HomB contribui para o propriedade pró-inflamatória e para adesão do H. pylori. No entanto, a associação clínica e a função do gene hom ainda não foi completamente elucidada. O objetivo do estudo foi determinar a distribuição dos genótipos homA e homB e avaliar a associação dos mesmos com patologias gástricas. Foram avaliados, prospectivamente, 183 pacientes (48 com câncer gástrico, 71 com DUP e 64 com gastrite) positivos para H. pylori e submetidos à endoscopia digestiva alta ou cirurgia no Hospital Universitário Walter Cantídio, Universidade Federal do Ceará. Realizou-se extração de DNA, seguida de PCR e eletroforese para os genes ureA, vacA, homA e homB. Dos 183 pacientes estudados, 47 foram positivos para homB (25.7%), 85 para homA (46.4%), 42 positivos para homA e homB (22.9%) e 9 pacientes foram negativos para os gene homA e homB (4.9%). As amostras positivas para ambos homA e homB foram excluídas das análises. Houve associação inversa significativa entre o genótipo homA e DUP (O.R=0.353; p=0.005) e úlcera gástrica (O.R=0.304; p=0.032). Houve associação significativa entre o genótipo homB e DUP (O.R=2.974; p=0.004). Não houve associação entre os genótipos homA ou homB em relação ao gênero ou idade. Dos 183 pacientes, 71% (131/183) dos apresentaram genótipo vacAs1 e 87.9% (160/183) genótipo vacAm1, consideradas cepas mais virulentas. Não houve associação entre o genótipo vacAs1m1 e homB (p=0.441). Esse estudo sugere que na amostra populacional estudada a presença do gene homB pode ser um preditor para DUP.

FERNANDES, Isabelle Joyce de Lima Silva. Helicobacter pylori e polimosfismos em enzimas de reparo de DNA e de síntese de óxido nítrico no câncer gástrico. 2010. 118 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T16:44:20Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_ijlsfernandes.pdf: 2647323 bytes, checksum: 98181db07c81173e187b289d53ff6238 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:23:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_ijlsfernandes.pdf: 2647323 bytes, checksum: 98181db07c81173e187b289d53ff6238 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:23:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_ijlsfernandes.pdf: 2647323 bytes, checksum: 98181db07c81173e187b289d53ff6238 (MD5) Previous issue date: 2010 / Gastric cancer is the most deadly malignant neoplasia worldwide, with high incidence in Brazil and Helicobacter pylori infection is a well-established risk factor. Depending on the presence of virulence genes such as cagA, cagE, vacA and virB11, H. pylori can cause differentiated inflammatory responses, with large amounts of nitric oxide (NO) generated primarily by iNOS. High amount of NO resulting in accumulation of reactive oxygen species can cause DNA oxidative damage. The genomic integrity is guaranteed by important repair enzymes as: APE-1, OGG-1 and PARP-1. Genetic polymorphisms that modify the activity of these enzymes may influence the ability to repair and therefore the host susceptibility to the development of gastric cancer H.pylori associated. Therefore, the goal of this study was to evaluate the association of the C150T polymorphism in iNOS, T2197G in APE-1, C1245G in OGG -1 and A40676G in PARP-1 with H.pylori genotype in 109 cases of patients with gastric adenocarcinoma from hospitals in Fortaleza, Ceará. The identification of polymorphisms was performed by PCR-RFLP and the detection and genotyping of H.pylori were performed by PCR. The studied polymorphisms showed the following frequencies: iNOS 78% CC, 21.1% CT and 0.9% TT; PARP-1 69.7% AA 26.6% AG and 3.7% GG to OGG -1 56% CC, 39.4% CG and 4.6% GG and APE-1 38.5% TT, 47.7% TG and 13.8% GG. Valuable to note the low frequency of the homozygous polymorphic (TT) of iNOS and the high frequency of heterozygous (TG) from APE-1. The variant alleles of iNOS and PARP-1 were correlated with subjects ≤ 55 years, suggesting that these polymorphisms were associated with early development of the neoplasia. Intestinal tumors located in the non-antrum were correlated with heterozygous genotype of OGG-1 (CG), while diffuse, located on the body with the AA genotype of PARP-1. H. pylori was detected in 92.6% of cases. The genes cagA, cagE and virB11 were detected in 65.3%, 50.4% and 60.3% of cases respectively and vacAs1m1 was detected in 72.2%. The cases were also grouped considering the alleles of vacA and the integrity of the cag-pathogenicity island. Thus, the groups A1 and A2, consist of more pathogenic strains, were observed in 33.6% and 13.8% of patients, respectively. In the individual analysis of each enzyme, we observed that individuals carrying the variant alleles of APE-1 (TG+GG) were infected with low pathogenic strains (p=0.0422). These low pathogenic strains were also associated with patients carrying the wild genotype (AA) of PARP-1 (p=0.0396). These data were confirmed when patients infected with more virulent strains were compared to those infected with less virulent strains (p = 0.046). Analyzing only the group A1, it was also observed a correlation of APE-1 (TG) with OGG-1 (CC). When genotypes were combined by considering only the repair enzymes studied or two by two, it was found that most patients infected with the wild-type of PARP-1 were carriers of the variant allele for at least one of the enzymes and that most patients infected with less pathogenic strains possess a polymorphic allele of APE-1, independent of the genotype associated with the repair enzyme. Taken together, these data indicate the relevance of the APE-1 polymorphism in the development of gastric cancer in individuals infected with less virulent strains and corroborate the importance of the bacterial genotype, since; in general, individuals with wild-type for enzymes repair studied developed gastric cancer when infected with virulent strains. / O câncer gástrico apresenta, mundialmente, uma elevada taxa de mortalidade, com alta incidência no Brasil, sendo a infecção com Helicobacter pylori um fator de risco bem estabelecido. Dependendo da presença de genes de virulência como cagA, cagE, vacA e virB11, H. pylori pode causar respostas inflamatórias diferenciadas, apresentando grande quantidade de óxido nítrico (ON) gerado principalmente por iNOS. Quantidade elevada de ON resulta em acúmulo de espécies reativas do oxigênio cuja instabilidade causa danos oxidativos no DNA. A integridade genômica é garantida por enzimas de reparo importantes como: APE-1, OGG-1, e PARP-1. Polimorfismos genéticos que modifiquem a atividade dessas enzimas podem influenciar a capacidade de reparo e, portanto, a susceptibilidade do hospedeiro ao desenvolvimento do câncer gástrico associado à H. pylori. Assim o objetivo deste estudo foi avaliar a associação dos polimorfismos C150T em iNOS, T2197G em APE-1, C1245G em OGG-1 e A40676G em PARP-1 com o genótipo de H. pylori em 109 amostra de pacientes diagnosticados com adenocarcinomas gástricos atendidos em hospitais de Fortaleza, Ceará. A identificação dos polimorfismos foi feita por PCR-RFLP e a detecção e genotipagem de H. pylori foram feitas por PCR. Os polimorfismos estudados apresentaram as seguintes freqüências: iNOS - 78% CC, 21,1% CT e 0,9% TT; PARP-1- 69,7% AA, 26,6% AG e 3,7% GG, para OGG-1 56% CC, 39,4% CG, e 4,6% GG e para APE-1 38,5%TT, 47,7%TG e 13,8% GG. Salienta-se a baixa freqüência do genótipo polimórfico (TT) de iNOS e alta frequência do heterozigoto (TG) de APE. Os alelos variantes de iNOS e de PARP-1 foram correlacionadas com indivíduos ≤55 anos, sugerindo que estes polimorfismos estariam associados ao desenvolvimento precoce da neoplasia. Os tumores intestinais localizados na região não-antro correlacionaram-se com o genótipo OGG-1 CG; enquanto que os difusos, localizados no corpo com o genótipo AA de PARP-1. H. pylori foi detectada em 92,6% dos casos. Os genes cagA, cagE e virB11 foram detectados em 65,3%, 50,4% e 60,3% dos casos, respectivamente e vacAs1m1 detectado em 72,2%. Os casos foram agrupados considerando os alelos de vacA e a integridade da ilha de patogenicidade cag, sendo os grupos A1 e A2, composto por cepas mais patogênicas, o qual foi observado em 33,6% e 13,8% dos pacientes, respectivamente. Na análise individual de cada enzima, observou-se que os indivíduos portadores dos alelos variantes de APE-1 (TG+GG) estavam infectados com cepas pouco patogênicas (p=0,0422). Essas cepas pouco patogênicas também foram associadas aos pacientes portadores do genótipo selvagem (AA) de PARP-1 (p=0,0396). Esses dados foram confirmados quando os pacientes infectados por cepas mais virulentas foram comparadas aos infectados por cepas menos virulentas (p=0,046). Analisando apenas o grupo A1 observou-se também uma correlação de APE-1 (TG) com OGG-1(CC). Quando os genótipos foram combinados considerando somente as enzimas de reparo estudadas ou duas a duas, verificou-se que parte dos pacientes infectados com o genótipo selvagem de PARP-1 eram portadores do alelo variante para pelo menos uma das enzimas e que parte dos pacientes infectados com cepas menos patogênicas possuíam o alelo polimórfico de APE-1, independente do genótipo da enzima de reparo associada. Somados, esses dados indicam a relevância do polimorfismo da APE-1 no desenvolvimento do câncer gástrico em indivíduos infectados com cepas menos virulentas e corroboram com a importância do genótipo bacteriano, uma vez que, de maneira geral, indivíduos com genótipo selvagem para as enzimas de reparo estudadas desenvolveram câncer gástrico quando infectados por cepas virulentas.

MONTENEGRO, Raquel Carvalho. Estudo preliminar da expressão de marcadores moleculares no câncer de estômago ocorridos no estado do Ceará. 2009. 108 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2003. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-09T16:18:53Z No. of bitstreams: 1 2003_dis_rcmontenegro.pdf: 1140375 bytes, checksum: c0183397faa708970aa142c09486765f (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-14T16:00:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2003_dis_rcmontenegro.pdf: 1140375 bytes, checksum: c0183397faa708970aa142c09486765f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-14T16:00:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2003_dis_rcmontenegro.pdf: 1140375 bytes, checksum: c0183397faa708970aa142c09486765f (MD5) Previous issue date: 2003 / In search for a better understanding of the biology of tumors, molecular markers related to proliferation, resistance and apoptosis have been intensively studied in the different types of cancer. These markers can help on the elucidation of more specific therapeutic targets for the treatment of various tumors. It was observed that stomach cancer is the second most frequent cause of death in the world. In Brazil, this tumor is among the five major causes of death by cancer and the adenocarcinomas are held responsible for about 95% of all cases. For that matter, the expression of KI-67, PCNA, p53, bcl-2 and c-myc were evaluated independently and in a combined form in stomach adenocarcinomas. Thus, KI-67 and PCNA were confronted in order to determine which one would pose as a better cellular proliferation marker. Finally, a DNA extraction tecnique using CTAB was implemented on tumor tissue as well as the molecular analysis of the p53 gene by SSCP. The positive results were compared with those obtained by the imonohistochemistry analysis. The tumors were collected in surgical procedure, processed and classified histopathologically. The markers were detected by the imunohistochemical method SABP. The DNA was extracted by the CTAB method and the exons 5, 7 and 8/9 of the p53 gene analyzed by SABP. Some of the samples were obtained from biopsy arquives. The age range of the patients was between 61 and 70 years, with 48,1% of the tumors presenting an intestinal origin, 40,7% were diffuse and the other 11,2% were mixed. According to the location, 50% of the tumors were found to be proximal. 41,1% of the tumors were found to be in a low stage (I – IIIA), 44,8% in a high stage (IIIB – IV) and 13,8% were not staged. The imunohistochemical results indicated that KI-67 is the best marker to estimate cellular proliferation in stomach adenocarcinomas. In an independent manner, the tumors showed an 89,3% positivity for KI-67, 62,5% for PCNA, 50% for p53, 60,7% for bcl-2 e 66,7% for c-myc. According to the staging, the difference was significant only to p53 (p = 0,02), with a 66,7% positivity to the tumors in low stage and 16,7% for the ones on a high stage. When evaluated in a combined form, the associations of KI-67+/p53- (p=0,012) (66,67%) and c-myc+/p53- (p=0,02) (63,64%) both for the high stage tumors, were found to be significant. The DNA extraction technique applied to the tumor tissue was found to be satisfactory. For the SSCP analyses, five patients had mutation on the exon 5 (3) and on the exon 7 (2). Based on that, we may conclude that KI-67 is the best marker to access the proliferation of the stomach adenocarcinomas and that there are two proliferation activation pathways: one being dependent and the other independent of the p53 gene. / Na busca de um melhor entendimento da biologia dos tumores, marcadores moleculares relacionados à proliferação, resistência e apoptose têm sido intensamente pesquisados nos diferentes tipos de câncer. Estes marcadores podem auxiliar no estudo de alvos terapêuticos mais específicos para cada tipo de tumor. O câncer de estômago é a segunda causa de óbito mais observado no mundo. No Brasil, este tumor está entre as cinco localizações primárias mais comuns de óbitos por câncer, sendo os adenocarcinomas responsáveis por 95% dos casos. Dessa forma, foi avaliada a expressão dos marcadores KI-67, PCNA, p53, bcl-2 e c-myc de forma independente e combinada em adenocarcinomas gástricos. Também foi avaliado qual dos marcadores, KI-67 ou PCNA, era mais indicado para acessar a proliferação celular. Além disso, foi implantada a técnica de extração de DNA de tecido tumoral com CTAB e análise molecular pelo SSCP do gene p53, sendo os resultados positivos comparados com os resultados da imunohistoquímica. Os tumores foram coletados em cirurgia, processados e classificados histopatologicamente. Os marcadores foram detectados pelo método de imunohistoquímica SABP. Foi realizada a extração de DNA pelo método do CTAB, sendo os éxons 5, 7 e 8/9 do gene p53 analisados por SSCP. Algumas amostras foram obtidas de arquivo de biopsia. A faixa etária dos pacientes encontrava-se entre 61 e 70 anos de idade, com 48,1% dos tumores do tipo intestinal, 40,7% difusos e 11,2% mistos e com 50% localizados no sítio proximal. Em relação ao estadiamento, 41,4% dos tumores apresentavam-se no grau baixo (I – IIIA), 44,8% no altorisco (IIIB – IV) e 13,8% sem estadiamento. De acordo com os achados imunohistoquímicos, os resultados sugerem que o marcador mais indicado para estimar a proliferação celular nos adenocarcinomas gástricos é o KI-67. De forma independente os tumores apresentaram positividade em 89,3% para KI-67, 62,5% para PCNA, 50% para p53, 60,7% para bcl-2 e 66,7% e para c-myc. De acordo com o estadiamento, a diferença foi significativa apenas para p53 (p = 0,02), com positividade de 66,7% nos tumores de baixo risco (I – IIIA) e 16,7% nos de altorisco. Quando avaliadas de forma combinada, as associações significativas foram entre KI-67+/p53- (p=0,012) nos tumores de alto risco (66,67%) e c-myc+/p53- (p=0,02) também nos tumores de altorisco (63,64%). A técnica aplicada para a extração do DNA do tecido tumoral foi satisfatória. Para o SSCP, cinco pacientes apresentaram mutação para o éxon 5 (3) e éxon 7 (2). Com isso, concluímos que o marcador mais indicado para acessar a proliferação é o KI-67 e que existem duas vias de ativação da proliferação nos adenocarcinomas gástricos: uma dependente de p53 e outra independente de p53.

BRAGA NETO, Manuel Bonfim. Estresse oxidativo e genótipo do H. pylori em pacientes portadores de câncer gástrico e seus familiares. 2015. 72 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-15T15:57:06Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_mbbraganeto.pdf: 1082677 bytes, checksum: e07dad10a4915c5d65f1929212d0dedb (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-15T15:58:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_mbbraganeto.pdf: 1082677 bytes, checksum: e07dad10a4915c5d65f1929212d0dedb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-15T15:58:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_mbbraganeto.pdf: 1082677 bytes, checksum: e07dad10a4915c5d65f1929212d0dedb (MD5) Previous issue date: 2015 / Gastric cancer is associated with H. pylori infection, environmental factors and genetic predisposition. Relatives of gastric cancer patients are at increased risk to develop cancer, possibly, due to infection by more virulent H. pylori strains and genetic predisposition associated with pro-inflammatory cytokines, which may, in turn, result in an exaggerated inflammatory response and oxidative stress. The aim of this study was to: 1) evaluate the oxidative stress in dispeptic patients without family history of gastric cancer (NRC), patients with gastric cancer (GC) and relatives of gastric cancer (RC); 2) evaluate the prevalence of the H. pylori genotypes homA, homB and cagE in RC and NRC and determine if the cagE gene is associated with GC as well as the pattern of cagA EPYIA phosphorylation in GC. This study was performed at the Hospital Universitário Walter Cantídeo (HUWC) in Fortaleza. Blood samples were collected and centrifuged to obtain serum, in order to measure the concentration of reduced glutathione (GSH), an anti-oxidant, and Malondealdehyde (MDA), a product of lipid peroxidation. DNA extraction was performed in gastric biopsies, followed by PCR and electrophoresis for ureA, vacA, homA, homB, cagA e cagE genes. The concentrations of MDA and GSH were evaluated in 213 patients (54 CG, 91 RC e 68 NRC). The group of CG had higher MDA and lower GSH concentrations when compared to the groups without cancer (p=0.001 and p=0.005, respectively). The H. pylori genotypes were evaluated in 186 patients (48 CG, 74 RC and 64 NRC). The overall cagE prevalence was 54.3% (101/186), 70% (52/74) in the RC group, 52% (25/48) in the GC group and 36% (24/87) in the NRC group. A significant and independent association was found between the cagE genotype and the RC group (OR 3,357; IC 2,026 - 9,476 95%: p=0,001) and between the homB genotype and the RC group (OR (OR 2,357; IC 95%: 1,401 – 3,961; p=0,001). Forty six cagA positive samples from the GC group were included for gene sequencing to evaluate the EPIYA phosphorylation sites of the CagA protein. All of the strains studied had an EPIYA-C pattern and approximately 50% of the strains were mixed. This study demonstrates that patients with gastric cancer are under higher levels of oxidative stress. The group of RC have a higher prevalence of cagE and homB. The group of GC patients had a high prevalence of mixed strains regarding CagA EPIYA-C phosphorylation pattern. Decreasing the lipid peroxidation, increasing the antioxidant reserve and identifying groups at risk of infection with more virulent strains of H. pylori may be important to prevent gastric cancer. / O câncer gástrico está relacionado a infecção por H. pylori, fatores ambientais e predisposição genética. Familiares de pacientes com câncer gástrico (FC) têm maior risco de desenvolvimento da doença, possivelmente, em decorrência da infecção por cepas mais virulentas de H. pylori e predisposição genética relacionado a citocinas pró-inflamatóriase o stress oxidativo. O objetivo do estudo foi: 1) avaliar o estresse oxidativo em pacientes portadores de câncer gástrico (CG), dispépticos sem história familiar de câncer gástrico (NFC), e familiares de câncer gástrico de primeiro grau (FC); 2) averiguar em FC e NFC a prevalência dos genótipos de H. pylori homA, homB, cagE e, em pacientes portadores de CG, avaliar se o gene cagE está associado a essa neoplasia e o padrão dos sítios de fosforilação EPYIA da proteína cagA. Estudo foi realizado no Hospital Universitário Walter Cantídio. O estresse oxidativo foi avaliado no soro através da dosagem de glutationa reduzida (GSH), antioxidante, e malondialdeído (MDA), produto da peroxidação lipídica. Realizou-se extração de DNA da biópsia gástrica, seguida de PCR e eletroforese para os genes ureA, vacA, homA, homB, cagA e cagE. Foi avaliado a concentração sérica de MDA e GSH em 213 indivíduos (54 CG, 91 FC e 68 NFC). O grupo CG apresentou concentrações de MDA mais elevado e de GSH mais baixo quando comparado com o grupo sem neoplasia (p=0.001 e p=0.005, respectivamente). Os genótipos de H. pylori foram avaliados em 186 pacientes (48 CG, 74 FC e 64 NFC). A prevalência geral de cagE na amostra foi de 54,3% (101/186), sendo 70% (52/74) no grupo FC, 52% (25/48) no grupo de CG e 36% (24/87) no grupo NFC. Houve associação significante, mesmo após análise multivariada, entre o genótipo cagE e o grupo de FC (OR 3,357; IC 2,026 - 9,476 95%: p=0,001) e entre homB e o grupo FC (OR 2,357; IC 95%: 1,401 – 3,961; p=0,001). Foram incluídas 46 amostras de CG cagA positivas para avaliação dos sítios EPIYA da proteína CagA. Todas as cepas avaliadas apresentaram padrão EPYIA-C, e aproximadamente 50% de cepas mistas. O presente estudo mostra que pacientes portadores de câncer gástrico possuem estresse oxidativo aumentado. Os indivíduos FC estão infectados com maior prevalência por cepas virulentas de H. pylori, cagE e homB. Além disso, os pacientes portadores de câncer gástrico apresentaram prevalência elevada de cepas mistas de H. pylori quanto ao segmentos EPIYA C da proteína CagA. Possivelmente, diminuir a peroxidação lipídica, aumentar a reserva de antioxidantes e identificar grupos de maior risco quanto ao perfil de cepas de H. pylori poderá ser importante para a prevenção do câncer gástrico.

FEITOSA, Neli Patricia Pereira. Imunoexpressão de marcadores de células -tronco, CD44 e CD133, no câncer gástrico primário e metástases linfonodais. 2015. 68 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-29T13:47:51Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_nppfeitosa.pdf: 1566891 bytes, checksum: c867b84a46d19b6c755515c32880e5be (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-29T13:50:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_nppfeitosa.pdf: 1566891 bytes, checksum: c867b84a46d19b6c755515c32880e5be (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T13:50:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_nppfeitosa.pdf: 1566891 bytes, checksum: c867b84a46d19b6c755515c32880e5be (MD5) Previous issue date: 2015 / Gastric cancer is the fourth most common cancer worldwide, accounting for the second leading cause of cancer mortality. Despite treatment with surgery and chemotherapy, the overall five-year survival of patients with gastric cancer remains low. One possible explanation for the ineffectiveness of therapy is the presence of cancer stem cells, a subpopulation of tumor cells that have stem cell characteristics. It has been reported that these, as well as embryonic stem cells, are immortal, can self-renew and to differentiate to be transformed in any cell type in the body. Several markers, including CD44 and CD133, have been reported as stem cell markers in both normal and cancerous cells and have been used to isolate cancer cells from solid tumors. The aim of this study was to evaluate the expression of CD44 and CD133 in primary gastric cancer and lymph node metastases by immunohistochemical and to relate it to clinicopathologic variables as histological type, gender, age, anatomical site, tumor size, angiolymphatic invasion, infiltration perineural, TNM classification (TN) and lymph node involvement. This study was developed from a set of 72 cases of gastric adenocarcinoma, from the Archives of Pathology and Forensic Medicine of the Federal University of Ceará Service (DPML-UFC). Tissue microarray and immunohistochemistry were utilized, with anti-CD44 monoclonal antibody and polyclonal anti-CD133. The cases with one or more cells with cytoplasmic and / or membrane immunostaining were considered positives. It was observed that 30% of the samples were positive for CD44. No statistically significant differences were found between the clinical and pathological variables studied and the immunoreactivity of CD44. Regarding the immunoreactivity of CD133, the present study showed that 24% of samples were positive. The degree of tumor invasion presented data showing a statistically significant trend (p = 0.0505), in reverse. The other variables, we found no statistically significant difference. The immunoreactivity of CD133 in histologically normal mucosa was higher than in the primary tumor and intestinal metaplasia, with statistically significant difference (p = 0.0159 and p = 0.0058, respectively). The CD133 immunostaining in intestinal type gastric carcinoma was significantly higher than in the histologically normal mucosal metaplasia (p = 0.0260). The frequency of expression of these markers is highly variable, and even in the samples considered positive, the stained cells percentage is also variable, and very low overall. / O câncer gástrico é a quarta neoplasia mais comum em todo o mundo, representando a segunda causa de mortalidade por câncer. Apesar do tratamento com cirurgia e quimioterapia, a sobrevida global em cinco anos de pacientes com câncer gástrico permanece baixa. Uma possível explicação para ineficácia da terapia é a presença de células-tronco cancerosas, uma subpopulação de células tumorais que apresentam características de células-tronco. Estas células, assim como as células tronco embrionárias, são consideradas imortais, podem se auto-renovar e se transformar em qualquer célula do corpo. Vários marcadores, incluindo CD44 e CD133, têm sido relatados como marcadores de células-tronco, normais e cancerosas, e utilizados para isolar células cancerosas de tumores sólidos. O objetivo desse trabalho foi avaliar a expressão de CD44 e de CD133, no câncer gástrico primário e metástases linfonodais, através de imunohistoquímica, e relacioná-la com as variáveis clínico-patológicas de tipo histológico, sexo, idade, localização anatômica, dimensão do tumor, invasão angiolinfática, infiltração perineural, classificação TNM (TN) e acometimento linfonodal. Este estudo foi desenvolvido a partir de um conjunto de 72 casos de adenocarcinoma gástrico, dos Arquivos do Serviço de Patologia e Medicina Legal da Universidade Federal do Ceará (DPML-UFC). Utilizou-se a técnica de tissue microarray asociada à imunohistoquímica com anticorpo monoclonal anti-CD44 e policlonal anti-CD133. Foram considerados positivos os casos que apresentaram uma ou mais células com imunomarcação citoplasmática e/ou membranar. Foi observado que 30% das amostras foram positivas para o CD44. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre as variáveis clínico-patológicas estudadas e a imunoexpressão de CD44. A imunoexpressão do CD133 foi positiva em 24% das amostras. O grau de invasão do tumor apresentou dados com tendência estatisticamente significante (p=0,0505), de forma inversa. Nas demais variáveis, não foi encontrada nenhuma diferença estatisticamente significante. A imunoexpressão de CD133 na mucosa histologicamente normal foi maior do que no tumor primário e na metaplasia intestinal, com diferença estatística significante (p=0,0159 e p=0,0058, respectivamente). A imunoexpressão de CD133 no adenocarcinoma gástrico tipo intestinal foi significativamente maior na mucosa histologicamente normal do que na metaplasia (p=0,0260). A frequência da expressão desses marcadores é muito variável, e mesmo nas amostras consideradas positivas, o percentual de células coradas também é variável, e em geral muito baixo.

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O câncer gástrico é a terceira causa de morte por câncer no mundo e a quimioterapia combinatória é um dos principais tratamentos para esta doença. Contudo, a principal causa de falha do tratamento é a quimiorresistência. Considerando este obstáculo juntamente com a descoberta de que muitas proteínas envolvidas na mitose podem estar associadas à tumorigênese, vários agentes antimitóticos estão sendo desenvolvidos e testados. As proteínas mitóticas AURKB e NDC80 foram recentemente identificadas como proteínas potenciais a serem inibidas no câncer gástrico. Portanto, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos da inibição de AURKB e NDC80 pelos fármacos experimentais ZM447439 e INH1, respectivamente. Analisamos os efeitos em duas linhagens de adenocarcinoma gástrico avaliando expressão gênica, ciclo celular, morte celular, análise morfométrica nuclear, capacidade de migração e presença de células-tronco tumorais. É importante enfatizar que essas duas pequenas moléculas não foram testadas na quimioterapia do câncer gástrico até o momento. Além disso, após uma revisão da literatura, concluímos que os melhores resultados dos ensaios clínicos foram alcançados quando antimitóticos foram combinados com a terapia convencional. Dessa forma, avaliamos também os efeitos da associação de 5- FU com ZM447439. Nossos resultados demonstraram que a monoterapia com 5-FU, ZM447439 e INH1 induziu a expressão gênica diferencial nas linhagens de câncer gástrico (ACP02 e ACP03) de pelo menos 22 de um total de 82 genes envolvidos em várias vias, como apoptose, ciclo celular, senescência e transição epitélio-mesenquimal. Observamos também que ZM447439 e sua combinação com 5-FU induziram apoptose, catástrofe mitótica, senescência e ciclo celular alterado nas linhagens de câncer gástrico. Outro dado interessante foi a expressão dos marcadores de células-tronco tumorais gástricas, LGR5 e CD24, e a capacidade de formar esferas, indicando que ambas ACP02 e ACP03 podem conter células tronco tumorais. Além disso, a monoterapia com ZM447439 ou 5-FU foi capaz de inibir a formação de esferas. Por outro lado, o INH1 mostrou menor atividade antitumoral, uma vez que apresentou o maior valor de IC50 e foi capaz somente de induzir apoptose e reduzir a migração celular. Interessantemente, a combinação do 5-FU com ZM447439 permitiu o uso de doses menores dos compostos, além de ser capaz de induzir a apoptose num tempo mais curto quando comparado com o tratamento com os fármacos isolados. Em síntese, os resultados observados sugerem o inibidor de AURKB, ZM447439, e sua associação com o agente quimioterápico 5-FU, como tratamentos promissores do câncer gástrico com base em sua elevada atividade antitumoral in vitro. / Gastric cancer is the third cause of cancer death worldwide and combinatorial chemotherapy is one of the main treatments for this disease. However, the major cause of treatment failure is chemoresistance. Considering this obstacle together with the discovery that many proteins involved in mitosis might be associated to tumorigenesis, several new anti-mitotics are being developed and tested. The mitotic proteins AURKB and NDC80 were recently shown as potential proteins to be inhibited in gastric cancer. Therefore, the aim of this study was to analyze the effects of AURKB and NDC80 inhibition by the experimental drugs ZM447439 and INH1, respectively. We analyzed the effects in two gastric adenocarcinoma cell lines evaluating gene expression, cell cycle, cell death, nuclear morphometric analysis, migration ability and presence of gastric cancer stem cells. It is important to emphasize these two small molecules have not been tested in gastric cancer chemotherapy until now. Moreover, after reviewing the literature, we concluded the best results of clinical trials were achieved when anti-mitotics were combined with conventional therapy. Thus, we evaluated the effects of 5-FU and ZM447439 combination as well. Our results demonstrated that monotherapy with 5-FU, ZM447439 and INH1 induced differential gene expression in gastric cancer cell lines (ACP02 and ACP03) of at least 22 from 82 genes involved in several pathways such as apoptosis, cell cycle, senescence and epithelial mesenchymal transition. We also observed that ZM447439 and its combination with 5-FU induced apoptosis, mitotic catastrophe, senescence and altered cell cycle in gastric cancer cell lines. Another interesting data was the expression of the gastric cancer stem cell markers LGR5 and CD24, and the ability to form spheres, indicating that both ACP02 and ACP03 may be composed by cancer stem cells. Furthermore, monotherapy with either ZM447439 or 5-FU were capable of inhibiting the formation of spheres. On the other hand, INH1 have shown lower antitumoral activity since it presented the highest IC50 value and was only capable of inducing apoptosis and reducing cell migration. Interestingly, the combination of 5-FU with ZM447439 allowed the use of smaller doses of the compounds, in addition to being able to induce apoptosis in a shorter time when compared to the treatment with the isolated drugs. Taken together, our findings suggest that due to the high antitumoral activity shown by ZM447439 and mainly its association with 5-FU, these might be promising gastric cancer therapies.

A metaplasia intestinal gástrica (MIG) é considerada como lesão precursora para o câncer gástrico, mas isto não tem levado a um controle maior dos portadores. Estudamos uma população dispéptica adulta e detectamos a prevalência de MIG. Vários marcadores têm sido testados para indicar qual paciente portador de metaplasia intestinal deva ser acompanhado com exames periódicos. Um destes marcadores é a pesquisa da proteína de membrana CD44v6 em lesões pré-malignas. Objetivo: estudar a expressão da CD44v6 em pacientes dispépticos com Helicobacter pylori (H. pylori) e metaplasia intestinal gástrica. Local: Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Pacientes: 642 pacientes dispépticos dos quais foram estudados 56 pacientes com MIG e comparados com outros dois grupos, um de pacientes com H. pylori e outro, sem H. pylori e sem MIG. Métodos: estudo da MIG com colorações HE (hematoxilina-eosina), PAS/AB (periodic acid-Schiff/ Alcian blue), HID (high iron diamine) e, para estudar a expressão da CD44v6, empregou-se a imuno-histoquímica. Resultados: De 642 pessoas avaliadas, 424 eram portadoras de Helicobacter pylori e 218 não. Das portadoras, 77 tinham MIG (18,2%) e das não portadoras, 15 (6,9%). Das pessoas com MIG, estudamos 56 casos, sendo MIG do tipo I em 55% (31/56) dos casos, 22% (12/56) do tipo II e 23% (13/56) do tipo III. A MIG teve igual proporção entre os sexos, foi mais frequente no antro, o tipo de MIG não teve relação com a extensão da metaplasia e não houve aumento proporcional com a idade. Na nossa população de estudo, a MIG foi de baixa frequência relativa (14,4%). Quanto à CD44v6, todos os nossos casos foram negativos para esta proteína. Conclusões: 1) Os nossos casos foram todos negativos para CD44v6 e não vemos utilidade de utilizar este marcador no nosso meio no rastreamento de pacientes com metaplasia intestinal gástrica que mereceriam um acompanhamento subsequente. 2) Biópsias do antro e da incisura detectaram quase a totalidade (93%) dos casos de metaplasia intestinal gástrica nos nossos casos e isto pode ser uma indicação para a prática clínica. 3) A distribuição da metaplasia intestinal gástrica entre os sexos seguiu a proporção no grupo estudado, concluindo-se que não há diferença entre os sexos. 4) Não encontramos alteração da freqüência da metaplasia intestinal gástrica conforme a idade. 5) O achado de borda em escova ou células de Paneth não exclui que naquela lâmina haja glândulas metaplásicas do tipo incompleto. 6) Não houve relação entre o local da metaplasia intestinal gástrica e seu tipo. 7) Não houve relação entre extensão e tipo de metaplasia intestinal gástrica. 8) A população estudada tem baixa prevalência de metaplasia intestinal gástrica. / The gastric intestinal metaplasia (GIM) is considered a premalignant lesion for gastric cancer, but this has not led to greater control of the carriers. We studied a dyspeptic adult population and detected the prevalence of GIM. Several markers have been tested to indicate which patients with intestinal metaplasia should be followed with periodic examinations. One of these markers is the membrane protein CD44v6. Objective: To study the expression of CD44v6 in dyspeptic patients with Helicobacter pylori (H. pylori) and gastric intestinal metaplasia. Location: Hospital de Clinicas de Porto Alegre, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brazil. Patients: 642 dyspeptic patients of which 56 patients with GIM and compared with two other groups, one of patients with H. pylori and another without H. pylori. Methods: A study of GIM with HE staining (hematoxylin-eosin), PAS / AB (periodic acid-Schiff / Alcian blue), HID (high iron diamine). We used immunohistochemistry (IHC) to study the expression of CD44v6. Results: Of 642 patients evaluated, 424 were carriers of Helicobacter pylori and 218 did not. The carriers had 77 MIG (18.2%) and noncarriers, 15 (6.9%). Of those GIM 56 study cases, GIM type I by 55% (31/56) cases, 22% (12/56) Type II and 23% (13/56) of Type III. GIM had equal sex ratio, was more frequent in the antrum, the type of GIM was not related to the extent of metaplasia and there was no proportional increase with age. In our study population, the GIM has low relative frequency (14.4%). As to CD44v6, all our cases were negative for this protein. Conclusions: 1 ) Our cases were all negative for CD44v6 and we do not see the usefulness of using this marker in screening patients with gastric intestinal metaplasia that merit a subsequent follow-up. 2) Biopsies of the antrum and incisura detected almost all (93 %) cases of gastric intestinal metaplasia in our cases and this can be an indication for clinical practice. 3) The distribution of gastric intestinal metaplasia between the sexes followed the proportion in the group studied, and so there is no difference between the sexes. 4) No change was found in the frequency of gastric intestinal metaplasia according to age. 5) The finding of brush border and Paneth cells does not preclude that metaplastic glands is not of the incomplete type. 6) There was no relationship between the location of gastric intestinal metaplasia and its type. 7) There was no relationship between the extent and type of gastric intestinal metaplasia. 8) The population has a low prevalence of gastric intestinal metaplasia.