Submitted by Programa de Pós-Graduação em Odontologia Saúde (mestrodo@ufba.br) on 2017-04-04T15:06:18Z No. of bitstreams: 1 pdf final.pdf: 2399331 bytes, checksum: 1a144def38498f9edb85ce2273368827 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-07-06T12:54:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pdf final.pdf: 2399331 bytes, checksum: 1a144def38498f9edb85ce2273368827 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T12:54:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pdf final.pdf: 2399331 bytes, checksum: 1a144def38498f9edb85ce2273368827 (MD5) / CAPES / As neoplasias de glândulas salivares representam um importante grupo de neoplasias cujos aspectos morfológicos são diversos, no entanto, o seu conteúdo estromal tem sido pouco investigado. Este estudo visa estudar a distribuição de mastócitos e proteínas relacionadas (SMA, PAR-2, TGFβ1, IL-6), bem como a sua contribuição na diferenciação miofibroblástica em diferentes neoplasias de glândulas salivares com e sem conteúdo mioepitelial e com alto e baixo índice proliferativo. Técnica imunohistoquímica para triptase de células mastocitárias, SMA, PAR-2, TGFβ1, IL- 6 foi realizada em 10 casos de Adenoma Pleomórfico (AP), nove casos de Adenoma de Células Basais (AB), 10 casos de Adenocarcinoma Polimorfo de Baixo Grau (APBG), 14 casos de Carcinoma Mucoepidermóide (CME) e 10 casos de Carcinoma Adenóide Cístico (CAC), sendo inicialmente os tumores classificados de acordo com o seu conteúdo mioepitelial (<50% ou ≥ 50%) e de proliferação celular (alto ou baixo), por meio da calponina e do Ki-67, respectivamente. Adicionalmente foi realizada dupla marcação imunohistoquímica para mastócitos e actina alfa de músculo liso (SMA). A densidade de mastócitos foi maior na região periparenquimal em todos os tumores, sendo mais elevada nos tumores malignos (p=0,025), especialmente no CME. Foi encontrada uma correlação positiva entre mastócitos intraparenquimais e periparenquimais nos tumores benignos (p=0,020), e uma correlação negativa nos tumores malignos (p >0,05). Tumores benignos com alto índice proliferativo apresentaram alta expressão de PAR-2 e TGFβ1, baixa expressão de SMA e IL-6, e menor densidade de mastócitos periparenquimais quando comparados aos tumores de baixo índice proliferativo; nos tumores benignos com conteúdo mioepitelial <50% observou-se alta expressão de TGFβ1, alta expressão de PAR-2 em 50% dos casos, baixa expressão de SMA e IL-6 e menor densidade de mastócitos periparenquimais quando comparados aos tumores com conteúdo mioepitelial >50% (p>0,05). Tumores malignos com alto índice proliferativo apresentaram alta expressão de PAR-2, baixa expressão de SMA, IL-6 e TGFβ1 e maior densidade de mastócitos totais, intra e periparenquimais quando comparados aos tumores de baixo índice proliferativo; no CME, tumores com baixo índice proliferativo apresentaram maior expressão de SMA (p=0,031); nos tumores malignos com conteúdo mioepitelial <50% observou-se alta expressão de PAR-2, baixa expressão de SMA, IL-6, TGFβ1, e maior densidade de mastócitos totais, intra e periparenquimais quando comparados aos tumores com conteúdo mioepitelial >50% (p>0,05). Quando comparada a densidade de mastócitos com a marcação miofibroblástica (SMA), tumores benignos e malignos com alta expressão de SMA apresentaram maior densidade de mastócitos totais e periparenquimais, com destaque para a densidade periparenquimal no APBG (p=0,017). Em relação à expressão das proteínas PAR-2, IL-6 e TGFβ1 e a densidade de mastócitos e SMA não foi observada diferença estatisticamente significante (p>0,05). Os resultados do presente trabalho apontam para uma possível participação dos mastócitos no desenvolvimento tumoral de tumores de glândula salivar. No entanto, não foi possível estabelecer a relação entre os mastócitos e a diferenciação miofibroblástica em tumores de glândula salivar. / Salivary gland neoplasms represent an important group of neoplasms whose morphology is different, however, its content stromal has been little investigated. This study aims to study the distribution of mast cells and related proteins (SMA, PAR-2, TGFβ1, IL-6), as well as their contribution to the myofibroblastic differentiation in different tumors of the salivary glands with and without myoepithelial content and high and low proliferative index. Immunohistochemistry for tryptase mast cells, SMA, PAR- 2, TGFβ1, IL-6 was performed in 10 cases of Pleomorphic Adenoma (PA), nine cases of Basal Cell Adenoma (AB), 10 cases of Polymorphous Low- Grade Adenocarcinoma (PLGA), 14 cases of Mucoepidermoid Carcinoma (MEC) and 10 cases of adenoid cystic carcinoma (ACC) initially being tumors were classified according to their myoepithelial content (<50%, or ≥ 50%) and cellular proliferation (high or low) by means of calponin and Ki-67, respectively. Additionally Double labeling immunohistochemistry was performed to mast cells and alpha smooth muscle actin (SMA). The density of mast cells was larger in the region periparenquimal all tumors and is higher in malignant tumors (p = 0.025), especially in MEC. A positive correlation between intraparenchymal and periparenchymal mast cells in benign tumors were found (p = 0.020), and a negative correlation in malignant tumors (p> 0.05). Benign tumors with high proliferation index showed high expression of PAR-2 and TGFβ1, low expression of SMA and IL-6, and lower density periparenchymal mast cells tumors compared to low proliferative index; in benign tumors with myoepithelial content of <50% was observed high expression of TGFβ1, high PAR-2 expression in 50% of cases, low SMA expression and IL-6 and lower density periparenchymal mast cells when compared to tumors with myoepithelial content > 50% (p> 0.05). Malignant tumors with high proliferative index showed high expression of PAR-2, low-SMA expression, IL-6 and TGFβ1 and higher density of total mast cells, intra and periparenchymal when compared to tumors of low proliferation index; the MEC, tumors with low proliferation index showed higher expression of SMA (p = 0.031); in malignant tumors with myoepithelial content <50% was observed high expression PAR- 2, low-SMA expression, IL-6, TGFβ1, and higher density of total mast cells, intra and periparenchymal when compared to tumors with myoepithelial content> 50% (p> 0.05). Compared the density of mast cells with myofibroblastic marking (SMA), benign and malignant tumors with high expression of SMA showed a higher density of total and periparenchymal mast cells, highlighting the periparenchymal density in PLGA (p = 0.017). Regarding the expression of PAR-2 protein, IL-6 and TGFβ1 and the density of mast cells and SMA was no statistically significant difference (p> 0.05). The results of this study point to a possible role of mast cells in tumor development of salivary gland tumors. However, it was not possible to establish the relationship between mast cells and myofibroblast differentiation in salivary gland tumors.

Orientadores: Albina Messias de Almeida Milani Altemani, Fernanda Viviane Mariano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T21:33:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ConchaGomez_CamilaAndrea_M.pdf: 7905371 bytes, checksum: d30a270e5a2b856cfa2e57fa9e5a3522 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Introdução: Vários tumores de glândulas salivares imitam o sistema ductal, principalmente o ducto intercalado, tais como o adenoma pleomórfico, adenoma de células basais, carcinoma adenóide-cístico e carcinoma epitelial-mioepitelial. Contudo o adenocarcinoma polimorfo de baixo grau não apresenta ductos com dupla população celular como os outros descritos, mas é acreditado que este tumor é originado do ducto intercalado terminal. Em relação aos marcadores imunoistoquímicos, existem aqueles que detectam a expressão de enzimas e podem ser usados como marcadores funcionais de diferenciação celular, como lisozima e DOG1. Na glândula salivar normal, a lisozima é expressa no citoplasma das células luminais do ducto intercalado e em pequena quantidade nas células acinares, enquanto que o DOG1 é expresso na porção membranosa apical das células acinares e luminais do ducto intercalado. Objetivo: investigar a utilidade de lisozima e DOG1 na avaliação dos tumores salivares que se acredita sejam originados do ducto intercalado. Material e métodos: A expressão imunoistoquímica destes marcadores foi analisada em: 24 casos de Adenomas pleomórfico (AP), 10 Mioepiteliomas (M), 17 Tumores de Warthin (TW), 21 Adenocarcinomas polimorfo de baixo grau (APBG), 14 Carcinomas epitelial-mioepitelial CEME), 17 Carcinomas adenóide cístico (CAC), 14 Carcinomas secretor análogo da mama (MASC), 22 Carcinomas de células acinares (CCA), 11 Carcinomas mucoepidermóide (CM), 4 Carcinomas de ducto salivar (CDS), 7 Carcinomas mioepitelial (CMi). Resultados: a expressão luminal apical de DOG1 foi observada somente em: CCA, AP, APBG, CEME e CAC. Este padrão de DOG1 foi mais extenso e frequente no CCA; nos outros tumores foi mais variável, porém com maior expressão no CEME. Lisozima foi positiva em: MASC, CEME, AP, APBG e CDS. Somente nos 2 primeiros tumores, a expressão de lisozima foi encontrada em mais de 50% dos casos. Conclusões: As expressões apical luminal de DOG1 e de lisozima no AP, APBG, CEME e CAC possivelmente indicam diferenciação do tipo ducto intercalado, que é variável nestas neoplasias. Dentre elas, o CEME é que apresenta tal diferenciação com maior frequência e extensão. As expressões de DOG1 tipo apical luminal e de lisozima podem ser utilizadas no diagnóstico diferencial entre MASC e CCA, nos casos que apresentam dificuldade diagnóstica, uma vez que são fortemente expressas no primeiro e ausente no segundo / Abstract: Introduction: Several salivary tumors present a cellular composition that is similar to that of the intercalated duct, such as: Pleomorphic adenoma (PA), Basal cell adenoma (BCA), Adenoid cystic carcinoma (AdCC) and Epithelial-myoepithelial carcinoma (EMC). Regarding Polymorphic low grade adenocarcinoma (PLGA), although it does not present a dual cell composition as the other tumors, it is believed to be originated from the terminal intercalated duct. In relation to immunohistochemical markers, there are those that detect enzyme expression and can be used as functional marker of cellular differentiation, such as DOG1 and lysozyme. In normal salivary gland, lysozyme is expressed in the cytoplasm of luminal cells of intercalated duct and in small amount of acinar cells whereas DOG1 is expressed in the apical membrane of both acinar and luminal cells of intercalated ducts. Objetive: investigate the utility of DOG1 and lysozyme in the evaluation of salivary tumors. Material and methods: The immunohistochemical expression of these markers was analyzed in 24 cases of PA, 10 Myoepitheliomas (M), 17 Warthin tumors (WT), 21 PLGA, 14 EMC, 17 AdCC, 14 Mammary analogue secretory carcinoma (MASC), 22 Acinic cell carcinoma (ACC), 11 Mucoepidermoid carcinoma (MEC), 4 Salivary duct carcinoma (SDC) and 7 Myoepithelial carcinoma (MC). Results: Luminal apical expression of DOG1 was observed only in ACC, PA, PLGA, EMC and AdCC. This DOG1 pattern of expression was more frequent and extensive in ACC; in the other tumors this expression was variable but more marked in EMC. Lysozyme was detected in MASC, EMC, PA, PLGA and SDC. Only in MASC and EMC, lysozyme expression was found in more than 50% of the cases. Conclusions: Luminal apical expression of DOG1 and of lysozyme in PA, PLGA, EMC and AdCC probably represent intercalated duct differentiation, which is variable in these tumors. Among these tumors, EMC is the lesion where such differentiation occurs more frequently and extensively. Luminal apical expression of DOG1 and of lysozyme can be useful for distinguishing MASC from ACC because both protein are markedly expressed only in the former tumor / Mestrado / Patologia / Mestra em Estomatopatologia

Carcinomas de glândulas salivares são raros e seu tratamento de escolha é cirúrgico, seguido ou não de radioterapia. Até 50% dos casos apresentam recorrências neoplásicas e a maioria delas é local. O único tratamento de resgate com potencial curativo é o cirúrgico. No entanto, poucos estudos abordam o tema. O objetivo deste estudo é avaliar a ocorrência de complicações cirúrgicas e os fatores prognósticos clínicos e anatomopatológicos em pacientes portadores de carcinoma de glândulas salivares recidivado, submetidos à cirurgia de resgate. Foram avaliados 59 pacientes que preenchiam os critérios de elegibilidade do estudo: diagnóstico comprovado da recidiva de carcinoma de glândulas salivares e cirurgia de resgate realizada com intenção curativa. Trinta e 5 pacientes desta série (59,3%) foram tratados previamente em outra instituição. A cirurgia de resgate de todos os pacientes foi realizada no Hospital A. C. Camargo, em São Paulo, entre os anos de 1957 a 2000. O local do tumor primário foi parótida em 34 casos (57,6%); cavidade oral, em 13 (22,1%) e glândula submandibular, em 12 (20,3%). O tipo histológico mais freqüente foi o carcinoma adenocístico em 23 casos (39%), seguido pelo carcinoma mucoepidermóide, em 14 (23,7%). O tratamento prévio foi somente cirurgia em 47 casos, cirurgia e radioterapia adjuvante em 11 casos e cirurgia e quimioterapia em apenas um caso. A maioria dos pacientes apresentou recorrência local (39; 66%), em sete casos a recorrência foi regional (11,9%) e em treze foi locorregional (22,1%). O estádio clínico da recorrência foi inicial (rEC I e II) em 15 casos (25,5%) e avançado (rEC III e IV), em 44 (74,5%). O tratamento cirúrgico da recorrência foi ressecção local em 39 casos (66,1%), esvaziamento cervical isolado em 7 (11,9%) e cirurgias em monobloco (ressecção local associada a esvaziamento cervical) em 13 casos (22%). Em 5 pacientes foi realizada parotidectomia ampliada com temporalectomia. A taxa global de complicações cirúrgicas foi de 32,2%. A complicação mais comum foi a infecção da ferida operatória. Não houve mortalidade pós-operatória. Houve nova recorrência em 36 pacientes (61%). A recorrência mais freqüente foi a distância, em 16 casos (27%), sendo o pulmão o sítio mais acometido. Em 10 casos (17%) houve falha no controle local; em 5 (8,5%), falha locorregional e em 5, falha regional (8,5%). A sobrevida atuarial global, após a cirurgia de resgate, foi de 61,3% em 5 anos e 42% em 10 anos. O sexo, o tipo histológico, a topografia, o estadiamento clínico e a conservação do nervo facial (tumores parotídeos) não apresentaram associação com a sobrevida global. Em análise univariada a idade maior que 60 anos foi associada a pior prognóstico. Este estudo demonstra que o prognóstico de pacientes com carcinomas de glândulas salivares recidivados, selecionados para serem submetidos à cirurgia de resgate é aceitável. As taxas de complicações cirúrgicas foram geralmente locais e não houve mortalidade pós-operatória nesta série. / Salivary gland carcinomas are rare and the main treatment option is surgery with or without postoperative radiotherapy. Almost half of the cases present recurrences of tumors and the majority are local. The only potentially curative treatment for recurrent tumors is salvage surgery. However, few papers were published on this subject. The aim of this study is evaluate the surgical complications and clinical and pathologic prognostic factors in patients with recurrent salivary gland carcinoma submitted to salvage surgery. We reviewed the medical charts of 59 patients that fulfilled the eligibility critera of the study: proven diagnosis of locorregionally recurrent salivary gland carcinoma and surgery with curative intention. Thirty five patients (59,3%) had been previously treated at another institution. The salvage surgery in all the patients was performed at the A. C. Camargo Hospital in São Paulo, Brazil from 1957 to 2000. The site of the primary tumor was the parotid in 34 cases, the oral cavity in 13 and submandibular gland in 12 cases. The most frequent histopathologic type was adenoid cystic carcinoma (23 cases; 39%) and mucoepidermoid carcinoma (14 cases ;23.7%). The prior treatment was surgery alone in 47 cases, surgery with adjuvant radiotherapy in 11 cases and surgery and adjuvant chemotherapy in only one case. The majority of the patients presented local recurrence (39; 66%), in seven cases the recurrence was regional (11.9%) and in thirteen cases it was locorregional (22.1%). The clinical stage of the recurrences were initial (rCS I/II) in 15 patients (25.5%) and advanced (rCS III/IV) in 44 patients (74.5%). The surgical treatment of the recurrence was local ressection in 39 cases (66.1%), en bloc surgeries (local ressection and neck dissection) in thirteen cases (22%) and neck dissection alone in seven cases (11.9%). Wide parotidectomy with temporal bone ressection was performed in five cases. The overall rate of surgical complications was 32.2%. The most frequent complication was wound infection. There was no post-operative deaths. There was a new recurrence in 61% of the patients, and the majority were distant metastases (16 cases; 27%). The lung was the most frequent involved site. In ten cases (17%) the recurrence was local, in five cases it was locorregional (8.5%). The actuarial overall survival were 61.3% in 5 years and 42% in ten years and in five cases it was regional (8.5%). Gender, histopathology, site of the primary tumor, facial nerve preservation (parotid tumors), were not associated with overall survival. In the univariate analysis, only age older than 60 years was associate with a poor prognosis. This study shows that the prognosis of patients with recurrent salivary gland carcinoma treated to salvage surgery is acceptable. The rates of surgical complications are local and there was no post-operative mortality in this series.

Carcinomas de glândulas salivares são raros e seu tratamento de escolha é cirúrgico, seguido ou não de radioterapia. Até 50% dos casos apresentam recorrências neoplásicas e a maioria delas é local. O único tratamento de resgate com potencial curativo é o cirúrgico. No entanto, poucos estudos abordam o tema. O objetivo deste estudo é avaliar a ocorrência de complicações cirúrgicas e os fatores prognósticos clínicos e anatomopatológicos em pacientes portadores de carcinoma de glândulas salivares recidivado, submetidos à cirurgia de resgate. Foram avaliados 59 pacientes que preenchiam os critérios de elegibilidade do estudo: diagnóstico comprovado da recidiva de carcinoma de glândulas salivares e cirurgia de resgate realizada com intenção curativa. Trinta e 5 pacientes desta série (59,3%) foram tratados previamente em outra instituição. A cirurgia de resgate de todos os pacientes foi realizada no Hospital A. C. Camargo, em São Paulo, entre os anos de 1957 a 2000. O local do tumor primário foi parótida em 34 casos (57,6%); cavidade oral, em 13 (22,1%) e glândula submandibular, em 12 (20,3%). O tipo histológico mais freqüente foi o carcinoma adenocístico em 23 casos (39%), seguido pelo carcinoma mucoepidermóide, em 14 (23,7%). O tratamento prévio foi somente cirurgia em 47 casos, cirurgia e radioterapia adjuvante em 11 casos e cirurgia e quimioterapia em apenas um caso. A maioria dos pacientes apresentou recorrência local (39; 66%), em sete casos a recorrência foi regional (11,9%) e em treze foi locorregional (22,1%). O estádio clínico da recorrência foi inicial (rEC I e II) em 15 casos (25,5%) e avançado (rEC III e IV), em 44 (74,5%). O tratamento cirúrgico da recorrência foi ressecção local em 39 casos (66,1%), esvaziamento cervical isolado em 7 (11,9%) e cirurgias em monobloco (ressecção local associada a esvaziamento cervical) em 13 casos (22%). Em 5 pacientes foi realizada parotidectomia ampliada com temporalectomia. A taxa global de complicações cirúrgicas foi de 32,2%. A complicação mais comum foi a infecção da ferida operatória. Não houve mortalidade pós-operatória. Houve nova recorrência em 36 pacientes (61%). A recorrência mais freqüente foi a distância, em 16 casos (27%), sendo o pulmão o sítio mais acometido. Em 10 casos (17%) houve falha no controle local; em 5 (8,5%), falha locorregional e em 5, falha regional (8,5%). A sobrevida atuarial global, após a cirurgia de resgate, foi de 61,3% em 5 anos e 42% em 10 anos. O sexo, o tipo histológico, a topografia, o estadiamento clínico e a conservação do nervo facial (tumores parotídeos) não apresentaram associação com a sobrevida global. Em análise univariada a idade maior que 60 anos foi associada a pior prognóstico. Este estudo demonstra que o prognóstico de pacientes com carcinomas de glândulas salivares recidivados, selecionados para serem submetidos à cirurgia de resgate é aceitável. As taxas de complicações cirúrgicas foram geralmente locais e não houve mortalidade pós-operatória nesta série. / Salivary gland carcinomas are rare and the main treatment option is surgery with or without postoperative radiotherapy. Almost half of the cases present recurrences of tumors and the majority are local. The only potentially curative treatment for recurrent tumors is salvage surgery. However, few papers were published on this subject. The aim of this study is evaluate the surgical complications and clinical and pathologic prognostic factors in patients with recurrent salivary gland carcinoma submitted to salvage surgery. We reviewed the medical charts of 59 patients that fulfilled the eligibility critera of the study: proven diagnosis of locorregionally recurrent salivary gland carcinoma and surgery with curative intention. Thirty five patients (59,3%) had been previously treated at another institution. The salvage surgery in all the patients was performed at the A. C. Camargo Hospital in São Paulo, Brazil from 1957 to 2000. The site of the primary tumor was the parotid in 34 cases, the oral cavity in 13 and submandibular gland in 12 cases. The most frequent histopathologic type was adenoid cystic carcinoma (23 cases; 39%) and mucoepidermoid carcinoma (14 cases ;23.7%). The prior treatment was surgery alone in 47 cases, surgery with adjuvant radiotherapy in 11 cases and surgery and adjuvant chemotherapy in only one case. The majority of the patients presented local recurrence (39; 66%), in seven cases the recurrence was regional (11.9%) and in thirteen cases it was locorregional (22.1%). The clinical stage of the recurrences were initial (rCS I/II) in 15 patients (25.5%) and advanced (rCS III/IV) in 44 patients (74.5%). The surgical treatment of the recurrence was local ressection in 39 cases (66.1%), en bloc surgeries (local ressection and neck dissection) in thirteen cases (22%) and neck dissection alone in seven cases (11.9%). Wide parotidectomy with temporal bone ressection was performed in five cases. The overall rate of surgical complications was 32.2%. The most frequent complication was wound infection. There was no post-operative deaths. There was a new recurrence in 61% of the patients, and the majority were distant metastases (16 cases; 27%). The lung was the most frequent involved site. In ten cases (17%) the recurrence was local, in five cases it was locorregional (8.5%). The actuarial overall survival were 61.3% in 5 years and 42% in ten years and in five cases it was regional (8.5%). Gender, histopathology, site of the primary tumor, facial nerve preservation (parotid tumors), were not associated with overall survival. In the univariate analysis, only age older than 60 years was associate with a poor prognosis. This study shows that the prognosis of patients with recurrent salivary gland carcinoma treated to salvage surgery is acceptable. The rates of surgical complications are local and there was no post-operative mortality in this series.

A proteína Akt modula a função de numerosos substratos envolvidos na regulação da sobrevivência celular, progressão do ciclo celular e crescimento celular. Estudos prévios realizados em nosso laboratório demonstraram a superexpressão de Akt em adenoma pleomórfico, mioepitelioma e carcinoma adenóide cístico. O objetivo deste estudo foi analisar a via da proteína Akt através da avaliação da expressão das proteínas NFkB e PTEN em neoplasias benignas e malignas de glândulas salivares através das técnicas de imunohistoquímica, western blotting e imunofluorescência, e a possível interação protéica direta entre p-Akt/Mdm2 e p-Akt/PTEN em linhagem de carcinoma adenóide cístico. A superexpressão nuclear na proteína PTEN foi encontrada nas duas neoplasias malignas estudadas. Além disso, não foi observada interação direta entre as proteínas p-Akt/Mdm2 e p-Akt/PTEN, as quais apresentam localização nuclear em neoplasias de glândulas salivares. / The Akt protein modulates the function of numerous substrates involved in the regulation of cell survival, cell cycle progression and cell growth. Previous studies from our laboratories showed overexpression of Akt and Mdm2 followed by the lack of p53 expression in pleomorphic adenoma, myoepithelioma and adenoid cystic carcinoma. The aim of this study was to analyze the Akt pathway through evaluation of expression of NFkB and PTEN proteins in pleomorphic adenoma, carcinoma ex pleomophic adenoma and adenoid cystic carcinoma by western blotting, immunofluorescence and immunohistochemical techniques, and we have intended to analyse a possible direct interaction between p-Akt/Mdm2 and p-Akt/ PTEN protein in salivary gland tumours. Overexpression of nuclear PTEN was present in both carcinomas studied. In addition, there was no direct interaction between p-Akt/Mdm2 and p-Akt/ PTEN protein, which presents a nuclear localization in salivary gland tumours.

A proteína Akt modula a função de numerosos substratos envolvidos na regulação da sobrevivência celular, progressão do ciclo celular e crescimento celular. Estudos prévios realizados em nosso laboratório demonstraram a superexpressão de Akt em adenoma pleomórfico, mioepitelioma e carcinoma adenóide cístico. O objetivo deste estudo foi analisar a via da proteína Akt através da avaliação da expressão das proteínas NFkB e PTEN em neoplasias benignas e malignas de glândulas salivares através das técnicas de imunohistoquímica, western blotting e imunofluorescência, e a possível interação protéica direta entre p-Akt/Mdm2 e p-Akt/PTEN em linhagem de carcinoma adenóide cístico. A superexpressão nuclear na proteína PTEN foi encontrada nas duas neoplasias malignas estudadas. Além disso, não foi observada interação direta entre as proteínas p-Akt/Mdm2 e p-Akt/PTEN, as quais apresentam localização nuclear em neoplasias de glândulas salivares. / The Akt protein modulates the function of numerous substrates involved in the regulation of cell survival, cell cycle progression and cell growth. Previous studies from our laboratories showed overexpression of Akt and Mdm2 followed by the lack of p53 expression in pleomorphic adenoma, myoepithelioma and adenoid cystic carcinoma. The aim of this study was to analyze the Akt pathway through evaluation of expression of NFkB and PTEN proteins in pleomorphic adenoma, carcinoma ex pleomophic adenoma and adenoid cystic carcinoma by western blotting, immunofluorescence and immunohistochemical techniques, and we have intended to analyse a possible direct interaction between p-Akt/Mdm2 and p-Akt/ PTEN protein in salivary gland tumours. Overexpression of nuclear PTEN was present in both carcinomas studied. In addition, there was no direct interaction between p-Akt/Mdm2 and p-Akt/ PTEN protein, which presents a nuclear localization in salivary gland tumours.

Orientador: Albina Messias de Almeida Milani Altemani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T21:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mello_MarcosFernandoSantos_M.pdf: 647246 bytes, checksum: 43815d880ab846eae0d6898832f1bc41 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Metástase em linfonodo é um importante indicador prognóstico em cânceres de cabeça e pescoço, incluindo carcinomas salivares. Nestes, o risco de metástases em linfonodos é variável e fortemente associado com o tipo histológico do tumor. O objetivo do presente estudo foi avaliar a densidade vascular linfática (DVL) e a expressão dos fatores de crescimento linfangiogênicos das células tumorais em diferentes tipos de carcinomas salivares subdivididos de acordo com o risco para metástases em linfonodos. Em 15 tumores de alto risco (indiferenciado, mucoepidermóide de alto grau e carcinomas de ducto salivar) e 60 de baixo/moderado risco (adenóide cístico, mucoepidermoide de grau baixo/intermediário, célula acinar, mioepitelial, carcinoma mioepitelial-epitelial e carcinoma polimórfico de baixo grau) foram examinadas as expressões do fator de crescimento do endotélio vascular-C (VEGF-C), fator de crescimento do hepatócito (HGF) e D2-40 (para avaliação da LVD). Nenhuma diferença significativa foi encontrada entre carcinomas de alto e baixo/moderado risco, em relação a DVL e a expressão de VEGF-C ou HGF. Além disso, a expressão destas proteínas não teve correlação com a DLV. Invasão vascular linfática foi encontrada principalmente em carcinomas de alto risco. A DLV intratumoral foi significativamente mais baixa do que a peritumoral, independentemente do risco para metástases e do sítio primário da lesão. Em conclusão, os tipos histológicos dos carcinomas salivares que estão associados com alto risco para metástase em linfonodos não apresentam aumento da DVL ou expressão do VEGF-C e HGF. A maior tendência para metástases nestes carcinomas parece estar relacionada com a sua capacidade para invadir os vasos linfáticos. Estudos adicionais sobre a interação das células tumorais com as células endoteliais são necessários para aumentar a nossa compreensão sobre o potencial metastático dos carcinomas salivares / Abstract: Nodal metastasis is an important prognostic indicator in head and neck cancers, including salivary carcinomas. In these, the risk for lymph node metastasis is variable and strongly associated with the tumor histologic type. The aim of the current study was to evaluate the lymphatic vessel density (LVD) and expressions of lymphangiogenic growth factors by tumor cells in different histologic types of salivary carcinomas subdivided according to the risk for nodal metastasis. In 15 high-risk (undifferentiated, high-grade mucoepidermoid and salivary duct carcinomas) and 60 low/moderate-risk tumors (adenoid cystic, low/intermediate-grade mucoepidermoid, acinic cell, myoepithelial, epithelial-myoepithelial and polymorphic low-grade carcinomas) the expressions of vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C), hepatocyte growth factor (HGF) and D2-40 (for assessing LVD) were examined. No significant differences were encountered between high and low/moderate/-risk carcinomas regarding LVD and VEGF-C or HGF expressions. Furthermore, the expression of these proteins did not correlate with LVD. Lymphatic vascular invasion was mainly found in high-risk carcinomas. Intratumoral LVD was significantly lower than peritumoral, regardless of the risk for metastasis and primary site of the lesion. The histologic types of salivary carcinomas which are associated with high-risk for nodal metastasis do not present increased LVD or VEGF-C and HGF expressions. The greater tendency for metastasis in these carcinomas seems to be related to their capacity to invade lymph vessels. Further studies on tumor cell interactions with lymphatic endothelial cells are needed to improve our understanding of the metastatic potential of salivary carcinomas / Mestrado / Anatomia Patologica / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Albina Messias de Almeida Milani Altemani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T00:26:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_CatarinadeOliveira_D.pdf: 1050550 bytes, checksum: fc3ca7c67f2a52e8450896158a67f0d6 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: CD10 e Podoplanina (D2-40), além de expressos nas células mioepiteliais, estão envolvidos na progressão tumoral e podem ser utilizados como marcadores prognósticos. Em 79 neoplasias salivares com diferenciação mioepitelial (44 malignas e 35 benignas), analisamos a expressão dessas proteínas nas células neoplásicas, na reação desmoplásica tumoral e, nos carcinomas adenóides císticos (CAC), verificamos possível correlação com fatores prognósticos. CD10 foi negativo nas células epiteliais em 100% dos casos. Nas mioepiteliais, foi positivo em 25,71% das lesões benignas e em 27,27% das malignas, sendo esses resultados significantemente inferiores àqueles da a-SMA (60% e 88,64%, respectivamente). CD10 foi positivo em 83,33%, 30%, 27,7% e 40% dos carcinomas epiteliais-mioepiteliais (CEME), adenomas pleomórficos, mioepiteliomas e carcinomas mioepiteliais, respectivamente, e negativo em 100% dos CAC, adenocarcinomas polimórficos de baixo grau (APBG) e adenomas de células basais. No estroma tumoral, a expressão do CD10 (38,64%) foi significantemente maior (p=0.007) que a da a-SMA (11,36%). Entretanto, a expressão do CD10 não apresentou correlação com os fatores prognósticos do CAC. O D2-40 foi negativo, nas células epiteliais e estromais, e positivo nas mioepiteliais em 59% dos carcinomas e em 42,86% das lesões benignas. Concluímos que, ao contrário do D2-40, o CD10 tem pouca utilidade para identificar células mioepiteliais malignas, exceto no CEME onde pode ser útil no diagnóstico diferencial com a variante tubular do CAC. Sua expressão estromal ocorre em células de fenótipo distinto dos miofibroblastos, está associada com invasão tumoral e não se correlaciona com fatores prognósticos do CAC. / AbstrAct: CD10 and Podoplanin (D2-40) are expressed in myoepithelial cells and, in addition, are involved in tumoral progression and can be utilized as prognostic markers. In a series of 79 salivary neoplasias with myoepithelial differentiation (44 malignant and 35 benign), the expression of these proteins was analyzed in tumor cells as well as in tumor-associated stromal cells and it was correlated with prognostic factors in a select group of lesions (adenoid cystic carcinomas). In epithelial cells, CD10 was negative in 100% of the cases. In myoepithelial cells, CD10 was positive in 25.71% of the benign neoplasias and in 27.27% of the malignant ones and this expressions was significantly lower in comparison to that of a-smooth muscle actin (a-SMA) (60% and 88.64%, respectively). In neoplasias classified according to histological subtype, CD10 was positive in 83.33%, 30%, 27.27% and 40% of epithelial-myoepithelial carcinomas (EMC), pleomorphic adenomas, myoepitheliomas and myoepithelial carcinomas, respectively and negative in 100% of adenoid cystic carcinomas (ACC), polymorphic low-grade adenocarcinomas (PLGA) and basal adenomas. In tumor-associated stromal cells, CD10 expression was significantly higher (p=0.007) than that of a-SMA (38.64% versus 11.36%). However, no correlation was detected between CD10 expression and prognostic factors in ACC. D2-40 was negative in epithelial cells and in tumorassociated stromal cells as well and positive in myoepithelial cells of carcinomas (59%) and benign lesions (42.86%). This reactivity in myoepithelial cells did not differ significantly of that using a-SMA as a marker, except for PLGA where D2-40 was negative. In conclusion, CD10 differs of D2-40 once it shows low utility to detect neoplastic myoepithelial cells. However, EMC is an exception and in this tumor, CD10 could be useful to separate this lesion from tubular variant of ACC. In the tumor-associated stroma, CD10 expression in non-myofibroblast cells seems to be associated with tumor invasion but it does not show correlation with prognostic factors in ACC. / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Orientadores: Albina Messias De Almeida Milani Altemani, Elizabeth Ferreira Martinez / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T03:06:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Montalli_VictorAngeloMartins_D.pdf: 4723030 bytes, checksum: 1764455ec3666d02c7e74ee7c326caed (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: As lesões salivares tumorais compostas por dupla população celular (epitelial e mioepitelial) são consideradas originárias do ducto intercalado e estas lesões são subdivididas em diversas entidades que apresentam sobreposição morfológica, com delimitações entre elas nem sempre nítidas. Entre as neoplasias benignas estão o adenoma pleomórfico (AP) e o adenoma de células basais (ACB). Recentemente foi descrita uma nova entidade tumoral benigna, com composição epitelial e mioepitelial, denominada de lesão do ducto intercalado (LDI). Diante disso, o nosso primeiro objetivo foi analisar os perfis morfológicos e imuno-histoquímicos de LDIs e ACBs classificados em tubulares (ACB-T) e não tubulares (ACB-NT) para verificar se as LDIs e ACB-Ts representam entidades distintas. Ainda, dado o papel crítico da célula mioepitelial na morfogênese das lesões tumorais salivares histogeneticamente relacionadas ao ducto intercalado, nosso segundo objetivo foi avaliar in vitro a influência de fatores do microambiente tumoral (proteínas da matriz extracelular e fatores de crescimento) sobre a morfologia, viabilidade e proliferação de células mioepiteliais advindas de AP. Para a análise morfológica e imuno-histoquímica, foram estudados oito casos de LDIs, nove ACBs-T e 19 ACBs-NT. Todos os ACB-T continham áreas LDI-like, enquanto nos ACB-NT estas eram raras e escassas. As células luminais das LDIs e ACBs-T exibiram positividade para CK7, lisozima, S100 e DOG1. No grupo ACB-NT, poucas células luminais mostraram tal expressão, sendo principalmente positivas para CK14. As células mioepiteliais das LDIs, ACB-T e ACB-NT foram positivas para CK14, calponina, AML e p63, mas essas eram mais numerosas nos ACBs. No estudo in vitro, a morfologia e diferenciação das células mioepiteliais foram avaliadas qualitativamente por imunofluorescência indireta (expressão da vimentina e AML, respectivamente). As células mioepiteliais exibiram morfologia poliédrica em todas as matrizes, independentemente da suplementação do fator de crescimento. AML foi imunoexpressa de forma heterogênea nas células mioepiteliais, porém houve aumento da expressão desta proteína quando acrescentado o TGF- ?1, independentemente do tipo de matriz usada. TGF- ?1 também aumentou significantemente a viabilidade das células mioepiteliais cultivadas na matriz fibronectina. Conclusões: as LDI, ACB-T e ACB-NT formam um continuum de lesões onde as LDIs estão estreitamente relacionadas com o ACB-T, visto que em ambos o imunofenótipo das células luminais e mioepiteliais é semelhante àquele observado nos ductos intercalados. A principal diferença entre LDI e ACB-T é a quantidade de células mioepiteliais, que é maior no último. Além disso, nossos resultados indicam que pelo menos alguns ACBs podem surgir via LDI. Os estudos em cultura de células sugerem que as diferentes matrizes celulares não influenciam a morfologia e diferenciação da célula mioepitelial. Dentre os fatores de crescimento estudados apenas TGF- ?1 associou-se com aumento da expressão de AML (diferenciação celular) e aumentou significantemente a viabilidade celular associado à matriz fibronectina / Abstract: Salivary tumor lesions composed of dual cell population (epithelial and myoepithelial) are considered to originate from the intercalated duct. These lesions are subdivided into several entities that share morphological features. Among the benign tumors are pleomorphic adenomas (PA) and basal cell adenoma (BCA). Recently, a new entity was described that is a benign tumor with epithelial and myoepithelial composition, called intercalated duct lesion (IDL). Our first objective was to analyze the morphological and immunohistochemical profiles of IDLs and BCAs classified into tubular (T-BCA) and non-tubular subtypes (NT-BCA), to determine whether or not IDL and tubular BCA represent distinct entities. Also, given the critical role of myoepithelial cells in the morphogenesis of the salivary tumor lesions histogenetically related to the intercalated duct, our second objective was to evaluate in vitro the influence of tumor microenvironment factors (extracellular matrix proteins and growth factors) on the morphology, viability and proliferation of myoepithelial cells arisen from PA . Eight IDLs, nine tubular BCAs and 19 non-tubular BCAs were studied by immunohistochemical technique. All tubular BCAs contained IDL-like areas, which represented 20-70% of the tumor. In non-tubular BCA, IDL-like areas were occasional and small (<5%). One patient presented IDLs, tubular BCAs and IDL/tubular BCA combined lesions. Luminal ductal cells of IDLs and tubular BCAs exhibited positivity for CK7, lysozyme, S100 and DOG1. In the non-tubular BCA group, few luminal cells exhibited such immunoprofile; they were mainly CK14-positive. Basal/myoepithelial cells of IDLs, tubular BCAs and non-tubular BCAs were positive for CK14, calponin, ?-SMA and p63; they were more numerous in BCA lesions. The in vitro study analyzed morphology and differentiation of myoepithelial cells by vimentin and SMA expressions, respectively, which were qualitatively assessed using indirect immunofluorescence. Myoepithelial cells showed polyhedral morphology in all extra cellular matrixes regardless of the supplementation of growth factors. These cells expressed SMA heterogeneously but when TGF- ?1 was added such expression increased. This modification did not show relationship with the type of extracellular matix. The viability of myoepithelial cells cultured on fibronectin matrix increased significantly with addition of TGF - ?1. Conclusions: IDL, tubular BCA and non-tubular BCA form a continuum of lesions in which IDLs are related closely to tubular BCA. In both, the immunoprofile of luminal and myoepithelial cells recapitulates the normal intercalated duct. The difference between the adenoma-like subset of IDLs and tubular BCA rests mainly on the larger numbers of myoepithelial cells in the latter. Our findings indicate that at least some BCAs can arise via IDLs. The cell culture studies suggest that the different matrixes do not influence the morphology and differentiation of myoepithelial cells. Among the growth factors studied, only TGF - ?1 was associated with an increased expression of SMA (cell differentiation) and a significant increase of the cellular viability associated with the fibronectin matrix / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Pablo Agustin Vargas / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T11:33:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fonseca_FelipePaiva_D.pdf: 1634857 bytes, checksum: 43da6be9627bec5197103495826aa6d6 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Tumores de glândulas salivares correspondem a aproximadamente 3% de todas as neoplasias de cabeça e pescoço e as neoplasias malignas derivadas destas estruturas anatômicas ainda representam um grande desafio para a oncologia de cabeça e pescoço devido a sua difícil abordagem cirúrgica e pobre resposta às outras abordagens terapêuticas. Um melhor entendimento do seu perfil molecular contribuiria significativamente para um melhor manejo terapêutico futuro e o estudo do potencial angiogênico dos tumores de glândulas salivares representa um interessante alvo de investigação. Tem sido demonstrado que as semaforinas induzem a apoptose de células tumorais, modulam a migração celular neoplásica e inibem a angiogênese em diferentes neoplasias humanas, competindo com o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) pela ligação aos seus principais receptores, as neuropilinas-1 e -2, desta forma inibindo os efeitos mitogênicos e pró-angiogênicos de VEGF. Assim, o objetivo deste estudo é investigar a expressão das semaforinas de classe 3 A e B (Sema3A e Sema3B), e dos seus receptores neuropilinas-1 e -2 (Np-1 e Np-2) em tumores de glândulas salivares, determinando seus significados clínicos. Duzentos e quarenta e oito tumores benignos e malignos de glândulas salivares selecionados de quatro instituições brasileiras foram organizados em blocos de parafina em microarranjo tecidual em matriz e submetidos a reações de imunoistoquímica contra CD34, Sema3A, Sema3B, Np-1 e Np-2. As imunoreações foram quantificadas utilizando algoritmos digitais e os resultados foram correlacionados com parâmetros clinicopatológicos e índices de sobrevida. Tumores malignos apresentaram uma maior densidade vascular, porém uma menor área vascular do que sua contraparte benigna. Em glândulas salivares normais a expressão de Np-1 e -2 esteve restrita às células ductais, enquanto que Sema3A e Sema3B estiveram principalmente no componente acinar. Tumores benignos e malignos revelaram uma expressão similar de todos os marcadores e a co-expressão de Np-1/Np-2 correlacionou-se significativamente com a ocorrência de parestesias e estágios mais avançados dos tumores. Apesar de não ser estatisticamente significativa, a sobre-expressão simultânea de ambos os receptores também indicou uma menor taxa de sobrevida. Desta forma, Sema3A, Sema3B, Np-1 e Np-2 devem estar envolvidas no desenvolvimento das glândulas salivares normais e na patogênese das neoplasias benignas e malignas derivadas destas estruturas; entretanto, a expressão destas proteínas não apresentou um potencial prognóstico estatisticamente significativo no presente estudo / Abstract: Salivary gland tumors correspond to approximately 3% of all head and neck neoplasms and the malignant neoplasias derived from these anatomic structures still represent a major pitfall in head and neck oncology because of their difficult surgical approach and poor response to other therapies. A better understanding of their molecular basis would significantly aid to an improved future management and the study of salivary gland tumors angiogenic potential represents an interesting target of investigation. It has been shown that semaphorins induce tumor cell apoptosis, modulate tumor cell migration and inhibit angiogenesis in different human neoplasms, competing with vascular endothelial growth factor (VEGF) for biding to their main receptors, the neuropilins-1 and -2, thereby inhibiting mitogenic and pro-angiogenic effects of VEGF. Hence, the objective of this study is to investigate the expression of class 3 Semaphorins A and B, and their receptors neuropilins-1 and -2 in salivary gland tumors, determining their clinical significance. Two hundred and forty eight benign and malignant salivary gland tumors selected from four Brazilian institutions were organized in tissue microarray paraffin blocks and submitted to immunohistochemical reactions against CD34, Sema3A, Sema3B, Np-1 and Np-2. The immunoreactions were quantified using digital algorithms and the results were correlated with clinicopathological parameters and survival rates. Malignant tumors presented an increased vascular density but a lower vascular area than their benign counterparts. In normal salivary glands Np-1 and Np-2 expression was restricted to ductal cells, whereas Sema3A and Sema3B were positive mainly in serous acinar compartment. Benign and malignant tumors revealed a similar expression of all markers and the co-expression of Np-1/Np-2 significantly correlated with the occurrence of paresthesia and higher stages of the tumors. In addition, although not statistically significant, simultaneous overexpression of both receptors also indicated an inferior survival rate. Hence, these results suggest that Sema3A, Sema3B, Np-1 and Np-2 may be involved in the development of normal salivary glands and in the pathogenesis of benign and malignant neoplasms derived from these structures; however, the expression of these proteins did not present a statistically significant prognostic potential in the current study / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia