Orientadores: Francesco Langone, Staffan Cullheim / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T16:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AlexandreLeiteRodriguesde_D.pdf: 10644282 bytes, checksum: 1271a03a451e8d25e794f7df95d5c1fb (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A transecção de um nervo periférico em ratos recém nascidos leva à extensa morte dos neurônios axotomizados. Neste estudo, demonstramos que a transecção do nervo ciático em ratos neonatos induz a TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labelling) marcação de motoneurônios e de neurônios sensitivos dos gânglios dorsais, indicando que mecanismos apoptóticos estão envolvidos. Tais resultados foram comprovados pelas observações à microscopia eletrônica. Interessantemente, observamos também um grande aumento da TUNEL marcação nos interneurônios localizados nas lâminas mais profundas da coluna dorsal. Esta localização sugere que para a sobrevivência dos interneurônios, tanto a integridade das aferências sensitivas como dos motoneurônios, suas prováveis células alvo, é essencial. No intuito de melhor compreender a importância relativa da perda do alvo (motoneurônios) e da aferência (neurônios sensitivos) sobre a indução da apoptose em interneurônios, foram comparados os padrões temporais e espaciais do aparecimento das células apoptóticas na medula e nos gânglios espinhais após a transecção do nervo ciático em ratos recém nascidos (P2). Os padrões temporais da TUNEL marcação dos motoneurônios e interneurônios induzidos pela lesão foram semelhantes (pico entre 8-48 horas após a lesão), enquanto que a marcação dos neurônios sensitivos ocorreu mais tardiamente (24-72 horas). Por outro lado, sabe-se que a morte dos motoneurônios e neurônios sensitivos, resultante da axotomia, pode dever-se à ausência de fatores neurotróficos devido à perda do contato com as células alvo. Assim, estudamos também, os efeitos do tratamento do coto proximal do nervo lesado com CNTF e NGF, utilizados para impedir a morte dos motoneurônios e neurônios sensitivos respectivamente. Tanto o NGF quanto o CNTF promoveram uma diminuição na TlJNEL marcação dos interneurônios. Contudo, o CNTF resgatou preferencialmente interneurônios nas lâminas mais profundas das colunas dorsais e nas ventrais, enquanto que o NGF foi mais eficaz nas lâminas superficiais. Os resultados obtidos dão suporte à hipótese de que os interneurônios medulares, no neonato, são dependentes tanto do alvo quanto da aferência para sua sobrevivência / Abstract: Transection of a peripheral nerve in neonatal rats induces an extensive death of axotomized neurons. We demonstrate here that spinal motoneurons and sensory dorsal root ganglia neurons become TUNEL-labeled (tenninal deoxynuc1eotidyl transferase dUTP nick end labelling) afier sciatic nerve transection in neonatal rats, thus indicating that apoptotic mechanisms are involved in the death processo Interestingly, there is also a profound increase of TUNEL-labeled intemeurons in the deep dorsal hom. This location suggests that an intact afferent input andJor contact with target organs are essential for intemeuronal survival. Death of motoneurons and sensory neurons could be a result of the injury per se and/or the deprivation of neurotrophic substances, secondary to the loss of contact with target cells. In order to defrne the relative importance of the loss of a potential target (motoneuron) and a potential afferent input (dorsal root ganglion cell) for the induction of apoptosis in intemeurons in this situation, we have compared the distributions and time courses for TUNEL labeling in the L5 segment ofthe spinal cord and the L5 dorsal root ganglion afier sciatic nerve transection in the neonatal (P2) rat. ln additional experiments were studied the effects on TUNEL labeling of intemeurons afier treatment of the cut sciatic nerve with either ciliary neurotrophic factor (CNTF), in order to rescue motoneurons, or nerve growth factor (NGF) to rescue dorsal root ganglion cells. The time courses of the TUNEL labeling in motoneurons and intemeurons induced by the lesion show large similarities (peak at 8-48h postoperatively), while the labeling in dorsal root ganglion cells occurs later (24-72h). Both CNTF and NGF decrease the number of TUNEL labeled intemeurons, but there is a regional difference, in that CNTF preferentially saves intemeurons in deep dorsal and ventral parts of the spinal cord, while rescuing effects of NGF are mainly seen in the superficial dorsal hom. The results are interpreted as signs of a trophic dependence on both the target and the afferent input for the survival of intemeurons neonatally / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Sebastião Roberto Taboga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T21:09:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zittlau_MaraLuciaCostamillan_M.pdf: 5826934 bytes, checksum: 5c05058cbdb3d074a5066cf10019c30a (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Estudos experimentais indicam que os anestésicos locais são potencialmente neurotóxicos e a neurotoxicidade está diretamente relacionada com o poder anestésico da medicação. Entretanto poucas informações têm sido relatadas na literatura quanto aos aspectos histológicos dos nervos lesados. Assim, o objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito da injeção intrafascicular do anestésico local ropivacaína sobre os nervos ciáticos de coelhos albinos, enfocando principalmente o envolvimento das membranas conjuntivas envoltórias no processo em estudo. Foram considerados 3 grupos experimentais de coelhos albinos adultos: Grupo I: nervos ciáticos controles (dois animais - 4 nervos); Grupo 11: nervos ciáticos após a injeção intrafascicular de 0,2 mL de solução fisiológica no nervo esquerdo e após a injeção intrafascicular de 0,2 mL ropivacaína (Naropin - Astra) no nervo direito (nove animais - 18 nervos) com coleta dos espécimes após 48 horas da injeção; Grupo III: nervos ciáticos após a injeção intrafascicular de 0,2 mL de solução fisiológica no nervo esquerdo e após a injeção intrafascicular de 0,2 mL ropivacaína (Naropin - Astra) no nervo direito (nove animais - 1& nervos) com coleta dos espécimes após 7 dias da injeção. Os nervos depois de removidos foram processados para inclusão em historesina Leica e os cortes histológicos foram corados pela Hematoxilina-eosina, Azul de T oluidina ou Picrossírius-hematoxilina. Os resultados indicam que a ropivacaína promove um efeito tóxico transitório no nervo, sendo .que após 48 horas da injeção intrafascicular foram detectados focos de degeneração axonal e grandes infiltrados inflamatórios no endoneuro, perineuro e epineuro, com grandes quantidades de eosinófilos, polimorfonucleares e macrófagos. Após 7 dias da injeção intrafascicular do anestésico uma notável fibrose nas membranas epineurais e perineurais foi observada. Além disto um aumento significativo de lipoblastos e adipócitos na região perineural. A transitoriedade do processo neurotóxico pode ser demonstrada pelo fato de haver uma grande quantidade de nervos em regeneração aos 7 dias após a injeção intrafascicular / Abstract: Persistent neurologic sequelae after central or peripheral nerve blockade with local anesthetics are rare, but in some cases a significant impact on the quality of life of the patients who suffer from such sequelae may occur. Experimental studies indicate that alI local anesthetics are potentially neurotoxin and the neurotoxicity paraIlels their anesthetic potency. This study was undertaken to investigate the effects of ropivacaine (Naropin) after intrafascicular injection into the sciatic nerves of albino rabbits. Twenty adult albine rabbits were used, following sedation with intramuscular ketamine (50mg!Kg) for nerve exposure by lateral incision. We considered three experimental groups: Group 1: sciatic nerve control (two animals four sciatic nerves); Group 11: intrafascicular injection with 0.2 mL of physiologic saline solution in the left nerves and intrafascicular injection with 0.2 mL of local anesthetic Naropin - Astra (Ropivacaine) into the rigth nerves. The specimens were colected at 48 h after durgs administration (nine animals - 18 sciatic nerves); Group111: intrafascicular injection with 0.2 mL of physiologic saline solution in the left nerves and intrafascicular injection with 0.2 mL of local anesthetic Naropin ¿ Astra (Ropivacaine) in the rigth nerves. The specimens were colected at 7 days after drugs administration. (nine animals - 18 sciatic nerves) The sciatic nerves were removed from these animals and fixed in Karnowisky solution for 24 hours. After partial dehydration up to 95% ethanol, they were embedded in historesin (Leica). The tissue was then sectioned at l-211m. Sections were stained with haematoxylin-eosin (HE); toluidine blue (TB) or picrosirius-haematoxylin (pSH). Comparing with control group the histological evidence of inflamatory reaction (migration of macrophagic cells and eosinophils - appeared soon after injection, with intense proliferation of perineurial cells. The results show that after 7 days of intrafascicular injection there was a severe fibrosis and an increase on perineurial vascularization. In group 2 the inflamatory reaction was noted near the local of the injection. Furthermore in this experiment we observed an increase on the number of epineurial lipoblasts and adipocytes. This study demonstrated that the toxic effects of ropivacaine are transient. In many cases there was an initial fascicular recover and axonal regeneration after 7 days of the injection / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular

Orientador: Francisco Langone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T23:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AlexandreLeiteRodriguesde_M.pdf: 6072377 bytes, checksum: 2075ac4b8f4bc66fa04494ddc7adc7c0 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Atualmente é consenso que a regeneração do Sistema Nervoso Periférico pode ser determinada pelas propriedades regenerativas intrínsecas dos neurônios e/ou pelas características do microambiente do nervo, após uma lesão (Fawcett, 1992). Recentemente, Lu et aI. (1990,1994), estudando as características regenerativas de várias linhagens isogênicas, observaram que a linhagem C57BL/6J apresenta uma baixa capacidade regenerativa axonal após a lesão de um nervo periférico. Não há, porém, dados conclusivos sobre os motivos intrínsecos que promovem esta resposta. Este estudo teve como objetivo principal, dar subsídeos para um melhor entendimento da baixa capacidade regenerativa axonal apresentada pelos camundongos da linhagem C57BL/6J. Para isso, foram realizados quatro tipos de transplantes de segmentos de nervos pré-degenerados, utililizando-se camundongos isogênicos das linhagens C57BL/6J (C), BALB/cJ (B) e NJ (A), bem como seus descendentes FI advindos do cruzamento CxA e CxB. 1) isotransplantes utilizando os camundongos isogênicos das linhagens C (n=3), B (n=3) e A (n=3); 2) entre doadores da linhagem C (n=6) e receptores FI CxB (n=3) e FI CxA (n=3); 3) entre doadores da linhagem B (n=3) e receptores FI CxB (n=3) e 4) entre doadores da linhagem A (n=6) e receptores FI CxA (n=3). Após anestesia com pentobarbital (50mg/Kg), todos os doadores de cada linhagem (C, n=6; B, n=3; A, n=3) tiveram seu nervo ciático esquerdo transeccionado ao nível do terço médio da coxa, sendo o coto proximal implantado na musculatura adjacente com vistas a evitar-se qualquer processo regenerativo. Duas semanas após a transecção, os doadores foram reoperados, sendo o coto distal dissecado e um segmento de aproximadamente 7mm retirado para o subsequente transplante. Paralelamente, os receptores tiveram seu nervo ciático transeccionado ao nível do terço médio da coxa, sendo implantado em seu coto proximal, com auxílio de um tubo de polietileno (TP) de 3mm de comprimento (d.i.=0,76mm), o enxerto do animal doador. Quatro semanas após o transplante, os animais foram perfundidos transcardiacamente com solução fixadora (Kamovsky, paraformaldeído 2%, Glutaraldeído 1 %) e os nervos regenerados foram dissecados, seguindo a rotina para inclusão em resina (AraIdite). Foram obtidos cortes transversais do nervo presente na região distal do TP sendo contado o número total de axônios mielínicos regenerados (NAM). Cortes transversais ultra-finos da mesma região foram obtidos, sendo quatro campos de cada espécime fotografados ao microscópio eletrônico (X2000). Os negativos foram ampliados (X3), medindo-se então, com auxílio de uma mesa digitalizadora e "software" (SigmaScan Measurement_, o diâmetro dos axônios mielínicos (DA) e a espessura da bainha de mielina (EBM). Os resultados mostraram não haver diferenças significativas entre os parâmetros, nos grupos de isoenxerto: NAM (C=3136:1:287; B=2759:1:170; A=2835:1:239); DA e EBM. Curiosamente, os resultados dos alotransplantes mostraram uma maior resposta regenerativa axonal nos grupos onde os doadores eram C57BL/6J (C para Fi CxB=4658:1:304; C para Fi CxA=3899:1:198), quando comparada àquela apresentada pelo grupo onde os doadores eram B e os receptores FI CxB (2595:1:300) [p<0,05]. Foram porém estatisticamente iguais aos obtidos quando os doadores eram A e os receptores FI CxA (3933:1:565). Por outro lado, os valores da EBM não variaram er1tre os grupos tanto de iso quanto de aloenxertos. Porém, o DA mostrou-se estatisticamente superior nos grupos de aloenxerto onde os doadores eram C57BL/6J. A partir dos resultados obtidos, é possivel sugerir que provavelmente o ambiente extracelular, incluindo as células não neurais, não são os maiores responsáveis pela baixa capacidade regenerativa axonal apresentada pelos animais C57BL/6J. Tal deficiência portanto, pode ser fruto de uma incapacidade dos axônios em regeneração de reconhecerem os estímulos presentes no meio extracelular. Tal incapacidade pode estar relacionada a problemas na síntese e/ou expressão de fatores de alta afinidade para neurotrofinas, tais como trkA para NGF, após uma lesão / Abstract: After a peripheral nerve lesion, the axonal regeneration can be detennined by the intrinsic neuronal properties and by nerve microenvironrnent features (Fawcett, 1992). Recently, the C57BL/6I isogenic mice strain was observed to presenting a subnormal axonal regeneration (Lu et al., 1990; 1994). The aim ofthis study was to investigate the peripheral axonal regeneration in adult male mice (8 to 10 weeks old) using a predegenerated nerve transplantation model. The mice were ITom C57BL/6I (C), BALB/cJ (B) and AlI (A) isogenic strains and ITom FI descendents. FI was obtained by crossing male C57BL/6I with female BALB/cJ (CxB) and AlI (CxA). Only male mice were used as donors and receptors ofthe nerve graft. Four types oftransplants were performed: 1st) isotransplants of C (n=3), B (n=3) and A (N=3) strains; 2nd) between donors of C strain (N=6) and receptors of CxB (n=3) and CxA (n=3); 3rd) between donors of B strain (N=3) and receptors of CxB (n=3) and 4th)between donors of A strain (N=3) and receptors of CxA (n=3). Under deep anesthesia (Pentobarbital, 50 mgIKg, i.p.), alI donors of each strain (C, n=6; B, n=3; A, n=3) had the left sciatic nerve transected at the levei of obturator tendon and the proximal nerve stump was ligated to avoid nerve regeneration. Two weeks after transection, the donor was reoperated and a 7mm-Iength segment of the distal nerve stump was removed for transplantation. At the same time, receptors (FI CxA; FI CxB [allotransplants] and isogenic strains [isotransplants]) had the left sciatic nerve transected at the leveI ofthe obturator tendon. The nerve graft was attached to the receptor nerve proximal stump bya 3mm-Iong polyethylene tube (PT) (i.d.=0.76mm) leaving a lmm gap. Four weeks after transplantation, the animaIs were perfused transcardiacally with Kamovsky's solution (paraformaldehyde 2%, Glutaraldehyde 1%) and the regenerated nerves were embedded in epoxy resin (Araldite). Transverse semi-thin nerve sections were obtained at the distal end of the PT and the total number of regenerated myelinated axons (TMA) was counted. Transverse ultra-thin sections were obtained at the same level. Four fields of each specimen were photographed at the electron microscope (X2000). The negatives were enlarged (X3) and the diameter of myelinated axons (AD) and myelin thickness (M1) were measured on a digitalizing table using SigmaScan Measurement@ software. The results showed no significant differences between the evaluated parameters in the isograft groups: TMA (C=3136:i:287; B=2759:i:170; A=2835:i:239); AD and MT. Interestingly, the FI allograft results showed a higher TMA in the 2nd transplant type (C to FI CxB=4658:i:304; C to FI CxA=3899:i:198) than in 3rd transplant type (B to FI CxB=2595:i:300) [p<0,05], but it was similar to the 4th transplant type (A to FI CxA=3933:i:565). On the other hand, MT was not statistically different between the allograft groups, while AD was higher in the groups in wich C was donor. The main conclusion is that non-neural cells within the nerve of C57BL/6J strain probably are not the limiting factor for the myelinated axon regeneration. Also, these results support the hypothesis that C57BL/6J axons could not recognize in time the extracellular regenerating stimulus. This problem may be caused by a neuronal deficiency in the synthesis' and/or expression of neurotrophin high-affinity receptors, such as trkA for NGF, after injury / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Análise da expressão de neurotrofinas durante a regeneração de nervo periférico de rato por enxerto venoso Enxertos de veias têm sido empregados para preencher lacunas em nervos periféricos transeccionados para melhor recuperação funcional. No entanto, vários inconvenientes, como a constrição do enxerto secundário foram observados. Uma nova alternativa para esta técnica foi desenvolvida. Simplesmente invertendo a veia de dentro para fora, chamado do Inside- out vein graft. As neurotrofinas são uma família de fatores neurotróficos conhecidos por desempenhar um papel significativo na regeneração de nervos periféricos. A família da neurotrofina é constituído por fator de crescimento nervoso (NGF), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), Neurotrofina-3 (NT-3) e Neurotrofina-4 (NT-4). No campo da neurobiologia, vários autores têm utilizado a técnica de PCR a fim de obter mais informações sobre os nervos regenerados. Neste estudo, foi utilizada a técnica de biologia molecular para explorar o papel e o nível das neurotrofinas durante a regeneração de nervos periféricos com enxerto de veia. O nervo isquiático de ratos foi seccionado e reparado com enxerto de veia invertida (IOVG) e técnicas de enxerto de veia padrão (SVG). No grupo controle, os ratos foram operados e o nervo isquiático foi mantido intacto. Os animais foram sacrificados após 6 e 12 semanas e os enxertos foram colhidos para observar o nível das neurotrofinas. Músculos EDL e Sóleo foram excisados e pesados para determinar a diferença de peso entre os grupos. Um pequeno segmento dos cotos distais de ambos os grupos SVG e IOVG também foram excisados e foram processados histologicamente para examinar a quantidade de axónios regenerados. Além disso, um outro pequeno segmento do coto distal foi processado para RT-PCR para analisar o nível das neurotrofinas nesta área.A tecnica do walk track analysis foi realizada para determinar o índice funcional do nervo isquiático nos grupos. Em 6 semanas, não ocorreu crescimento neuronal significativo no coto distal dos dois tipos de enxertos, porém um crescimento foi observado em 12 semanas. Não houve diferença significativa na massa muscular entre IOVG e SVG em ambos os períodos de tempo. No entanto, um aumento significativo na massa muscular foi observado a partir de 6 a 12 semanas nos grupos IOVG e SVG. Um aumento significativo na produção de NT-3 foi observado no grupo de SVG em ambos, enxerto e o coto distal quando comparados a partir de 6 a 12 semanas, no entanto, não houve aumento observado no nível de neurotrofinas dos outros tipos (NGF e NT-4) . Surpreendentemente, não houve aumento significativo da NT-3 no grupo IOVG. Conclui-se que, entre as neurotrofinas avaliadas neste estudo, não há nenhuma diferença significativa no seu nível de RNAm entre os dois grupos, exceto NT-3. Finalmente, uma vez que o nível de RNAm de NT-3 aumenta significativamente entre 6 e 12 semanas no grupo SVG e não no IOVG, observado por estas duas técnicas de nível molecular, estudos adicionais necessitam serem feitos para decifrar o mecanismo exato. / Vein grafts have been employed to bridge the gap in transected peripheral nerves to produce better functional recovery. However several disadvantages such as secondary graft constriction were observed and a new alternative to this technique was developed by simply reversing the vein inside out. Both inside out and standard vein grafts were successfully used in recovering the sensory segmental defect in humans. Neurotrophins are a family of eurotrophic factors known to play an important role in the regeneration of peripheral nerves. The neurotrophin family consists of Nerve Growth Factor (NGF), Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF), Neurotrophin-3 (NT-3) and Neurotropinh-4 (NT-4). In the neurobiology field, several authors have been using PCR technique in order to gain more information regarding regenerated nerves. In this study, we employed this molecular biology technique to explore the role and level of the neurotrophins during the peripheral nerve regeneration with vein graft. The sciatic nerve of rats were sectioned and repaired with Inside out vein graft (IOVG) and standard vein graft techniques (SVG). In the control group the rats were sham operated wherein the sciatic nerve was kept intact. The animals were euthanized at 6 and 12 weeks and the grafts were harvested to observe the level the neurotrophins. EDL and Sol muscles were excised and measured to determine any weight difference between the groups. A small segment of the distal stumps from both the SVG and IOVG groups were also excised and were subjected to histological process to examine the amount of regenerated axon. In addition, another small segment of the distal stump was processed for RT-PCR to further examine the level of the neurotrophins in this area. At 6 weeks, no significant neuronal growth was observed in the distal stump of both graft types but a distinct growth was seen at 12 weeks. Walk track analysis showed poor motor function recovery in the experimental groups during both time intervals. Morphometric analysis demonstrated no significant differences in the amount of myelination between both the groups. There was no significant difference in the muscle mass between IOVG and SVG in both time periods. However, a significant increase in both the muscle mass was observed from 6 to 12 weeks in the IOVG and SVG groups. A significant increase in the production of NT-3 was observed in SVG group in both the distal stump and graft segment when compared from 6 to 12 weeks; however there was no observed increase in the level of other neurotrophins (NGF and NT-4). Surprisingly, no significant increase of NT-3 was noticed in the IOVG group. We conclude that amongst the neurotrophins evaluated in this study, there is no significant difference in their mRNA level between both groups except NT-3. Also, since mRNA level of NT-3 increases significantly between 6 and 12 weeks in SVG and not in IOVG, it suggests that the mechanism by which these two techniques operate at a molecular level may differ and further studies need to be done to decipher the exact mechanism.

Análise da expressão de neurotrofinas durante a regeneração de nervo periférico de rato por enxerto venoso Enxertos de veias têm sido empregados para preencher lacunas em nervos periféricos transeccionados para melhor recuperação funcional. No entanto, vários inconvenientes, como a constrição do enxerto secundário foram observados. Uma nova alternativa para esta técnica foi desenvolvida. Simplesmente invertendo a veia de dentro para fora, chamado do Inside- out vein graft. As neurotrofinas são uma família de fatores neurotróficos conhecidos por desempenhar um papel significativo na regeneração de nervos periféricos. A família da neurotrofina é constituído por fator de crescimento nervoso (NGF), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), Neurotrofina-3 (NT-3) e Neurotrofina-4 (NT-4). No campo da neurobiologia, vários autores têm utilizado a técnica de PCR a fim de obter mais informações sobre os nervos regenerados. Neste estudo, foi utilizada a técnica de biologia molecular para explorar o papel e o nível das neurotrofinas durante a regeneração de nervos periféricos com enxerto de veia. O nervo isquiático de ratos foi seccionado e reparado com enxerto de veia invertida (IOVG) e técnicas de enxerto de veia padrão (SVG). No grupo controle, os ratos foram operados e o nervo isquiático foi mantido intacto. Os animais foram sacrificados após 6 e 12 semanas e os enxertos foram colhidos para observar o nível das neurotrofinas. Músculos EDL e Sóleo foram excisados e pesados para determinar a diferença de peso entre os grupos. Um pequeno segmento dos cotos distais de ambos os grupos SVG e IOVG também foram excisados e foram processados histologicamente para examinar a quantidade de axónios regenerados. Além disso, um outro pequeno segmento do coto distal foi processado para RT-PCR para analisar o nível das neurotrofinas nesta área.A tecnica do walk track analysis foi realizada para determinar o índice funcional do nervo isquiático nos grupos. Em 6 semanas, não ocorreu crescimento neuronal significativo no coto distal dos dois tipos de enxertos, porém um crescimento foi observado em 12 semanas. Não houve diferença significativa na massa muscular entre IOVG e SVG em ambos os períodos de tempo. No entanto, um aumento significativo na massa muscular foi observado a partir de 6 a 12 semanas nos grupos IOVG e SVG. Um aumento significativo na produção de NT-3 foi observado no grupo de SVG em ambos, enxerto e o coto distal quando comparados a partir de 6 a 12 semanas, no entanto, não houve aumento observado no nível de neurotrofinas dos outros tipos (NGF e NT-4) . Surpreendentemente, não houve aumento significativo da NT-3 no grupo IOVG. Conclui-se que, entre as neurotrofinas avaliadas neste estudo, não há nenhuma diferença significativa no seu nível de RNAm entre os dois grupos, exceto NT-3. Finalmente, uma vez que o nível de RNAm de NT-3 aumenta significativamente entre 6 e 12 semanas no grupo SVG e não no IOVG, observado por estas duas técnicas de nível molecular, estudos adicionais necessitam serem feitos para decifrar o mecanismo exato. / Vein grafts have been employed to bridge the gap in transected peripheral nerves to produce better functional recovery. However several disadvantages such as secondary graft constriction were observed and a new alternative to this technique was developed by simply reversing the vein inside out. Both inside out and standard vein grafts were successfully used in recovering the sensory segmental defect in humans. Neurotrophins are a family of eurotrophic factors known to play an important role in the regeneration of peripheral nerves. The neurotrophin family consists of Nerve Growth Factor (NGF), Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF), Neurotrophin-3 (NT-3) and Neurotropinh-4 (NT-4). In the neurobiology field, several authors have been using PCR technique in order to gain more information regarding regenerated nerves. In this study, we employed this molecular biology technique to explore the role and level of the neurotrophins during the peripheral nerve regeneration with vein graft. The sciatic nerve of rats were sectioned and repaired with Inside out vein graft (IOVG) and standard vein graft techniques (SVG). In the control group the rats were sham operated wherein the sciatic nerve was kept intact. The animals were euthanized at 6 and 12 weeks and the grafts were harvested to observe the level the neurotrophins. EDL and Sol muscles were excised and measured to determine any weight difference between the groups. A small segment of the distal stumps from both the SVG and IOVG groups were also excised and were subjected to histological process to examine the amount of regenerated axon. In addition, another small segment of the distal stump was processed for RT-PCR to further examine the level of the neurotrophins in this area. At 6 weeks, no significant neuronal growth was observed in the distal stump of both graft types but a distinct growth was seen at 12 weeks. Walk track analysis showed poor motor function recovery in the experimental groups during both time intervals. Morphometric analysis demonstrated no significant differences in the amount of myelination between both the groups. There was no significant difference in the muscle mass between IOVG and SVG in both time periods. However, a significant increase in both the muscle mass was observed from 6 to 12 weeks in the IOVG and SVG groups. A significant increase in the production of NT-3 was observed in SVG group in both the distal stump and graft segment when compared from 6 to 12 weeks; however there was no observed increase in the level of other neurotrophins (NGF and NT-4). Surprisingly, no significant increase of NT-3 was noticed in the IOVG group. We conclude that amongst the neurotrophins evaluated in this study, there is no significant difference in their mRNA level between both groups except NT-3. Also, since mRNA level of NT-3 increases significantly between 6 and 12 weeks in SVG and not in IOVG, it suggests that the mechanism by which these two techniques operate at a molecular level may differ and further studies need to be done to decipher the exact mechanism.

Orientador: Fábio Rogério / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T07:22:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_CarlosViniciusAlmeidade_M.pdf: 1210366 bytes, checksum: f2d46d6b8c16b1647290224d152e20d8 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A busca por estratégias para o tratamento de doenças neurodegenerativas e neurotraumas tem sido realizada mediante o emprego de moléculas que possam atuar impedindo a morte de células nervosas e/ou estimulando a regeneração axonal e dendrítica. Dentre elas se encontram os fatores neurotróficos e, em especial, o fator neurotrófico ciliar (CNTF), membro da família das neurocinas que promove a sobrevivência de uma variedade de populações de neurônios, além de desempenhar papel importante na resposta do tecido nervoso à lesão. Seu mecanismo de ação se dá através da via Janus Quinase/Proteína Transdutora de Sinal e Ativadora de Transcrição (JAK/STAT), conhecidamente envolvida na expressão de diversos genes implicados na neuroproteção através da fosforilação da STAT3. Outra via de sinalização intracelular também relacionada com mecanismos de neuroproteção e regeneração axonal é aquela dependente da concentração citoplasmática do monofosfato de adenosina cíclico (cAMP), cuja concentração intracelular também pode ser modificada farmacologicamente através da interferência nos seus processos de síntese e degradação. O cAMP está envolvido em diversos eventos fisiológicos envolvendo o sistema nervoso e sua proteção. Seu principal alvo é a Proteína Quinase A, a qual exerce funções, dentre elas, a de estimular vias de sinalização intracelulares comprometidas com a sobrevivência neuronal e regeneração axonal. A estratégia aplicada no presente estudo consistiu na inibição da degradação de cAMP através de um inibidor de fosfodiesterase tipo IV, Rolipram. Diversas evidências sugerem que existam importantes interações entre a atividade do cAMP e a ação de neurocinas que potencializam os efeitos protetores destas últimas. Tendo isso em vista, investigamos os efeitos da associação do Rolipram e CNTF na proteção de neurônios da medula espinal de ratos neonatos após secção do nervo isquiático. Foi estudado um lote de ratos para investigação a curto prazo (tratamento e sacrifício no mesmo dia) para a investigação das vias de sinalização envolvidas e outro a longo prazo (tratamento por cinco dias) para a investigação morfológica com os grupos CNTF (0,3ug/g), Rolipram (2,0ug/g), CNTF + Rolipram (C+R) (0,3ug/g e 2,0ug/g, respectivamente), PBS e DMSO. Os dois últimos foram agrupados em um grupo denominado CONTROLE para análise proteica. As conseqüências no crescimento dos animais (evolução ponderal) foram mais proeminentes, visto que o grupo C+R cresceu menos que os outros grupos, denotando um efeito deletério já a partir do segundo dia de intervenção (P3) no desenvolvimento dos animais. Os tratamentos rápidos desencadearam um padrão diversificado de resultados. O tratamento com CNTF aumentou a fosforilação de STAT3 (pSTAT3) e a STAT3 total. A proteína pró-apoptótica BAD fosforilada aumentou com C+R, porém sua forma total não sofreu alterações. Já o fator de transcrição proteína ligadora ao elemento responsivo ao cAMP (CREB) e sua forma fosforilada, pCREB, não apresentaram alterações após os diferentes tratamentos. Após o tratamento prolongado não houve diferença entre os grupos no índice de Sobrevivência Neuronal. Não observamos efeito aditivo com tratamento simultâneo de CNTF e Rolipram nas vias relacionadas com a sobrevivência neuronal no presente modelo de lesão nervosa periférica / Abstract: The search for strategies for the treatment of neurodegenerative diseases and neurotraumas has been performed through the use of molecules that may act as neuroprotective agents and avoid the death of neural cells and/or stimulate axonal and dendritic regeneration. Among these strategies, the neurotrophic factors, specially the ciliary neurotrophic factor (CNTF), member of the neurocytokines, have gained interest due to the fact of being capable of promoting the survival of a variety of neurons besides playing an important role in response to nervous injury. The mechanism of action is through Janus Kinase/ Signal Transducer and Activator of Transcription (JAK/STAT), known to be involved in the expression of a variety of genes implicated in neuroprotection by phosphorylation of STAT3. Another intracellular signaling via also related with neuroprotection and axonal regeneration mechanisms is the one dependent on the cytoplasmic concentration of cyclic adenosine monophosphate (cAMP), whose intracellular concentration may also be modified pharmacologically through the interference in the processes of its synthesis and degradation. cAMP has been reported to be involved in several physiological events involving the nervous system and its protection. Its main target is Protein Kinase A (PKA), which exerts functions such as neuronal survival and axonal regeneration. The strategy applied on this work consisted on the inhibition of the breakdown of cAMP through an inhibitor of phosphodiesterase type IV, Rolipram. It has been described important relationship between the activity of cAMP and action of neurocytokines that potentiate the neuroprotective effects of the latter. In the present work we investigated the effects of the association of Rolipram and CNTF on the protection of spinal motoneurons of neonatal rats after transection of sciatic nerve. A set of rats was used to investigate short period treatment (treatment and sacrifice in the same day) in order to analyse intracelullar signaling vias involved and other set to investigate a prolonged treatment (treatment for five days) to make a morphological analysis of the groups CNTF (0,3ug/g), Rolipram (2,0ug/g), CNTF + Rolipram (C+R) (0,3ug/g e 2,0ug/g, respectively), PBS and DMSO. For proteic analysis, the two latter were grouped in one group called CONTROL. C+R group showed failure to thrive, meaning that a deleterious effect occurred as of the second day of intervention (P3). Short period treatments showed different results. Treatment with induced both phosphorylation and total amount of STAT3. The pro-apoptotic protein BAD raised its levels in response to C+R, but the total levels were not affected. On the other hand, cAMP Responsive Element Binding Protein (CREB) and its phosphorilated form, pCREB, showed no alteration after the treatments. In the prolonged investigation there was no difference between the treatments in the Neuronal Survival Index. There was no additive effect after simultaneous treatment with CNTF and Rolipram in neuronal survival in the present model of peripheral nervous injury / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Os nervos periféricos são extensões do sistema nervoso central e responsáveis pela interação das atividades das extremidades, em suas funções sensitiva e motora. São vulneráveis aos mesmos tipos de traumas que afetam outros tecidos: contusão, compressão, esmagamento, estiramento, avulsão e laceração. Desta forma, a interrupção de continuidade da estrutura do nervo, por algum tipo de trauma, resulta na interrupção de transmissão dos impulsos nervosos e na desorganização de suas atividades funcionais. Para tanto, em vista da evolução tecnológica e o desenvolvimento de equipamentos mais sofisticados, a microcirurgia vem ganhando cada vez mais espaço no campo da investigação experimental referente a recuperação de nervos periféricos lesionados. Em uma secção simples, sem perda tecidual, a neurorrafia denominada término-terminal apresenta bons resultados, contudo, quando ocorre perda de tecido nervoso ou, não se têm mais os cotos distais do nervo, outras técnicas devem ser empregadas, até porque, não se pode de modo algum tencionar o nervo numa tentativa de coaptá-lo novamente. Várias técnicas de tubulização utilizando-se materiais biológicos e não biológicos, para criar um meio por onde ocorrerá a regeneração nervosa já foram ou ainda estão sendo testados com resultados insatisfatórios sob o aspecto funcional.É sabido que em um trauma sem perda tecidual, numa neuropraxia, por exemplo, o nervo recupera espontaneamente de forma satisfatória. É sabido também que em um feixe vásculo-nervoso, o nervo periférico encontra-se em íntimo contato com a adventícia de artérias e veias. A adventícia dos vasos é constituída por tecido conjuntivo frouxo, rico em adipócitos. Assim, em um trauma, os neuritos oriundos do coto proximal do nervo lesado, ficam diretamente em contato com esses adipócitos. Seguindo este raciocínio, e com base em trabalhos anteriores onde foi usada veia preenchida com músculo esquelético a fresco como enxerto, decidimos testar a possibilidade de crescimento axonal por meio de enxerto com tubo de polietileno preenchido por tecido adiposo autólogo. Para tanto será utilizado um tubo com 12 mm de comprimento por 0,25 mm de diâmetro, com poros de 80 µm de diâmetro, preenchido com tecido adiposo in natura retirado das adjacências do referido nervo, na tentativa de se recuperar o nervo isquiático. A certificação do sucesso da recuperação do nervo será feita por meio de técnicas de microcirurgia, microscopia e morfometria. O enxerto de polietileno mostrou ter resistência a pressões, uma vez que não foi observado colapso estrutural. A gordura mostrou ser bom material trófico já que no grupo onde a utilizou apresentou resultados mais próximos do controle final. / Peripheral nerves are extensions of the central nervous system and are responsible for the interaction of the activities of the extremities in their sensory and motor function. They are vulnerable to these types of injuries that affect other tissues: contusion, compression, crush, stretch, tear and avulsion. Thus, the interruption of continuity of the nerve structure, due to some sort of trauma, results in the interruption of transmission of nerve impulses and disruption of their functional activities. Therefore, in view of technological evolution and development of more sophisticated equipment, microsurgery is gaining more space in the field of experimental research concerning the recovery of injured peripheral nerves. In a single section, without loss of tissue, called the end-terminal neurorrhaphy was also good, however, when there is loss of nervous tissue or, if not longer have the distal nerve stumps, other techniques must be employed, because, in any circumstance the nerve should be tensioned as an attempt to coaptation again. Several techniques of tubing, using biological materials and non-biological means to create a place where nerve regeneration have been or are still being tested with unsatisfactory results in the functional aspect. It is known that in a trauma without loss of tissue, a neuropraxia, for example, the nerve recovers spontaneously and satisfactorily. It is also known that in a neurovascular bundle, the peripheral nerve is in close contact with the adventitia of arteries and veins. The adventitia of the vessels is composed of loose connective tissue rich in adipocytes. Thus, in trauma, the neurites from the proximal stump of injured nerve, are directly in contact with these adipocytes. Following this reasoning, and based on previous work where it was used vein filled with fresh skeletal muscle as a graft, decided to test the possibility of axonal growth by grafting polyethylene tube filled with autologous adipose tissue. For that will be used with a tube 12 mm long and 0.25 mm in diameter, with pores of 80 microns in diameter, filled with fresh adipose tissue removed from the vicinity of that nerve, in an attempt to recover the sciatic nerve. Certification of successful nerve recovery will be done through microsurgical techniques, microscopy and morphometry. The graft polyethylene proved to have pressure resistance, since no structural collapse was observed. The fat was found to be good material as trophic group which had used the results closer to the ultimate control.

Nas lesões onde há secção de nervos o cirurgião necessita restabelecer a continuidade entre dois cotos. Apesar de ser considerado como o método padrão, a sutura com fios de náilon pode ocasionar reação inflamatória prejudicando o processo de regeneração ou ser de difícil execução, nos casos de nervos de calibres reduzidos. O reparo com adesivo de fibrina é uma opção ao reparo com sutura convencional, mas a comparação entre esses dois métodos apresenta resultados conflitantes na literatura. O objetivo deste trabalho foi comparar os parâmetros usualmente empregados na avaliação da regeneração do nervo ciático do rato previamente seccionado com a utilização do reparo com a sutura convencional, com o adesivo de fibrina ou uma combinação das duas técnicas. Previamente à secção do nervo ciático do lado direito, cada animal foi submetido à mensuração do índice funcional ciático a partir de medidas obtidas da impressão das patas traseiras durante a marcha. Após a exposição cirúrgica procedeu-se à avaliação eletrofisiológica que consistia na mensuração da latência, amplitude e velocidade de condução do potencial de ação do nervo e do potencial de ação motor. Com técnica microcirúrgica, os nervos foram seccionados e reparados de forma imediata. Três grupos com 10 animais cada foram formados de acordo com o reparo utilizado. No grupo A, o reparo foi realizado com a sutura utilizando-se quatro pontos de fio de náilon 10-0; no grupo B a coaptação dos cotos do nervo foi realizada com a aplicação do adesivo de fibrina; no grupo C o reparo foi realizado com um ponto de náilon 10-0 associado com a aplicação do adesivo de fibrina. Após 12 semanas o índice funcional ciático foi avaliado nos três grupos e a avaliação funcional da regeneração foi obtida comparando-se os valores deste índice. Após 24 semanas os animais foram reoperados para avaliação eletrofisiológica com as medidas dos mesmos parâmetros que foram avaliados antes da secção do nervo. A avaliação eletrofisiológica da regeneração comparou os valores da amplitude, latência e velocidade de condução dos potencias de ação do nervo e motor, os valores da razão entre a velocidade de condução na reoperação e a velocidade de condução antes da secção do nervo para os dois potenciais e a razão entre a amplitude na reoperação e a amplitude antes da secção dos nervos dos dois potenciais. Após esta avaliação, os nervos foram fixados e retirados para a obtenção de segmentos proximais e distais à região do reparo com a finalidade de se proceder ao estudo histomorfométrico com contagem total dos axônios regenerados, mensuração dos diâmetros desses axônios nesses segmentos e quantificação do número de axônios regenerados em situação extrafascicular no segmento distal. A análise estatística foi realizada através de comparação dos parâmetros obtidos entre os grupos com a análise de variância ou com o teste de Kruskal-Wallis. Quando era identificada uma diferença significativa entre os grupos, para p < 0,05, foi utilizado um teste de comparações múltiplas através do método de Tukey ou Duncan. Após 12 semanas do reparo os resultados do índice funcional ciático no grupo B foram superiores aos do grupo A. Não houve diferença significativa na avaliação desse parâmetro entre os grupos B e C. Os animais do grupo B apresentaram melhores resultados na regeneração em comparação com o grupo A quando avaliados a latência, a velocidade de condução após o período de observação e a razão entre a velocidade de condução realizada na reoperação e o mesmo parâmetro obtido antes da secção do nervo durante a mensuração do potencial de ação motor. Os animais do grupo C apresentaram melhores resultados na regeneração em comparação com o grupo A quando avaliada a razão entre a velocidade de condução realizada na reoperação e o mesmo parâmetro obtido antes da secção do nervo na mensuração do potencial de ação motor. Não houve diferença na regeneração avaliada pelo estudo eletrofisiológico entre os grupos B e C. Não houve diferenças significativas na avaliação histomorfométrica entre os três grupos. Considerando os resultados conclui-se que o reparo com o adesivo de fibrina forneceu as melhores condições para a regeneração em comparação com a sutura / Injuries involving nerves section require the surgeon to reestablish the continuity between the two stumps. Although direct suturing of the nerve using Nylon is considered a standard procedure, it can cause inflammatory reaction impairing the regeneration, or the procedure can be difficult due to reduced nerve caliber. The repair with fibrin glue is an alternative to the conventional suture technique, but comparison between these two techniques have presented conflicting results in the literature. The objective of this study was to compare the parameters commonly applied in assesssing the regeneration of the sectioned rat sciatic nerve, using conventional suture, fibrin glue and a combination of both techniques. Before sectioning the right sciatic nerve, the sciatic functional index of each rat was determined by measuring the printing of the posterior limbs during gait. After the surgical exposure, the electrophysiologic evaluation was performed. It consisted of measuring the latency, magnitude and conduction velocity of the nerve and muscular action potentials. Using the microsurgical techniques, the nerves were sectioned at middle and repaired immediately. Thirty rats were divided evenly into three groups accordingly to the nerve repair technique. In group A, the nerve was repaired with four-stitch suture using Nylon 10-0; in group B the stumps were united using fibrin glue; in group C, the nerve was repaired with a single-stitch suture using Nylon 10-0 and fibrin glue. After 12 weeks, the sciatic functional index of the three groups was evaluated. The functional evaluation of the nerve regeneration was obtained by comparing the sciatic functional index of the three groups. After 24 weeks, the rats underwent reoperation for electrophysiologic assessment based on the same parameters used before the nerve section. The electrophysiologic evaluation of the nerve regeneration consisted of comparing the results of the same parameters evaluated in the first surgery, the ratio between the conduction velocity of the action potential at the reoperation and the same velocity before the division of the nerve and the ratio between the magnitude of the action potential at the reoperation and before the nerve section. After electrophysiologic evaluation, the nerves were fixed and removed to obtain the proximal and the distal stumps for histomorphometric study. The histomorphometric study consisted of total count of regenerated axons, measurement of the regenerated axons diameter in both stumps, and the determination of the number of the regenerated axons in extrafascicular location in the distal stump. Statistical analysis was performed by comparing the parameters obtained from the three groups using ANOVA or the Kruskal-Wallis test. Whenever a significant difference between the groups was identified, with p<0.05, a multiple comparison test (Tukey or Duncan) was applied. With regards to the sciatic functional index 12 weeks after the repair, the rats of group B presented better outcome than those of group A. There was no significant difference between groups B and C. When latency and the nerve conduction velocity assessed at the reoperation, and the ratio between the conduction velocity at the reoperation and before the nerve division in the motor action potential evaluation were measured, the rats of group B presented better results in regeneration than those of group A. As for regeneration, with the motor action potential evaluation, rats of group C presented better results than those of group A when the ratio between the nerve conduction velocity at the reoperation and before the nerve division was considered. No difference between groups B and C was found in regeneration evaluated by means of electrophysiologic study. There were no significant differences in regard to the histomorphometric evaluation between the three groups. Based on the results, we conclude that nerve repair using fibrin glue provided the best conditions for regeneration than the suture

A subnutrição é um quadro caracterizado por escassez proteico-calórica e sua manifestação na República de Moçambique é responsável por um terço das mortes de crianças com idade inferior a 5 anos. É a responsável pela falha no crescimento nos primeiros anos de vida e no Brasil, até 2011, era considerada um problema grave de saúde pública. O objetivo deste trabalho foi investigar possíveis repercussões no tecido nervoso periférico de ratos Wistar subnutridos, comparando-os com aqueles que receberam a dieta padrão de Moçambique (baseada em proteína vegetal) e com aqueles que receberam nutrição balanceada. Para a realização deste estudo foram utilizados 15 ratos machos da linhagem Wistar e as técnicas utilizadas foram: Microscopia Eletrônica de Transmissão e Varredura, possibilitando a aquisição de dados quantitativos e qualitativos, utilizando ainda princípios estereológicos. Os resultados demonstraram alterações morfológicas nos grupos S e M, assim como diferenças quanto ao contorno das fibras nervosas e a disposição das camadas de mielina. Em relação ao peso e a ASTn, os três grupos são diferentes estatisticamente. Ao contrário, quanto à densidade de fibras nervosas mielínicas e ao número total estimado de fibras mielínicas, não houve diferença significante entre os grupos. Em relação à ASTax do nervo isquiático, houve significância entre os três grupos, já na análise da ASTbm e da ASTfm, houve diferença apenas entre os grupos S &ne; N, M &ne; N. Foi concluído, portanto que a subnutrição promoveu alterações morfológicas na estrutura do nervo isquiático e nas fibras nervosas mielínicas que podem ser irreparáveis, e numericamente gerou um mecanismo compensatório de aumento de densidade em relação a área do nervo, ou seja, um nervo de área menor, porém com fibras nervosas mais próximas, não havendo diferença na quantidade de fibras por nervo / Undernutrition is a condition characterized by protein-calorie shortage and its manifestation in the Republic of Mozambique is responsible for a third of deaths of children under the age of 5 years. It is responsible for growth failure early in life and in Brazil until 2011, was considered a serious public health problem. The objective of this study was to investigate possible effects on peripheral nerve tissue of Wistar rats undernourished, comparing them with those who received standard diet of Mozambique (based on vegetable protein) and those who received balanced nutrition. For this study were used 15 male rats of the Wistar and techniques used were: Transmission Electron Microscopy and Scanning, enabling acquisition of quantitative and qualitative data, using stereological principles. The results showed morphological changes in S and M groups as well as differences in the contour of nerve fibers and of the layers of myelin. In terms of weight and ASTn, the three groups are statistically different. Rather, density of myelinated nerve fibers and the estimated total number of myelinated fibers, not present significant difference between groups. Regarding ASTax sciatic nerve, there was significant difference between the three groups, and in the analysis of ASTms and ASTmf, there was difference only between the groups. It was concluded therefore that malnutrition promoted morphological changes in the sciatic nerve structure and myelin nerve fibers that may be irreparable, numerically generating a compensatory mechanism of density increase in relation to nerve area, in other words, a nerve smaller area but with next nerve fibers, with no difference in the number of nerve fibers by

A verificação do trajeto do nervo isquiático por meio da dissecação da articulação coxofemoral de cadáveres da espécie canina, e a sintopia destas estruturas, tem relevância em ser pesquisada na medida em que tal relação neuroarticular pode estar envolvida nos casos de neuropraxia durante as intervenções cirúrgicas de artroplastia total do quadril de cães. O escopo do estudo foi o de apresentar uma contribuição aos cirurgiões em prendizado na implantação das próteses acetabular e femoral, para que possam compreender as relações anátomo-cirúrgicas entre a articulação coxofemoral e o nervo isquiático, e com a finalidade de potencializar positivamente o resultado do pós-operatório imediato dos cães. Foram utilizadas 20 articulações coxofemorais provenientes de 10 cadáveres de cães, com raças definidas ou SRD, machos ou fêmeas, com peso variável, sempre acima de 20 quilogramas, sem alterações macro-morfológicas nas referidas articulações, e dissecadas por técnica clássica. Realizou-se manobras de abdução articular para a obtenção de luxação articular, além da retração caudal do fêmur proximal, à semelhança do que ocorre no transcorrer da aplicação da técnica operatória de colocação da prótese total de quadril. A dissecação cirúrgica das estruturas estudadas revelou um aumento considerável de contato entre o nervo isquiático e a articulação coxofemoral durante as manobras de abdução articular em aproximadamente 90º, quando adicionada de retração caudal do femur proximal. Assim, conclui-se que a etapa ora referida, necessária pela técnica cirúrgica de artroplastia total de quadril em cães, pode levar a lesão do nervo isquiático, devendo o cirurgião estar atento na realização destas manobras. / The ischiatic nerve course verification using dissection of the hip joint from cadavers of the canine species, as well as the sintopy of these structures, have a relevant aspect to be investigated, because these neuro-articular relation can be involved in cases of neurapraxia during some surgical interventions of total hip arthroplasty in dogs. The main objective of the study was to present a contribution to the new surgeons during their learning phase of implantation of the acetabular and femoral prosthesis, so they can understand the anatomic and surgical relation between the hip joint and the ischiatic nerve, aiming to potentially make positive the immediate post surgical result of the treated dogs. 20 hip joints from 10 cadavers of dogs were utilized, with pure breeds or not, males or females, with variable weight, always over 20 kilos, without macro-morphological alterations in the hip joints, and dissected using the classical technique. Hip joint abduction manoeuvres were made to obtain the desired joint luxation, besides a caudal retraction of the proximal femur, like occurs during the application of the surgical technique utilized to perform the total hip replacement surgery. The surgical dissection involving the studied structures showed a significant increasing contact between the ischiatic nerve and the hip joint during the articular abduction manoeuvres, using approximately a 90 degree angle, and when added a caudal retraction of the proximal femur. Consequently, conclusion was that the above-mentioned stage, needed to perform the total hip arthroplasty procedure in dogs, can lead to a lesion of the ischiatic nerve. Thus, the surgeons shall be alert during the realization of these manoeuvres.