Análise da expressão de neurotrofinas durante a regeneração de nervo periférico de rato por enxerto venoso Enxertos de veias têm sido empregados para preencher lacunas em nervos periféricos transeccionados para melhor recuperação funcional. No entanto, vários inconvenientes, como a constrição do enxerto secundário foram observados. Uma nova alternativa para esta técnica foi desenvolvida. Simplesmente invertendo a veia de dentro para fora, chamado do Inside- out vein graft. As neurotrofinas são uma família de fatores neurotróficos conhecidos por desempenhar um papel significativo na regeneração de nervos periféricos. A família da neurotrofina é constituído por fator de crescimento nervoso (NGF), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), Neurotrofina-3 (NT-3) e Neurotrofina-4 (NT-4). No campo da neurobiologia, vários autores têm utilizado a técnica de PCR a fim de obter mais informações sobre os nervos regenerados. Neste estudo, foi utilizada a técnica de biologia molecular para explorar o papel e o nível das neurotrofinas durante a regeneração de nervos periféricos com enxerto de veia. O nervo isquiático de ratos foi seccionado e reparado com enxerto de veia invertida (IOVG) e técnicas de enxerto de veia padrão (SVG). No grupo controle, os ratos foram operados e o nervo isquiático foi mantido intacto. Os animais foram sacrificados após 6 e 12 semanas e os enxertos foram colhidos para observar o nível das neurotrofinas. Músculos EDL e Sóleo foram excisados e pesados para determinar a diferença de peso entre os grupos. Um pequeno segmento dos cotos distais de ambos os grupos SVG e IOVG também foram excisados e foram processados histologicamente para examinar a quantidade de axónios regenerados. Além disso, um outro pequeno segmento do coto distal foi processado para RT-PCR para analisar o nível das neurotrofinas nesta área.A tecnica do walk track analysis foi realizada para determinar o índice funcional do nervo isquiático nos grupos. Em 6 semanas, não ocorreu crescimento neuronal significativo no coto distal dos dois tipos de enxertos, porém um crescimento foi observado em 12 semanas. Não houve diferença significativa na massa muscular entre IOVG e SVG em ambos os períodos de tempo. No entanto, um aumento significativo na massa muscular foi observado a partir de 6 a 12 semanas nos grupos IOVG e SVG. Um aumento significativo na produção de NT-3 foi observado no grupo de SVG em ambos, enxerto e o coto distal quando comparados a partir de 6 a 12 semanas, no entanto, não houve aumento observado no nível de neurotrofinas dos outros tipos (NGF e NT-4) . Surpreendentemente, não houve aumento significativo da NT-3 no grupo IOVG. Conclui-se que, entre as neurotrofinas avaliadas neste estudo, não há nenhuma diferença significativa no seu nível de RNAm entre os dois grupos, exceto NT-3. Finalmente, uma vez que o nível de RNAm de NT-3 aumenta significativamente entre 6 e 12 semanas no grupo SVG e não no IOVG, observado por estas duas técnicas de nível molecular, estudos adicionais necessitam serem feitos para decifrar o mecanismo exato. / Vein grafts have been employed to bridge the gap in transected peripheral nerves to produce better functional recovery. However several disadvantages such as secondary graft constriction were observed and a new alternative to this technique was developed by simply reversing the vein inside out. Both inside out and standard vein grafts were successfully used in recovering the sensory segmental defect in humans. Neurotrophins are a family of eurotrophic factors known to play an important role in the regeneration of peripheral nerves. The neurotrophin family consists of Nerve Growth Factor (NGF), Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF), Neurotrophin-3 (NT-3) and Neurotropinh-4 (NT-4). In the neurobiology field, several authors have been using PCR technique in order to gain more information regarding regenerated nerves. In this study, we employed this molecular biology technique to explore the role and level of the neurotrophins during the peripheral nerve regeneration with vein graft. The sciatic nerve of rats were sectioned and repaired with Inside out vein graft (IOVG) and standard vein graft techniques (SVG). In the control group the rats were sham operated wherein the sciatic nerve was kept intact. The animals were euthanized at 6 and 12 weeks and the grafts were harvested to observe the level the neurotrophins. EDL and Sol muscles were excised and measured to determine any weight difference between the groups. A small segment of the distal stumps from both the SVG and IOVG groups were also excised and were subjected to histological process to examine the amount of regenerated axon. In addition, another small segment of the distal stump was processed for RT-PCR to further examine the level of the neurotrophins in this area. At 6 weeks, no significant neuronal growth was observed in the distal stump of both graft types but a distinct growth was seen at 12 weeks. Walk track analysis showed poor motor function recovery in the experimental groups during both time intervals. Morphometric analysis demonstrated no significant differences in the amount of myelination between both the groups. There was no significant difference in the muscle mass between IOVG and SVG in both time periods. However, a significant increase in both the muscle mass was observed from 6 to 12 weeks in the IOVG and SVG groups. A significant increase in the production of NT-3 was observed in SVG group in both the distal stump and graft segment when compared from 6 to 12 weeks; however there was no observed increase in the level of other neurotrophins (NGF and NT-4). Surprisingly, no significant increase of NT-3 was noticed in the IOVG group. We conclude that amongst the neurotrophins evaluated in this study, there is no significant difference in their mRNA level between both groups except NT-3. Also, since mRNA level of NT-3 increases significantly between 6 and 12 weeks in SVG and not in IOVG, it suggests that the mechanism by which these two techniques operate at a molecular level may differ and further studies need to be done to decipher the exact mechanism.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-08T13:52:06Z No. of bitstreams: 1 Carlos Borges Filho.pdf: 1239455 bytes, checksum: 6ed42bfbe4228eaf1553aaf8e1235c9e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-08T13:52:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos Borges Filho.pdf: 1239455 bytes, checksum: 6ed42bfbe4228eaf1553aaf8e1235c9e (MD5) Previous issue date: 2014-08-09 / A relação entre o estresse e a depressão tem sido alvo de intensas pesquisas comportamentais e fisiopatológicas. Dentro deste contexto, estudos postulam que a hipersecreção de cortisol e o desenvolvimento de um quadro de estresse oxidativo são fatores responsáveis pela ocorrência da depressão em indivíduos estressados. Como mecanismo recente de estudo, também está sendo sugerido o papel das neurotrofinas e da enzima Na+,K+-ATPase na fisiopatologia da depressão. Embora vários antidepressivos já estejam disponíveis no mercado, a falta de eficácia na totalidade dos pacientes e a vasta ocorrência de efeitos colaterais adversos constituem uma problemática no tratamento da depressão. Assim, pesquisas têm buscado compostos, principalmente naturais, que possam melhor satisfazer as exigências clínicas sem ocasionar alterações fisiológicas indesejáveis. A crisina é um flavonóide natural abundante no, localmente denominado, maracujá do mato (Passiflora coerulea), e seus efeitos terapêuticos já têm sido explorados em modelos de estresse oxidativo, hiperlipidemia, inflamação, hipertensão e neoplasia, mas seu efeito na depressão ainda é desconhecido. Com isso, objetivou-se neste trabalho analisar o efeito do tratamento oral com o flavonóide crisina por 28 dias em camundongos submetidos ao estresse crônico moderado e imprevisível (CUMS), em parâmetros comportamentais, bioquímicos e neurotróficos, comparando com o efeito da fluoxetina (controle positivo). O CUMS aplicado por 28 dias reduziu os níveis de BDNF (Fator neurotrófico derivado do cérebro) e NGF (Fator de crescimento do nervo) e ocasionou a inibição da atividade da enzima Na+,K+-ATPase no hipocampo e córtex pré-frontal de camundongos. O tratamento com crisina (5 ou 20mg/kg) não só protegeu contra estas mudanças, mas a dose de 20mg/kg ainda elevou o BDNF e o NGF a níveis acima do grupo controle em animais não estressados e em animais submetidos ao CUMS. O CUMS induziu a redução na preferência por sacarose, o aumento no tempo de imobilidade no teste de nado forçado (FST) e o aumento nos níveis plasmáticos de corticosterona. Além do tratamento com crisina (5 ou 20mg/kg) prevenir contra estas alterações nos animais estressados, também se observou o efeito antidepressivo da crisina no FST nos animais não estressados. Os dados acima citados mostram o efeito antidepressivo da crisina em animais não estressados e estressados, de forma equivalente à fluoxetina, sugerindo o possível envolvimento do BDNF e do NGF no efeito antidepressivo da crisina. O protocolo do CUMS reduziu os níveis de tióis não-protéicos (NPSH) e elevou os níveis de espécies reativas (RS) no hipocampo e córtex pré-frontal de camundongos. Como possível mecanismo de resposta a estas mudanças, foi verificada a elevação da atividade das enzimas glutationa redutase (GR), glutationa peroxidase (GPx) e catalase (CAT) no hipocampo e córtex pré-frontal dos camundongos submetidos ao CUMS. O tratamento com crisina (5 ou 20mg/kg) protegeu frente a estas modificações, mostrando o envolvimento da ação antioxidante no efeito antidepressivo da crisina em animais estressados. Em conclusão, estes dados demonstram o efeito antidepressivo da crisina em parâmetros comportamentais e fisiopatolóficos em animais não estressados e em animais estressados, e sugerem o possível envolvimento do BDNF e do NGF no efeito antidepressivo da crisina. Ainda, este trabalho expõe o maracujá do mato como um importante alvo para o estudo dos produtos naturais no combate à depressão e outras doenças do sistema nervoso central, mostrando a fundamentalidade da investigação da funcionalidade e constituição bioativa desta e outras plantas desta região. / The relationship between stress and depression has been subject of the intense behavioral and pathophysiological research. Within this context, studies have postulated that the hypersecretion of cortisol and the development of a framework of oxidative stress are factors responsible for the occurrence of depression in stressed individuals. As a recent study of mechanism, has also been suggested the role of the neurotrophins and of the enzyme Na+,K+-ATPase in the pathophysiology of depression. Although various antidepressants are already available on the market, the lack of efficacy in whole of patients and the wide occurrence of adverse side effects are a problematic in the treatment of depression. Thus, studies have investigated compounds, mainly natural, which can better meet the clinical requirements without causing undesirable physiological changes. Chrysin is a flavonoid abundant in natural, locally called, the bush passionfruit (Passiflora coerulea), and its therapeutic effects have been explored in models of oxidative stress, hyperlipidemia, inflammation, hypertension and cancer, but its effect on depression is still unknown. Thus, this study aimed to analyze the effect of oral treatment with the flavonoid chrysin for 28 days in non-stressed mice and mice subjected to chronic unpredictable mild stress (CUMS) in behavioral, biochemical and neurotrophic parameters, compared with the effect of fluoxetine (positive control). The CUMS applied for 28 days decreased the levels of BDNF and NGF and caused the inhibition of the , Na+,K+-ATPase activity in the hippocampus and prefrontal cortex of mice. Treatment with chrysin (5 or 20mg/kg) not only protected against these changes, but still 20mg/kg increased BDNF and NGF levels above the control group in non-stressed animals and in animals subjected to CUMS. The CUMS induced the reduction in the preference for sucrose, the increase in immobility time in forced swim test (FST) and the increase in plasma corticosterone levels. Besides crysin treatment (5 or 20mg/kg) prevent against these changes in stressed animals, also observed the antidepressant effect of chrysin in the FST in non-stressed animals. The aforementioned data show the effect of antidepressant of crysin in non-stressed and stressed animals, equivalently to fluoxetine, suggesting a possible involvement of NGF and BDNF in the antidepressant effect of chrysin. The protocol CUMS reduced levels of non-protein thiols (NPSH) and raised levels of reactive species (RS) in the hippocampus and prefrontal cortex of mice. As a possible mechanism of response to these changes, we observed the increase in the activity of enzymes glutathione reductase (GR), glutathione peroxidase (GPx) and catalase (CAT) in the hippocampus and prefrontal cortex of mice subjected to CUMS. Treatment with chrysin (5 or 20mg/kg) protected against these changes, showing the involvement of antioxidant action in the antidepressant effect of chrysin in stressed animals. In conclusion, these data demonstrate the antidepressant effect of chrysin on behavioral and pathophysiological parameters in non-stressed and stressed animals, suggesting a possible involvement of BDNF and NGF in the antidepressant effect of chrysin. Still, this work exposes the passion fruit bush as an important target for the study of natural products in the combat of depression and other diseases of the central nervous system, showing the fundamentality of research of functionality and bioactive constitution these and other plants of this region.

Introduction: Peripheral nerve lesions are frequent in clinical practice, causing hyperalgesia and loss of motor function. Gabapentin (GABAP) is used in this condition for the treatment of pain, while statins such as atorvastatin (ATORV) have been demonstrating neuroprotective effects in preclinical nerve injury studies. Objective: To investigate the influence of treatment with GABAP and ATORV on aspects related to nerve regeneration. Methods: Male Swiss mice (25-35 g) were subjected to nerve injury by partial ligation of the sciatic nerve. The influence of the drugs on mechanical hyperalgesia and grip force was assessed at baseline (before injury), 7, 14 and 21 days after injury, following daily treatment (intragastric) with GABAP (30 mg / kg) and ATORV (3 or 10 mg/kg), alone or in combination. Data were evaluated by 1 or 2-way ANOVA (Tukey or Dunnett, respectively, p< 0.05). Results: GABAP (26.67  4.21% of response) and ATORV (36.67  10.85% of response), alone or in combination, reduced mechanical hyperalgesia (vehicle: 76.00  11.66% of response); besides of this, there was an important effect for the association of these drugs on the grip force (vehicle: -4.19  0.5 g; GABAP+ATORV: -1.29  1.22g). The two agents also influenced the levels of brain derived neurotrophic factor, BDNF, (vehicle: 105.30  12.53 pg/mg of protein; GABAP: 34.92  5.92 pg/mg of protein; ATORV: 33.77  4.20 pg/mg of protein) and and insulin-like growth factor-1, IGF-1, (vehicle: 399.60  61.30 pg/mg of protein; GABAP: 388.30  38.57 pg/mg of protein; ATORV: 306.50  16.72 pg/mg of protein), while levels of interleucin 10 (IL-10), were not affected by treatments. Conclusion: It is suggested that the association of these substances of different pharmacological classes, GABAP and ATORV, may bring benefits on hyperalgesia and motor function associated with nerve lesions. / Submitted by Roberto Henrique Benedetti (roberto.benedetti@unisul.br) on 2018-08-16T14:30:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Benedetti-2018.pdf: 2198483 bytes, checksum: 428390b9e64984be1485debcae231696 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Correa da Cruz (caroline.cruz@unisul.br) on 2018-08-16T14:44:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Benedetti-2018.pdf: 2198483 bytes, checksum: 428390b9e64984be1485debcae231696 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T14:44:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Benedetti-2018.pdf: 2198483 bytes, checksum: 428390b9e64984be1485debcae231696 (MD5) Previous issue date: 2018 / Introdução: As lesões nervosas periféricas são frequentes na prática clínica, causando hiperalgesia e perda da função motora. A gabapentina (GABAP) é utilizada nesta condição para o tratamento da dor, enquanto as estatinas como a atorvastatina (ATORV) vêm demonstrando efeitos neuroprotetores em estudos pré-clínicos de lesão nervosa. Objetivo: Investigar a influência do tratamento com GABAP e ATORV sobre aspectos relacionados à regeneração nervosa. Métodos: Utilizou-se camundongos Swiss, machos (25-35 g), com lesão nervosa por ligadura parcial do nervo isquiático. A influência dos fármacos sobre a hiperalgesia mecânica e a força de preensão foi avaliada nos dias zero (basal), 7, 14 e 21 após a lesão, após tratamento diário (via intragástrica) com GABAP (30 mg/kg) e ATORV (3 ou 10 mg/kg), isoladamente ou em associação. Dados avaliados por ANOVA de 1 ou 2 vias (Tukey ou Dunnett, respectivamente, p< 0,05). Resultados: A GABAP (26,67  4,21 % de resposta) e a ATORV (36,67  10,85 % de resposta), isoladamente, reduziram a hiperalgesia mecânica (veículo: 76,00  11,66 % de resposta) e, além disso, houve um importante efeito para a associação destes fármacos sobre a força de preensão (veículo: -4,19  0,57 g; GABAP+ATORV: -1,29  1,22 g). Os dois agentes influenciaram também os níveis de fator neurotrófico derivado do encéfalo, BDNF, (veículo: 105,30  12,53 pg/mg de proteína; GABAP: 34,92  5,92 pg/mg de proteína; ATORV: 33,77  4,20 pg/mg de proteína) e fator de crescimento semelhante à insulina-1, IGF-1, (veículo: 399,60  61,30 pg/mg de proteína; GABAP: 388,30  38,57 pg/mg de proteína; ATORV: 306,50  16,72 pg/mg de proteína), já os níveis de interleucina 10 (IL-10), não foram alterados pelos tratamentos. Conclusão: Sugere-se que a associação destas substâncias de diferentes classes farmacológicas, GABAP e a ATORV, pode trazer benefícios sobre a hiperalgesia e a função motora associadas às lesões nervosas.

Análise da expressão de neurotrofinas durante a regeneração de nervo periférico de rato por enxerto venoso Enxertos de veias têm sido empregados para preencher lacunas em nervos periféricos transeccionados para melhor recuperação funcional. No entanto, vários inconvenientes, como a constrição do enxerto secundário foram observados. Uma nova alternativa para esta técnica foi desenvolvida. Simplesmente invertendo a veia de dentro para fora, chamado do Inside- out vein graft. As neurotrofinas são uma família de fatores neurotróficos conhecidos por desempenhar um papel significativo na regeneração de nervos periféricos. A família da neurotrofina é constituído por fator de crescimento nervoso (NGF), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), Neurotrofina-3 (NT-3) e Neurotrofina-4 (NT-4). No campo da neurobiologia, vários autores têm utilizado a técnica de PCR a fim de obter mais informações sobre os nervos regenerados. Neste estudo, foi utilizada a técnica de biologia molecular para explorar o papel e o nível das neurotrofinas durante a regeneração de nervos periféricos com enxerto de veia. O nervo isquiático de ratos foi seccionado e reparado com enxerto de veia invertida (IOVG) e técnicas de enxerto de veia padrão (SVG). No grupo controle, os ratos foram operados e o nervo isquiático foi mantido intacto. Os animais foram sacrificados após 6 e 12 semanas e os enxertos foram colhidos para observar o nível das neurotrofinas. Músculos EDL e Sóleo foram excisados e pesados para determinar a diferença de peso entre os grupos. Um pequeno segmento dos cotos distais de ambos os grupos SVG e IOVG também foram excisados e foram processados histologicamente para examinar a quantidade de axónios regenerados. Além disso, um outro pequeno segmento do coto distal foi processado para RT-PCR para analisar o nível das neurotrofinas nesta área.A tecnica do walk track analysis foi realizada para determinar o índice funcional do nervo isquiático nos grupos. Em 6 semanas, não ocorreu crescimento neuronal significativo no coto distal dos dois tipos de enxertos, porém um crescimento foi observado em 12 semanas. Não houve diferença significativa na massa muscular entre IOVG e SVG em ambos os períodos de tempo. No entanto, um aumento significativo na massa muscular foi observado a partir de 6 a 12 semanas nos grupos IOVG e SVG. Um aumento significativo na produção de NT-3 foi observado no grupo de SVG em ambos, enxerto e o coto distal quando comparados a partir de 6 a 12 semanas, no entanto, não houve aumento observado no nível de neurotrofinas dos outros tipos (NGF e NT-4) . Surpreendentemente, não houve aumento significativo da NT-3 no grupo IOVG. Conclui-se que, entre as neurotrofinas avaliadas neste estudo, não há nenhuma diferença significativa no seu nível de RNAm entre os dois grupos, exceto NT-3. Finalmente, uma vez que o nível de RNAm de NT-3 aumenta significativamente entre 6 e 12 semanas no grupo SVG e não no IOVG, observado por estas duas técnicas de nível molecular, estudos adicionais necessitam serem feitos para decifrar o mecanismo exato. / Vein grafts have been employed to bridge the gap in transected peripheral nerves to produce better functional recovery. However several disadvantages such as secondary graft constriction were observed and a new alternative to this technique was developed by simply reversing the vein inside out. Both inside out and standard vein grafts were successfully used in recovering the sensory segmental defect in humans. Neurotrophins are a family of eurotrophic factors known to play an important role in the regeneration of peripheral nerves. The neurotrophin family consists of Nerve Growth Factor (NGF), Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF), Neurotrophin-3 (NT-3) and Neurotropinh-4 (NT-4). In the neurobiology field, several authors have been using PCR technique in order to gain more information regarding regenerated nerves. In this study, we employed this molecular biology technique to explore the role and level of the neurotrophins during the peripheral nerve regeneration with vein graft. The sciatic nerve of rats were sectioned and repaired with Inside out vein graft (IOVG) and standard vein graft techniques (SVG). In the control group the rats were sham operated wherein the sciatic nerve was kept intact. The animals were euthanized at 6 and 12 weeks and the grafts were harvested to observe the level the neurotrophins. EDL and Sol muscles were excised and measured to determine any weight difference between the groups. A small segment of the distal stumps from both the SVG and IOVG groups were also excised and were subjected to histological process to examine the amount of regenerated axon. In addition, another small segment of the distal stump was processed for RT-PCR to further examine the level of the neurotrophins in this area. At 6 weeks, no significant neuronal growth was observed in the distal stump of both graft types but a distinct growth was seen at 12 weeks. Walk track analysis showed poor motor function recovery in the experimental groups during both time intervals. Morphometric analysis demonstrated no significant differences in the amount of myelination between both the groups. There was no significant difference in the muscle mass between IOVG and SVG in both time periods. However, a significant increase in both the muscle mass was observed from 6 to 12 weeks in the IOVG and SVG groups. A significant increase in the production of NT-3 was observed in SVG group in both the distal stump and graft segment when compared from 6 to 12 weeks; however there was no observed increase in the level of other neurotrophins (NGF and NT-4). Surprisingly, no significant increase of NT-3 was noticed in the IOVG group. We conclude that amongst the neurotrophins evaluated in this study, there is no significant difference in their mRNA level between both groups except NT-3. Also, since mRNA level of NT-3 increases significantly between 6 and 12 weeks in SVG and not in IOVG, it suggests that the mechanism by which these two techniques operate at a molecular level may differ and further studies need to be done to decipher the exact mechanism.

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-03-24T17:09:38Z No. of bitstreams: 1 Cabo, Carolina Serra Jogaib [Dissertação, 2014].pdf: 1585469 bytes, checksum: c26025e0cb73856aeb3ee836ea718d62 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T17:09:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cabo, Carolina Serra Jogaib [Dissertação, 2014].pdf: 1585469 bytes, checksum: c26025e0cb73856aeb3ee836ea718d62 (MD5) / Estudos sobre os efeitos do extrato aquoso da Eugenia punicifolia (EP) demonstram sua ação na neurotransmissão da junção neuromuscular. Entretanto, apesar de saber que o aumento da neurotransmissão colinérgica pode apresentar atividade neuroprotetora e atuar na plasticidade neuronal, não existem estudos sobre o efeito do extrato de EP em células do Sistema Nervoso Central. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito do extrato diclorometano de EP sobre células da retina de ratos neonatos in vitro no que tange à proliferação celular, modulação do fenótipo colinérgico e aos níveis de fator de crescimento do nervo (NGF), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) e da interleucina IL-4. Foram realizadas culturas primárias de células da retina de ratos neonatos da linhagem Lister Hooded de ambos os sexos, dia pós-natal 0-2. As culturas foram plaqueadas em placas de Petri pré-tratadas com poli-L-ornitina, na densidade de 1,0x105 cel/cm2, receberam meio 199 ou 1μg/mL do extrato diclorometano de Eugenia punicifolia (EP 1μg/mL) e foram mantidas por 48 horas a 37°C, em atmosfera de 95% de ar e 5% de CO2. O método bioquímico utilizado para análise da proliferação celular foi a incorporação de [3H]-timidina. Os níveis dos receptores muscarínicos, de neurotrofinas e citocinas foram determinados por Western Blot. Todos os dados são apresentados em relação à porcentagem do controle (100%). Os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da UFF (Projeto nº 186/2012). Os resultados mostram que o tratamento das culturas com diferentes concentrações do extrato diclorometano de EP por 48h induziu aumento dependente da concentração na proliferação celular, sendo o aumento mais significativo observado na concentração de 1μg/mL, concentração que foi utilizada em todos os experimentos. Foi observada a redução nos níveis dos receptores muscarínicos M1 e M4, e nos níveis de transportador de acetilcolina associado à vesícula, aumento na expressão do receptor M3 e nenhuma alteração nos níveis do receptor M5. Observou-se, também, que o extrato diclorometano de EP aumenta os níveis de NGF e da interleucina-4, e diminui dos níveis de BDNF. Os resultados sugerem que o extrato diclorometano de EP exerce efeito proliferativo e de diferenciação através da alteração do fenótipo colinérgico da retina e da participação de fatores neurotróficos / Studies on the effects of the Eugenia punicifolia (EP) aqueous extract demonstrate its action on neurotransmission in the neuromuscular junction. However, despite knowing that increased cholinergic neurotransmission may have neuroprotective activity and act in neuronal plasticity, there are no studies on the effect of the extract of EP in cells of the Central Nervous System. The aim of this work was to study the effect of the dichloromethane extract of EP on retinal cells of neonatal rats in vitro with respect to cell proliferation, modulation of the cholinergic phenotype and levels of nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and interleukin IL-4. Primary cell cultures of neonatal rat retina from Hooded Lister strain of both sexes, postnatal day 0-2 were performed. Cultures were plated on pre-treated Petri plates with poly-L- ornithine at a density of 1.0 x105 cel/cm2 received medium 199 or 1μg/mL of dichloromethane extract of E. punicifolia (EP 1μg/mL) and kept for 48 hours at 37°C in an atmosphere of 95% air and 5% CO2. The method used for biochemical analysis of cellular proliferation was the incorporation of [3H]-thymidine. The levels of muscarinic receptors, neurotrophins and cytokines were determined by Western blot. All data are presented in relation to the percentage of control (100%). The experimental procedures were approved by the Ethics Committee on Animal Use of UFF (Project nº 186/2012). The results show that treatment of cultures with different concentrations of the dichloromethane extract of EP for 48h induces an increase in cell proliferation, with the most significant increase observed with the concentration of 1μg/mL, concentration, which was used in all experiments. A reduction in levels of muscarinic receptors M1 and M4, and VAChT was observed, an increase in expression of the M3 receptor and no change in the levels of the M5 receptor were observed. Also was observed that the dichloromethane extract of EP increased NGF levels and interleukin-4, and decreases levels of BDNF. The results suggest that the dichloromethane extract of EP exerts a proliferative effect and differentiation by altering the cholinergic phenotype of the retina and the involvement of neurotrophic factors

Made available in DSpace on 2016-03-22T17:27:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SharonMFerreir.pdf: 2163870 bytes, checksum: d5e466194ea4c397ec8640eb900fa160 (MD5) Previous issue date: 2014-10-27 / % Major depressive disorder (MDD) is one of the most prevalent psychiatric disorders that affect approximately 17% of the population in a lifetime. Neurotrophins (NGF) are a group of structurally related proteins, which control the development and differentiation of nerve cells that play a role in cellular migration proliferation, differentiation and phenotypic maintenance central nervous system development. Thus, the role of NGF in neuronal plasticity and support, may suggests that these NGF plays an important action in the etiology and pathophysiology of suicide individuals. Therefore, the aim of this study was to evaluate serum levels of NGF in healthy and depressed person with and without suicide risk in a population-based sample of individuals. This study was performed 47 individuals with current depressive episode and suicide risk without a history of mania, and allocated to major depression and suicide risk groups. Two groups of 47 individuals each, were matched by sex and age: the active control group was composed of those with current depressive episode without risk of suicide; while the population control group included individuals with no history of affective disorder.This study was conducted by a questionnaire with demographic questions (gender, ethnicity, age and education level). After the diagnostic interview, a collection of blood from each individual was performed. Measurement of serum levels of NGF by ELISA. The comparison between the levels of NGF with the group of depressed individuals at risk for suicide without a depressed suicide risk and healthy control was performed by ANOVA with Bonferroni through post-hoc test.. NGF levels were significantly lower (p <0.001) in the groups with major depression and major depression with suicide risk (92.39 ± 41.21ng / mL and 100.99 ± 35.08ng / mL, 40 respectively) compared to the control group (149.81 ± 65.94 ng / ml). In conclusion, our study demonstrates that reducing the levels of NGF can be used as a marker TDM, compared with healthy individuals / O transtorno depressivo maior (TDM) é um dos distúrbios psiquiátricos de maior prevalência que acomete em aproximadamente 17% da população geral ao longo da vida. As neurotrofinas, dentre elas o fator de crescimento neural (NGF), são um grupo de proteínas relacionadas estruturalmente, as quais controlam o desenvolvimento e a diferenciação das células nervosas que desempenham um papel importante na proliferação celular, migração, diferenciação fenotípica e manutenção do sistema nervoso central em desenvolvimento. Devido ao importante papel das NGF na plasticidade e suporte neuronal, sugere-se que o NGF desempenha um importante papel na etiologia e fisiopatologia do suicídio. Portanto o objetivo deste estudo foi avaliar os níveis séricos de NGF em indivíduos saudáveis e deprimidos com e sem risco de suicídio de uma amostra de base populacional. O estudo envolveu 47 indivíduos para compor o grupo com depressão maior e risco de suicídio. Outros dois grupos, de 47 indivíduos cada, foram pareados por sexo e idade: o grupo controle ativo foi composto por aqueles que apresentaram episódio depressivo atual, sem risco de suicídio; enquanto o grupo controle populacional contemplou os indivíduos sem história de transtorno afetivo. O estudo foi realizado por um questionário com questões sociodemográficas (sexo, etnia, idade e escolaridade). Os níveis séricos de NGF foram analisados através da técnica de ELISA. A comparação entre os níveis de NGF com o grupo de indivíduos deprimidos com risco de suicídio, deprimidos sem risco de suicídio e controle populacional foi realizada por ANOVA, com post-hoc através do teste Bonferroni. Os níveis de NGF foram significativamente menores (p<0.001) nos grupos com depressão maior e depressão maior com risco de suicídio 38 (92.39±41.21ng/mL e 100.99±35.08ng/mL, respectivamente) quando comparados ao grupo controle (149.81±65.94ng/mL).Concluimos que a redução dos níveis de NGF podem ser utilizados como um marcador de estado em TDM, em comparação com os de indivíduos saudáveis

A lesão do nervo alveolar inferior (NAI) está relacionada à prática odontológica. Estudos demonstram que a laserterapia promove a regeneração do nervo e analgesia. Usando o modelo de esmagamento do NAI associado à laserterapia avaliamos a reparação nervosa e a nocicepção dos animais antes da lesão, e após o tratamento. Vimos que o laser reverteu o comportamento hipernociceptivo e que a modulação de receptores para glutamato, de neurotrofinas, do receptor de potencial transiente vanilóide do subtipo 1, da substância p e do peptídeo relacionado ao gene da calcitonina atuam neste processo. Adicionalmente, o laser alterou o microambiente da lesão modulando proteínas, como laminina, proteína mielínica zero e neurofilamentos, promovendo a regeneração do nervo; por microscopia eletrônica mostramos esta regeneração, evidenciada pelo aumento no número de fibras nervosas e da espessura da bainha de mielina no nervo do grupo tratado em relação ao grupo operado. Em conjunto, os resultados obtidos contribuem para reforçar o uso terapêutico do laser. / The inferior alveolar nerve injury (IAN) is related to dental practice. Studies have shown that LLLT promotes nerve regeneration and analgesia. Using IAN crush model associated with laser therapy we evaluated nerve repair and nociception of animals before injury and after treatment. We have seen that the laser reversed hipernociceptive behavior and modulation of glutamate receptors, neurotrophins, the transient potential vanilloid receptor subtype 1, substance P and calcitonin gene-related peptide act in this process. Additionally, the laser alter the microenvironment of the lesion modulating proteins such as laminin, myelin protein zero and neurofilaments, promoting nerve regeneration; electron microscopy showed this regeneration, evidenced by the increase in the number of nerve fibers and the thickness of the myelin sheath in nerve treated group compared to the surgery group. Together, these results contribute to enhance the therapeutic use of the laser.

A lesão do nervo alveolar inferior (NAI) está relacionada à prática odontológica. Estudos demonstram que a laserterapia promove a regeneração do nervo e analgesia. Usando o modelo de esmagamento do NAI associado à laserterapia avaliamos a reparação nervosa e a nocicepção dos animais antes da lesão, e após o tratamento. Vimos que o laser reverteu o comportamento hipernociceptivo e que a modulação de receptores para glutamato, de neurotrofinas, do receptor de potencial transiente vanilóide do subtipo 1, da substância p e do peptídeo relacionado ao gene da calcitonina atuam neste processo. Adicionalmente, o laser alterou o microambiente da lesão modulando proteínas, como laminina, proteína mielínica zero e neurofilamentos, promovendo a regeneração do nervo; por microscopia eletrônica mostramos esta regeneração, evidenciada pelo aumento no número de fibras nervosas e da espessura da bainha de mielina no nervo do grupo tratado em relação ao grupo operado. Em conjunto, os resultados obtidos contribuem para reforçar o uso terapêutico do laser. / The inferior alveolar nerve injury (IAN) is related to dental practice. Studies have shown that LLLT promotes nerve regeneration and analgesia. Using IAN crush model associated with laser therapy we evaluated nerve repair and nociception of animals before injury and after treatment. We have seen that the laser reversed hipernociceptive behavior and modulation of glutamate receptors, neurotrophins, the transient potential vanilloid receptor subtype 1, substance P and calcitonin gene-related peptide act in this process. Additionally, the laser alter the microenvironment of the lesion modulating proteins such as laminin, myelin protein zero and neurofilaments, promoting nerve regeneration; electron microscopy showed this regeneration, evidenced by the increase in the number of nerve fibers and the thickness of the myelin sheath in nerve treated group compared to the surgery group. Together, these results contribute to enhance the therapeutic use of the laser.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-22T12:46:48Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ImunorreatividadeReceptoresNeutrofinas.pdf: 1743935 bytes, checksum: 3c7e92ab21ea4d9b4e1bd1f0ef0d56d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-27T12:07:20Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ImunorreatividadeReceptoresNeutrofinas.pdf: 1743935 bytes, checksum: 3c7e92ab21ea4d9b4e1bd1f0ef0d56d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T12:07:20Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ImunorreatividadeReceptoresNeutrofinas.pdf: 1743935 bytes, checksum: 3c7e92ab21ea4d9b4e1bd1f0ef0d56d3 (MD5) Previous issue date: 2015-08-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / Neurotrofinas são fatores de crescimento expressos por células do Sistema Nervoso, tanto durante o desenvolvimento quanto na vida adulta. O Fator de Crescimento Nervoso (NGF, do inglês- Nerve Growth Factor), o Fator Neurotrófico derivado do Cérebro (BDNF- do inglês- Brain-derived Neurotrophic Factor), Neurotrofina-3 (NT-3) e Neurotrofina-4/5 (NT-4/5), desempenham inúmeras funções relacionadas a maturação e resposta do tecido nervoso à patologias, como o Acidente Vascular Encefálico (AVE). Nesta condição, o aumento da expressão das neurotrofinas pode interferir no grau de neurogênese na Zona sub-ventricular (SVZ), bem como redirecionar a corrente migratória das Células-tronco Neurais Adultas (CTNAs) para a região isquêmica. A presença dos receptores de neurotrofinas p75NTR e TrkA, em CTNAs da SVZ, indica que eles podem participar na regulação da neurogênese nessa região. Neste trabalho, descrevemos a influência de uma isquemia experimental, através de uma microinjeção do peptídeo vasconstritor Endotelina-1, restrita ao estriado adjacente à SVZ; sobre o padrão de imunoreatividade para os receptores p75NTR e TrkA em diferentes tempos de sobrevida. Foi analisado o padrão histopatológico do estriado isquêmico e a citoarquitetura da SVZ, seguidos de análises imunoistoquímicas para os receptores. Inúmeras células p75NTR + foram encontradas na SVZ contra e ipsilateral ao sítio de injeção, ocorrendo uma redução de imunorreatividade no primeiro e terceiro dia após a isquemia. Raríssimas células TrkA+ foram encontradas na SVZ de ambos os grupos, porém, observamos inúmeros terminais axonais TrkA+ na SVZ ipsilateral a isquemia. Logo, após o processo isquêmico, houve espessamento da SVZ, concomitante à redução da imunorreatividade para o p75NTR e surgimentos de terminais axonais TrkA+. / Neurotrophins are growth factors expressed by cells of the nervous system both during development and in adulthood. The Nerve Growth Factor (NGF, the English- Nerve Growth Factor), brain-derived neurotrophic factor (English- BDNF- of Brain-Derived Neurotrophic Factor), Neurotrophin-3 (NT-3), Neurotrophin-4/5 ( NT-4/5), have many functions related to aging and response of nervous tissue to the pathology such as vascular accident (CVA). In this pathology, the increase of the neurotrophin expression can interfere with the degree of neurogenesis in the sub-ventricular zone (SVZ) and redirect the rostral migratory flow of Adult Neural Stem Cells (CTNAs) to the ischemic region. The presence of neurotrophin receptors TrkA and p75NTR in the CTNAs of SVZ indicates that they may participate in the regulation of neurogenesis in this region. Here we describe the influence of an experimental ischemia by microinjection of a vasconstritor Endothelin-1 peptide, which is restricted to the striatum adjacent SVZ; on the pattern of immunoreactivity for TrkA and p75NTR receptors in different survival times. The histopathological pattern of ischemic striatum and the cytoarchitecture of the SVZ, followed by immunohistochemical analysis to the receptors were analyzed. Numerous p75NTR + cells were found in the ipsilateral SVZ and against the injection site, with had a reduction in immunoreactivity at first and third day after ischemia. Few TrkA + cells were found in SVZ of both groups, however, many TrkA + axonal terminals were saw in the ischemic ipsilateral SVZ. Soon after the ischemic process, there was thickening of the SVZ, the concomitant reduction in immunoreactivity for p75NTR and TrkA + arisings of axonal terminals.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A forma digestiva decorrente da doença de Chagas é uma das principais causas de morbidade e mortalidade na fase crônica da doença. Pacientes portadores da forma digestiva apresentam uma série de sintomas relacionados à obstrução do órgão. No megacólon, os órgãos exibem grande aumento do lúmen e hipertrofia da camada muscular. Análises histológicas dos órgãos afetados têm demonstrado lesões inflamatórias do sistema nervoso entérico (SNE), associadas com uma grande redução no número de neurônios. Embora o mecanismo de lesão neuronal continue obscuro, a frequente observação de ganglionite e periganglionite em pacientes com megacólon aponta para a participação de células do sistema imune nesse processo. Indivíduos não portadores de megacólon também apresentaram processos de denervação e inflamação, porém menos intensas em relação aos portadores de megacólon. Conhecendo que a inter-relação entre o SNE e o sistema imune é muito rica, é de extrema importância compreender os mecanismos que atuam em comum entre estes dois sistemas, o que pode elucidar e mostrar novos caminhos para o controle efetivo de doenças que afligem o trato gastrintestinal. Dados preliminares de nossos estudos utilizando a proteína GAP-43, marcador de regeneração neuronal, sugerem que esse processo de plasticidade neuronal esteja ocorrendo no cólon de pacientes portadores da infecção crônica. A hipótese é que o desenvolvimento do megacólon chagásico esteja intimamente relacionado com a expressão de neurotrofinas, substâncias capazes de estimular o processo de regeneração neuronal. A partir desses dados uma nova linha investigativa abriu-se no estudo da patologia do megacólon chagásico. Para a compreensão do desenvolvimento dessa patologia, avaliamos o grau de destruição das diferentes classes neuronais, a taxa de regeneração e as substâncias envolvidas com as mesmas, sendo essa a hipótese norteadora da dissertação aqui apresentada. / Patients with the digestive form of Chagas' disease exhibit a number of symptoms related to obstruction of the organ. Histological analysis of affected organs have demonstrated inflammatory lesions of the enteric nervous system (ENS), associated with a large reduction in the number of neurons caused, mainly, by inflammatory process. However, previous studies presented that some substances, like neurotrophins, may restrict neuronal destruction levels. The objective of this study is to characterize the neurotrophins expression in tissues from chagasic patients with chagasic megacolon and verify its involvement in megacolon development. For this, we used samples from chagasic patients with megacolon (n=8) and non-infected individuals (n=8) that, after preparation, were submitted to confocal fluorescence immunohistochemistry. To identify the sources and expression level of neurotrophins (NGF, GDNF and NT3), we performed a co-localization with Peripherin (neuronal marker) and S-100 (glial cell marker). Our results presented that, in the colon, the glial cells are the main sources of neurotrophins in all analyzed groups. Besides, chagasic patients with megacolon presented high expression of all investigated neurotrophins when compared with non-infected individuals. Our data point that neurotrophins might perform a protective role in the enteric nervous system and that prevent the megacolon installation. By the other side, chagasic patients that do not express an adequate level of neurotrophins may progress to megacolon form. We believe that this data can suggest new treatment protocols, like drugs administration qualified to elevate neurotrophins levels, what could prevent the megacolon installation and maintain the normal function of the gastrointestinal tract. / Dissertação (Mestrado)